针刺对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞的影响

目的探讨针刺对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞（ENSCs）的诱导分化。方法 25只成年SD雄性大鼠,随机分为假手术组、模型组和针刺治疗组。假手术组不损伤脊髓,模型组和针刺治疗组用改良Allen’s重物坠击法制备脊髓损伤模型。模型组不予任何处理;针刺治疗组予以针刺治疗,每日1次,7d为1疗程,共2个疗程。于2周后取材,对距离损伤中心5mm的脊髓行免疫组化染色,检测Nestin、Brdu、NSE、GFAP的表达。结果 Nestin和Brdu的表达针刺治疗组较模型组多,假手术组最少;NSE的表达针刺治疗组较模型组多,但少于假手术组;GFAP的表达模型组高于针刺治疗组,假手术组最低。结论针刺对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞有诱导分化作用。     

夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠神经干细胞分化趋势的影响

目的:观察夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠脊髓组织神经干细胞增殖分化的影响,探究其与急性脊髓损伤后神经细胞再生的关系。方法:选用72只体重在200~220 g之间的雄性SD大鼠。随机将大鼠分为假手术组,模型组,电针组和药物组,每组分术后1 d、7 d、14 d等时间点,每个时间点有6只。采用改良的Allen法建立大鼠T9~T10段脊髓急性中度损伤模型,用免疫荧光双标法检测各组大鼠脊髓组织中Brd U/nestin阳性细胞的共表达,用BBB评分反映大鼠的运动功能恢复。结果:治疗结束后,模型组、电针组和药物组BBB评分和Brd U/nestin阳性细胞数呈逐级增高趋势,其中与模型组相比,电针组Brd U/nestin阳性细胞数明显增多(P0.05),BBB评分明显提高(P0.05)。结论:夹脊电针干预后,Brd U/nestin表达增多,BBB评分提高,促进了大鼠神经干细胞的分化和运动功能的恢复。     

夹脊电针干预脊髓损伤大鼠OMgp表达的研究

目的:探讨大鼠脊髓损伤后,电针对脊髓损伤后轴突再生抑制性因子OMgp含量表达变化影响的研究。方法:将大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、夹脊电针治疗组(电针组)和单唾液酸神经节苷脂治疗组(GM1组)。采用改良的Allen氏WD(weightdrop)法撞击T9^T10段脊髓,造成该段脊髓的急性中度损伤,分别给予夹脊电针和GM1注射治疗,并在损伤后1 d,7 d,14 d分批处死大鼠。每组大鼠均在损伤后和处死前进行BBB评分,判定其损伤和恢复情况。灌注之后采用蛋白印迹(western blot)检测方法,观察伤段脊髓的抑制因子—少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(oligodendrocyte-myelin glycoprotein,OMgp)的表达。结果:BBB评分显示,模型对照组、电针组和GM1组的评分呈逐级增高趋势,其中电针组上升趋势比模型组明显,具有统计学意义(P<0.05)。蛋白印迹结果显示,电针组和GM1组抑制因子OMgp的表达量均少于模型组,具有统计学意义(P<0.05)。结论:夹脊电针能减少髓鞘生长抑制因子OMgp的表达,从而促进脊髓损伤后轴突的再生及大鼠后肢运动功能恢复。     

夹脊电针治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

夹脊电针上下连接电极能够在脊髓内产生较强的电场，用于治疗脊髓损伤，其机理可能为通过产生拮抗内生性损伤电流而阻止Ca^2 内流，稳定膜结构，增加线粒体酶活性，阻断脊髓继发性病变，保护脊髓神经轴突的退变，促进神经轴突再生。目的：探讨夹脊电针治疗脊髓损伤的机理。方法：采用Wistar大鼠为受试对象，以改良的Allen′s法造成T11－T12脊髓撞击伤模型，术后随机分为治疗组和对照组，治疗组采用夹脊电针治疗，观察两组急性期伤区脊髓组织含水量及组织总钙含量动态变化和术后4周大鼠瘫肢运动功能及组织形态学（包括形态计量学）变化。结果：治疗组在神经功能、生化、组织形态学方面均优于对照组，二者之间差异显著（P＜0．05）。结论：夹脊电针能明显减轻脊髓损伤早期继发性病理损害，并能有效促进损伤后中枢神经的功能恢复。     

