5-HT5A受体在长春新碱致神经病理性痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化中的作用

目的 评价5-羟色胺5A受体(5-HT5AR)在长春新碱致神经病理性痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化中的作用.方法 雄性成年SD大鼠40只,体重180～200 g,随机分为4组(n=10):对照组(C组)、神经病理性痛组(P组)、空载体腺病毒组(B组)和siRNA重组腺病毒载体组(S组).C组腹腔注射生理盐水1 ml;P组、B组和S组第1～5天和第8～12天每天定时腹腔注射0.1 mg/kg长春新碱建立大鼠神经病理性痛模型.腹腔给药结束第2天测定机械痛阈,然后P组、B组和S组分别鞘内注射人工脑脊液、空载体腺病毒和siRNA重组腺病毒载体25μl.鞘内给药后第7天测定机械痛阈,然后处死大鼠,取L4.5脊髓组织,测定脊髓背角5-HT5AR及胶原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 与C组比较,P组、B组和S组各时点机械痛阈降低,脊髓背角5-HT5AR和GFAP的表达均上调(P＜0.05);与P组比较,S组鞘内给药后第7天机械痛阈降低,脊髓背角5-HT5AR表达下调,GFAP表达上调(P＜0.05),B组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 5-HT5AR参与了星形胶质细胞活化的抑制过程,从而减轻长春新碱致大鼠神经病理性痛.     

脊髓背角γ-氨基丁酸转运体-1在大鼠骨癌痛中的作用

目的 评价脊髓背角γ-氨基丁酸转运体-1 (GAT-1)在大鼠骨癌痛中的作用.方法 清洁级健康雌性SD大鼠80只,体重150～180 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=16):假手术组(Ⅰ组);骨癌痛组(Ⅱ组)采用胫骨上段骨髓腔接种Walker-256乳腺癌细胞的方法制备大鼠骨癌痛模型;假手术+ GAT-1选择性抑制剂NO-711组(Ⅲ组)和骨癌痛+NO-711(Ⅳ组)于术后第14天鞘内注射NO-711 20 μg,1次.d,连续3d;骨癌痛+生理盐水组(Ⅴ组)于术后第14天鞘内注射10μl生理盐水,1次/d,连续3d.于术前1d、术后第3、5、7、10、14、16天时测定大鼠机械痛阈,术后第16天机械痛阈测定后处死大鼠,取腰段脊髓,采用Western blot法检测脊髓GAT-1的表达,采用免疫荧光双标法观察Ⅰ组和Ⅱ组大鼠患侧脊髓GAT-1和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应阳性产物的共表达.结果 与Ⅰ组和Ⅲ组比较,Ⅱ组、Ⅳ组和Ⅴ组术后第7～ 16天机械痛阈降低,Ⅱ组和Ⅴ组术后GAT-1表达上调(P＜0.05);与Ⅱ组和Ⅴ组比较,Ⅳ组术后第16天鞘内给药后机械痛阈升高,脊髓背角GAT-1表达下调(P＜0.05);与Ⅰ组比较,Ⅱ组患侧脊髓GFAP和GAT-1共表达增加(P＜0.05).结论 脊髓背角GAT-1的表达上调参与了大鼠骨癌痛的形成与维持,该作用可能与脊髓星形胶质细胞的活化有关.     

脊髓背角星形胶质细胞NF-κB在紫杉醇诱发大鼠神经病理性痛中的作用

目的 评价脊髓背角星形胶质细胞NF-κB紫杉醇诱发大鼠神经病理性痛中的作用.方法 健康雄性SD大鼠20只,6周龄,体重180～200 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n＝10):对照组(C组)和神经病理性痛组(NP组).NP组隔日腹腔注射紫杉醇2 mg/kg,共4次;对照组隔日腹腔注射生理盐水1 ml/kg,共4次.于给药前和给药结束后1、7、14 d时分别测定体重、机械痛阈和热痛阈.给药结束后14 d时,处死大鼠,取L4～6脊髓组织,采用免疫荧光法测定脊髓背角星形胶质细胞NF-κB p65的表达.结果 两组体重比较差异无统计学意义(P＞0.05).与C组比较,NP组给药结束后7和14 d时机械痛阈和热痛阈降低,脊髓背角星形胶质细胞NF-κB p65表达上调(P＜0.05或0.01).结论 紫杉醇通过激活脊髓星形胶质细胞中的NF-κB,诱发大鼠神经病理性痛.     

