天花粉蛋白诱导NB4人白血病细胞凋亡研究

为了研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白(trichosanthin，TCS)诱导人类白血病细胞株NIM细胞的凋亡及增长抑制的影响，采用流式细胞术分析NB4细胞经TCS诱导后细胞膜联蛋白V(annexin V)表达及线粒体膜电位(△ψm)的改变：用MTT比色法测定TCS对NB4细胞的增长抑制率，用琼脂糖凝胶电泳做细胞凋亡DNA分析。结果表明：小TCS对NB4细胞具有明显的增长抑制作用，并随TCS浓度的升高及作用时间的延长，抑制现象愈加显著；②NB4细胞经TCS诱导后，annexin V呈阳性表达，随作用时间延长阳性率进一步升高；③线粒体△ψm随着凋亡细胞的增加而逐渐降低；④DNA电泳呈梯状条带，表明TCS对NB4细胞确实存在诱导凋亡作用。结论：天花粉蛋白在体外能够明显抑制NB4细胞的增长，并诱导细胞凋亡，为今后TCS应用于急性早幼粒白血病的临床治疗提供重要的实验依据。     

热休克蛋白在白血病细胞凋亡和耐药中的分子机制

热休克蛋白（hsps)是一组普遍存在于各类细胞的具同源谱功能的高度保守的蛋白。hsps的活化和异常表达涉及多个凋亡信号传导通路和凋亡调节因子，其与化疗耐药及肿瘤的发生，发展密切有关，本文着重讨论了hsp27,hsp70,hsp90等在白血病细胞耐药和抗凋亡中的作用以及可能的分子机制。     

中药露蜂房蛋白对人红白血病细胞株K562细胞影响的实验研究

目的：研究中药露蜂房中蛋白成份抗白血病作用的机理，为中药露蜂房治疗白血病的临床应用和开发新的抗白血病药物提供实验和理论依据。方法：采用细胞培养和透射电子显微镜技术，观察中药露蜂房蛋白成份对人红白血病细胞（K562细胞）的生长抑制作用和形态结构的影响，采用免疫组织化学方法测定露蜂房蛋白对K562细胞凋亡相关信号转导蛋白NF-κBp65、β-catenin及iNOS表达的影响。结果：（1）与生理盐水对照组比较，露蜂房蛋白处理组白血病细胞生长饱和密度降低，细胞增殖活性减弱（P＜0．05）；（2）露蜂房蛋白处理组白血病细胞呈典型的凋亡形态学改变；（3）与生理盐水对照组比较，露蜂房蛋白处理组白血病细胞中NF-κBp65、β-catenin及iNOS表达减弱，NF—κBp65和β-catenin细胞核内转导减少（P＜0．05）。结论：中药露蜂房蛋白成份有明显抑制K562细胞的作用，其作用机制可能是通过调节凋亡相关信号传导因子NF-κBp65、β-catenin及iNOS的表达，从而诱导白血病细胞凋亡。     

三氧化二砷阻滞人Burkitt淋巴瘤细胞增殖和细胞周期作用及其相关机制

本研究探讨As2O3 对人Burkitt淋巴瘤细胞增殖和细胞周期的影响及相关的分子机制,为As2O3临床应用于Burkitt淋巴瘤的治疗提供依据。以人Burkitt淋巴瘤Namalwa细胞株为模型,用不同浓度As2O3作用不同时间,以MTT法、流式细胞术、RQ—PCR和Western—blot分别检测As2O3对细胞增殖、增殖周期和凋亡发生及细胞周期重要调节基因CyclinE、CDK2和P2I表达的影响。结果表明：As2O3显著抑制Namalwa细胞的生长增殖,并显示明显的浓度和时间依赖性;As20,明显阻滞Namalwa细胞于G1期,并显示明显的量效关系;As2O3诱导Namalwa细胞凋亡,呈现明显的作用浓度和作用时间依赖性;As2O3明显下调Namalwa细胞CyclinE、CDK2基因的转录及蛋白表达,明显上调CDK抑制蛋白P2j基因的转录及蛋白表达,且呈现出浓度依赖性。结论：As2O3明显抑制人Burkitt淋巴瘤细胞株Namalwa的生长增殖,此作用与As2O3阻滞细胞周期于G1期及诱导细胞凋亡有关,而As2O3对细胞周期的阻滞与其下调细胞周期的重要驱动基因CyclinE和CDK2的表达、上调CDK抑制因子P2I基因的表达密切相关。     