电针人中穴对脑梗死大鼠内源性神经干细胞分化的影响

[目的] 观察电针人中穴（GV26）对脑梗死（CI）后内源性神经干细胞增殖、分化的影响。[方法] Wistar大鼠随机分为电针组、模型组、假手术组、空白组,前3组每组24只,按干预和取材的时间分为1、3、7、14 d 4个亚组,空白组6只,采用神经功能缺损体征评分（NSS）评定各组大鼠神经功能缺损程度;苏木精-伊红（HE）染色法观察CI后内源性神经干细胞的形态改变;免疫组化、免疫荧光双标记法检测CI后内源性神经干细胞的增殖、分化。[结果] 神经功能方面,空白组、假手术组NSS评分无变化,神经功能正常,模型组、电针组CI大鼠随着时间的延长,两组大鼠在感觉、反射、肢体功能等方面均有改善,3、7、14 d时电针组NSS评分低于模型组,两组差异有统计学意义（P<0.05）;HE染色,空白组和假手术组脑组织形态未见明显异常,模型组和电针组均可见神经细胞的细胞核固缩、伴细胞空泡,随干预天数增加,逐渐有结缔组织、星形胶质细胞与正常细胞生成,电针组整体修复情况优于模型组;免疫组化,与空白组、假手术组比较,模型组大鼠各时相内源性神经干细胞（eNSPCs）特异性标识物齿状回巢蛋白（Nestin）目标蛋白平均光密度值（AOD）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP） AOD均明显升高（P<0.01）,与模型组比较,电针组各时相Nestin AOD均较高（P<0.05或P<0.01）,3、7、14 d时GFAP AOD均升高（P<0.05或P<0.01）;免疫荧光双标记,与空白组、假手术组比较,模型组大鼠Nestin及GFAP表达量均明显升高（P<0.01）,荧光信号强,与模型组比较,电针组各时相Nestin表达均升高（ P<0.05或P<0.01）,Nestin/5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）共标记信号强,3、7、14 d时GFAP表达升高（P<0.05或P<0.01）,GFAP/BrdU共标记信号强。[结论] 电针人中穴可明显改善CI大鼠神经功能损伤情况,促进内源性神经干细胞的增殖、分化为星形胶质细胞,从而有利于CI后神经功能网络的修复和功能的重建。     

夹脊电针法对脊髓损伤大鼠相关因素影响的实验研究进展

查阅近10年来夹脊电针法治疗脊髓损伤大鼠模型实验研究的文献,从染色法、评分法、神经电生理、聚合酶链式反应、蛋白印迹法等方面对其疗效进行评价。认为夹脊电针法治疗脊髓损伤具有穴位和电刺激双重功效,电针的作用机制主要为减轻继发性损伤、促进轴突生长,为临床治疗提供了实验依据。参考文献26篇。     

夹脊电针调节自噬流促进大鼠脊髓损伤修复

目的：探讨夹脊电针对脊髓损伤大鼠自噬流的影响,明确其促进脊髓损伤修复的机制。 方法：实验采用NYU Impactor M-Ⅲ打击器制作Allen’s模型,将48只大鼠随机分为四组,分别为假手术组（Sham）、模型组（Model）、夹脊电针组（EA）、夹脊电针+抑制剂组（EA+CQ）。 每组各12只,再将每个实验组按照不同的治疗时间分为3d组和7d组两个亚组,每组各6麻醉处死取出受损节段脊髓组织进行免疫组化检测,观察自噬体标记因子LC3和自噬底物P62的表达情况。结论：Model组和Sham组比较,BBB评分降低（p<0.01）,LC3和P62的表达含量增加（p<0.01）,说明自噬流被阻塞,EA组和Model组比较能促进大鼠后肢运动功能的恢复（p<0.05）,增强LC3的表达含量（p<0.05）,降低P62的表达（p<0.05）,说明夹脊电针可以促进自噬流。而在夹脊电针治疗的基础上注射抑制剂,增强LC3的表达（p<0.05）,而逆转了BBB评分和P62的表达（p<0.01）。证明夹脊电针治疗能促进自噬流修复损伤脊髓,改善大鼠后肢运动功能。     