神经病理性痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞NF-κB活性的变化

目的 观察神经病理性痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞NF-κB活性的变化,以探讨脊髓星形胶质细胞调控神经病理性痛时胞内可能的信号转导通路机制.方法 雄性SD大鼠16只,月龄2～3 71,体重220～280 g,随机分为2组(n=8):假手术组(S组)和神经病理性痛组(CCI组).CCI组采用慢性压迫性损伤法制备大鼠慢性神经病理性痛模型,S组仅暴露坐骨神经.分别于术前1 d和术后7 d测定机械痛阈和热痛阈,术后第7天测定痛阈后处死大鼠,取脊髓,记录腰段脊髓背角星形胶质细胞核内NF-κBp65的免疫反应阳性细胞数.结果 与术前1 d比较,CCI组大鼠术后7 d机械痛阈和热痛阈降低(P<0.05).与S组比较,CCI组大鼠术后7 d机械痛阈和热痛阈降低,术侧脊髓背角星形胶质细胞NF-κBp65免疫阳性细胞数增多(P<0.05).结论 脊髓背角星形胶质细胞参与大鼠神经病理性痛的调控,其机制可能与NF-κB信号转导通路有关.     

鞘内注射氟代柠檬酸对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用

目的通过观察鞘内注射星形胶质细胞特异性抑制剂氟代柠檬酸(FC)对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用,探讨脊髓星形胶质细胞在神经病理性疼痛中的作用。方法雄性SD大鼠32只,随机分为4组(n=8),A组行假手术,鞘内注射FC的溶媒;B组行假手术,鞘内注射FC;C组制作坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型,鞘内注射FC的溶媒;D组制备CCI模型,鞘内注射FC。鞘内置管后3 d,制备CCI模型,术后1 d开始行鞘内注射,1次/d(容积1μl),连续6 d,剂量为1 nmol/μl。分别于术前1 d(基础值)、术后1、3、5、7 d测定大鼠的机械痛阈和热痛阈。术后7 d测定热痛阈后立即处死大鼠,取L4.5脊髓组织,其中4只用于免疫组化实验(测定IL-6表达),另外4只用于RT-PCR实验(测定IL-6 mRNA表达)。结果CCI可导致机械痛阈和热痛阈降低,脊髓组织IL-6 mRNA和IL-6表达增加;而鞘内注射FC可在一定程度上抑制CCI导致的上述改变。结论脊髓星形胶质细胞的激活参与大鼠神经病理性疼痛的调节。     

神经肽Y2受体在大鼠神经病理性痛中的作用

目的 探讨神经肽Y2受体(NPY2R)在大鼠神经病理性痛中的作用.方法 SPF级雄性SD大鼠36只,8周龄,体重190～ 210 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=12):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和NPY2R反义寡核苷酸组(ODN组).NP组和ODN组采用坐骨神经慢性压迫法制备神经病理性痛模型.术后7d时ODN组鞘内注射5μg/μlNPY2R反义寡聚核苷酸30 m.分别于术前3 d(T0,基础状态)、术后7 d(T1)、鞘内给药后15 min、1.5、3.0、4.5、6.0 h(T2-6)时测定机械痛阈和冷痛阈,然后处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用免疫荧光法测定脊髓背角神经元NPY2R、降钙素基因相关肽(CGRP)的表达和二者共表达(NPY2R/CGRP)水平.结果 与S组比较,NP组和ODN组T1.时机械痛阈降低,冷痛阈升高,脊髓背角神经元NPY2R、CGRP表达上调(P＜0.05);与NP组比较,ODN组T3-5时机械痛阈升高,脊髓背角神经元NPY2R和NPY2R/CGRP表达下调(P＜0.05),冷痛敏和脊髓背角神经元CGRP表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓背角神经元NPY2R参与了大鼠神经病理性痛的机械痛觉过敏维持,而未参与冷痛觉过敏维持.     

