组织工程表皮与单核白血病细胞共培养的致敏性检测模型

背景：大量研究表明体外构建的组织工程皮肤可用于化学物质的刺激性检测。目的：构建组织工程表皮和单核白血病细胞共培养体外模型,并用致敏物初步验证。方法：利用人源性角质形成细胞构建组织工程表皮,和单核白血病细胞进行共培养,干预24h后,ELISA法检测空白对照组,溶剂对照组,二硝基氟苯处理组和十二烷基硫酸钠处理组培养液中白细胞介素1β的质量浓度,流式细胞术检测各组中单核白血病细胞表面标记物CD86和CD54的平均荧光强度。结果与结论：角质形成细胞气液界面培养14d后,苏木精-伊红染色结果显示构建的组织工程表皮含有8～10层细胞结构,泛角蛋白免疫组化染色阳性。二硝基氟苯处理组培养液中白细胞介素1β质量浓度,单核白血病细胞表面标记物CD86和CD54的平均荧光强度均高于溶剂对照组（P〈0.05）。实验成功构建了组织工程表皮和单核白血病细胞共培养的致敏物检测模型。     

直接和间接共培养条件下小鼠子宫自然杀伤细胞与树突状细胞相互作用的比较

背景:子宫自然杀伤细胞与树突状细胞可以相互作用,但相互间作用是否必须直接接触还存在不同的观点。目的:对比直接和间接共培养条件下子宫自然杀伤细胞与树突状细胞之间的相互作用,明确两者相互作用的方式。方法:将树突状细胞和子宫自然杀伤细胞进行直接接触共培养,设为直接共培养组;在2种细胞Transwell系统中进行共培养,设为间接共培养组。观察培养细胞的生长状况,酶联吸附法检测培养上清白细胞介素10,12、转化生长因子β细胞因子的浓度,流式细胞术检测各组细胞表面标志CD86的表达情况。结果与结论:与单独培养树突状细胞和子宫自然杀伤细胞相比,直接和间接共培养组培养液上清中白细胞介素10,12、转化生长因子β浓度均增加(P<0.05),尤以白细胞介素10浓度增加明显(P<0.05),CD86的表达明显增高(P<0.05)。直接共培养组白细胞介素10,12和转化生长因子β浓度更高(P<0.05),表达CD86的细胞含量更多(P<0.05)。证实子宫自然杀伤细胞可以促进树突状细胞成熟,而树突状细胞促进子宫自然杀伤细胞的分泌,两者通过细胞间的直接接触而相互作用。     

组织工程皮肤移植过程中白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达

背景:白细胞介素10和肿瘤坏死因子α在异体异种皮肤移植局部免疫与排斥反应中发挥了重要作用.但在组织工程人工皮肤移植过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达情况目前尚不清楚.目的:采用表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤并移植修复兔全层皮肤缺损创面,观察创面修复效果和局部皮肤组织白介素10与肿瘤坏死因子α的表达变化.方法:将体外培养的人表皮干细胞或角质细胞接种到脱细胞真皮支架中,构建组织工程人工皮肤;取新西兰白兔常规制作背部全层皮肤缺损创面随机分为4组,表皮干细胞组、角质细胞组用含表皮干细胞或角质细胞的组织工程皮肤移植于皮肤缺损创面;脱细胞真皮组移植单纯脱细胞真皮;对照组创面空置.观察刨面修复情况,局部炎症反应,创面愈合时间.各组分别于术后7d在部分创而取材观察组织形态和白细胞介素10与肿瘤坏死因子α表达.结果与结论:含表皮干细胞的人工皮肤移植后创面愈合良好,局部炎症反应轻微,无出血、积脓、坏死,创面愈合时间较角质细胞组明显缩短.白细胞介素10在各组均有表达,其中表皮干细胞组表达最强,角质细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组最弱.肿瘤坏死因子α在各组也均有表达,其中角质细胞组表达最强,表皮干细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组较弱.说明以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用有效促进皮肤缺损创面的修复治疗,创面修复过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子的表达变化可能是其取得较好效果的主要机制之一.     

