大蒜素对人胃癌MGC803细胞体外作用的研究

目的 探讨大蒜素对人胃癌MGC803细胞的作用.方法 MTT法检测MGC803细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期改变和免疫组化SP法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果 2μg/ml大蒜素作用24h、72h后细胞的生长抑制率为14.01%±2.36%和50.57%±7.01%;浓度8μg/ml时抑制率升为35.42%±5.55%和89.66%±19.92%.2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素作用于MGC803细胞24h后G0/G1期细胞比率明显下降,而G2/M期比率明显上升.经2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素处理后MGC803细胞的bcl-2蛋白表达明显下调,bax蛋白的表达明显上调.结论 大蒜素能通过诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期来抑制癌细胞的生长增殖.其机制可能与下调bcl-2和上调bax蛋白表达诱导癌细胞调亡有关.     

P21活化激酶1小分子干扰RNA对胃癌BGC823细胞生长的影响

目的观察Pak1siRNA对胃癌BGC823细胞生长和细胞周期的影响。方法 Westernblot检测Pak1在胃癌细胞中的表达。BGC823细胞转染Pak1siRNA后,MTT分析和细胞计数观察BGC823细胞的生长情况,同时进行细胞周期测定。结果 Pak1在胃癌BGC823细胞中高表达,且能被Pak1siRNA干扰达72.24%。BGC823细胞在转染Pak1siRNA后,生长明显受到抑制(P<0.05),细胞周期在G2/M期发生阻滞,转染Pak1siRNA组G2/M比率[(20.12±1.64)%]较对照组[(8.70±1.69)%,P=0.008]明显升高。结论 Pak1siRNA能够影响细胞周期,从而抑制胃癌BGC823细胞的生长。     

miR-223对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

目的 观察miR-223对结肠癌SW480细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 PLL3.7-miR-223和PLL3.7-miR-EV质粒转染SW480细胞,Real-time PCR检测转染24h后miR-223的表达变化,CCK-8试剂盒检测转染12、24、48 h后细胞的增殖能力,流式细胞仪分析转染48 h后细胞周期和凋亡情况,Western blot检测IGF-1R、AKT蛋白表达情况.结果 转染24 h后,Real-time PCR检测结果显示PLL3.7-miR-223转染组miR-223的表达量（6.55±2.04）较PLL3.7-miR-EV（以其miR-223的表达量为1）明显上调（P＜0.01）.与对照EV组相比,SW480细胞在转染miR-223后生长明显受到抑制,细胞周期在G1期发生阻滞[（61.61±4.02）％vs.（35.99±1.62）％],凋亡增加明显[（67.43±4.75）％vs.（44.23±3.11）％],均P＜0.01,并且能够降低生长相关蛋白IGF-1R及细胞凋亡相关蛋白AKT的表达.结论 miR-223可以通过调节IGF-1R和AKT的表达影响结肠癌细胞SW480的增殖、细胞周期和凋亡.     

微小RNA miR-148b-3p在人胶质瘤细胞中的表达及意义

目的检测微小RNA(microRNA,miR)-148b-3p在人胶质瘤细胞中的表达水平,并探讨其对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测胶质瘤细胞A172和正常星形胶质细胞HA1800中miR-148b-3p的表达水平。合成miR-148b-3p mimics及阴性对照(NC),用Lipofectamine 2000将miR-148b-3p mimics和NC转染至人胶质瘤细胞A172。分别采用噻唑蓝(MTT)法、Transwell实验、流式细胞术检测转染miR-148b-3p mimics对胶质瘤细胞A172增殖、侵袭及细胞周期的影响。结果 miR-148b-3p在胶质瘤细胞A172中的相对表达量为0.27±0.06,显著低于在正常星形胶质细胞HA1800中的相对表达量1.16±0.21(P0.01)。MTT检测到miR-148b-3p mimics组A172细胞增殖率在转染后显著降低,转染24h、48h及72h后,细胞增殖率分别下降(12.33±0.46)%、(18.35±0.64)%和(30.54±1.22)%。Transwell实验结果显示miR-148b-3p mimics组A172细胞穿膜细胞数为23.1±1.8,显著低于NC组的87.1±4.6(P0.01),miR-148b-3p mimics能够抑制A172细胞的侵袭能力。流式细胞术结果显示miR-148b-3p mimics显著阻滞A172细胞从G0/G1期向S期转换。结论 miR-148b-3p在胶质瘤细胞中低表达,miR-148b-3p在胶质瘤细胞中发挥抑制肿瘤增殖和侵袭的作用。     