鞘内注射γ-氨基丁酸转运体-1特异性小干扰RNA对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨鞘内注射γ-氨基丁酸转运体-1(GAT-1)特异性小干扰RNA(siRNA)对大鼠神经病理性痛的影响.方法 雄性SD大鼠,体重200～250 g.第一部分实验20只大鼠随机分为5组(n=4):GAT-1 siRNA-1组、GAT-1siRNA-2组、GAT-1 siRNA-3组、阴性对照siRNA组和DEPC处理组.坐骨神经结扎2 d后鞘内注射相应的siRNA 2μg/d或等容量DEPC水,连续3 d,于末次鞘内注射后第2天取大鼠脊髓腰膨大,采用Western blot法检测脊髓背角GAT-1蛋白的表达.第二部分实验 30只大鼠随机分为3组(n=10):GAT-1 siRNA-3+lipo2000组、GAT-1 siRNA-3错译siRNA+lipo2000组和DEPC处理+lipo2000组,于坐骨神经结扎前、坐骨神经结扎后3 d、鞘内续给药结束后1、3、5、7、10 d时测定机械痛阈和热痛阈.第三部分实验84只大鼠随机分为3组(n=28),同第二部分实验,于各时点每组随机取4只大鼠处死,取脊髓腰膨大,采用Western blot法测定脊髓背角GAT-1蛋白的表达.结果 鞘内注射GAT-1 siRNA后神经病理性痛大鼠机械痛阈和热痛阈升高,脊髓背角GAT-1蛋白表达下调(P＜0.05).结论 鞘内注射GAT-1 siRNA可通过抑制脊髓背角GAT-1蛋白表达上调,减轻大鼠神经病理性痛.     

脊髓小胶质细胞抑制对神经病理性痛大鼠脊髓背角GABAB受体表达的影响

目的 通过观察鞘内注射特异性小胶质细胞抑制剂米诺环素对神经病理性痛大鼠脊髓背角GABAB受体表达的影响,探讨脊髓小胶质细胞活化介导神经病理性痛发生的作用机制.方法 雄性SD大鼠48只,体重220～260 g,结扎L5神经根制备神经病理性痛模型,随机分为4组(n=12):Ⅰ组仅暴露L5神经根但不结扎,鞘内注射生理盐水10 μl;Ⅱ组暴露并结扎L5神经根,鞘内注射生理盐水10 μl;Ⅲ组仅暴露L5神经根但不结扎,鞘内注射米诺环素50 μg(10μl);Ⅳ组暴露并结扎L5神经根,鞘内注射米诺环素50 μg(10 μl).于术前1 d～术后18 d,每日鞘内注射生理盐水或米诺环素,2次/d.于术前1 d(基础状态)、术后1、2、4、6、8、10、12、14、16、18 d各组取6只大鼠测定机械痛阈,并确定机械痛周最低点,然后在机械痛阈最低点时各组另取6只大鼠测定脊髓背角GABABR2的表达.结果 与Ⅰ组相比,Ⅱ组机械痛阈降低,术侧脊髓背角GABABR2表达下调(P＜0.05或0.01);与Ⅱ组和Ⅲ组比较,Ⅳ组机械痛阈升高,术侧脊髓背角GABABR2表达上调(P＜0.05或0.01).结论 脊髓小胶质细胞活化介导神经病理性痛发生的作用机制可能与抑制GABAB受体的激活有关.     

p38MAPK信号转导通路在大鼠骨癌痛中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在大鼠骨癌痛中的作用.方法 雌性sD大鼠56只,体重150～170 g,随机分为4组(n=14):生理盐水对照组(NS组)、骨癌痛组(BC组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和p38MAPK抑制剂组(SB203580组).骨髓腔内注射Walker256细胞悬液制备大鼠骨癌痛模型,注射后10 d,DMSO组和SB203580组分别鞘内注射5%二甲基亚砜和SB203580(10 μg)10 μl.各组随机取8只大鼠,于注射Walker256细胞悬液前、注射后1、3、5、7、10 d,鞘内给药后1、3、6、12、24 h时采用von Frey纤维丝测定术侧后爪机械缩足反射阈值(MWT);各组余6只大鼠鞘内给药后6 h时取L_(4,5)脊髓,采用免疫组化法检测脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)的表达水平.结果 骨髓腔内注射Walker256细胞悬液后7 d大鼠术侧后爪MWT开始降低,鞘内注射SB203580提高了MWT;骨髓腔内注射Walker256细胞悬液后脊髓背角pCREB表达上调,鞘内注射SB203580后脊髓背角pCREB表达下调.结论 鞘内注射SB203580可通过抑制脊髓背角pCREB的表达减轻骨癌痛;p38MAPK信号转导通路在骨癌痛中起重要作用.     