夹脊电针治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

夹脊电针上下连接电极能够在脊髓内产生较强的电场,用于治疗脊髓损伤,其机理可能为通过产生拮抗内生性损伤电流而阻止Ca2+内流,稳定膜结构,增加线粒体酶活性,阻断脊髓继发性病变,保护脊髓神经轴突的退变,促进神经轴突再生。目的:探讨夹脊电针治疗脊髓损伤的机理。方法:采用Wistar大鼠为受试对象,以改良的Allen’s法造成T11-T12脊髓撞击伤模型,术后随机分为治疗组和对照组,治疗组采用夹脊电针治疗,观察两组急性期伤区脊髓组织含水量及组织总钙含量动态变化和术后4周大鼠瘫肢运动功能及组织形态学(包括形态计量学)变化。结果:治疗组在神经功能、生化、组织形态学方面均优于对照组,二者之间差异显著(P<0.05)。结论:夹脊电针能明显减轻脊髓损伤早期继发性病理损害,并能有效促进损伤后中枢神经的功能恢复。     

电针督脉对脊髓损伤大鼠脊髓组织线粒体融合及神经干细胞增殖分化的影响

目的：观察电针督脉对脊髓损伤（SCI）大鼠损伤区脊髓组织中线粒体融合及神经干细胞增殖分化的影响,探讨电针促进SCI神经修复的机制。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组各15只。采用精密打击器打击法构建胸10节段SCI模型。电针组大鼠予以电针“大椎”“脊中”,30 min/次,1次/d,共14 d。用Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)运动功能评分法评估大鼠后肢的运动功能;HE染色法、尼氏染色法观察大鼠损伤区脊髓组织病理变化及神经元数量;免疫荧光染色法检测大鼠损伤区脊髓组织中神经干细胞增殖标记物巢蛋白（Nestin）、线粒体融合相关蛋白视神经萎缩蛋白1(OPA1)及神经干细胞转录因子性别决定区Y框蛋白2(SOX2)的阳性表达;实时荧光定量PCR法、Western blot法检测大鼠脊髓组织中Nestin mRNA及蛋白的表达。结果：与同时点假手术组比较,模型组大鼠造模后BBB评分降低（P<0.001）;脊髓组织中神经元肿胀、破裂、坏死严重,尼氏小体溶解严重,神经元数量减少（P<0.001）;Nestin、OPA1、SOX2阳性表达及Nes...     

电针治疗脊髓损伤后神经源性膀胱作用机制的研究与思考

回顾和分析近10年来电针治疗脊髓损伤后神经源性膀胱的相关国内外实验研究文献,以探索电针治疗此病的作用机制。从临床观察指标上看,电针具有改善尿动力学参数,增大膀胱容量,降低膀胱压力,改善膀胱顺应性等作用。从作用机制上看,电针可以通过提高NGF及其受体TrkA、BDNF及其受体TrkB的表达调节膀胱的兴奋性和顺应性;通过提高α-SMA蛋白的表达而增强膀胱兴奋性;通过降低膀胱组织中Cyt-C、Apaf-1、caspase-3,9蛋白表达和促进bcl-2、抑制bax的表达而降低细胞凋亡;通过上调PACAP-cAMP-PKA信号通路蛋白的表达而改善膀胱功能。目前针刺治疗SCI后NB尚无嘌呤受体信号途径与缝隙连接蛋白的实验研究,也为今后的实验探索提供了新的途径。     

电刺激促进中枢神经系统内源性神经干细胞的增殖与分化及在脊髓损伤中的作用

本文简要地回顾了半个世纪以来人们对于哺乳类动物中枢神经系统内源性神经干细胞(endoge-nous neural stem cells,eNSCs)的认识。eNSCs和神经前体细胞的增殖与分化贯穿生命始终,而不是传统学说所述的出生后神经细胞不再分裂。在脊髓,这些细胞将分化成成熟的少突胶质细胞及其它胶质细胞。笔者基于近年来植入功能性电刺激器(FES)治疗脊髓损伤的研究工作,回顾了在正常或损伤的实验动物中,将FES植入大脑皮质或周围神经干可以增加脊髓内eNSCs的分化与增生,进而促进脊髓再髓鞘化及组织修复等研究进展;同时探讨了将eNSCs和FES的研究工作与针灸,尤其是电针治疗相结合的可能性。     

