AK2123对受照小鼠全血化学发光的影响

ＡＫ２１２３的放射增敏作用已被体内外研究所证实。但是否对机体免疫功能有影响,尚未见报道。本文用化学发光的方法探讨ＡＫ２１２３对受照小鼠免疫功能的影响。材料和方法：用６０Ｃｏγ射线３Ｇｙ全身照射,吸收剂量率为９９－０ｃＧｙ／ｍｉｎ。采用第四军医大学动物实验中心繁育的ＢＡＬＢ／Ｃ纯系雄性小鼠４０只,体重１８～２２ｇ,鼠龄７～８周。随机将动物分为假照射组;照射组,６０Ｃｏγ射线一次３Ｇｙ全身照射组;预防照射组,照射前腹腔给ＡＫ２１２３１ｍｇ,１次／天,共５次;治疗照射组,照射后腹腔给ＡＫ２１２３１ｍｇ…     

血管紧张素Ⅱ在60Co照射细胞增生和胶原合成中的作用

目的 探讨＾６０Ｃｏγ射线照射对在纤维细胞增生和Ⅰ型胶的合成的作用机制。方法 将人胚肺成纤维细胞（ＨＥＬＦ）以不同剂量照和血管紧张素Ⅱ刺激，测定培养液中丙二醛含量，检测细胞增生程度，用免疫细胞化学显示ＡⅡ和Ⅰ型胶原的合成。结果１－５Ｇｙ照射能刺激细胞增生和Ⅰ型胶原合成，同时促进胞内ＡⅡ合成，外源性ＡⅡ能促进细胞增生及胶的合成。结论ＨＥＬＦ经＾６０Ｃｏ照射能过多合成ＡⅡ，其可能与照射后细胞增生有关。     

裂变中子照射对小鼠胸腺淋巴细胞亚群的影响 Ⅱ.小鼠经裂变中子照射后胸腺淋巴细胞及亚群的动力学变化

目的：研究小鼠胸腺细胞及其亚群在裂变中子照射后损伤和修复的规律，并与大约相同致死效应的６０Ｃｏγ射线照射后的规律进行比较。方法：测定照后不同时间小鼠胸腺细胞总数和胸腺重量指数，并采用间接免疫荧光法，测定照后不同时间小鼠胸腺淋巴细胞Ｌｙｔ＋２和Ｌ３Ｔ＋４细胞亚群的百分数。结果和结论：裂变中子和６０Ｃｏγ射线照射后小鼠胸腺重量指数均在照后第３天降至最低，而后的恢复速度差不多，但恢复水平前者一直低于后者，３１ｄ时的水平二者无显著差异。两种辐射照射后第３天胸腺细胞数几乎降至为０，随后的恢复中子照射稍逊于γ射线照射，３１ｄ的恢复水平基本一致。小鼠经裂变中子２．３Ｇｙ和６０Ｃｏγ射线４．５Ｇｙ照射后，第１天Ｌｙｔ＋２和Ｌ３Ｔ＋４细胞百分率均下降，水平基本一致。中子照射第３天的Ｌｙｔ＋２和Ｌ３Ｔ＋４细胞百分率降至更低（７０％以下），而γ射线照射的Ｌｙｔ＋２和Ｌ３Ｔ＋４细胞百分率则开始恢复。中子照射后经第７天明显恢复后，又出现第２次下降，３１ｄ仍未恢复至照前水平。γ射线照射后第３１天，Ｌｙｔ＋２细胞已恢复至照前水平，Ｌ３Ｔ＋４细胞则仍低于照前水平。     

γ射线照射后造血细胞端粒酶活性变化

以ＫＧｌａ和ＣＥＭ两个白血病细胞株为模型，探讨γ射线照射后造血细胞中端粒酶的变化。方法 细胞经照射后用＾３Ｈ－胸腺嘧啶渗入法测定细胞增殖能力，Ｋｉｎ氏ＴＲＡＰ方法分析端粒酶活性，并采用２次胸腺嘧啶使嘧啶使细胞同步化，ＢｒｄＵ渗入法分析细胞同步化结果及照射后细胞周期分布。结果 γ射线照射后造血细胞能增加端粒酶活性，在０￣３Ｇｙ照射后酶活性逐渐上升，３Ｇｙ达高峰，在时间动态变化上，照射后８￣２４小时酶     

