砷剂对肺腺癌细胞凋亡及LRP、C-myc基因表达的影响

目的:研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人肺腺癌的抑制和诱导凋亡作用及对肺耐药蛋白基因(lung resistance protein,LRP)、C-myc基因表达的影响及可能机制.方法:选用人肺腺癌A549细胞株,运用体外细胞培养法,MTT法,流式细胞术检测As2O3对人肺腺癌的抑制和诱导凋亡作用;用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测LRP、C-myc mRNA的表达.结果:As2O3对人肺腺癌A549细胞具有抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系.不同浓度的As2O3均可诱导凋亡.1.0μmol/L、2.0μmol/L的As2O3可下调LRP的表达.结论:As2O3具有抑制肿瘤细胞增殖作用,主要是通过诱导细胞凋亡实现的,其机制与下调LRP、C-myc表达有密切关系.     

三氧化二砷对人胃癌细胞系MGC803凋亡及耐药基因表达影响的实验研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对人胃癌细胞系MGC803的抑制和诱导凋亡作用及对MRP基因表达的影响。方法：选用人胃癌MGC803细胞系,运用体外细胞培养法,MTT法,流式细胞术检测As2O3对人其抑制和诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测MRPmRNA的表达。结果：As2O3对人胃癌MGC803细胞具有抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系。不同浓度的As2O3均可诱导凋亡。1．0μmol／L、2．0μmol／L的As2O3可下调MRPmRNA的表达。结论：As2O3具有抗肿瘤作用,主要是通过诱导细胞凋亡实现的,其机制与下调MRPmRNA表达有密切关系。     

番荔枝内酯单体squamocin诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的 观察番荔枝内酯单体squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨squamocin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测不同浓度的squamocin对人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响;流式细胞仪检测squamocin干预在不同时间点对人肺腺癌A549细胞凋亡率的影响;Western blotting检测squamocin干预前后细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 MTT法显示,squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用随着squamocin浓度的增加和作用时间的延长而增强,24、48、72h半数抑制浓度（IC50）分别为16.54、9.28、6.17μg／ml;流式细胞仪检测显示,在24、48、72h实验组人肺腺癌A549细胞凋亡率之间及其与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中实验组72h的细胞凋亡率最高,为（51.87±1.79）％Western blotting显示,squamocin干预后细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2表达明显下调。结论 squamocin可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,这可能与squamocin上调细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax表达以及降低抑制细胞凋亡基因Bcl-2表达有关。     

三氧化二砷对人肝癌细胞生长增殖的影响

目的观察三氧化二砷（As2O3）对人BEL7402肝癌细胞株的作用及其机制。方法采用MTF法检测As2O3对BEL7402细胞的生长抑制率;流式细胞仪测定经不同浓度As2O3处理后的BEL7402细胞周期及增殖细胞核抗原（PCNA）变化,同时Annexin V—FITC／PI双染法检测细胞凋亡。结果三氧化二砷可显著抑制BEL7402细胞生长,且剂量-效应关系显著（r=0．9650,P〈0．01）,半数抑制浓度（IC50）为4．93μmol／L;BEL7402经As2O3处理后可发生凋亡。As2O3能显著下调PCNA蛋白表达（P〈0．01）,并使细胞周期阻滞在G2／M期。结论三氧化二砷可有效抑制人肝癌BEL7402细胞生长增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调PCNA表达及阻滞细胞周期有关。     

三氧化二砷对人肺巨细胞癌细胞系（PLA—801D株）运动能力、尿激酶的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对人肺巨细胞癌细胞系PLA－801D株细胞运动能力和尿激酶（uPA）、尿激素受体（uPAR)mRAN表达的影响。方法 采用0．5μmol/L、1．0μmol／L及2．0μmol／L三种浓度的As2O3处理人肺巨细胞癌细胞（PLA－801D株）,120h后收取细胞,分别采取Boyden小室测定细胞穿膜运动能力及ERT－PCR方法检测细胞uPA及uPARmRNA转录表达水平。结果 经As2O3处理的PLA－801D株细胞,穿膜运动能力和uPA及uPARmRNA转录表达水平均显著下降,As2O3作用呈剂量依赖方式。结论 As2O3可抑制肿瘤细胞的运动能力;可下调uPA、uPAR表达,可能影响肿瘤细胞基质降解过程。     