氧化砷诱导早细粒细胞白血病细胞凋亡的体外研究

目的：阐明氧化砷治疗急性早幼粒细胞白血病的机制。方法：以原代ＡＰＬ细胞为模型，将不同浓度的氧化砷作用于ＡＰＬ细胞，并对其作用机制进行研究。结果：高浓度氧化砷选择性诱导ＡＰＬ细胞凋亡，低浓度氧化砷诱导新鲜ＡＰＬ细胞部分分化。进一步研究发现，不同浓度的氧化砷均能快速调速和降解ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白。结论：氧化砷对ＡＰＬ细胞存在双重效应，即诱导凋亡和部分分化。     

热休克蛋白在白血病细胞凋亡和耐药中的分子机制

热休克蛋白(hsps)是一组普遍存在于各类细胞的具同源谱功能的高度保守的蛋白.hsps的活化和异常表达涉及多个凋亡信号传导通路和凋亡调节因子,其与化疗耐药及肿瘤的发生、发展密切有关.本文着重讨论了hsp27、hsp70、hsp90等在白血病细胞耐药和抗凋亡中的作用以及可能的分子机制.     

黄酮类化合物的抗白血病作用

黄酮类化合物是一类存在于多种植物中的多酚类化合物，研究发现它们具有许多潜在的药用价值，其中抗白血病作用是一个研究热点。其抗白血病作用主要表现在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和分化、干预细胞信号转导和增强抑癌基因活性及抑制癌基因表达等方面。本文就黄酮类化合物抗白血病作用的研究进展进行综述。     

存活蛋白和P63蛋白在B细胞非霍奇金淋巴瘤组织中的表达及其对细胞凋亡和增殖的作用

本研究探讨存活蛋白（Survivin）和P63蛋白在B细胞非霍奇金淋巴瘤（B—NHL）发生发展中的可能作用及其与细胞凋亡和增殖的相互关系。应用免疫组织化学SP法和TdT介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）技术检测43例B-NHL和10例反应性增殖淋巴组织（RHL）中的survivin和P63蛋白表达以及细胞凋亡和增殖细胞核抗原（PCNA）的水平。结果表明：survivin和P63在43例B-NHL中表达的阳性率分别为69．8％（30／43）和82．7％（36／43），survivin和P63在10例RHL中表达阳性率分别为10％（1／10）和40％（4／10），survivin在侵袭性B—NHL中的阳性率明显高于惰性B—NHL（83．3％vs46．2％，P〈0．01），P63蛋白表达差异无显著性意义；survivin阳性表达与凋亡指数（AI）和增殖指数（PI）呈正相关（r=0．429，P〈0．01；r=0．348，P〈0．01），P63蛋白阳性表达与AI和PI呈正相关（r=0．451，P〈0．01；r=0．369，P〈0．05），B—NHL的AI和PI呈显著正相关（r=0．598，P〈0．001）。结论：survivin可能参与了B—NHL的凋亡和增殖调控机制，P63作为癌基因参与B—NHL发生，二者可能共同影响细胞增殖和凋亡。     

白花丹醌对人急性早幼粒细胞白血病细胞的体外效应

根据作者已往的临床经验，中草药白花丹对急性早幼粒细胞白血病（APL）治疗有效，但至今尚无关于白花丹对APL疗效方面的系统研究。本研究的目的是通过NB4细胞体外观察白花丹提取物白花丹醌（plumbagin）对细胞增殖及凋亡的影响。采用MTT比色法检测白花丹醌对NB4细胞增殖抑制作用；用光学显微镜及透射电镜观察细胞形态改变；DNA凝胶电泳及annexin V／PI双染实验测定检测细胞凋亡；DNAPI染色法检测细胞亚二倍体峰及细胞周期。结果显示：白花丹醌在2-15μmol/L浓度范围内能够显著抑制NB4细胞的增殖，且呈剂量依赖性效应关系（P〈0．01）；在光学显微镜及透射电镜下可见典型的细胞凋亡形态变化；白花丹醌诱导细胞出现DNA梯形条带，annexin V^＋／PI^-凋亡细胞及亚二倍体峰，细胞周期阻滞于G2／M期，凋亡细胞比例与白花丹醌呈剂量依赖性效应关系（P〈0．05）。结论：本研究首次证实白花丹醌能够抑制APL细胞系NB4的增殖、诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期进程。     