小干扰RNA抑制成熟树突细胞表面抗原CD80/CD86的表达

背景：成熟树突细胞可通过其表面抗原CD80/CD86来启动Th细胞活化,促使Th细胞向Th1细胞分化减少、向Th2细胞方向分化增多。〈br〉 目的：探讨小干扰RNA抑制哮喘小鼠成熟树突细胞表面抗原CD80/CD86表达后对Th1及Th2型细胞因子干扰素γ、白细胞介素4分泌的影响。方法：建立哮喘小鼠模型,分离哮喘小鼠骨髓成熟树突细胞,流式细胞术检测表面标记物 CD11c、CD80、CD86的阳性表达率;设计合成CD80/CD86相关小干扰RNA转染哮喘小鼠成熟树突细胞,荧光定量PCR、流式细胞术检测干扰前后成熟树突细胞中CD80/CD86 mRNA和相应蛋白的表达,将干扰组、未干扰组、转染试剂对照组的成熟树突细胞分别与小鼠T淋巴细胞共培养,ELISA检测上清液中Th1及Th2型细胞因子干扰素γ、白细胞介素4分泌水平。结果与结论：①正常组成熟树突细胞的CD80/CD86的表达与哮喘组相比均明显降低（均P＜0.05）。②小干扰RNA转染哮喘小鼠成熟树突细胞后,干扰组CD80/CD86 mRNA及其蛋白表达水平较其他组均明显降低（均P＜0.05）。③小干扰RNA转染后干扰组共培养体系中干扰素γ水平明显高于其他组（均P＜0.05）,白细胞介素4水平则明显低于其他组（均P ＜0.05）。提示哮喘小鼠成熟树突细胞高表达CD80/CD86,小干扰RNA特异性抑制哮喘小鼠成熟树突细胞中CD80/CD86的表达,能增加干扰素γ并减少白细胞介素4的分泌,从而纠正Th1/Th2失衡。     

胚胎骨髓来源间充质干细胞对人Th17细胞的免疫调节

背景:众多研究表明间充质干细胞能发挥免疫调节功能,抑制T细胞增殖。目的:观察胚胎骨髓来源间充质干细胞对人Th17细胞的调节作用。方法:将人胚胎骨髓间充质干细胞与正常人外周血单个核细胞或CD4+T细胞以1∶10比例共培养4d,以单个核细胞或CD4+T细胞单独培养为对照。应用实时定量PCR检测细胞白细胞介素17mRNA表达,酶联免疫吸附试验检测细胞上清中白细胞介素17蛋白水平,流式细胞术检测Th17细胞数量。结果与结论:胚胎骨髓来源间充质干细胞与单个核细胞共培养组白细胞介素17mRNA表达水平明显高于单个核细胞组(P<0.01)。与此一致的是,胚胎骨髓来源间充质干细胞与单个核细胞或CD4+T细胞共培养组细胞上清中白细胞介素17蛋白水平明显高于单个核细胞组、CD4+T细胞组(P<0.05,P<0.01)。胚胎骨髓来源间充质干细胞与CD4+T细胞共培养组Th17细胞数量明显高于CD4+T细胞组(P<0.01),但胚胎骨髓来源间充质干细胞本身并不表达白细胞介素17。表明胚胎骨髓来源间充质干细胞可促进人Th17细胞增殖。     

胚胎骨髓来源间充质干细胞对人Th17细胞的免疫调节

背景：众多研究表明间充质干细胞能发挥免疫调节功能,抑制T细胞增殖。目的：观察胚胎骨髓来源间充质干细胞对人Th17细胞的调节作用。方法：将人胚胎骨髓间充质干细胞与正常人外周血单个核细胞或CD4＋T细胞以1∶10比例共培养4d,以单个核细胞或CD4＋T细胞单独培养为对照。应用实时定量PCR检测细胞白细胞介素17mRNA表达,酶联免疫吸附试验检测细胞上清中白细胞介素17蛋白水平,流式细胞术检测Th17细胞数量。结果与结论：胚胎骨髓来源间充质干细胞与单个核细胞共培养组白细胞介素17mRNA表达水平明显高于单个核细胞组（P〈0.01）。与此一致的是,胚胎骨髓来源间充质干细胞与单个核细胞或CD4＋T细胞共培养组细胞上清中白细胞介素17蛋白水平明显高于单个核细胞组、CD4＋T细胞组（P〈0.05,P〈0.01）。胚胎骨髓来源间充质干细胞与CD4＋T细胞共培养组Th17细胞数量明显高于CD4＋T细胞组（P〈0.01）,但胚胎骨髓来源间充质干细胞本身并不表达白细胞介素17。表明胚胎骨髓来源间充质干细胞可促进人Th17细胞增殖。     