电离辐射对小鼠移植性肝癌作用的实验研究

目的研究不同剂量γ射线照射对小鼠移植性肝癌形成的影响。方法γ射线照射后６小时，给予小鼠右肩胛尾侧部皮下接种Ｈ２２肝癌细胞，观察各组小鼠的肿瘤形成及生长情况。另外，观察了γ射线对小鼠足垫迟发性超敏反应（ＤＴＨ）、ＮＫ细胞活性及血清ＳＯＤ含量的影响。结果０．３及０．６Ｇｙγ射线照射后，小鼠肿瘤潜伏期延长，０．１５及０．３Ｇｙ照射后，小鼠ＮＫ细胞活性及ＤＴＨ反应增强，０．１５～１．２Ｇｙ照射后，小鼠血清总ＳＯＤ及Ｍｎ－ＳＯＤ含量均显著升高。结论电离辐射对小鼠移植性肝癌的作用与照射对小鼠免疫功能及ＳＯＤ水平的影响密切相关。     

低剂量γ射线诱导的淋巴细胞DNA断裂的适应性反应

利用ＤＮＡ解旋荧光测定法（ＦＡＤＵ）研究了低剂量γ射线诱导的淋巴细胞ＤＮＡ断裂的适应性反应，并观察了不同浓度的３－氨基苯甲酰胺（３－ＡＢ）对适应性反应的影响。结果表明：０．５～４．０ｃＧｙγ射线照射（Ｄ１），均可诱导淋巴细胞对１５Ｇｙγ射线照射的抗性，８．０ｃＧｙ引起的适应性反应不明显，２．０，４．０ｃＧｙ的γ射线为诱导适应性反应的最适剂量。５～２０Ｇｙ的Ｄ２照射均可显现出Ｄ１（２．０ｃＧｙ）诱导的适应性反应，以１５Ｇｙ照射后适应性反应最强。０．５ｍｍｏｌ／Ｌ的３－ＡＢ就可明显地抑制适应性反应。当浓度增至５．０ｍｍｏｌ／Ｌ时，适应性反应几乎完全受抑。     

CD3单抗对自体LAK细胞增殖作用的观察

有效的ＩＬ - 2 /ＬＡＫ细胞治疗必需具备两个主要条件 ,一是增强ＬＡＫ高效杀伤活性 ,二是大量扩增足够数量的ＬＡＫ细胞 ,一般认为每次的细胞输注数不得少于 10 11。因此如何制备质量高数量多的ＬＡＫ细胞是提高临床疗效的关键所在。Ａｎｄｅｒｓｏｎ(1998) [1] 等报道用ＣＤ3 单抗和ＩＬ - 2联合培养ＬＡＫ细胞 ,可以明显增加ＬＡＫ细胞的数量 ,为了进一步明确ＣＤ3单抗在人全血ＬＡＫ细胞制备中的合理应用 ,我们对不同浓度的ＣＤ3 单抗在不同时间对ＬＡＫ细胞的增殖作用进行了初步研究。现将结果报告如下。1　材料与方法1.1　试剂 :ＩＬ…     

OK-432对小鼠γ射线照射后T淋巴细胞功能的修复作用

对溶血性链球菌制剂ＯＫ－４３２促进照射小鼠Ｔ细胞功能的修复作用进行了探讨。方法实验用ＢＡＬｂ／ｃ小鼠，６０Ｃｏγ射线一次全身照射，吸收剂量５Ｇｙ。观察指标：小鼠脾淋巴细胞转化；ＩＬ－２产生及活性测定；迟发型超敏反应性测定。结果ＯＫ－４３２对几个Ｔ细胞亚群均具有作用，促进受照射小鼠对同种异型脾细胞的混合淋巴细胞反应及迟发型超敏反应的修复，促进脾脏中ＴＨ细胞产生ＩＬ－２，并能增强脾细胞对非特异性有丝分裂原的增殖反应。结论ＯＫ－４３２有促进多种Ｔ细胞亚群功能恢复的作用。     