新斯的明对神经病理性痛大鼠脊髓小胶质细胞的影响

目的 评价新斯的明鞘内给药对神经病理性痛大鼠脊髓小胶质细胞的影响.方法 健康雄性SD大鼠,月龄1月,体重200～250 g,建立坐骨神经分支选择性损伤(SNI)致神经病理性痛模型.术后5 d行鞘内置管,取鞘内置管成功的SNI大鼠40只,恢复2 d后行鞘内给药.随机分为4组(n=10):SNI组、新斯的明组(N组)、阿托品+新斯的明组(A+N组)和美加明+新斯的明组(M+N组).SNI组鞘内注射生理盐水20μL,N组鞘内注射新斯的明10μg,A+N组和M+N组分别于鞘内注射阿托品10μg或美加明10μg后5min鞘内注射新斯的明10μg.分别于造模前2 d(基础状态)、造模后即刻(T_1)、1 d(T_2)、3 d(T_3)、5 d(T_4)、新斯的明给药前即刻(T_5)、给药后15 min(T_6)、30 min(T_7)、45 min(T_8)、60 min(T_9)时各组随机取5只大鼠测定机械痛阈,并确定给药后机械痛阈最高点,在机械痛阈最高点时另取5只大鼠麻醉后取脊髓,镜下计数阳性脊髓小胶质细胞.结果 与SNI组比较,N组给药后各时点机械痛阚升高,T_6时达峰值,A+N组和M+N组给药后各时点机械痛阈升高,N组和A+N组术侧阳性脊髓小胶质细胞数量减少(P<0.05),M+N组术侧阳性脊髓小胶质细胞数量差异无统计学意义(P>0.05).与N组比较,A+N组和M+N组给药后各时点机械痛阈降低(P<0.05).结论 新斯的明鞘内给药可抑制神经病理性痛大鼠脊髓小胶质细胞的激活,从而发挥镇痛作用,其机制与激活N胆碱能受体有关.     

鞘内注射右美托咪啶对骨癌痛大鼠脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白表达的影响

目的 探讨右美托咪啶对骨癌痛大鼠脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)表达的影响.方法清洁级健康成年雌性Wistar大鼠64只,体重200～240 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=16):假手术组(S组)、骨癌痛组(BP组)、生理盐水组(NS组)和右美托眯啶组(D组).BP组、Ns组和D组采用胫骨骨髓腔注射10μl含Walker 256乳癌细胞2×106个缓冲液的方法制备大鼠骨癌痛模型,S组和BP组不作鞘内注射,NS组和D组于模型制备成功后7 d分别鞘内注射生理盐水10μl、右美托咪啶5μg/kg.分别于鞘内注射前1 d(T0)、注射前即刻(T1)、注射后1、6、12、24 h(T2-5,)时各组随机取10只大鼠,采用von Frey丝测定机械痛阈,各组余6只大鼠T4时处死取脊髓,采用免疫组化法测定脊髓背角p-CREB的表达.结果 与S组比较,BP组、NS组和D组T2～5时机械痛阈降低,T4时脊髓背角p-CREB表达上调(P＜0.05);与BP组比较,D组T2～5时机械痛阈升高,T4时脊髓背角p-CREB表达下调(P＜0.05),NS组机械痛阈和脊髓背角p-CREB表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射右美托咪啶可通过抑制大鼠脊髓背角CREB磷酸化减轻骨癌痛.

Abstract：

Objective To investigate the effect of intrathecal (IT) dexmedetomidine on the expression of cAMP response element-binding protein phosphorylation (p-CREB) in spinal dorsal horn in a rat model of bone cancer pain. Methods Sixty-four adult female Wistar rats weighing 200-240 g were randomly divided into 4 groups (n = 16 each): sham operation group (group S); bone cancer pain group (group BP); normal saline group ( group NS) ; dexmedetomidine group (group D) . Bone cancer pain was induced by injecting Walker 2S6 mammary gland carcinoma cell suspension (2 ×106 cells/ml) 10μl into the medullary cavity of the tibia in BP, NS and D groups. Groups S and BP received no IT injection. Croups NS and D received IT injection of NS 10 μl and dexme detomidine 5 μg/kg respectively 7 days after successful establishment of the model. Ten animals were selected from each group at 1 day before IT administration (T0), immediately before IT administration (T1 ) and at 1, 6, 12 and 24 h after IT administration (T2-5 ) and paw withdrawal threshold (PWT) to mechanical stimuli was measured with von Frey filaments. The other 6 rats in each group were sacrificed at T4 and the spinal cord was removed for determination of p-CREB expression in the spinal dorsal horn.Results PWT was significantly decreased at T1-5 and pCREB expression up-regulated at T4 in BP, NS and D groups compared with group S ( P ＜ 0.05) . Compared with group BP, PWT was significantly decreased at T2-5 and p-CREB expression down-regulated at T4 in group D ( P ＜0.03), while no significant change in PWT and p-CREB expression was found in group NS (P ＞ 0.05) .Conclusion IT dexmedetomidine can reduce the bone cancer pain through inhibiting the phosphorylation of CREB in rat spinal dorsal horn.     

