p15^INK4B基因甲基化在急性普细胞白血病和慢性粒细胞白血病中的研究

为探索ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在ＣｐＧ岛高甲基化对白血病发病机制的重要作用,应用敏感的甲基化特异的ＭＳＰ－ＰＣＲ的测定方法,测定了ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在急性粒细胞白血病（ＡＭＬ）和慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中甲基化的表达变化,研究结果表明,ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因操纵区在ＡＭＬ和ＣＭＬ中的甲基化发生率分别为８３．９％（２６／３１）和０％（０／２８）。结论提示：甲基化是ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在ＡＭＬ中主要的失活方式之一,并可在病程进展中出现甲基化,使病情加重,在ＣＭＬ中无基化的发生,说明ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因的功能在ＣＭＬ中可能是完整的。     

恶性血液病中的P15^INK4B基因甲基化

目的 探索特定基因操纵区ＣｐＧ岛高甲基化对人类造血系统恶性肿瘤的作用。方法 利用甲基化特异性聚合酶链反应（ＭＳＰ）的方法,用亚硫酸氢钠修饰后的ＤＮＡ为模板进行甲基化特异性聚合酶链反应（ＰＣＲ）,测定了２５例急性髓系白血病（ＡＭＬ）,１５例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）,１６例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）和１２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在操纵区５′－ＣｐＧ岛异常甲基化的发生率。结果 Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因异常甲基化的发生率：ＡＭＬ为８４％,ＣＭＬ为０,ＭＤＳ为５０％,ＭＭ为７５％。高危型的ＭＤＳ较低危型更易发生甲基化,在ＭＭ中,Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ甲基化一般发生在早期,与骨髓象的幼稚程度关系密切。结论 调节细胞生长和分化的Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因高甲基化是使Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因失活的主要原因之一,     

肝细胞癌遗传特性的研究现况

肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,由于早期诊断和基因治疗的需要,研究人员对其遗传的改变作了深人的研究,其遗传背景逐渐得到揭示。在肝癌生成的过程中,许多基因发生了改变,如 ｐ５３基因［１］,甘露糖－６－磷酸／胰岛素样因子２受体（Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ２Ｒ）［２］,Ｂ－ｃａｔｅｎｉｎ［３］,视网膜母细胞瘤基因（ＲＢＩ）［４］,编码细胞周期因子依赖性激酶４的１６ ＫＤ抑制因子的基因（ｐ１６ＩＮＫ４Ａ）［５］,腺瘤样息肉病基因（ＡＰＣ）［６］,乳腺癌易感基因２ （Ｂｒｃａ２）［７］,周期因子Ａ基因（ｃｙｃｌｉｎＡ）［８…     

急性白血病患者p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究

目的　探讨血液系统恶性肿瘤患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的发生率及其临床意义。方法　用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 方法扩增ｐ１６ 及ｐ１５ 基因外显子１ 及外显子２ ,检测等位基因纯合子缺失;再用限制性内切酶 Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测ｐ１６ 及ｐ１５ 基因甲基化; 然后用 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 法（ Ｔｄ Ｔｍｅｄｉａｔｅｄ ｄ Ｕ Ｔ Ｐｄｉｇｏｘｙｇｅｎｉｎ ｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ） 检测细胞凋亡。结果　５６ 例患者中有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者共３３ 例,其中急性淋巴细胞白血病（ Ａ Ｌ Ｌ）３８ 例中２３ 例（ 占６０ ．５ ％ , Ｔ Ａ Ｌ Ｌ１２ 例, Ｂ Ａ Ｌ Ｌ１１ 例） , Ａ Ｎ Ｌ Ｌ１８ 例中１０ 例（ 占５５５ ％ ） 。 Ａ Ｌ Ｌ 患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因均以甲基化失活为主。 Ｔ Ａ Ｌ Ｌ 失活的频率比 Ｂ Ａ Ｌ Ｌ 高。有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者, 细胞的凋亡比例明显减少,病情进展迅速,治疗效果差,缓解率低, 缓解期明显缩短。结论　ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的检测对于探讨急性白血病的发病机制,判断疾病进程有重要意义。     

采用甲基化特异性聚合酶链反应研究急性白血病p15基因CpG？…

目的 探讨ｐ１５基因ＣｐＧ岛甲基化作为各型急性白血病通用的基因标志物的可行性。方法 采用甲基化特异性聚合链反应（ＭＳＰ）法检测４０例初治或复发急性白血病、５例完全缓解白血病及８例（份）正常骨髓的ｐ１５基因ＣｐＧ岛甲基化,并对ＭＳＰ产物进行序列测定。结果 急性白血病患ｐ１５基因ＣｐＧ岛甲基化阳性率为８０％,ＡＭＬ与ＡＬＬ的阳性率（分别为８３％和７３％）差异无显性;５例完全缓解期白血病患中１例ｐ     