L-NAME对小肠上皮细胞辐射防护作用机理的探讨

目的探讨硝基左旋精氨酸甲基酯（Ｌ－ＮＡＭＥ）对小肠上皮细胞辐射防护的机理。方法实验用大鼠ＩＥＣ－６细胞，６０Ｃｏγ射线照射；荧光分光光度法测定培养液上清中一氧化氮（ＮＯ）含量；ＮＡＤＰＨ黄递酶组化法（ＮＤ组化法）和免疫细胞化学法观察一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性变化；ＭＴＴ法检测细胞的生存力。结果ＩＥＣ－６细胞经射线照射后，其培养液上清中ＮＯ含量明显增加，细胞内结构型一氧化氮合酶（ｃＮＯＳ）活性升高，诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）活性降低，Ｌ－ＮＡＭＥ能明显提高细胞的生存力，ＮＯ底物－左旋精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）部分逆转其作用。结论ＮＯ参与了ＩＥＣ－６细胞的辐射损伤，Ｌ－ＮＡＭＥ对ＩＥＣ－６细胞具有辐射防护作用。     

NK细胞的辐射效应有关机理的探讨

作者研究了与小鼠脾脏ＮＫ细胞辐射效应有关的因素和机理。１６Ｇｙγ射线照射可使小鼠脾脏ＮＫ活性降低和ＮＫ细胞毒素因子分泌减少，组化染色显示照射使脾脏效应细胞中ＮＫ细胞含量、ＮＫ细胞中颗粒数目下降，并使ＮＫ细胞中酸性磷酸酶活性减弱，而小鼠或效应细胞用ＩＬ－２预处理则可有效地防止上述各指标的降低甚至使之回复至正常范围以上，这提示上述各因素与ＮＫ细胞的功能及其辐射效应密切相关．同时射线使小鼠内源性ＩＬ－２产生能力降低，但ＩＬ－２产生与ＮＫ活性二者对辐射的反应性明显不同，说明ＩＬ－２仅是参与对ＮＫ细胞功能及其辐射效应的调控。而不是其唯一的决定因素．     

低剂量辐射对脐血的免疫刺激作用

目的：探讨低剂量辐射对脐血T淋巴细胞膜分子表达，IL－2分泌及LAK细胞体外抗肿瘤活性的影响。方法：新鲜分离的脐血淋巴细胞及LAK前体细胞接受低剂量γ射线照射，分别用直接免疫荧光标记流式细胞术，MTT法及3H-TdR释放实验检测T淋巴细胞膜分子的表达，IL－2分泌的LAK体外杀伤肿瘤靶细胞（K562，HL－60）活性。结果：（1）62mGyγ射线照射后，脐血淋巴细胞CD3，TCR／CD3复合物，CD4，CD8分子表达显著上调，且均在4－24h，人随时间推移而逐步增强，CD4／CD8比值无显著性变化；（2）62mGy γ射线照射后，脐血单个核细胞上清IL－2活性随培养时间推多逐渐增强，不同时间点比较差异均有显著性（P＜0．05）；（3）脐血LAK细胞对K562和HL－60的杀伤活性与成人外周血相比差异无显著性（P＞0．05），接受低剂量辐射的脐血LAK细胞对K562和HL－60的细胞毒性显著高于非照射组（P＜0．01），结论：低剂量辐射可促进脐血T淋巴细胞的成熟，活化和信号的转导及IL－2的分泌，增强脐血LAK杀伤肿瘤靶细胞的细胞毒活性，从而可能在脐血移植中加速免疫功能重建，增强移植物抗白血病效应。     

低剂量辐射对LAK/TIL培养扩增及抗肿瘤作用的实验研究

目的　为了解低剂量电离辐射对LAK/TIL细胞培养扩增及抗肿瘤作用的影响。方法　从荷瘤小鼠的脾脏制得LAK细胞 ,从荷Lewis肺癌小鼠瘤组织中分离得TIL细胞 ,给予不同剂量的X射线照射后培养。结果　低剂量电离辐射可增加LAK/TIL细胞的扩增量 ,降低细胞扩增过程死亡率 ,并增加细胞毒性。结论　低剂量电离辐射对生物活性细胞不仅有诱导扩增作用 ,同时亦降低扩增过程细胞死亡率。     