三氧化二砷对人胃癌细胞系MGC803凋亡及耐药基因表达影响的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞系MGC803的抑制和诱导凋亡作用及对MRP基因表达的影响.方法:选用人胃癌MGC803细胞系,运用体外细胞培养法,MTT法,流式细胞术检测As2O3对人其抑制和诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MRP mRNA的表达.结果:As2O3对人胃癌MGC803 细胞具有抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系.不同浓度的As2O3均可诱导凋亡.1.0μmol/L、2.0μmol/L的As2O3可下调MRP mRNA的表达.结论:As2O3具有抗肿瘤作用,主要是通过诱导细胞凋亡实现的,其机制与下调MRP mRNA 表达有密切关系.     

三氧化二砷逆转人肺腺癌A549/ R 细胞耐药及对GSTs 表达的影响

 目的 探讨三氧化二砷（As₂O₃）对人肺腺癌A549／R细胞耐药的逆转及谷胱甘肽S转移酶（GSTs）表达的变化。方法 分别采用生化方法及RT-PCR方法检测GSTs活性及GST-πmRNA表达水平的变化。结果 0．15μmol／L As2O3可使A549／R细胞内阿霉素（ADM）浓度增加，其IC50值由原来的0．495μmol／L降低至0．217μmol／L，逆转倍数为2．3倍。耐药细胞中GSTs活性增高，GST-πmRNA呈过表达状态。不同浓度的As2O3作用后，GSTs活性下降（P〈0．05），GST-πmRNA表达水平下调，呈浓度依赖性变化。结论 As₂O₃可部分逆转A549／R细胞对ADM的耐药性，GST-π的改变参与其耐药机制。     

Amorphigenin联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞的协同抗肿瘤作用

背景与目的 Amorphigenin是从紫穗槐属植物的种子中分离提取的鱼藤酮类化合物,研究发现amorphigenin对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。本研究拟探讨amorphigenin对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的抗肿瘤作用及其可能的分子机制。方法采用CCK-8法测定A549/DDP细胞的增殖;克隆形成实验测定A549/DDP细胞的克隆形成;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot技术检测caspase-3、PARP和LRP蛋白的表达。结果Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞的增殖48 h[半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentra-tion, IC50）]为（2.19±0.92）μmol/L、抑制克隆形成及诱导细胞凋亡。此外,Amorphigenin与顺铂联合可协同地抑制A549/DDP细胞生长和促进凋亡;降低耐药蛋白LRP蛋白的表达。结论 Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞增殖和促进细胞凋亡;amorphigenin可能是通过抑制耐药蛋白LRP蛋白表达,进而与顺铂对A549/DDP细胞产生协同抑制作用。     

1，25二羟基维生素D3对肺腺癌细胞株生长及凋亡的影响

目的：研究1，25二羟基维生素D3[1，25（OH）。VitD3]对肺腺癌细胞株A549生长及凋亡的影响。方法：应用流式细胞仪、免疫组织化学和RT-PCR等方法观察1，25二羟基维生素D3对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期、调控细胞周期基因和调控凋亡基因表达水平的影响。结果：μmol／L的1，25二羟基维生素D3时A549细胞的生长有抑制作用，1μmol／L的1，25二羟基维生素D3作用后A549细胞G1期比例由59．7％增加至73．2％，P=0．001；S期比例由26．4％降至21．1％，P=0．018；细胞凋亡率由2.6％增至7．2％，P=0．015；可明显上调Fas／FasL的表达量，下调bcl-2表达量；可抑制细胞周期蛋白D1的表达量由0．762减至0．207，P=0．001；同时抑制细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4的表达量由0．642减至0．129，P=0．002。但较低浓度的1，25二羟基维生素队上述作用不明显。结论：1μmol／L的1，25二羟基维生素D1可通过多种途径发挥抗肺腺癌作用。     