大蒜素对人胃癌MGC803细胞体外作用的研究

目的探讨大蒜素对人胃癌MGC803细胞的作用。方法MTT法检测MGC803细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期改变和免疫组化SP法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果2μg/ml大蒜素作用24h、72h后细胞的生长抑制率为14.01%±2.36%和50.57%±7.01%;浓度8μg/ml时抑制率升为35.42%±5.55%和89.66%±19.92%。2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素作用于MGC803细胞24h后G0/G1期细胞比率明显下降,而G2/M期比率明显上升。经2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素处理后MGC803细胞的bcl-2蛋白表达明显下调,bax蛋白的表达明显上调。结论大蒜素能通过诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期来抑制癌细胞的生长增殖。其机制可能与下调bcl-2和上调bax蛋白表达诱导癌细胞调亡有关。     

miR-34a通过调控YY1抑制肾癌细胞的增殖及侵袭

目的探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制。方法实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对照组、阴性对照组、miR-34a mimics转染组。实时PCR检测转染24 h后miR-34a表达量;噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力;实时PCR和蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1表达水平。结果与癌旁组织相比,20例癌组织中miR-34a平均表达量为1.06±0.67,显著低于癌旁组织(1.62±0.83,P<0.01);转染后24 h,miR-34a mimics转染组的miR-34a表达量为157.04±13.01,较阴性对照组显著上调(P<0.01);miR-34a mimics转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期;细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01);转染miR-34a mimics后YY1基因在mRNA表达无明显变化(P>0.05),蛋白水平下调。结论 miR-34a在肾癌中低表达,可能与肾癌的发生有关;miR-34a调控YY1的表达可能是抑制肾癌细胞生物活性的重要机制之一。     

miR-135a与前列腺癌细胞增殖相关因子信号转导及转录激活因子6的相关性研究

目的探讨miR-135a与前列腺癌细胞增殖相关因子信号转导及转录激活因子(STAT6)的相关性。方法选取前列腺癌DU145细胞,随机分为miR-135a转染组和空白转染组,miR-135a转染组细胞转染miR-135a序列,空白转染组转染空白序列,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,采用Transwell细胞迁移侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-STAT6和STAT6蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-135a表达。结果转染后48h,miR-135a转染组miR-135a相对表达量为(0.932±0.061),明显高于空白转染组(P0.05);miR-135a转染组培养24、48h的OD值分别为(0.210±0.045)和(0.281±0.052),明显低于空白转染组(P0.05);miR-135a转染组G0/G1期细胞比例为(60.02±6.39)%,明显高于空白转染组(P0.05);miR-135a转染组迁移细胞数和侵袭细胞数分别为(116.93±30.02)个和(133.02±28.51)个,明显低于空白转染组(P0.05);miR-135a转染组p-STAT6和STAT6蛋白相对表达量分别为(0.947±0.114)和(0.437±0.077),明显低于空白转染组(P0.05)。结论miR-135a可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,可能与其抑制前列腺癌细胞STAT6表达有关。     