复元活血汤加减联合电针对脊髓损伤后神经功能康复的效果

目的:观察复元活血汤加减联合电针对脊髓损伤(SCI)神经功能康复的效果及对神经营养因子和炎症因子的影响。方法:将120例患者随机分为观察组61例和对照组59例。两组患者基础治疗,单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液,200~400 mg,静脉滴注,1次/d,共6周;注射用鼠神经生长因子,20μg,肌肉注射,1次/d,共4周。对照组给予电针治疗,及口服通络化痰胶囊,3粒/次,3次/d。观察组电针治疗同对照组,并内服复元活血汤加减,1剂/d。两组疗程均为连续治疗12周。脊髓神经功能损伤程度采用美国脊柱损伤协会(ASIA)残损评分;采用脊髓损伤步行指数Ⅱ(WISCⅠⅡ)和10 m步行时间(10 MWT)评价下肢运动能力;日常生活功能采用Barthel指数(MBI),评价膀胱功能,检测外周血脑源性神经生长因子(BDNF),神经生长因子(NGF),星形胶质原性钙结合蛋白S-100β(S-100β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),和白细胞介素-1β(IL-1β)水平,以上指标均治疗前后各评价1次。结果:治疗后观察组患者ASIA量表感觉评分和运动评分均高于对照组(P<0.01);观察组患者WISCⅠⅡ评分高于对照组,10 MWT短于对照组(P<0.01);观察组日漏尿次数、尿失禁量和残余尿量均少于对照组,膀胱容量多于对照组(P<0.01);观察组患者日常生活功能好于对照组(Z=1.967,P<0.05);观察组BDNF和NGF水平均高于对照组,S-100β,TNF-α和IL-1β水平均低于对照组(P<0.01)。结论:在西医常规治疗的基础上,采用内服复元活血汤加减配合电针治疗SCI患者,可促进神经功能恢复,改善感觉和运功能力,提高膀胱功能和日常生活能力,并可促进神经营养因子的表达,抑制炎症反应。     

夹脊电针对脊髓损伤小鼠运动功能及凋亡蛋白的影响

目的观察夹脊电针对脊髓损伤小鼠模型运动功能及凋亡蛋白的影响。方法 96只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组和电针组[疏密波(2/100Hz),0.2mA,15min],每组24只,采用腹腔注射麻醉剂制备T10SCI模型。选择T8和T12两对夹脊穴进行针刺治疗,每天1次,干预28d。观察CatWalk步态分析,采用Western Blot测定脊髓P53、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与模型组同期比较,电针组14、28d小鼠爪印面积、支撑时相比增加,P53表达降低,28d下肢摆动速度加快(P<0.05);针刺组28d小鼠下肢摆动速度、支撑时相比增加,7、14、28dP53表达降低(P<0.05);电针组和针刺组3~28dBax表达降低,7~28dBcl-2表达升高(P<0.01,P<0.05)。与针刺组同期比较,电针组28d爪印面积变大、支撑时相比增加,P53表达降低,7、14dBax表达降低,7、28dBcl-2表达升高(P<0.05)。结论夹脊电针可促进脊髓损伤小鼠运动功能恢复,抑制P53、Bax和促进Bcl-2表达。     

灵芝孢子对大鼠受损伤的脊髓神经干细胞增殖和分化的影响

目的探讨灵芝孢子对大鼠受损伤的脊髓自身神经干细胞增殖和分化的影响。方法将成年SD 大鼠随机分成损伤不用药组和损伤用药组。对两组动物 T12脊髓段施行右侧半横断后,在其腹腔内注射溴脱氧尿嘧啶(5’-Bromo-2’-deoxyuridine,BrdU 50mg/kg),每天2次,连续注射10天。损伤用药组动物胃饲灵芝孢子。在脊髓损伤后2周和4周,用免疫荧光组织化学法检测两组动物脊髓中央管室管膜细胞的 BrdU、nestin、neurofilament(NF)、oligodendrocyte specific protein 和 glial fibrillary acidic protein(GFAP)标记物,并分析其增殖和分化情况。结果损伤用药组大鼠脊髓室管膜细胞 BrdU 阳性染色数量[(45.67±3.62)个]高于损伤不用药组[(29.91±3.68)个]。在脊髓白质中,有些 BrdU 阳性细胞同时表达 oligodendrocyte specific protein 或nestin 或 NF 或 GFAP。结论灵芝孢子能够促进大鼠受损伤脊髓中央管室管膜细胞增殖,少数增殖后的细胞能分化为神经干细胞、神经元...     