三氧化二砷联合抗坏血酸抑制人肾癌 786 -0 细胞增殖及相关蛋白表达的研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）联合抗坏血酸（AA）对786-0人肾透明细胞癌细胞增殖的影响,并通过其对bcl-2和bax蛋白表达的影响探讨相关机制.方法：将体外培养的786-0人肾透明细胞癌细胞分为对照组（N）和实验组,实验组分为AA组、As2O3组、As2O3与AA联合组.用CCK-8细胞增殖-毒性检测试剂盒检测药物对细胞增殖的影响,TUNEL试剂盒检测细胞凋亡,Western blot方法测定bcl-2基因和bax基因的蛋白表达.结果：以0μmol/L或50μmol/L AA分别联合0、1、2、4、8、16μmol/L As2O3作用786-0细胞24h,与As2O3单独应用相比,AA与不同浓度As2O3联合应用都可显著提高As2O3对786-0细胞的抑制率,其作用具有剂量依赖性（P＜0.05）.0μmol/L或8μmol/L As2O3分别联合0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L AA作用786-0细胞24h,与As2O3单独应用相比,AA与As2O3联合应用能够显著下调bcl-2表达,上调bax表达,联合组与其他组比较有明显差异,并具有剂量依赖性.结论：抗坏血酸（AA）联合三氧化二砷（As2O3）可以明显协同抑制786-0人肾透明细胞癌细胞的增殖,且具有剂量依赖性,其机制可能与下调bcl-2基因表达,上调bax蛋白表达从而诱导肾癌细胞的凋亡有关.     

氧化砷诱导结肠癌细胞凋亡及其分子机制

 目的　观察不同浓度As2O3对结肠癌Lovo、LS-174T细胞株生长的影响。方法　0.125～2μ mo1/L的As2O3与结肠癌细胞株Lovo、LS-174T共同孵育,观察不同浓度As2O3作用不同时间对结肠癌细胞的生长抑制作用、细胞形态学改变、DNA的变化。结果　1～2μ mol/L As2O3作用的结肠癌细胞呈凋亡特征性改变：细胞膜不发生破裂,细胞核出现核浓缩、核碎裂和凋亡小体形成;流式细胞仪检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰;细胞DNA抽提琼脂糖凝胶电泳呈凋亡特征性条带。结论　1～2μ mol/L As2O3可诱导结肠癌细胞凋亡,肿瘤细胞凋亡与Fas、Fas-L表达有关。     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡过程中Par-4及WT1基因表达的变化

 目的　探讨三氧化二砷（As2O3）诱导K562细胞凋亡过程中前列腺凋亡反应因子-4（Par-4）和WT1基因表达的变化。方法　用不同浓度As2O3（2～10 μmol／L）处理K562细胞24～72 h,MTT法测定细胞增生活力,流式细胞术检测细胞凋亡,采用荧光定量RT-PCR检测Par-4和WT1基因 mRNA表达变化,Western blotting检测Par-4和WT1蛋白表达的变化。结果　不同浓度As2O3作用于K562细胞,随浓度增加能明显抑制细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。同时Par-4基因mRNA和蛋白表达逐渐增加;而WT1基因mRNA及蛋白表达逐渐下降。结论　As2O3可抑制K562细胞生长,诱导细胞凋亡,Par-4与WT1基因可能参与As2O3诱导K562细胞凋亡的调控。     