人外周单个核细胞来源树突细胞成熟与肺炎支原体膜脂蛋白的影响

目的：实验着眼于肺炎支原体膜脂蛋白对人外周血单个核细胞来源的树突细胞的表型（CD83，CD86）及分泌细胞因子的作用，探讨肺炎支原体加重哮喘的机制是否是改变了树突细胞的性状。 方法：①对象：所有外周血采自正常人，志愿献血者为武汉大学医学院2005级硕士博士研究生6人：实验用肺炎支原体膜脂蛋白购自广州华银医药科技有限公司。②实验过程及分组：从肘静脉采集志愿者20mL新鲜全血，以不连续密度梯度离心法及贴壁法获取单核细胞，加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，重组人白细胞介素4培养5d得到不成熟树突细胞后，分别予肺炎支原体膜脂蛋白，脂多糖和空白刺激再培养2d。③评估：用流式细胞仪检测各组树突细胞表面表达CD83，CD86的情况，用酶联免疫吸附法检测各组树突细胞分泌白细胞介素12的水平。 结果：①肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞表达CD83，CD86高于未刺激组（P〈0．01，P〈0．01）;脂多糖组树突细胞表达CD83，CD86高于末刺激组（P〈0．01，P〈0．01）;肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞表达CD83较脂多糖组无差异，表达CD86高于脂多糖组（P〈0．05）。②肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞分泌白细胞介素12高于未刺激组（P〈0．01）;脂多糖组树突细胞分泌白细胞介素12高于未刺激组（P〈0．01）；肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞分泌白细胞介素12低于脂多糖组（P〈0．05）。 结论：肺炎支原体膜脂蛋白可刺激未成熟树突细胞分化成熟，但较脂多糖刺激的不同，前者刺激成熟的树突细胞在呈递抗原给T细胞时，可进一步使T细胞向Th2极化，导致Th1／Th2平衡失调，从而加重哮喘。     

羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞构建组织工程皮肤

背景：由于人胎盘来源的间充质干细胞具有多方面的优点,近年来已成为干细胞研究的热点。目的：分析鉴定羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞的生物学特性,探讨其作为皮肤种子细胞在三维气液培养构建组织工程皮肤中的应用情况。方法：用胰酶胶原酶多步消化法获取羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞,通过流式细胞术、反转录-聚合酶链反应和免疫荧光染色技术,鉴定两种细胞的表面分子标记、干细胞特性、与皮肤角质形成细胞的相似性,并利用两种细胞为种子细胞以鼠Ⅰ型胶原为基质进行三维气液培养。结果与结论：①流式细胞术检测体外培养羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞均高表达CD90、CD73、CDl05,不表达造血干细胞标志CD34以及MHC-Ⅱ类分子HLA-DR。②反转录聚合酶链反应检测到羊膜间充质干细胞表达干细胞特性基因CMCY和NANOG,羊膜上皮细胞表达干细胞特性基因CMCY和KLF4,两种细胞均有干细胞特性。③反转录-聚合酶链反应检测羊膜间充质干细胞表达皮肤角质形成细胞特性基因K19、β1-integrin、K8,羊膜上皮细胞表达K19、β1-integrin、K5、K8,免疫荧光染色见羊膜上皮细胞表达与角质形成细胞增殖相关的的特性蛋白K14,说明羊膜上皮细胞与皮肤角质形成细胞更具相似性,在特定条件下更易于分化为皮肤角质形成细胞。④利用两种细胞成功构建组织工程皮肤,苏木精-伊红染色切片显示其具有一定的皮肤结构,且羊膜上皮细胞发生了初步分化。以上结果说明羊膜间充质干细胞与羊膜上皮细胞通过三维培养构建人皮肤组织是可行的。     

