抗乙肝病毒前S(2)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

本文用聚合人血清白蛋白亲和层析柱纯化的含前S(2)-HBsAg,脾内接种BALB/c/小鼠,取其脾细胞与Sp2/0-Ag骨髓瘤细胞进行常规方法融合,以4种酶联法进行筛选,并经多次有限稀释亚克隆培养,最终选出3株为分泌抗前S(2)单克隆抗体的细胞株。再经亚克隆培养和多次传代与冻存,并用抑制酶联法检测其抗体,均为抗前S(2)抗体阳牲。接种BALB/c小鼠     

NOD/SCID小鼠抗原对脐血T细胞上TCRVβ亚家族基因克隆性的影响

目的：了解脐血单个核细胞（MNC）体外与NOD/SCID小鼠抗原共培养后, TCRVβ亚家族T细胞分布和克隆性增殖的特点.方法：将NOD/SCID小鼠外周血MNC、骨髓、胸腺及脾细胞反复冻融3次制成可溶性抗原, 分别与Ficoll-Hypaque法分离的脐血MNC共培养.第15天和第20天, 分别收集细胞提取RNA, 用RT-PCR扩增人TCRVβ亚家族基因, 并用基因扫描进行T细胞克隆性分析.结果：扩增前脐血T细胞表达大部分Vβ亚家族, 经NOD/SCID小鼠抗原诱导后, TCRVβ亚家族T细胞呈限制性表达, 某些Vβ亚家族基因（Vβ10、 11）呈寡克隆性增殖, 而某些Vβ亚家族基因（Vβ2、 15、 16、 19）呈寡克隆表达的趋势.结论：NOD/SCID小鼠抗原可刺激脐血T细胞选择性增殖, 提示在建立人源化NOD/SCID小鼠免疫模型时应考虑所存在的GVHR问题.     

分泌抗人甲胎蛋白并对肝癌细胞株有特异性亲和力的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和鉴定

采用杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0与人甲胎蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合,,经3～4次有限稀释法克隆,ELISA法筛选,获得分泌抗人甲胎蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株 其上清和腹水效价分别为10~(-2)和10~(-6～-9)。再经间接荧光法、放射免疫法反复     

一种针对多种上皮样细胞系的单克隆抗体

用人卵巢粘液囊腺癌细胞系细胞制备抗原,给BALB/c小鼠脾内注射后,取其脾细胞与Sp2/0瘤细胞融合,HAT选择培养基培养21d,以免疫荧光法检测,经3次亚克隆培养,获1株能稳定分泌单克隆抗体的杂交     

用免疫荧光法筛选抗人μ链单克隆抗体(McAb)的研究

用人血清IgM球蛋白重链-μ链免疫的BALB/c小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤Sp 2/0细胞在PEG作用下融合,用免疫荧光法筛选出6种分泌McAb的杂交瘤细胞,其中5株确定为抗人μ链McAb,一株未定。杂交瘤细胞经四次克隆,半年多传代,接种BALB/c鼠可稳定的产生腹水抗体。     

抗人胃癌单克隆抗体的制备

分别以SGC-7901胃癌细胞以及MKN-28胃癌细胞无血清培养上清免疫Balb/c 小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合。此外,尚取荷胃癌裸小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合。经筛选及克隆化后获得六株分泌胃癌单抗的杂交瘤(RWS3,RWS4,RSD5,RSC12,RNE8,RNF11)。     

抗人胃癌单克隆抗体的制备及反应性研究

用国内胃癌细胞系GGC-81-40免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag~(14)融合,经ELISA和IF法筛选,获得了5株产生抗人胃癌单克隆抗体的杂交瘤细胞系,称GMG_1系列(GMG_1:1D_(1-1);1D_(1-2);1A_2;4D_6;5B_(10))。现已传代培养     

抗人肝癌单克隆抗体HL2的制备及鉴定

本文以贯序免疫法依次用人肝癌细胞株QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721免疫BACB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合,经检测细胞抗原的EL-ISA方法筛选,连续克隆4次后,获得了1株能稳定分泌肝癌单抗的杂交瘤株HL_2。其     

胃癌血清中免疫抑制因子的初步探讨

带瘤动物血清能抑制小鼠脾细胞抗绵羊红细胞的空斑形成细胞反应(PFC),说明其血清中存在免疫抑制因子。1980年Takateru等报道用肺癌血清作PFC免疫抑制试验,阳性率达78％,非癌肺部疾病者为6％,正常人为7％,并提出有可能将此法用于肺癌的免疫诊断。由于此免疫抑制试验的结果与肺癌的组织分型无显著关系,提示可用于其他肿瘤的测定。我们尝试用胃癌血清作PGC免疫抑制试验,以了解,胃癌血清的免疫抑制活性,现将结果简要报道如下。 材料与方法 取C57BL/6J小鼠,每组3只。将0.4ml经56℃     