采用甲基化特异性聚合酶链反应研究急性白血病p15基因CpG岛甲基化

目的　探讨ｐ１５ 基因ＣｐＧ岛甲基化作为各型急性白血病通用的基因标志物的可行性。方法　采用甲基化特异性聚合酶链反应（ＭＳＰ）法检测４０ 例初治或复发急性白血病、５ 例完全缓解期白血病及８ 例（ 份） 正常骨髓的ｐ１５ 基因ＣｐＧ岛甲基化,并对ＭＳＰ产物进行序列测定。结果　急性白血病患者ｐ１５ 基因ＣｐＧ岛甲基化阳性率为８０％ ,ＡＭＬ与ＡＬＬ的阳性率（分别为８３％ 和７３％） 差异无显著性;５ 例完全缓解期白血病患者中１ 例ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化阳性（该例患者不久白血病复发）;正常骨髓８ 例均为阴性,表明ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化为白血病细胞所特有;ＭＳＰ产物测序结果与理论结果相符合,ＭＳＰ敏感度可达１０ －３。结论　ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化在各型急性白血病中均有很高的发生率,可以作为各型急性白血病通用的微量残留病（ＭＲＤ） 指标;白血病完全缓解期ｐ１５ ＣｐＧ 岛甲基化仍为阳性可能预示着复发;ＭＳＰ法ＤＮＡ需要量极少,不需要有特异性酶切位点,无同位素污染,对标本要求不高,敏感度高,是甲基化研究的一个简便、敏感、特异的新手段。     

聚合酶链反应方法检测急性白血病p15基因高度甲基化

目的 探讨ｐ１５基因高度甲基化在急性白血病发病中的作用。方法 用甲基化敏感的限制性核酸内切酶消化结合聚合酶链反应技术。结果 在３６例急性白血病患中有２２例（６１．１％）存在ｐ１５基因高度甲基化,其中２６例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）有１７（６５．４％）,１０例急性淋巴细胞白血病有５例（５０．０％）存在ｐ１５基因高度甲基化。结合临床资料分析,有ｐ１５基因甲基化的ＡＮＬＬ患有较高的外周血白细胞     

RARa／MYL融合mRNA是诊断和监测急性早幼粒细胞白血病的特异标志

应用四条引物（Ｒ５，Ｒ６，Ｄ３，Ｄ４）通过逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了２０例初治急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）患的ＲＡＲａ／ＭＹＬ融合ｍＲＮＡ。建立的方法可在０．１ｎｇ细胞总ＲＮＡ中检出ＲＡＲａ／ＭＹＬ融合ｍＲＮＡ，相当于在１０＾４～１０＾５个正常细胞中检出一个ＡＰＬ细胞，扩增产物的特异性经Ｋｐｎ Ｉ酶切法确认。１８例患表达Ｂ型融合ｍＲＮＡ（２９０ｂｐ片段），２例表达Ａ型（３１１ｂ     

HPV16,18E6,c—erbB—2及p21ras基因蛋白的表达与宫颈？…

目的 研究人乳头状瘤病毒（ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ，ＨＰＶ）１６和１８型Ｅ６蛋白及ｃ－ｅｒｂＢ－２和ｐ２１ｒａｓ基因蛋白的表达与宫颈癌的关系。方法 应用免疫组化ｅｎｖｉｓｉｏｎ法（二步法）对宫颈鳞癌６４例、腺癌２０例、宫颈上皮瘤变（ｃｅｒｖｉｃａｌ ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉｌａ ｎｅｏｐｌａｓｉａ，ＣＩＮ）３０例及正常子宫颈粘膜３０例行ＨＰＶ１６、１６Ｅ６、ｃ－ｅｒｂＢ－２及ｐ２     

肿瘤抑制基因p53.p16与脑肿瘤

探索肿瘤抑制基因ｐ５３、ｐ１６变异在脑肿瘤发病中的意义。方法２３例脑肿瘤病人原发肿瘤标本用免疫组化ＬＳＡＢ法行肿瘤抑制基因Ｐ５３Ｐ１６蛋白检测。结果：星形细胞瘤Ⅰ级９例，ｐ１６蛋白４例表达３０％以下，５例不表达，ｐ５３蛋白３例表达３０％以下。     

p15INK4b基因异常与骨髓增生异常综合征

在肿瘤抑制基因中，p15^INK4b基因由于在骨髓增生异常综合征（MDS）演进过程中的重要作用而逐渐受到关注，系列的研究表明，随着MDS向AML的演出一进，p15^INK4b基因由于其外显子1启动子区的5′CpG岛发生高度甲基化而失活，这种类型的甲基化限于MDS细胞克隆，用甲基化特异性PCR法可较为敏感地将其检测到，p15^INK4b基因的失活抑制了细胞因子如Fas抗原，TGF-β和碱性螺旋-环-螺旋（bHLH)蛋白介导的细胞凋亡，由于p15^INK4b基因甲基化与MDS的密切关系，调节基甲基化状态可能会成为治疗MDS的一个新途径。     