急性白血病RNA转染脐血源性树突状细胞介导的免疫作用

目的检测应用脐血诱导成熟树突状细胞(DC),并以急性白血病(AL)总RNA冲击该DC所诱导产生的特异性细胞毒T细胞(CTL)的杀伤活性。方法取AL患者外周血或骨髓,以淋巴细胞分离液获得单个核细胞(MNC),并提取RNA。分离脐血MNC,以2×106个细胞/孔接种于12孔培养板,培养体系中加入重组人粒单核细胞集落刺激因子(rhGM-CSF),重组人白细胞介素4(rhIL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),并在培养第5天,加入白血病总RNA,致敏脐血DC。培养过程中,观察树突状细胞形态,流式细胞仪检测表型。培养第12天收获成熟DC,与自体T淋巴细胞共培养,诱导产生白血病特异性CTL,乳酸脱氢酶法(LDH法)测定溶细胞活性。结果脐血来源DC表现出成熟DC典型形态和免疫表型特征,培养第5天,DC相关分化抗原CD1a、CD83、CD86、CD80的表达较培养前增高,差异有统计学意义(P<0.01);培养至第12天,DC相关分化抗原CD1a、CD83、CD86、CD80的表达较培养第5天增高,另外人类白细胞相关抗原(HLA-DR)的表达也较培养第5天增高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。以白血病RNA转染的DC组所刺激的自体T淋巴细胞对自身白血病靶细胞显示出明显的杀伤活性,而未经抗原转染DC组无明显杀伤活性,按照各效靶比进行两者的比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论利用细胞因子体外诱导脐带血产生大量成熟DC,以急性白血病RNA转染此DC,并以此白血病特异性DC诱导产生抗白血病特异性CTL,不失为清除AL患者体内残留灶的积极措施。     

生肌液-明胶-壳聚糖载药皮肤支架的细胞相容性水

背景:组织工程皮肤对于大面积皮肤缺损的修复与重建具有重要作用,含有中药的组织工程皮肤支架对于细胞黏附及创面感染控制的作用研究并不多见.目的:利用角质形成细胞与成纤维细胞筛选生肌液应用浓度,观察生肌液-明胶-壳聚糖载药皮肤支架对细胞黏附及生物相容性影响.设计、时间及地点:以角质形成细胞与成纤维细胞为观察对象,随机对照实验,于2005-02/08在大津市天津医院骨科研究所细胞工程室完成.材料:健康大耳白兔1只,用于获取皮肤种子细胞;生肌液、当归提取液及生地提取液(自行提取,1.5 g/mL),明胶-壳聚糖支架及生肌液-明胶-壳聚糖支架由天津大学提供.方法:①以dispase Ⅱ-胰蛋白酶-EDTA消化法获取第3代角质形成细胞与成纤维细胞.②实验分为5组,对照组为普通培养液(含体积分数为0.1胎生血清的基础培养基);生肌液组为含有生肌液质鬣浓度分别为5,6,8,12 g/L的培养液;当归组为含有当归提取液质量浓度为8 g/L.的培养液;生地组为含有生地提取液质昔浓度为8 g/L.的培养液;表皮生长因子组为含有10 μ g/L 表皮生长因子的培养液;分别用于培养第3代角质形成细胞和成纤维细胞,于1,3,5,7d用M1_r法榆测细胞的增殖情况.③制备基质中生肌液质量浓度分别为50,60,80,120 g/L的载药支架组,将上述细胞在支架上培养,分别于7,14 d用半定量方法观察细胞与支架的黏附情况.④60,80 g/L.载药支架组种植角质形成细胞,分别于4,7,14 d取材,进行苏木精一伊红染色和扫描电镜观察.主要观察指标:①生肌液对皮肤种子细胞增殖的影响.②载药支架对细胞黏附的影响.③细胞与载体的相容性.结果:①MTT检测结果表明,5、6、8g/L的尘肌液组细胞增殖较快,与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.05).②第3代角质形成细胞与成纤维细胞在60、80 g/L的载药支架上呵获得较多增殖.③支架E的角质形成细胞形态良好,与支架紧密贴附,药物对细胞无明显毒性作用.结论:生肌液质量浓度为60,80 g/L 的明胶-壳聚糖载药支架町有效促进角质形成细胞和成纤维细胞的黏附和增殖.     