环孢霉素A体外对白血病细胞作用的的研究

为了进一步探讨环胞霉素A（CSA）逆转白血病细胞耐药的机理,采用溴化四氮唑兰法（MTT）测定K562和K562/ADM白血病细胞系对化疗的体外反应性,以脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,台盼蓝拒染法测细胞存活率。结果发现CSA在1.0mg/L水平对两种白血病细胞存活无明显影响,但能够增强其对化疗药物的敏感性,促进化疗药物诱导的白血病细胞凋亡,当浓度大于1.0mg/L时单独CSA也能杀伤白血病细胞并诱导其凋亡。结论提示,CSA可以通过促进细胞凋亡逆转白血病细胞的耐药,其自身也有一定的诱导白血病细胞凋亡及杀伤白血病细胞的作用。     

DC-CIK细胞的生物学活性及体外抗白血病作用的研究

本研究探讨树突状细胞（DC）对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）增殖能力、免疫表型、分泌细胞因子水平及抗白血病细胞的作用。健康人外周血单个核细胞诱导DC和CIK，将DC与CIK共培养，以CIK细胞单独培养为对照。用台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数，MTT法测定杀伤活性，流式细胞术分析免疫表型，ELISA双抗体夹心法测定干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-12（IL—12）的水平。结果表明：DC—CIK细胞增殖能力明显高于CIK细胞（P〈0．05）；DC、CIK细胞共培养后，CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD56^＋细胞比率较相同条件下CIK细胞组显著增多（P〈0．05）；共培养3天，DC—CIK细胞上清液中IL-12、IFN-γ水平均比CIK细胞单独培养的水平高（P〈0．01，P〈0．05）；在5：1—40：1的效靶比范围内，DC—CIK细胞对白血病细胞的杀伤率显著高于CIK细胞（P〈0．05），且杀伤率与效靶比呈正相关。结论：DC增加CIK细胞的增殖能力和抗白血病活性，有可能作为一种临床有效的抗白血病免疫治疗手段。     

Fas配体在髓系白血病细胞中的表达及功能研究

为了解Fas配体 (FasL)在髓系白血病细胞中的表达水平及其诱导Fas+敏感细胞发生凋亡的功能 ,用流式细胞术检测 38例髓系白血病患者 (外周血白细胞 >10 0× 10 9/L)的白血病细胞在新鲜分离及IL 2和IFN γ刺激后表面膜FasL的表达水平 ,将白血病细胞 ( 1× 10 6/ml)与Jurkat细胞 ( 1× 10 5/ml)混合培养 2 4小时后 ,用DNA电泳和流式细胞术双标法检测Jurkat细胞发生凋亡的情况。结果表明 :白血病细胞表面FasL表达量 ( 3.5 9± 1.0 5 ) %高于正常人 ( 0 .36± 0 .16 ) % ,P <0 .0 0 1,经IL 2和IFN γ刺激后其表达量明显增加 ( 7.78± 3.4 0 ) % ,P <0 .0 1;白血病细胞刺激前后诱导Jurkat细胞发生的凋亡率分别为 ( 8.2 8± 1.6 1) % ,( 10 .73± 2 .16 ) % ,差异具有显著性意义。结论 :FasL在髓系白血病细胞表面高表达且对Fas+的敏感细胞具有杀伤功能 ,推测Fas/FasL途径可能在白血病的“免疫逃逸”中发挥作用     

三氧化二砷诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡与细胞周期阻滞

本研究探讨研究三氧化二砷（As2O3）对人淋巴瘤Raji细胞株凋亡诱导的作用特点及其机制。用MTT比色法观察不同浓度As2O3对Raji细胞的增殖抑制效应，电子显微镜观察不同浓度As2O3作用不同时间后细胞的凋亡形态，DNA-ladder琼脂糖凝胶电泳观察凋亡条带，流式细胞术检测Raji细胞凋亡、细胞周期分布。结果表明：1—8μmol／LAs2O3能明显抑制Raji细胞的活力，并存在一定的量效、时效关系。2—8μmol／L浓度的As2O3可以诱导Raji细胞周期阻滞及凋亡，而1μmol／LAs2O3不诱导细胞凋亡，只是通过细胞周期阻滞作用抑制细胞增殖。结论一定浓度三氧化二砷可以抑制Raji细胞的增殖，阻滞细胞周期，诱导细胞凋亡。细胞周期阻滞伴随细胞凋亡而发生。     