酶联免疫吸附法检测宫颈脱落细胞p16INK4a蛋白

目的 检测宫颈脱落细胞中p16INK4a蛋白,试图建立一种新的宫颈癌筛查方法 .方法 选取同时行液基细胞学(TCT)检查和宫颈组织活检的标本1356例.在进行活检之前所有标本用棉签拭子获取新鲜的宫颈脱落细胞,并用细胞刷取材行TCT检测.用ELISA方法 检测棉签拭子获取细胞及TCT保存液固定的宫颈脱落细胞中的p16INK4a蛋白的表达.结果 TCT方法 用于筛查宫颈癌及宫颈上皮内瘤样病变(CIN)的敏感性和特异性分别为82.93%和88.11%:ELISA方法 检测新鲜宫颈脱落细胞中的p16INK4a表达用于筛查的敏感性和特异性分别为87.80%和92.43%,其敏感性和特异性均优于TCT检查(P=0.023和P<0.001),ELISA检测p16INK4a蛋白的阳性率与宫颈病变程度呈正相关(r=0.774,P<0.001).结论 ELISA检测宫颈脱落细胞中p16INK4a表达用于筛查宫颈癌及CIN,其敏感性较高,特异性较强,有望成为一种新的宫颈癌筛查方法 .     

喉鳞状细胞癌中p16INK4a基因甲基化状况及表达

目的研究喉鳞状细胞癌p16^（INK4a）基因启动子区域5′CpG岛的甲基化状况,探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系。方法采用甲基化特异性PCR检测30例喉鳞状细胞癌及15例远离肿瘤的正常喉黏膜中p16^（INK4a）基因启动子区域5′CpG岛的甲基化状况,并应用免疫组化EnVision法检测p16^（INK4a）蛋白的表达情况。结果30例喉鳞状细胞癌中p16^（INK4a）基因启动子区5′CpG岛甲基化率76.7%（23/30）;p16^（INK4a）蛋白缺失率为93.3%（28/30）。15例正常喉黏膜中未检测到p16^（INK4a）基因异常甲基化,而且其相应蛋白表达均为阳性。p16^（INK4a）基因甲基化状况与其蛋白表达和临床分期密切相关。结论p16^（INK4a）基因5′CpG岛异常甲基化在喉鳞状细胞癌中频率很高,可能在喉癌发生、发展中扮演重要角色;而且这可能是一个早期事件,其临床早期诊断和基因治疗意义均值得进一步深入探讨。     

p16^INK4a和Ki-67免疫细胞化学染色在宫颈液基细胞学中的应用价值

目的 探讨液基细胞学检测(LCT)剩余细胞学标本中p16INK4a、Ki-67的免疫细胞化学染色筛查宫颈鳞状细胞癌和宫颈癌前病变的价值.方法 采用免疫细胞化学和免疫组化法对194例细胞学标本和91例组织活检标本进行p16INK4a、Ki-67检测.结果 p16INK4a、Ki-67表达阳性率随着宫颈病变程度的加重而升高,与病变级别呈正相关.Ki-67的标记指数(LI)在HSIL组最高,与其他各组间均数的差异显著(P＜0.05).LSIL及其以上病变细胞学p16INK4a和Ki-67与组织学诊断符合率分别为87.3％和80.95%.宫颈脱落细胞学Ki-67、p16INK4a的免疫细胞化学染色检出高级别病变及鳞癌病变的敏感度、特异度分别为83.6％、86.7％和87.1％、100％. 结论 利用LCT液基细胞学涂片中p16INK4a、Ki-67的免疫细胞化学染色作为辅助诊断指标应用于宫颈癌高危人群筛查,具有重要意义.     

宫颈上皮内瘤变进展过程中p16INK4A和Claudin-1的表达及意义

目的:探讨p16INK4A和Claudin-1在宫颈上皮内瘤变(CIN)进展过程中的作用.方法:应用免疫组化二步法,检测正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中p16INK4A和Claudin-1蛋白的表达.结果:p16INK4A和Claudin-1蛋白阳性表达率及表达水平在各组间差异有统计学意义(P＜0.05),其表达水平及阳性率随疾病由低度鳞状上皮内病变(LSIL)向高度鳞状上皮内病变(HSIL)和浸润性鳞状细胞癌(ISCC)进展同步增强.p16INK4A与Claudin-1蛋白表达间无相关性(P＞0.05).结论:p16INK4A及Claudin-1与宫颈鳞状上皮的恶性转化相关;联合检测宫颈病变中p16INK4A和Claudin-1的表达,有助于早期诊断CIN和宫颈癌.     