三氧化二砷联合BSO对K562／ADM细胞P-糖蛋白的抑制作用研究

目的研究三氧化二砷（As2O3）联合γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁硫氨酸亚砜胺（BSO）对肿瘤多药耐药细胞K562／ADM细胞中P-糖蛋白（P—gP）的抑制作用，比较单用As2O3与两药联合的作用效果。方法As2O3组（0．5μmol／L，2．0μmol／L，5．0μmol／L）单独及联合100μmol／LBSO作用于K562／ADM细胞后，分光光度法检测K562／ADM细胞内谷胱甘肽（GSH）含量变化；流式细胞术（FCM）检测P-gp蛋白水平表达变化；反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测mdr-1 mRNA的表达变化。结果As2O3临床剂量组（0．5μmol／L，2μmol／L）联合BSO24h内即可抑制P-gp和mdr-1mRNA的表达水平，在48h后，临床剂量联合组抑制mdr-1mRNA的作用效果要明显强于单用高剂量组，在72h后，临床剂量联合组抑制P—gP的作用效果要明显强于单用高剂量组。结论临床剂量As2O3联合BSO可有效抑制K562／ADM细胞P—gp及mdr-1 mRNA的表达。     

三氧化二砷对膀胱癌T24细胞Apaf-1基因表达的影响

目的：观察三氧化二砷 (arsenic trioxide,As2O3)对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡蛋白酶活化因子-1 (apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)基因表达的影响。方法：取处于对数生长期的T24细胞,用0.25%胰酶消化成细胞密度为1×105/mL的单细胞悬液,再用含有不同浓度 (0、1、2、4、8 μmol/L)As2O3的培养基作为药物组,并设置空白对照组,置于培养箱中分别培养24、48和72 h后,用二甲基四氮唑蓝 (MTT)法检测As2O3对T24细胞的增殖抑制率;取T24细胞在不同浓度 (0、1、2、4、8 μmol/L)的As2O3培养液中培养72 h后用脱氧核糖核酸原位末端转移酶标记技术 (TUNEL)法检测细胞凋亡,用RT-PCR及Western blotting检测As2O3 对Apaf-1 mRNA和蛋白表达的影响。结果：与对照组相比,2、4、8 μmol/L As2O3剂量组能有效抑制T24细胞增殖,且具有剂量-反应关系 (24 h时r=-0.962,P=0.038;48 h时r =-0.959,P=0.041;72 h时r=-0.973,P=0.027)。As2O3于1～8 μmol/L作用72 h时细胞出现典型的凋亡变化,具有剂量-反应关系 (r=0.993,P =0.007);同时Apaf-1 mRNA和蛋白的表达均明显增强,且具有剂量-反应关系 (mRNA：r=0.986,P=0.014;蛋白：r=0.989,P=0.000)。结论：As2O3能够有效抑制膀胱癌T24细胞生长、增殖并诱导其凋亡,机制可能与其上调Apaf-1基因的表达有关。     

三氧化二砷诱导肺癌细胞凋亡的体外实验研究

 目的　观察三氧化二砷体外作用于肺癌 A549细胞株所致的凋亡作用及形态学改变 ;方法　采用 MTT法、透射电镜法及 TUNEL荧光染色法观察不同浓度 As₂ O₃ 对肺癌 A549细胞株的作用效果 ;结果　 1及 2 .5μmol/ L As₂ O₃ 对肺癌 A549细胞株 2 4 h的凋亡诱导率为 :2 2 .80 %及 30 .1 5% ,48h的凋亡诱导率为 :41 .75%及 60 .0 4 % ,72 h的凋亡诱导率为 :56.38%及 73.30 % ,均分别高于相应时间点的 5- FU的作用 ,光镜下观察可见凋亡细胞体积缩小变圆 ,TUNEL染色后在免疫荧光显微镜下观察可见凋亡的细胞呈荧光染色阳性 ;结论　 As₂ O₃ 在体外可明显有效地诱导 A549细胞株凋亡.     