丙戊茶碱对糖尿病痛性周围神经病变大鼠脊髓星形胶质细胞活化的影响

目的 评价丙戊茶碱对糖尿病痛性周围神经病变大鼠脊髓星形胶质细胞活化的影响.方法 清洁级SD大鼠40只,月龄2月,雌雄不拘,体重180-200 g,腹腔注射1%链脲佐菌素60 mg/kg以制备大鼠糖尿病痛性周围神经病变模型.取模型制备成功的大鼠20只,随机分为糖尿病组(DM组)和丙戊茶碱组(PP组),每组10只;另取10只同月龄D大鼠作为对照组(NC组).PP组和DM组在注射链脲佐菌素后第28天开始,每天分别腹腔注射丙戊茶碱10 mg/kg和等容量生理盐水,注射1周.于注射链脲佐菌素前(TI)、注射链脲佐菌素后2、7、14、21、28、35 d(T2-7)时取尾静脉血样0.1 ml测定血糖水平;于T1、T3-7,时测定大鼠右后爪机械缩足反应阈值(PWT);T7时处死大鼠,取L4,s脊髓制备切片.采用免疫组化法检测神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.结果 与TI时比较,DM组和PP组L2-7时血糖水平升高,T4-7时PWT降低(P<0.01);与NC组比较,DM组和PP组T2-7时血糖水平升高,T6,7时PWT降低,T7时GFAP表达上调(P<0.01);与DM组比较,T7时PWT升高,GFAP表达下调(P<0.05).结论 丙戊茶碱可能通过抑制脊髓星形胶质细胞活化减轻大鼠糖尿病神经病理性痛.     

骨癌痛大鼠吗啡耐受后脊髓胶质细胞及炎性细胞因子的变化

目的 评价骨癌痛大鼠吗啡耐受后脊髓胶质细胞及炎性细胞因子的变化.方法 雌性SD大鼠,体重180～220 g,采用MADB-106鼠源性乳腺癌细胞注入大鼠左侧胫骨建立骨癌痛模型.14d后,选择一般状况良好、体重无减轻、进食好、活动正常、热痛阈<18.5 s、机械痛阈<27.8 g的大鼠16只,随机分为2组:对照组(n=7)注射等容量生理盐水;吗啡耐受组(n=9)皮下注射吗啡3次/d,连续5 d,每天单次注射剂量按10、20、40、50、60 mg/kg递增.于造模前和造模后10 d开始隔日1次测定热痛阈和机械痛阈;造模后19 d皮下注射吗啡3 mg/ks,30 min后测定热痛阈和机械痛阈.随后处死动物,取腰段脊髓,采用RT-PCR法测定脊髓白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达;采用ELISA法测定脊髓IL-1β和TNF-α的含量;采用免疫组化法测定脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的活力.结果 与造模前比较.对照组造模后14、16、18 d时热痛阈和机械痛阈降低(P<0.05);与对照组比较,吗啡耐受组造模后14、16、18 d时热痛阈和机械痛阈升高,造模后19 d时热痛阈和机械痛阈降低,左侧脊髓IL-1β mRNA和TNF-αmRNA表达升高,脊髓IL-1β和TNF-α的含量增加,脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的活力增强(P<0.05).结论 骨癌痛大鼠连续递增剂量腹腔注射吗啡可引起脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞进一步活化,IL-1β和TNF-α释放增加,从而发生吗啡耐受.     