HIV-1 Selection by Epidermal Dendritic Cells during Transmission across Human Skin

Macrophage tropic HIV-1 is predominant during the initial viremia after person to person transmission of HIV-1 (Zhu, T., H. Mo, N. Wang, D.S. Nam, Y. Cao, R.A. Koup, and D.D. Ho. 1993. Science. 261:1179–1181.), and this selection may occur during virus entry and carriage to the lymphoid tissue. Human skin explants were used to model HIV-1 selection that may occur at the skin or mucosal surface. Macrophage tropic, but not T cell line tropic strains of HIV-1 applied to the abraded epidermis were recovered from the cells emigrating from the skin explants. Dermis and epidermis were separated by dispase digestion after virus exposure to determine the site of viral selection within the skin. Uptake and transmission to T cells of all HIV-1 isolates was found with the dermal emigrant cells, but only macrophage tropic virus was transferred by emigrants from the epidermis exposed to HIV-1, indicating selection only within the epidermis. CD3⁺, CD4⁺ T cells were found in both the dermal and epidermal emigrant cells. After cell sorting to exclude contaminating T cells, macrophage tropic HIV-1 was found in both the dermal emigrant dendritic cells and in dendritic cells sorted from the epidermal emigrants. These observations suggest that selective infection of the immature epidermal dendritic cells represents the cellular mechanism that limits the initial viremia to HIV-1 that can use the CCR5 coreceptor.     

细胞共培养在组织工程研究中的应用及价值

背景:细胞共培养即最大程度地模拟机体内环境,在体外观察细胞与细胞之间的相互作用,是组织工程研究的热点.目的:总结并讨论细胞共培养研究在组织工程研究的应用及价值.方法:由第一作者用计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI:2000/2010)和Medline数据库(2000/2010),检索词分别为"细胞共培养,骨髓间充质干细胞,神经干细胞,软骨细胞,组织工程"和"Cells co-culture,Bone marrow stem cells,Neural stem cells,Cartilage",语言分别设定为中文和英文.从细胞共培养在骨髓间充值干细胞、神经干细胞和软骨细胞3方面进行总结,对细胞共培养在组织工程研究及应用方面进行介绍.结果与结论:共检索到182篇文章,按纳入和排除标准对文献进行筛选,共纳入30篇文章.结果表明大量细胞共培养的研究,都围绕着最大程度地模拟体内环境、维持体内性状,观察细胞与细胞之间相互作用,很多体外细胞共培养的研究结果和进展对于深入了解共培养有重要的指导和参考价值,但有关共培养的新方法新技术,研究结果,最新动向和研究热点但仍需进一步分析和总结.     

细胞共培养在组织工程研究中的应用及价值

背景：细胞共培养即最大程度地模拟机体内环境,在体外观察细胞与细胞之间的相互作用,是组织工程研究的热点。目的：总结并讨论细胞共培养研究在组织工程研究的应用及价值。方法：由第一作者用计算机检索中国期刊全文数据库（CNKI：2000/2010）和Medline数据库（2000/2010）,检索词分别为＂细胞共培养,骨髓间充质干细胞,神经干细胞,软骨细胞,组织工程＂和＂Cellsco-culture,Bone marrow stem cells,Neural stem cells,Cartilage＂,语言分别设定为中文和英文。从细胞共培养在骨髓间充值干细胞、神经干细胞和软骨细胞3方面进行总结,对细胞共培养在组织工程研究及应用方面进行介绍。结果与结论：共检索到182篇文章,按纳入和排除标准对文献进行筛选,共纳入30篇文章。结果表明大量细胞共培养的研究,都围绕着最大程度地模拟体内环境、维持体内性状,观察细胞与细胞之间相互作用,很多体外细胞共培养的研究结果和进展对于深入了解共培养有重要的指导和参考价值,但有关共培养的新方法新技术,研究结果,最新动向和研究热点但仍需进一步分析和总结。     

Progress of co-culture systems in cartilage regeneration

ABSTRACT

Introduction: Cartilage tissue engineering has rapidly developed in recent decades, exhibiting promising potential to regenerate and repair cartilage. However, the origin of a large amount of a suitable seed cell source is the major bottleneck for the further clinical application of cartilage tissue engineering. The use of a monoculture of passaged chondrocytes or mesenchymal stem cells results in undesired outcomes, such as fibrocartilage formation and hypertrophy. In the last two decades, co-cultures of chondrocytes and a variety of mesenchymal stem cells have been intensively investigated in vitro and in vivo, shedding light on the perspective of co-culture in cartilage tissue engineering.