MicroRNA-15a抑制骨髓瘤细胞生长及其机制研究

目的:研究microRNA-15a(miR-15a)在多发性骨髓瘤(MM)细胞生长中的作用及可能机制。方法:慢病毒颗粒感染MM细胞株U266和RPMI8226,流式细胞术(FCM)分选获得稳定转染MM细胞株。CCK-8法检测miR-15a高表达前后MM细胞的增殖情况;AO/EB染色、Hoechst 33258荧光染色法及FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞凋亡的情况;FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞周期的情况;real-time PCR方法检测miR-15a高表达前后MM细胞miR-15a、BMI-1及BCL-2 mRNA的表达;Western blot方法检测miR-15a高表达前后MM细胞BMI-1蛋白表达。结果:获得高表达miR-15a的MM稳定转染细胞株。CCK-8结果显示miR-15a高表达可抑制M M细胞(U266和RPM I8226)的增殖;AO/EB、Hoechst 33258染色和FCM结果显示,miR-15a高表达可显著诱导MM细胞(U266和RPM I8226)的凋亡,U266和RPM I8226细胞高表达组与对照组细胞凋亡率分别为:90.52%vs37.08%,59.40%vs 44.17%;同时,miR-15a高表达可诱导MM细胞(U266和RPM I8226)G1期阻滞,G1期细胞分别为(41.50±0.64)%、(45.31±0.77)%。real-time PCR结果显示,在高表达miR-15a抑制骨髓瘤细胞生长的过程中BCL-2 mRNA表达显著降低,BMI-1 mRNA表达则没有改变,但是Western blot结果却显示BMI-1蛋白表达出现显著降低。结论:miR-15a高表达通过诱导骨髓瘤细胞周期阻滞和凋亡抑制骨髓瘤细胞生长,其机制涉及miR-15a在转录后水平对BMI-1、BCL-2基因的负调控。     

靶向IGF-ⅠR的RNA干扰技术抑制胃癌细胞增殖的研究

目的 观察特异的小干扰RNAs(small interfering RNAs,siRNAs)对胃癌细胞胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(Insulin-like growth factor-Ⅰ receptor,IGF-Ⅰ R)基因表达的抑制作用,研究其对肿瘤增殖的影响.方法 设计并体外合成2条靶向IGF-Ⅰ R的siRNAs,脂质体法瞬时转染MGC803细胞,转染前后均使用Western Blot法检测IGF-Ⅰ R的表达水平,MTT法检测细胞增殖,细胞计数并描记生长曲线.结果 MGC803细胞中有IGF-ⅠR的强烈表达.转染后48h,干扰组(siRNA2-L组、siRNA2-H组、siRNA1组)IGF-Ⅰ R表达抑制率分别为64.41%±4.11%、74.14%±6.15%、89.8%±4.10%;siRNA1组转染后第2-5天细胞增殖逐渐减少(分别达49.9%±1.2%、45.9%±4.4%、39.1%±5.1%、29%±4.0%);同期细胞计数分别为对照组的65.58%±4.89%、55.59%±0.82%、44.18%±3.17%、21.15%±1.1%.结论 特异的siRNAs可显著抑制胃癌细胞中的IGF-Ⅰ R基因的表达从而显著抑制细胞的增殖.     

microRNA-21调节宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4的表达研究

目的探讨microRNA(miR)-21-反义寡核苷酸(ASODN)对宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4基因表达、细胞增殖与凋亡的影响。方法宫颈鳞癌SiHa细胞分3组,采用LipofectamineTM2000转染试剂,miR-21调控组转染miR-21抑制剂的ASODN,miR-21抑制剂阴性对照的ASODN,空白对照组不转染。Cell Titer和荧光TUNEL分别检测转染前后SiHa细胞增殖和凋亡的变化,流式细胞仪分析细胞周期,实时RT-PCR检测miR-21和PDCD4mRNA水平表达,Western blot检测靶蛋白PDCD4表达。结果 AS-miR-21组与阴性、空白对照组相比,SiHa细胞生长明显抑制,而阴性和空白对照组比较无明显差异;细胞凋亡率分别为(9.7±0.52)%、(3.6±0.17)%和(3.4±0.36)%;细胞周期结果显示AS-miR-21组G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,与对照组间差异显著(P<0.05);实时RT-PCR结果显示,miR-21表达下降而PDCD4表达升高。Western blot检测结果显示,PDCD4表达AS-miR-21组明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论 AS-miR-21可有效抑制miR-21在宫颈鳞癌SiHa细胞中的表达并上调PDCD4基因表达,发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