脊髓胶质细胞在大鼠炎性痛形成中的作用

目的 评价脊髓胶质细胞在大鼠炎性痛形成中的作用.方法 清洁Ⅱ级成年雄性SD大鼠,体重180～220 g,取蛛网膜下腔置管成功的大鼠65只,随机分为5组(n=13),生理盐水组(NS组):右后肢踝关节外侧皮下注射NS 50μl;炎性痛组(IP组):采用右后肢踝关节外侧皮下注射完全弗氏佐剂50μl的方法制备炎性痛模型;氟代柠檬酸组(FC组):经蛛网膜下腔导管注射FC 1 nmol/10 μl,15 min后右后肢踝关节外侧皮下注射NS 50 μl;NS+IP组:经蛛网膜下腔导管注射NS 10 μl,15 min后制备炎性痛模型;FC+IP组:经蛛网膜下腔导管注射FC 1 nmol/10 μ,15 min后制备炎性痛模型.于模型制备前2 d(T_0)、皮下注射药物前(T_1)和注射药物后2、4、6、8、10、12、24、26 h(T_(2～9))时测定机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).皮下注射药物后8 h时采用免疫组化法测定脊髓背角星形胶质细胞标记物(GFAP)和小胶质细胞标记物(OX-42)的表达水平.结果 与NS组比较,IP组和NS+IP组T_(3～9)时MWT和TWL降低,FC+IP组T_(3～9)时MWT降低,T_(8,9)时TWL降低,IP组、NS+EP组和FC+EP组脊髓GFAP和OX-42的表达水平均上调(P<0.05);与IP组比较,FC组T_(3～9)时MWT和TWL升高,FC+IP组T_(3～7)时MWT和TWL升高,2组脊髓GFAP和OX-42的表达水平均下调(P<0.05或0.01).结论 脊髓胶质细胞的活化参与了大鼠炎性痛的形成.     

μ受体在抗神经生长因子抗体减轻大鼠骨癌痛中的作用

目的 评价μ受体在抗神经生长因子抗体(anti-NGF)减轻大鼠骨癌痛中的作用.方法 实验一健康雌性SD大鼠60只,体重200～220 g,随机分为4组(n=15):假手术组(S组)、假手术+anti-NGF组(SN组)、骨癌痛组(P组)和骨癌痛+anti-NGF组(PN组).P组和PN组于左侧胫骨上段骨髓腔内注射10μl Walker256乳腺癌细胞(1×105个)制备骨癌痛模型;S组和SN组于左侧胫骨上段注射PBS 10μl.于肿瘤细胞接种后13 d时,进行鞘内置管.鞘内置管成功后3 d,SN组和PN组鞘内注射anti-NGF 10μg(用生理盐水稀释至10μl),S组和P组鞘内注射生理盐水10μl,2次/d,连续5 d.于肿瘤细胞接种前、肿瘤细胞接种后13、16、18、21 d时测定自发缩足次数(NSF)、热缩足潜伏期(PWL)和机械性痛阈(PWT).肿瘤细胞接种后21 d时,处死大鼠,取L4.5段脊髓背角和背根神经节,测定μ受体及其mRNA的表达.实验二健康雌性SD大鼠30只,体重200～220 g,随机分为2组(n=15):骨癌痛+anti-NGF组(PN组)和骨癌痛+纳洛酮+anti-NGF组(PNN组).于左侧胫骨上段骨髓腔内注射10μlWalker256乳腺癌细胞(1×105个)制备骨癌痛模型.于肿瘤细胞接种后13 d时,进行鞘内置管.鞘内置管成功后3 d,PN组鞘内注射鞘内注入anti-NGF 10μg(生理盐水稀释至25μl);PNN组鞘内注射纳洛酮10μg(生理盐水稀释至25μl),0.5 h后,鞘内注射anti-NGF 10μg(生理盐水稀释至25 μl),2次/d,连续5 d.于肿瘤细胞接种前、肿瘤细胞接种后13、16、18、21 d时测定大鼠NSF、PWL和PWT.结果 实验一与S组比较,SN组NSF、PWL和PWT差异无统计学意义,SN组和PN组μ受体及其mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),P组和PN组瘤细胞接种后13～21 d时NSF增加,PWL缩短,PWT降低,P组μ受体及其mRNA表达下调(P＜0.05或0.01);与P组比较,PN组肿瘤细胞接种后18～21 d时NSF减少,PWL延长,PWT升高,μ受体及其mRNA表达上调(P＜0.05或0.01).实验二与PN组比较,PNN组肿瘤细胞接种后18～21 d时NSF增加,PWL缩短,PWT降低(P＜0.05或0.01).结论 anti-NGF减轻大鼠骨癌痛与μ受体的激活有关.     