Areas covered: We summarize the recent literature on the application of heterologous cell co-culture systems in cartilage tissue engineering and compare the differences between direct and indirect co-culture systems as well as discuss the underlying mechanisms.

Expert opinion: Co-culture system is proven to address many issues encountered by monocultures in cartilage tissue engineering, including reducing the number of chondrocytes needed and alleviating the dedifferentiation of chondrocytes. With the further development and knowledge of biomaterials, cartilage tissue engineering that combines the co-culture system and advanced biomaterials is expected to solve the difficult problem regarding the regeneration of functional cartilage.     

Gene transfer to epidermal stem cells: implications for tissue engineering

The skin is an attractive target for gene therapy because it is easily accessible and shows great potential as an ectopic site for protein delivery in vivo. Genetically modified epidermal cells can be used to engineer three-dimensional skin substitutes, which when transplanted can act as in vivo 'bioreactors' for delivery of therapeutic proteins locally or systemically. Although some gene transfer technologies have the potential to afford permanent genetic modification, differentiation and eventual loss of genetically modified cells from the epidermis results in temporary transgene expression. Therefore, to achieve stable long-term gene expression, it is critical to deliver genes to epidermal stem cells, which possess unlimited growth potential and self-renewal capacity. This review discusses the recent advances in epidermal stem cell isolation, gene transfer and engineering of skin substitutes. Recent efforts that employ gene therapy and tissue engineering for the treatment of genetic diseases, chronic wounds and systemic disorders, such as leptin deficiency or diabetes, are reviewed. Finally, the use of gene-modified tissue-engineered skin as a biological model for understanding tissue development, wound healing and epithelial carcinogenesis is also discussed.     

组织工程皮肤的研究与进展

背景:在因烧伤或外伤造成的大面积皮肤缺损的病例中,组织工程化皮肤为其提供了新的治疗方向,因此,研究皮肤组织工程的相关种子细胞及支架具有重要意义,已成为当今的研究热点。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库1990-01/2007-01有关皮肤组织工程的文章,检索词“tissue engineered skin,stem cell”,限定文章语言种类为English。同时应用计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据1994-01/2007-01期间的相关文章,检索词“皮肤组织工程,皮肤干细胞”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选取符合研究要求的相关文章全文。纳入标准:①有关皮肤组织工程种子细胞的研究。②有关皮肤组织工程支架的研究。排除标准:重复或类似的同一研究、Meta分析、或个案报道等。资料提炼:共收集到97篇有关皮肤组织工程的文章,排除重复或类似的同一研究,69篇符合研究要求。资料综合:组织工程学的发展为皮肤移植治疗大面积皮肤缺损提供了新的发展方向,使其克服了原有的皮肤供区不足、免疫排斥、传播疾病等各种问题。①皮肤种子细胞:胚胎干细胞及多种成体干细胞均可作为组织工程化皮肤的种子细胞,其中皮肤干细胞成为首选,将其种于生物支架上,可以获得临床所需的表皮、真皮及复合皮肤。②表皮替代物的研究现状。③目前各种真皮替代物的制作方法。④复合人工皮肤的研究方向。⑤现在各种技术仍不够成熟,大范围临床应用始终面临许多问题,但组织工程化皮肤已成为研究者的工作重点。结论:组织工程化皮肤是治疗大面积皮肤缺损的最佳方案,具有广阔的临床应用前景,随着生命科学、手术技术、材料科学以及诸多相关学科的飞速发展,一种功能与外形近乎正常皮肤的组织工程化皮肤既可实现。     

The use of sinecatechins (polyphenon E) ointment for treatment of external genital warts