反义miR-21抑制宫颈鳞状细胞癌CaSki细胞系生长体外研究

目的探讨敲低miR-21表达对宫颈鳞状细胞癌细胞系CaSki增殖活性与凋亡的影响。方法实时荧光定量RT-PCR法检测正常宫颈组织、CaSki细胞转染前后miR-21的表达水平,采用MTT法、流式细胞术等技术检测转染后CaSki细胞增殖活性与凋亡的变化。结果 miR-21在CaSki细胞中表达水平为正常宫颈组织的3.25倍。CaSki细胞中转染反义miR-21(AS-miR-21)可显著抑制其表达。转染后24h、48h、72h、96h,MTT检测提示10nmol与20nmolAS-miR-21转染组中细胞增殖率较对照组明显降低(P<0.05),自48h抑制作用显现,且随着转染浓度增加,抑制作用增强,呈现剂量依赖性。细胞周期检测结果显示AS-miR-21转染组的G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少(P<0.05)。AnnexinⅤ联合PI技术检测细胞凋亡,结果显示AS-miR-21转染组早期凋亡细胞率[(23.40±2.16)%]明显高于空白对照组[(5.1±2.16)%]、阴性对照组[(6.87±0.55)%](P=0.000)。结论 AS-miR-21转染可敲低CaSki细胞中miR-21表达,并有效抑制细胞增殖活性,促进细胞凋亡。     

蒙药娜仁满都拉-11诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究蒙药娜仁满都拉-11对人胃癌MGC803细胞生长的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将不同浓度的蒙药作用于MGC803细胞,通过MTT法检测细胞的生长情况;利用透射电镜、流式细胞术检测凋亡细胞;应用免疫组化检测Bcl-2的表达情况。结果:蒙药能抑制MGC803细胞的增殖,且呈浓度依赖性。2mg/mL药物作用MGC803细胞48h后,电镜和流式细胞术检测均显示蒙药能诱导胃癌细胞凋亡;Bcl-2在蒙药作用后表达明显降低。结论:娜仁可明显抑制MGC803细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2表达有关。     

多发性骨髓瘤细胞和正常浆细胞miR-373表达水平及其对肿瘤生长的影响

目的分析多发性骨髓瘤细胞和正常浆细胞microRNA-373(miR-373)表达水平及其对肿瘤生长的影响。方法回顾性收集江苏大学附属句容医院收治的36例多发性骨髓瘤患者为病例组,另同期选取30例于该院健康体检者为对照组。采用实时荧光定量PCR法测定病例组细胞与对照组正常浆细胞中miR-373的表达量。通过Lipofectamine-2000将miR-373模拟物(转染miR-373组)或相应的阴性对照(阴性对照组)转染为H929细胞。分析H929细胞中细胞增殖、细胞周期和凋亡及肿瘤生长的情况。结果实时荧光定量PCR法检测结果显示,病例组细胞中miR-373的相对表达量(0. 40±0. 04)较对照组正常浆细胞的水平(1. 02±0. 05)显著下降(P 0. 01)。细胞增殖实验表明,相比阴性对照转染的H929细胞,经转染miR-373模拟物的H929细胞中miR-373表达明显升高(P 0. 01)。细胞周期实验结果发现,相比阴性对照组,转染miR-373组的H929细胞在S期的细胞百分比较低,而在G0/G1期的细胞百分比较高(P 0. 01)。细胞凋亡实验结果发现,相比阴性对照组,转染miR-373组的H929细胞凋亡率明显增高(P 0. 01)。小鼠成瘤实验表明,miR-373的过表达可通过下调叉头框蛋白M1(FOXM1)表达以明显阻滞肿瘤生长(P 0. 01)。结论 miR-373可通过调节FOXM1表达以发挥有效阻滞多发性骨髓瘤肿瘤生长的作用,提示其对多发性骨髓瘤的临床治疗具有重要意义。     

非甾体类抗炎药阿司匹林、吲哚美辛对胃癌MGC803细胞的抑制作用研究

目的探讨非甾体类抗炎药阿司匹林(ASP)、吲哚美辛(Indo)促进胃癌MGC803细胞凋亡、抑制增殖的作用和机制。方法细胞增殖检测(MTT)法检测ASP、Indo对MGC803细胞增殖的影响;流式细胞技术检测ASP、Indo对MGC803细胞凋亡的影响;细胞免疫化学方法检测ASP、Indo对MGC803细胞表达C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)的影响。结果与对照组相比,ASP、Indo对MGC803细胞具有明显的增殖抑制作用及促进MGC803细胞凋亡的作用;MGC803细胞高表达CRP、IL-6,ASP、Indo能下调MGC803细胞CRP、IL-6的表达水平。结论非甾体类抗炎药ASP、Indo对胃癌MGC803细胞具有抑制增殖、诱导凋亡的作用,并能下调MGC803细胞中CRP、IL-6的表达。     