Lymphocyte subsets and their H2AX phosphorylation in response to in vivo irradiation in rats

Abstract

Purpose: The objective of the study was to investigate differences in the radiosensitivity of rat peripheral blood lymphocyte subsets identified by expression of surface clusters of differentiation markers (CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD161) after whole-body in vivo gamma-ray irradiation and to assess their individual histone H2AX phosphorylation as an early cell response to irradiation.

Materials and methods: The relative representations of CD45RA B-lymphocytes, CD161 natural killer cells (NK cells), CD3CD4 T-lymphocyte subset and CD3CD8 T-lymphocyte subset in the rat peripheral blood were studied 24–72 hours after irradiation in a dose range of 0–5 Gy. Their intracellular H2AX phosphorylation (γ-H2AX) after 4 Gy and 9 Gy whole-body in vivo irradiation was assessed by multicolour flow cytometry.

Results: We determined the linear dose response of radioresistant CD161 NK cells (24 h), both radiosensitive T-lymphocyte subsets (24 h) and CD45RA B-lymphocytes (72 h) after in vivo irradiation. CD45RA B-lymphocytes showed the highest radiosensitivity and we observed pronounced H2AX phosphorylation which remained expressed in these cells for over 4 h after irradiation.

Conclusion: The combination of the surface immunophenotyping together with intracellular detection of γ-H2AX offers the possibility to assess the absorbed dose of ionizing irradiation with high sensitivity post irradiation and could be successfully applied to biodosimetry.     

γ射线致旁效应细胞脆性组氨酸三联体的表达

目的 研究⁶⁰Coγ射线照射后人淋巴母细胞(AHH-1)及其旁效应细胞中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的表达情况,探讨FHIT基因在电离辐射旁效应中的作用。方法 旁效应细胞模型的制备:分别用不同剂量(0、2和5 Gy) ⁶⁰Coγ射线照射AHH-1细胞后,立即离心,将直接受照细胞与未受照细胞共同培养于Transwell中,此未受照细胞为旁效应1组;另将直接受照细胞培养液转移至未受照细胞培养瓶中形成旁效应2组。于照后0、6、12和24 h收集细胞,抽提细胞总RNA及总蛋白,分别应用RT-PCR和Western blot方法检测 FHIT mRNA及蛋白表达水平;并在照后即刻和24 h收集细胞,应用流式细胞仪检测细胞周期,并应用细胞计数法观察细胞增殖变化。结果 对照细胞、直接受照细胞、旁效应细胞中FHIT基因 mRNA水平变化不明显,而FHIT蛋白表达在直接受照细胞及旁效应细胞中显著下调(F=102.45.P<0.001)。细胞周期分析结果显示直接受照细胞及旁效应细胞G₂期阻滞明显,且增殖能力明显下降。结论 2、5 Gy⁶⁰Coγ射线照射能导致直接照射AHH-1细胞及其旁效应细胞FHIT蛋白表达明显下调,提示FHIT基因在电离辐射旁效应中发挥一定作用。     