黄芪注射液联合间质干细胞对大鼠脊髓损伤修复作用的实验研究

目的研究黄芪注射液与间质干细胞联合应用对大鼠脊髓损伤修复的影响。方法Wistar大鼠120只随机分成假手术组、模型组、PBS液对照组、黄芪注射液对照组、大鼠骨髓间质干细胞(rMSCs)移植治疗组和rMSCs移植加黄芪注射液治疗组。造模后3 d治疗组经脊髓局部注射rMSCs和脊髓局部注射rMSCs同时加用黄芪注射液腹腔注射,对照组则分别注射PBS液和黄芪注射液。移植后7、14、21、28天分别行(Basso Beattie Bresnahan,BBB)评分法检测大鼠神经功能恢复情况,进一步取脊髓组织作病理学检查,并应用双标免疫组化检测5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记rMSCs的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元中丝蛋白(NF-M)表达情况。结果治疗组较对照组损伤脊髓修复明显,神经功能评分显著提高(P0.05)。rMSCs移植加黄芪注射液治疗组在不同时间点的神经功能评分都高于rMSCs移植治疗组。脊髓组织病理切片显示rMSCs移植加黄芪注射液治疗组较rMSCs移植治疗组组织水肿和炎性细胞浸润减轻更明显,胶质细胞增生更活跃。双标免疫组化显示移植的rMSCs在宿主脊髓中存活,从第7 d开始即有GFAP和NF-M表达并向损伤部位迁移。rMSCs加黄芪注射液治疗组中GFAP、NF-M阳性细胞数目均较rMSCs移植治疗组增多(P0.05)。结论rMSCs移植是治疗脊髓损伤的有效方法;黄芪注射液在体内有诱导rMSCs向神经细胞分化的能力,并有协同rMSCs促进大鼠脊髓损伤修复的作用。     

重复电针预处理对兔脊髓缺血损伤后热休克蛋白90表达的影响

目的 :探讨重复电针刺激“足三里”穴对脊髓缺血性损伤保护作用的部分机理。方法 :1 6只成年雄性新西兰大白兔随机分成两组 (各组n =8) ,即对照组、电针预处理组。对照组每天静脉给予戊巴比妥钠 3 0mg/kg,连续 5d ;电针预处理组每天静脉给予戊巴比妥钠 3 0mg/kg,同时给予电针刺激双侧“足三里”穴 ,3 0min/d ,连续 5d。最后 1次预处理结束后 2 4h ,夹闭肾下腹主动脉2 0min ,制作兔脊髓缺血模型 ;并于 48h后处死动物取脊髓 (L5～ 7)制作标本 ,行免疫组织化学染色。结果 :再灌注 48h脊髓前角的HSP 90表达电针预处理组明显多于对照组 (P <0 .0 1 )。结论 :重复电针刺激“足三里”行预处理诱导缺血耐受的机理可能与增强HSP 90在脊髓前角的表达相关。     

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓组织超微结构的影响

目的探讨补阳还五汤(BYHWD)对脊髓损伤(SCI)大鼠脊髓组织超微结构的影响,从微观角度探讨脊髓损伤的病理机制。方法应用SPF级Wistar大鼠,采用Allens’打击法制作中度SCI模型,参照改良Tarlov评分标准,分为模型组、BYHWD组、金纳多组,正常组不造模;用药2周结束实验后,取SCI大鼠脊髓组织制片行透射电子显微镜超微结构观察。结果正常组大鼠胞内与灰质内均未观察到空泡;模型组大鼠脊髓损伤严重,大部分的线粒体嵴丢失,形成空泡,内质网重度扩张,与其他组别比较有明显差异,差异有统计学意义(P<0.01);BYHWD组与模型组和金纳多组比较有明显好转,差异有统计学意义(P<0.01)。大鼠后肢运动功能Tarlov评分结果:在0 d～3周内,正常组大鼠后肢运动功能Tarlov评分无明显变化;BYHWD组与金纳多组评分随时间变化差异无统计学意义(P>0.05),与模型组及正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BYHWD能有效保护损伤脊髓组织的组织结构继发性损伤,营养神经元细胞,促进神经纤维的修复。     

电针对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡PARP-1裂解片段表达的影响

目的：观察电针对脊髓损伤后神经细胞凋亡基因PARP-1裂解片段表达的影响。方法：采用Allen＇s法制备急性脊髓损伤模型。动物分为电针组、药物组（Caspase-3抑制剂组）、模型组、假手术组。应用TUNEL法对细胞凋亡进行标记。结果：脊髓损伤后6h即发现神经细胞凋亡,1d达到高峰,3d、7d、14d随后下降。凋亡的细胞主要位于脊髓灰质前角。且电针对PARP-1裂解片段在1d、14d有明显抑制作用。结论：PARP-1裂解片段可能促进神经元的凋亡而参与了脊髓继发性损伤。电针通过抑制PARP-1裂解片段在大鼠脊髓损伤神经元中表达,抑制神经细胞凋亡而减轻脊髓继发性损伤。