马钱子碱诱导人单核细胞白血病THP-1细胞凋亡及作用机制

本研究旨在探讨马钱子碱对人单核细胞白血病THP-1细胞的诱导凋亡作用及其可能的作用机制。应用CCK-8法检测马钱子碱对THP-1细胞的生长抑制作用;应用AO／EB荧光染色法、Annexin—V／PI双染法检测马钱子碱对THP-1细胞凋亡的影响;PI单染法检测马钱子碱对THP-l细胞周期的影响;RT-PCR检测BCL-2、BAX基因的表达。结果表明,马钱子碱能有效地抑制THP-1细胞的生长,呈剂量和时间依赖关系;THP-1细胞经浓度为400μg／ml马钱子碱作用48h后,大部分细胞核染色质被EB染成橘红色并呈固缩状,显示为晚期凋亡的细胞形态;0—400μg／ml范围内的马钱子碱作用THP-1细胞48h后,随着药物浓度的增高,细胞凋亡率逐渐上升;与对照组相比细胞周期被阻滞于Go／G1,期,并出现亚二倍体凋亡峰;RT-PCR结果显示,BCL-2基因表达明显下降,BAX基因表达上调。结论：马钱子碱能抑制THP-1细胞生长,诱导其凋亡,并对细胞周期起阻滞作用,其作用机制可能与BCL-2基因表达抑制及BAX基因表达激活有关。     

白血病细胞对Fas/FasL途径介导凋亡的抵抗及其应对策略

从细胞凋亡的角度看，造血细胞凋亡过少是造血细胞堆积的原因，Fas／FasL系统作为诱导细胞凋亡的一条重要途径，参与了白血病的发生发展。白血病细胞普遍存在对Fas／FasL途径介导的凋亡不敏感或抵抗，而这也是造成白血病细胞免疫逃逸和对化疗不敏感的重要原因之一。近年来，国内外对白血病Fas／FasL途径介导的凋亡抵抗的机制．诸如Fas／FasL突变及表达异常Fas信号传导途径异常，凋亡调控基因对Fas／FasL系统的调控（NF—KB、XiAP膜受体CD28和基质金属蛋白酶7等）和应对策略的相关研究取得了一些进展，现对上述有关问题作一综述。     

黄芩苷对耐阿霉素白血病细胞株HL-60／ADR增殖、凋亡的影响

本研究探讨中药黄芩苷对耐阿霉素人髓系白血病细胞株HL-60／ADR增殖、凋亡的影响。应用MTT法绘制细胞生长曲线,观察黄芩苷对HL-60／ADR细胞增殖的影响;应用Annexin V FITC／PI双染流式细胞术、DNA片段化、TdT酶介导的原位缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡;RT—PCR检测黄芩苷作用不同时段后c-myc、bcl-2等凋亡相关基因mRNA的表达水平;Western blot法检测凋亡及信号通路相关蛋白C—MYC、BCL-2、pro—caspase-3、PARP、BAD等的表达变化。结果表明,黄芩苷能明显抑制HL-60／ADR细胞增殖所测得的细胞倍增时间为48小时,半数抑制率为28μmol;Annexin V FITC／PI法检测到早期凋亡细胞、DNA片段化,TUNEL法检测到晚期凋亡细胞,细胞凋亡率呈浓度依赖性（20、40、80μmol／L）。黄芩苷作用HL-60／ADR细胞不同时段（12、24、48小时）后C-myc、bcl-2基因mRNA的表达,并随着作用时间的延长而逐渐减弱,C—MYC、BCL-2、procaspase-3、PARP（116kD）蛋白的表达逐渐下降,PARP（85kD）及BAD蛋白表达逐渐增强,呈时间依赖性。结论：黄芩苷能有效抑制HL-60／ADR细胞增殖,诱导其凋亡,上述凋亡相关基因及信号通路相关蛋白可能参与了黄芩苷抑制HL-60／ADR细胞增殖和诱导凋亡的过程：