三氧化二砷诱导A375细胞凋亡过程中的信号传导途径研究

背景与目的： 探讨三氧化二砷(arsenic trioxide, As2O3)在诱导人黑素瘤A375细胞凋亡中,对NF-κB、C-IAP2以及Caspase-3信号传导途径的影响。 材料与方法： 将As2O3和Caspase-3 抑制剂Ac-devd-cho单独或联合作用A375细胞后,采用Western blot 法检测NF-κB p65和Caspase-3表达水平,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达,RT-PCR法检测C-IAP2 mRNA表达。 结果： 5.0 μmol/L As2O3单独处理A375细胞12 h和24 h以及As2O3联合Ac-devd-cho处理24 h组,随着As2O3作用时间的延长,Caspase-3激活蛋白增多、NF-κB p65核蛋白和C-IAP2 mRNA表达下降,Ac-devd-cho能够阻断Caspase-3蛋白的活化,而对NF-κBp 65核蛋白和C-IAP2 mRNA表达无明显影响;免疫组织化学法也显示,Caspase-3激活型蛋白随着As2O3作用时间的延长而增高,但能被Ac-devd-cho阻断。 结论： As2O3可诱导A375细胞凋亡,能抑制A375细胞NF-κB、C-IAP2基因的表达,且不被Ac-devd-cho所阻断; As2O3能活化Caspase-3蛋白表达,而此效应可被Ac-devd-cho阻断。推测NF-κB-C-IAP2-Caspase-3通路可能是As2O3诱导A375细胞凋亡的途径之一。     

氧化砷对MR2细胞耐药转运分子作用的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对肿瘤耐药转运分子的作用。方法以耐全反式维甲酸(ATRA)早幼粒白血病细胞株MR2为研究对象,以非耐药早幼粒白血病细胞株NB4为对照组,用免疫组化法观察P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药相关蛋白(LRP)的表达。结果MR2细胞Pgp表达为30%～40%,NB4细胞为10%～20%,二者差异有极显著性(P<0.001)。MR2细胞MRP表达为56.9±3.4～21.2±1.1,NB4细胞为20.6±5.3～16.7±1.2,二者差异有极显著性(P<0.001)。0.5～2.0μmol/LAs2O3能显著降低MR2细胞中Pgp和MRP的表达,而对LRP的表达无影响。MR2细胞中Pgp和MRP表达的降低与As2O3作用浓度和作用时间呈负相关。结论MR2细胞耐药转运分子Pgp和MRP表达的下调,可能是As2O3克服耐药的敏感靶分子,而LRP则否。ATRA可能是Pgp和MRP的转运底物     

全反式维甲酸和三氧化二砷抑制子宫内膜癌细胞生长及其与NDRG1基因的关系

目的 探讨全反式维甲酸（ATRA）和三氧化二砷（As2O3）对人子宫内膜癌HEC-2B细胞体外生长的抑制作用及其与分化相关基因1（NDRG1）的关系。方法 采用MTT法比较不同浓度（1×10-7、5×10-7、1×10-6、5×10-6和1×10-5mol／L）ATRA和（1.0、2.0、4.0、8.0和16.0μmol／L）As2O3对子宫内膜癌HEC-2B细胞的增殖抑制作用,Western blotting检测HEC-2B细胞中NDRG1蛋白的表达情况。结果 镜下观察,经ATRA和As2O3作用48h后的子宫内膜癌HEC-2B细胞呈现凋亡的特征性改变。1×10-7～1×10-5mol／L 的ATRA和1.0～16.0μmol／L的As2O3能够抑制子宫内膜癌HEC-2B细胞的生长,呈剂量和时间依赖性。ATRA和As2O3能够从蛋白水平调节NDRG1的表达,其表达随药物浓度的增加逐渐下调。结论 ATRA和As2O3能够抑制子宫内膜癌HEC-2B细胞的生长,该抑制作用可能与NDRG1蛋白下调有关。