MicroRNA-1184在胃癌细胞中的表达及作用

摘要:目的探讨 MicroRNA-1184( miR-1184)在胃癌细胞系中的表达水平及其对胃癌细胞增殖、迁移、细胞周期及凋亡等生物学行为中的作用。方法通过实时荧光定量 PCR检测胃癌组织及人胃黏膜上皮细胞系GES-1中miR-1184的表达水平;通过 CCK-8试验、平板克隆形成试验、Transwell迁移试验及细胞划痕试验检测胃癌细胞的增殖和迁移能力;通过流式细胞术检测胃癌细胞系的细胞周期及凋亡率的变化;通过Western blot 检测胃癌细胞上皮-间质转化( EMT)、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达水平;通过双荧光素酶报告基因试验检测miR-1184与异柠檬酸脱氢酶3(NAD+)a( IDH3A)的靶向关系。结果与胃癌旁组织及人胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-1184在胃癌组织中呈低表达(t=2.54,P<0.05),且在胃癌细胞系BGC-823 和 MGC-803中呈低表达(t= 13.99,P<0.001;t= 14.85,P<0.01)。与对照组相比,转染miR-1184抑制剂可促进胃癌细胞的增殖(t=9.28, P<0.05)、迁移(t=9.24, P<0.001). EMT进程,G,/S期细胞周期转换以及细胞凋亡减少(t=6.57,P<0.01);转染 miR-1184模拟物可抑制胃癌细胞的增殖(t=7.34 ,P<0.001)、迁移(t=9.24,P<0.001)、EMT进程、G,/S期细胞周期转换以及细胞凋亡增加(t= 20.33 ,P<0.000 1) ;miR-1184可与IDH3A靶向结合,其抑制剂可使胃癌细胞中IDH3A蛋白的表达量增加(t=11.32 ,P<0.001),而其模拟物可使胃癌细胞中IDH3A蛋白的表达量减少(t=20.91,P<0.0001)。结论miR-1184 在胃癌组织和细胞系中呈低表达,可影响胃癌细胞增殖、迁移EMT进程、细胞周期G,/S期转换及细胞凋亡等生物学行为。     

抑制mll-af9融合基因表达对急性单核细胞白血病细胞THP-1增殖的影响

本研究探讨siRNA(small interfering RNA)对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1的mll-af9融合基因的影响.选择THP-1细胞特有的m11-af9融合基因为靶基因,设计并合成siRNA片段.以人急性单核细胞白血病细胞系THP-1为靶细胞,应用脂质体转染方法,将siRNA导入细胞,通过流式细胞仪检测siRNA转染效率,用RTPCR法比较转染前后mll-af9 mRNA表达水平的变化,以MTT法检测细胞增生抑制率,流式细胞术检测细胞周期的改变和细胞凋亡水平.结果表明siRNA转染效率为(69.1±1.8)%,转染siRNA后THP-1细胞生长受到明显抑制,m11-af9融合基因表达量大幅度减少,细胞周期发生了明显的变化,主要表现为G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,并使细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡水平增高,而对照组siRNA转染后则无上述改变.结论利用siRNA靶向干扰mll-af9融合基因的表达可以有效抑制人急性单核细胞白血病细胞THP-1的增殖.     

沉默RORα通过Wnt信号通路促进人胃癌细胞增殖与迁移侵袭

目的:在构建沉默RORα人胃癌MGC803细胞的基础上,观察沉默RORα对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。方法:软琼脂集落形成实验、流式细胞术、细胞迁移和侵袭实验检测RORα沉默对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。RT-PCR与Western blot检测RORα、Wnt1、MMP-9与TIMP3 m RNA与蛋白表达。结果:集落形成实验显示,沉默组的集落形成率128.1%明显高于对照组和空载体组(P0.05)。流式细胞术显示,沉默组S期细胞百分率39.9%较对照组26.1%和空载体组27.4%明显增加(P0.05)。迁移实验显示,沉默组迁移距离(1.76±0.19)mm明显高于对照组(1.32±0.14)mm和空载体组(1.29±0.17)mm(P0.05)。侵袭实验显示,沉默组穿膜细胞(172±27)个明显多于对照组(147±17)个和空载体组(149±14)个(P0.05)。RT-PCR与Western blot表明,沉默RORα可显著上调Wnt1与MMP-9 m RNA与蛋白与下调RORα与TIMP3 m RNA与蛋白。结论:沉默RORα可通过Wnt信号通路上调MMP-9和下调TIMP3促进MGC803细胞增殖与迁移侵袭。     