CyclinD1、p16INK4在低度恶性子宫内膜间质肉瘤中的表达

目的探讨低度恶性子宫内膜间质肉瘤(LGESS)组织中Cyclin D1、p16INK4的表达。方法采用免疫组织化学法检测36例手术切除后经病理确诊的LGESS瘤组织中Cyclin D1和p16INK4蛋白的表达,分析它们与临床病理特征和预后的关系。结果 Cyclin D1、p16在LGESS中的表达率分别为47%、39%,且它们的表达与患者的年龄、是否绝经、孕产次、肿瘤大小、肌层浸润深度、是否脉管侵犯、有无淋巴结转移均无相关性,但Cyclin D1与临床手术病理分期及LGESS预后有关(P0.05)。结论 Cyclin D1阳性表达的低度恶性子宫内膜间质肉瘤与肿瘤侵袭性的临床行为有关。     

p15INK4B甲基化与骨髓增生异常综合征患者预后及地西他滨疗效的关系

目的 通过检测初诊骨髓增生异常综合征(MDS)患者p15INK4B甲基化水平,观察地西他滨治疗前、后p15INK4B甲基化状态变化,探讨p15INK4B甲基化水平与预后的关系及其对地西他滨疗效的影响.方法 261例初诊MDS患者,其中男143例,女118例,中位年龄52(32 ～78)岁.低危组172例(低危104例、中危-1 68例),高危组89例(中危-2 52例、高危37例).收集患者骨髓单个核细胞,采用甲基化特异性PCR (MSP)检测p15INK4B甲基化水平,按p15INK4B甲基化程度对患者进行生存分析.采用MSP方法分别检测58例MDS患者地西他滨治疗前及治疗2个疗程后骨髓p15INK4B甲基化水平,分析p15INK4B甲基化对地西他滨疗效的影响.结果 低危组患者p15INK4B甲基化水平明显低于高危组患者(117.22对157.63,P＜0.05).p15INK4B甲基化阳性患者2年预期生存(OS)率低于阴性患者(69.8％对91.8％,P＜0.05);在低危组,p15INK4B甲基化阳性患者2年预期OS率低于阴性患者(78.2％对92.0％,P＜0.05);在高危组,p15INK4B甲基化阳性患者OS率及中位OS时间与阴性患者比较差异无统计学意义[35.6％对38.5％,(17.0±9.3)个月对(18.0±5.7)个月,P＞0.05].COX分析结果显示p15INK4B甲基化水平是OS时间的独立预后因素.治疗前p15INK4B甲基化阳性组患者地西他滨治疗的总反应率及完全缓解率与阴性组比较差异无统计学意义(65.9％对76.5％,22.0％对29.4％,P＞0.05).地西他滨治疗有效组p15INK4B甲基化水平在治疗前、后差异无统计学意义(P＞0.05).结论 初诊时p15INK4B甲基化水平高的MDS患者生存时间更短,但p15INK4B甲基化水平对地西他滨疗效无明显影响.     

p19ARF和p16INK4a在人胰腺癌、结直肠癌中表达的比较研究

目的：比较p16^INK4a和p19^ARF2种抑癌基因在可切除的人胰腺癌和结直肠癌组织中的表达形式，从而对其在这两种肿瘤的发生、发展中的意义及两种肿瘤生物学行为差异的本质有一个初步认识。方法：胰腺癌和结直肠癌切除标本各30例的石蜡标本，用单克隆抗体免疫组化ABC法同时测定肿瘤组织的p16、p19和p21蛋白的表达。结果：胰腺癌的p16表达率13.3％(4/30)明显低于结直肠癌的40％(12/30，Pd0.02)；而p19在两者的表达率差异不明显。p16与p19表达无相关性。p16的表达率与胰腺癌的临床病理分期和分级呈负相关；有大血管浸润的胰腺癌p19阳性率(20％)低于无血管浸润者(72.2％,P=0.01)。P19在局部淋巴结阳性的胰腺癌表达率低于淋巴结阴性者，但无显著差异。而p16和p19与结直肠癌的病理分期、分级、血管浸润和淋巴结转移均无明显相关。结论：p16的下调是胰腺癌发生发展的一个重要原因，可能也是胰腺癌生物学行为明显不同于结直肠癌的主要原因；我们还首次发现p19下调与胰腺癌的大血管浸润和淋巴结转移有关，p19异常可能是胰腺癌播散的1种标示。未发现这2种抑癌基因与结直肠癌发生发展的明显关系。