辐射诱导人细胞系CEM、外周血单个核细胞DNA修复基因hHR21sp的表达研究

目的：研究辐射对人T淋巴细胞白血病细胞系（CEM）、外周血单个核细胞的hHR21^sp基因转录表达水平的影响及意义。方法：分别对人T淋巴细胞白血病细胞系CEM和正常人外周血单核细胞在UV或γ辐射后不同时间提取细胞总RNA,通过RT－PCR与hHR21^sp基因特异引物杂交,以β-actin为内参照射像密度扫描检测人T淋巴细胞白血病细胞系CEM、单核细胞DNA修复基因表达,结果：UV－辐射、γ－辐射后早期（3－6h）, 人T淋巴细胞白血病细胞系CEM和淋巴细胞hHR21^sp基因的表达水平明显增加,照射后6hhHR21^sp基因的表达水平增加最多且UV辐射更明显,在晚期（9h)降低。比较人细胞系CEM和淋巴细胞两者hHR21^sp基因的表达水平,γ辐射（3Gy)后淋巴细胞对hHR21^sp基因表达高于人细胞系CEM,且表达增加时间较长,达9h;而人细胞系CEM受到γ辐射后早期表达增加,在6－9h后表达降低,结论：人T淋巴细胞白血病细胞系（CEM）和人淋巴细胞的DNA修复基因hHR21^sp基因在一定剂量辐射（UV、γ辐射）范围内其表达水平随辐射剂量增加而诱导表达水平增高,且对UV辐射更敏感,提示hHR21^sp基因在人细胞系CEM细胞和人单核细胞在照射损后表达增加,可能是促进单核细胞损伤修复的原因之一。     

NO提高γ射线对L1210细胞损伤效应及其机制的研究

目的探讨一氧化氮（NO）是否提高γ射线对L1210细胞的损伤效应及其机制.方法将L1210细胞加入隔离培养器内与3T3细胞共培养,收集经γ射线照射后12、24、48和72 h各组L1210细胞,台盼蓝染色观察直接损伤作用,TUNNEL法观察诱导细胞凋亡的情况,流式细胞术检测细胞周期.结果γ射线照射后质粒转染组L1210细胞台盼蓝拒染率下降最快,12 h后与空载体组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,加DEVD-CHO后能够提高台盼蓝拒染率,24 h后有显著的差异（P＜0.05）;γ射线照射后质粒转染组细胞凋亡率24 h开始明显升高,与空载体组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,加DEVD-CHO后细胞凋亡率下降,24 h开始与单独质粒转染组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;射线照射后质粒转染组细胞G1期快速上升,4 h与空载体组差异有统计学意义（P＜0.05）,加DEVD-CHO后G1期上升较单纯质粒转染组慢,4 h两组差异有统计学意义（P＜0.01）.结论NO可增强γ射线对L1210细胞的直接损伤作用,出现细胞的G1阻滞,促进细胞凋亡.Caspase-3的活化参与上述作用.     

Dose-rate effect was observed in T98G glioma cells following BNCT

BackgroundIt is generally said that low LET radiation produce high dose-rate effect, on the other hand, no significant dose rate effect is observed in high LET radiation. Although high LET radiations are produced in BNCT, little is known about dose-rate effect of BNCT.Materials and methodsT98G cells, which were tumor cells, were irradiated by neutron mixed beam with BPA. As normal tissue derived cells, Chinese hamster ovary (CHO-K1) cells and DNA double strand breaks (DNA-DSBs) repair deficient cells, xrs5 cells were irradiated by the neutrons (not including BPA). To DNA-DSBs analysis, T98G cells were stained immunochemically with 53BP1 antibody. The number of DNA-DSBs was determined by counting 53BP1 foci.ResultsThere was no dose-rate effect in xrs5 cells. D₀ difference between 4 cGy/min and 20 cGy/min irradiation were 0.5 and 5.9 at the neutron and gamma-ray irradiation for CHO-K1, and 0.3 at the neutron for T98G cells. D₀ difference between 20 cGy/min and 80 cGy/min irradiation for T98G cells were 1.2 and 0.6 at neutron irradiation plus BPA and gamma-ray. The differences between neutron irradiations at the dose rate in T98G cells were supported by not only the cell viability but also 53BP1 foci assay at 24 h following irradiation to monitor DNA-DSBs.ConclusionDose-rate effect of BNCT when T98G cells include 20 ppm BPA was greater than that of gamma-ray irradiation. Moreover, Dose-rate effect of the neutron beam when CHO-K1 cells did not include BPA was less than that of gamma-ray irradiation These present results may suggest the importance of dose-rate effect for more efficient BNCT and the side effect reduction.     