The skin is an attractive target for gene therapy because it is easily accessible and shows great potential as an ectopic site for protein delivery in vivo. Genetically modified epidermal cells can be used to engineer three-dimensional skin substitutes, which when transplanted can act as in vivo ‘bioreactors’ for delivery of therapeutic proteins locally or systemically. Although some gene transfer technologies have the potential to afford permanent genetic modification, differentiation and eventual loss of genetically modified cells from the epidermis results in temporary transgene expression. Therefore, to achieve stable long-term gene expression, it is critical to deliver genes to epidermal stem cells, which possess unlimited growth potential and self-renewal capacity. This review discusses the recent advances in epidermal stem cell isolation, gene transfer and engineering of skin substitutes. Recent efforts that employ gene therapy and tissue engineering for the treatment of genetic diseases, chronic wounds and systemic disorders, such as leptin deficiency or diabetes, are reviewed. Finally, the use of gene-modified tissue-engineered skin as a biological model for understanding tissue development, wound healing and epithelial carcinogenesis is also discussed.     

壳聚糖-丝素支架与真皮间充质干细胞的体外复合培养

背景:壳聚糖与丝素有各自的优点和不足,将两者共混,可取长补短,改善性能.进行壳聚糖-丝素支架与真皮间充质干细胞体外复合培养的研究,可进一步为工程化组织构建打下基础.目的:将壳聚糖-丝素支架与大鼠真皮间充质干细胞体外复合培养,探讨壳聚糖-丝素支架对真皮间充质干细胞吸附、生长及增殖的影响.方法:①壳聚糖和丝素以质量比为3:7充分搅拌混匀,冻干制作壳聚糖-丝素海绵状支架,并测其孔径、孔隙率等指标.②将该支架与大鼠真皮间充质干细胞复合进行体外培养,倒置相差显微镜观察细胞与支架复合生长、基质形成以及细胞与支架结合的情况.分别于培养6,12,24 h消化支架上的细胞,计算细胞吸附率.于培养2,4,6,8,10 d后,用MTT法检测细胞增殖率情况.以无支架的细胞培养作为对照组.结果与结论:①倒置相差显微镜及扫描电镜下观察发现该支架有分布较均匀且细密的小孔,孔与孔之间相互连通,孔径大小较均匀,孔径在100～150 μm之间,孔隙率为90.3%.②24 h内,真皮间充质干细胞对支架的黏附率随着时间的增加而逐渐增高,24 h时的黏附率为93%,表明真皮间充质干细胞可良好地黏附于壳聚糖-丝素支架上.③MTT法检测细胞增殖结果显示,于培养各检测时间点,实验组与对照组比较差异均无显著性意义.于培养早期(第2,4天),对照组增殖细胞数略高于实验组;于培养第10天,实验组的增殖细胞数略高于对照组.倒置相差显微镜观察细胞于支架上的形态和附着良好,并有较旺盛的细胞基质分泌.表明真皮间充质干细胞在该支架上能良好地生长、增殖.提示壳聚糖-丝素支架是真皮间充质干细胞体外培养的良好支架材料.     

Co-culture in cartilage tissue engineering

For biotechnological research in vitro in general and tissue engineering specifically, it is essential to mimic the natural conditions of the cellular environment as much as possible. In choosing a model system for in vitro experiments, the investigator always has to balance between being able to observe, measure or manipulate cell behaviour and copying the in situ environment of that cell. Most tissues in the body consist of more than one cell type. The organization of the cells in the tissue is essential for the tissue's normal development, homeostasis and repair reaction. In a co-culture system, two or more cell types brought together in the same culture environment very likely interact and communicate. Co-culture has proved to be a powerful in vitro tool in unravelling the importance of cellular interactions during normal physiology, homeostasis, repair and regeneration. The first co-culture studies focused mainly on the influence of cellular interactions on oocytes maturation to a pre-implantation blastocyst. Therefore, a brief overview of these studies is given here. Later on in the history of co-culture studies, it was applied to study cell-cell communication, after which, almost immediately as the field of tissue engineering was recognized, it was introduced in tissue engineering to study cellular interactions and their influence on tissue formation. This review discusses the introduction and applications of co-culture systems in cell biology research, with the emphasis on tissue engineering and its possible application for studying cartilage regeneration.