脊髓蛋白激酶C表达在代谢型谷氨酸受体5参与大鼠吗啡耐受形成中的作用

目的 评价脊髓蛋白激酶C(PKC)表达在代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)参与大鼠吗啡耐受形成中的作用.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠32只,体重180～240 g,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、吗啡耐受组(M组)、反义链组(ANT组)和错义链组(MIS组).M组鞘内注射0.9%生理盐水5μl、ANT组和MIC组分别鞘内注射30 nmol反义、错义寡聚脱氧核苷酸(溶于5μl0.9%生理盐水),2次/d,连续8 d,于第6～8天鞘内注射吗啡15μg,2次/d,C组注射等容量生理盐水.于鞘内注射寡聚脱氧核苷酸6、7、8 d(T1～3)时测定大鼠的热痛阈和机械痛阈,第9天(T4)时处死大鼠取L4.5脊髓,采用RT-PCR法测定mGluR5、PKCα、PKCγ的mRNA表达,采用Western blot法测定PKCα、PKCγ的表达.结果 与C组比较,M组和MIS组T1.2时、ANT组T1～3时大鼠热痛阈和机械痛阈升高,T4时M组和MIS组脊髓mGluR5 mRNA、PKCα、PKCγ的表达上调,ANT组脊髓mGluR5 mRNA表达下调(P＜0.05);与M组比较,ANT组T2.3时大鼠热痛阈和机械痛阈升高,脊髓mGluR5 mRNA、PKCα、PKCγ的表达下调(P＜0.05),MIS组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓PKC表达在mGluR5参与大鼠吗啡耐受形成中起重要作用.     

米诺环素对骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓CX3C趋化因子受体1mRNA表达的影响

目的 探讨米诺环素对骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)mRNA表达的影响.方法 清洁级雌性SD大鼠,体重180～200 g,月龄3月,经L3,4间隙行鞘内置管,取鞘内置管成功的大鼠60只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组:正常对照组(C组,n=10)、米诺环素对照组(M组,n=10)、骨癌痛-吗啡耐受组(BM组,n=20)和米诺环素治疗组(BM+M组,n=20).C组不作任何处理;BM组和BM+M组右侧胫骨上段骨髓腔注入Walker256细胞10 μl(400个/μl)制备骨癌痛模型,术后第10天开始鞘内注射吗啡20 μg/kg(100 μl),2次/d,连续7 d,制备骨癌痛-吗啡耐受模型,注射吗啡第8天分别经鞘内注射20μl生理盐水或米诺环素0.25 mg/kg(20 μl),1次/d,连续3 d;M组不行手术,于BM组注射吗啡第8天时鞘内注射米诺环素0.25 mg/kg,1次/d,连续3 d.于术前、术后3、6、9 d、鞘内注射吗啡4、7、10、12 d(T0～7)时测定机械缩足阈值(MWT)和机械缩足持续时间(MWD).C组和M组于T7时,BM组和BM+M组于T6,7时取L4～6脊髓节段,采用免疫组化法检测小胶质细胞标记物——OX-42表达,采用实时PCR法检测CX3CR1 mRNA表达水平.结果 与C组和M组比较,BM组T2,3.5～7时、BM+M组T2,3,5,时MWT降低,MWD延长,CX3CR1 mRNA和OX-42表达上调(P＜0.01).与BM组比较,BM+M组L6,7时MWT升高,MWD缩短,CX3CR1 mRNA和OX-42表达下调(P＜0.01).C组和M组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 米诺环素可抑制骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓CX3CR1 mRNA的表达,可能是其拮抗吗啡耐受的机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effect of minocycline on spinal CX3 C chemokine receptor 1(CX3 CR1)mRNA expression in morphine-tolerant rats with bone cancer pain.Methods Sixty female SD rats weighing 180-200 g in which intrathecal(IT)catheter was successfully placed at L3,4 interspace without complications were randomly divided into 4 groups:control group(group C,n=10);minocycline group(group M,n=10);bone cancer pain + morphine tolerance group(group BM,n=20)and bone cancer pain+morphine tolerance+ minocycline group(group BM+M,n=20).Bone cancer pain was induced by injection of breast cancer cells(Walker256)10μl(400/μl)into upper segment of bone marrow of right tibia.Morphine tolerance was induced by IT injection of morphine 20 μg/kg twice a day for 7 consecutive days starting from the 10th day after intratibia injection in BM and BM + M groups. Minocycline 0.25 mg/kg was injected IT once a day for 3 consecutive days in group M and after the model of bone cancer pain and morphine tolerance was established in group BM + M. Mechanical withdrawal threshold (MWT) and mechanical withdrawal duration (MWD) were determined before (T0, baseline) and at3, 6 and 9 days after operation (T1-3) and at 4, 7, 10 and 12 days after IT morphine injection was started (T4-7).The animals were sacrificed at T6 and T7 respectively in BM and BM + M groups and at T7 in C and M groups.The lumbar segment of the spinal cord (L4-6) was removed for determination of CX3 CR1 mRNA (by RT-PCR) and OX-42 expression (by immuno-histochemistry) .Results There was no significant difference in MWT and MWD at all time points between group C and group M. MWT was significantly decreased while MWD prolonged in morphine tolerant rats with cancer pain in group BM as compared with C and M groups. The hyperalgesia was significantly attenuated by IT minocycline in group BM + M. Spinal CX3 CR1 mRNA and OX-42 expression was significantly increased in group BM than in C and M groups. IT minocycline attenuated the increase in spinal CX3 CR, mRNA and OX-42 expression induced by bone cancer. Conclusion IT minocycline can inhibit spinal CX3CR1 mRNA expression, thereby antagonizing morphine tolerance in morphine-tolerant rats with bone cancer pain.     

鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸对大鼠神经病理性痛的疗效

目的 探讨鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸对大鼠神经病理性痛的疗效.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为5组(n=12):假手术组(S组)、C7脊神经压迫组(N组)、C7脊神经压迫+鞘内注射PSD-93误义寡核苷酸10 μg组(M组)、C7脊神经压迫+鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸5 μg组(AJ组)和C7脊神经压迫+鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸10 μg组(A2 组).N组、M组、A1组和A2组用60 g无创微血管夹压迫大鼠右侧C7脊神经15 min,制备神经病理性痛模型,经枕骨大孔鞘内置管,术毕当日开始给药,每日1次,连续4 d.于术前2 d(T0)和术后1、3、5、7 d(T1-4)测定机械痛阈和、热痛阈;T2和T4时分别处死6只大鼠,取C7脊髓,免疫组化法测定脊髓背角PSD-93蛋白表达.结果 与S组比较,N组、M组和A1组T1-4时机械痛阈及热痛阈降低,N组和M组T2,4时脊髓背角PSD-93蛋白表达上调(P＜0.05);与N组和M组比较,A1组T1,2时、A2组T1～4时机械痛阈及热痛阈升高,A1组T2时、A2组T2,4时脊髓背角PSD-93蛋白表达下调(P＜0.05);与A1组比较,A2组T1-4时机械痛阈及热痛阈升高,T2,4时脊髓背角PSD-93蛋白表达下调(P＜0.05).结论 鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸可减轻大鼠神经病理性痛.     

鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸对神经病理性痛大鼠脊髓nNOS的影响

目的 探讨鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸对神经病理性痛大鼠脊髓神经型一氧化氮合酶(nNOS)的影响.方法 雄性SD大鼠32只,体重250～350 g,随机分为4组(n=8):假手术+生理盐水组(C组);C7脊神经压迫+生理盐水组(N组);C7脊神经压迫+PSD-93误义寡核苷酸10μg组(M组);C7脊神经压迫+PSD-93反义寡核苷酸10μg组(A组).N组、M组和A组采用60 g微血管夹压迫大鼠右侧C7脊神经15 min制备神经病理性痛模型,经枕骨大孔鞘内置管至颈膨大处.术毕当日开始给药,每日1次,连续4 d.于术前2 d(T0)、术后1、3、5和7 d(T1-4)时测定机械痛阈和热痛阈,术后7 d处死大鼠取C7段脊髓,免疫组化法检测神经压迫侧脊髓PSD-93蛋白和nNOS的表达.结果 与T0时比较,N组和M组各时点机械痛阈及热痛阈降低(P<0.05);与C组比较,N组和M组各时点机械痛阈及热痛阈降低,N组、M组和A组脊髓背角PSD-93蛋白和nNOS表达上调(P<0.05);与N组和M组比较,A组各时点机械痛阈及热痛阈升高,脊髓背角PSD-93蛋白和nNOS表达下调(P<0.05).结论 鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸可抑制神经病理性痛大鼠脊髓nNOS表达,nNOS在神经病理性痛中的作用可能受PSD-93蛋白调节.