低剂量照射对慢性髓细胞白血病干细胞p16基因mRNA表达水平的影响及其意义

目的 探讨低剂量辐射(LDR)对慢性髓细胞白血病干细胞(LSCs)中P16基因转录表达的影响及其临床意义。 方法 取20例健康产妇脐血100 ml,免疫磁株法分离纯化CD34+、CD38-的正常造血干细胞(HSCs)作为对照组;取20例初诊慢性髓细胞白血病(CML)慢性期患者骨髓液5~10 ml,免疫磁株法分离纯化CD34+、CD38-、CD123+的LSCs作为实验组。将HSCs及LSCs依据LDR剂量(0、12.5和50 cGy)辐照后收集细胞行RT-PCR和荧光实时定量PCR检测两种干细胞中p16基因的变化;另辐照后分别于24、48和72 h收集细胞,流式细胞仪检测两种干细胞的细胞周期和凋亡率。结果 CML-LSCs经12.5 cGy剂量照射后P16 mRNA表达略上调,50 cGy照射后明显增高(Z=-3.39,P＜0.01),而HSCs经各剂量点LDR处理后p16基因转录水平无明显变化。CML-LSCs经12.5 cGy剂量处理后48 h出现G₀/G₁期阻滞,50 cGy剂量点照射后72 h出现了G₀/G₁期阻滞现象。CML-LSCs经LDR处理后,细胞的早期凋亡率随时间推移逐渐增加,50 cGy剂量照射后72 h处达到(17.75±11.76) %,与未照射组 (6.13±4.71)%相比差异有统计学意义(Z=-2.37,P＜0.05)。 结论 LDR可诱导CML-LSCs中P16基因转录水平的表达上调,使得CML-LSCs阻滞在G₀/G₁期,促进LSCs的凋亡,为P16基因作为CML中治疗的靶点及LDR在白血病中的应用提供理论依据。     

优化胞质分裂阻滞实验方案用于核质桥分析的可行性

目的:探索优化胞质分裂阻滞实验方案用于辐射诱导核质桥分析的可行性,为以核质桥为指标进行生物剂量估算提供科学依据。方法:用2 Gy 60Co γ 射线(剂量率为1 Gy/min)照射人离体外周血(设0 Gy对照),照射后28 h在细胞样品中加入终浓度为6 μg/ml的松胞素B,培养48、56、68和72 h...     

低剂量率裂变中子照射对大鼠外周血淋巴细胞亚群的影响

目的 探讨低剂量率中子长期照射对大鼠外周血细胞亚群的影响。方法 96只雄性大鼠分为对照组和照射组,照射组每天用低剂量率中子²⁵²Cf(吸收剂量率为0.35 mGy/h)照射20.5h,在照射的第14、28、42、56和70天(累积剂量分别为0.1、0.2、0.3、0.4和0.5 Gy)及停止照射后第35天各取8只大鼠,用血细胞计数仪检测大鼠外周血WBC、用流式细胞仪检测外周血CD4⁺CD3⁺、 CD8⁺CD3⁺、CD45RA⁺/CD161α⁺亚群的变化。结果 累积剂量为0.3、0.4及0.5 Gy时WBC明显低于对照组(P<0.05),停止照射后35 d,WBC显著低于对照组(P<0.01);累积剂量为0.1、0.3、0.4、0.5 Gy及停止照射后35 d,外周血CD4⁺CD3^-细胞比例显著高于对照组(P<0.01或<0.05);累积剂量为0.2和0.3 Gy时CD8⁺CD3^-细胞比例显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。而累积剂量为0.1 Gy时的CD4⁺CD3⁺细胞比例及0.1和0.2 Gy时的CD8⁺CD3⁺细胞比例明显高于同一天对照组(P<0.01或<0.05)。另外,低剂量率中子长期照射可使累积剂量为0.2~0.3 Gy的外周血NK细胞(CD161α⁺ CD45RA^-)显著升高,累积剂量为0.1~0.5 Gy及停止照射后35 d照射组的外周血B细胞(CD161α^- CD45RA⁺)比例明显下降。结论 低剂量率裂变中子长期照射可使外周血淋巴细胞TCR基因突变,使大鼠外周血WBC减少,淋巴细胞中B细胞减少,NK细胞细胞比例升高,这种变化在停止照射后一段时间仍可能难以恢复。