肌醇5'磷酸酶基因突变对K562细胞周期蛋白和Akt磷酸化的影响

目的 从分子水平探讨肌醇5'磷酸酶(SHIP)基因突变对人白血病细胞系K562细胞周期及其相关基因表达的影响.方法 应用携带野生型和突变型SHIP及绿色荧光蛋白的慢病毒及空载体慢病毒质粒转染K562细胞,通过流式细胞术检测K562/SHIP细胞转染效率、细胞增殖指数及细胞周期变化;MTT法检测细胞增殖活性改变,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测SHIP mRNA水平变化,Western blot检测各组K562细胞SHIP、细胞周期蛋白(cyclin)D1、p21WAF1/CIPI、P27KIP1蛋白表达水平及Akt磷酸化变化.结果 野生型SHIP基因能明显抑制K562细胞增殖,并产生明显的G0/G1期阻滞[G0/G1期细胞分别为(34.2±7.8)%和(0.7±8.3)%,P<0.01];但SHIP基因点突变并未影响K562细胞增殖及细胞周期改变[G0/G1期细胞分别为(33.4±4.2)%和(36.3±6.7)%,P>0.05].Western blot结果发现转染野生型SHIP基因后K562细胞Akt磷酸化和cyclin D1表达水平明显下降(P<0.01),p21WAF1/CIPI、p27KIP1表达增高,而突变型SHIP基因对Akt磷酸化水平和细胞周期蛋白表达几乎没有影响(P>0.05).结论 ①野生型SHIP基因通过下调K562细胞Akt磷酸化水平,进而抑制其下游cyclin D1表达,上调p21WAF1/CIPI和p27KIP1基因表达,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制K562细胞增殖;②SHIP基因突变体(TTC→CTC,Phe→Leu)丧失了对K562细胞的增殖抑制作用,提示SHIP基因对K562细胞增殖的负调控作用有赖于其基因结构和功能正常.     

MiR-195对人脑胶质瘤细胞 U251和 SHG-44增殖的抑制作用

目的探讨 miR-195过表达对体外培养的人脑胶质瘤细胞U251和 SHG-44增殖的影响。方法通过脂质体将miR-195 mimics转染至U251和SHG-44细胞,同时设立空白对照组和阴性对照组,实时荧光定量PCR检测转染前后miR-195的表达水平;用CCK-8法评价细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期。结果胶质瘤细胞转染miR-195 mimics后,发现U251细胞和SHG-44细胞中miR-195的表达分别为5.93＆#177;0.43和6.43＆#177;0.48,较空白对照组和阴性对照组均增高约6倍左右。与空白对照组和阴性对照组相比,转染miR-195 mimics后的胶质瘤细胞的增殖能力明显受到抑制,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞减少。结论过表达miR-195可以阻滞胶质瘤细胞周期进展,从而抑制其增殖,为胶质瘤的基因治疗提供新的策略。     

尼美舒利对丝裂霉素-c抑制人胃癌细胞株细胞增殖及诱导凋亡影响的实验研究

目的 研究环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)选择性抑制剂尼美舒利(Nimesulide，NIM)对丝裂霉素-c(Mitomycin，MMC-c)抑制体外培养人胃癌细胞株SGC7901及MGC803细胞增殖及诱导凋亡作用的影响。方法 采用MTT比色法观察NIM对MMC-c抑制人胃癌细胞SGC7901及MGC803细胞增殖的影响；采用流式细胞仪技术及吖啶橙荧光染色观察NIM对MMC-c诱导人胃癌细胞SGC7901及MGC803细胞凋亡的影响。结果 NIM能增强MMC-c抑制SGC7901细胞增殖及诱导SGC7901细胞凋亡，而对MGC803细胞无明显影响。结论 COX-2选择性抑制剂NIM能增强MMC-c对部分人胃癌细胞抑制增殖与诱导凋亡作用，作用有无可能取决于癌细胞COX-2的表达情况。