狂犬病毒单克隆抗体的杂瘤细胞系的建立

《病毒学报》1985,1(2)105朱家鸿、曾毅报道,将感染狂犬病毒aG株(我国狂犬疫苗生产毒种)后发病的BALB/c乳鼠脑内病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞S_P2/0融合。融合率为95.7％(401/419),阳性克隆占26.8％,经克隆化后获得3株杂交瘤细胞,用免疫荧光、BLISA和双向免疫扩散试验证明,该3株细胞分泌抗狂犬病毒     

小鼠B7-H4慢病毒表达载体的构建及对脾细胞增殖的影响

目的:构建小鼠B7-H4(mB7-H4)慢病毒表达载体并观察B7-H4蛋白对脾细胞增殖的影响。方法:从BALB/c小鼠肺脏中克隆B7-H4基因,构建表达载体mB7-H4-EGFP,酶切后克隆入慢病毒表达载体pCDH1-MCS1-EF1-Puro中,命名为pCDH1-mB7-H4-EGFP;以包含起始密码和多克隆位点的寡核苷酸取代mB7-H4作为对照载体pCDH1-Control-EGFP。分别与包装载体混合物一起经LipofectamineTM2000转染入293T细胞包装成病毒颗粒,感染293T细胞。pCDH1-mB7-H4-EGFP重组慢病毒感染的293T细胞分别与BALB/c、C57BL/6、BALB/c∶C57BL/6(1∶1)小鼠脾细胞混合培养,用MTT法检测其对脾细胞增殖的影响,对照为pCDH1-Con-trol-EGFP重组慢病毒感染的293T细胞进行的相同处理。结果:mB7-H4被成功克隆,测序证实与GenBank的mRNA核酸序列2个核苷酸有差异,但与其编码的氨基酸一致。pCDH1-mB7-H4-EGFP慢病毒表达载体被成功构建。mB7-H4蛋白表达在293T细胞表面,与对照相比,对BALB/c、C57BL/6、BALB/c∶C57BL/6(1∶1)小鼠脾细胞增殖均具有明显抑制作用。结论:成功构建小鼠B7-H4慢病毒表达载体,感染293T细胞后表达出对脾细胞增殖具有抑制活性的mB7-H4膜表面蛋白。     

抗葡萄球菌肠毒素A的单克隆抗体

用小鼠骨髓瘤(SP/2)细胞和由葡萄球菌肠毒素A(SEA)免疫的BALB/c纯系小鼠脾细胞进行体细胞杂交,获得了十种单克隆抗体,出同位素标记的SEA做免疫沉淀,以竞争和非竞争放射免疫法测定,其中五种克隆与SEA呈特异性反应,对其他葡萄球菌肠毒素没有交叉反应。另外五种克隆显示对血清蛋白有中等的交叉反应,杂交瘤抗体是从注射瘤细胞的     

子宫组织定居记忆T细胞的免疫学特征

目的探究小鼠子宫内组织定居记忆T细胞(Trm)的分布、表型和功能等免疫学特性。方法 Balb/c小鼠经心脏灌洗去除循环中的记忆T细胞后,用胶原酶和DNaseⅠ消化得到子宫中淋巴细胞,脾组织研磨后得到单细胞悬液,用流式细胞术检测子宫和脾组织中组织定居记忆T细胞的表型特征;用多克隆刺激剂刺激后,流式检测IFN-γ的表达。结果小鼠子宫和脾脏中T淋巴细胞表达Trm的表面分子标志CD69和CD103,子宫中T细胞表达CD69和CD103高于脾组织中T细胞。且发现CD69~+T细胞比CD69-T细胞表达较高水平的IFN-γ。而CD103-T细胞比CD103~+T细胞表达较高水平的IFN-γ。CD69~+CD103~+和CD69~+CD103-的Trm细胞表达记忆细胞表面分子CD44的比例高于CD69-CD103-和CD69-CD103~+非Trm细胞。结论小鼠子宫中存在着一群Trm细胞,其表面表达CD69和/或CD103。CD69~+T细胞比CD69-T细胞产生较高的IFN-γ,而CD103-T细胞比CD103~+T细胞产生较高IFN-γ。     

抗人肺腺癌单克隆抗体放射免疫显像的动物实验研究

本文介绍用单克隆抗体进行裸鼠移植瘤的放射免疫定位的实验结果。用人肺腺癌细胞株(LTEP-a_2)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0细胞融合,筛选出产生抗LTEP-a_2抗体的杂交瘤细胞,经3次亚克隆后,注入BALB/c小鼠腹腔,产生腹水。Zetaprep离子交换     

抗乙型肝炎表面抗原单克隆细胞株的建立及实验研究

<正> 我们利用简易二氧化碳培养环境,用NS-1骨髓瘤细胞与HBsAg免疫的小鼠脾细胞融合,获得-株分泌抗HBsAg的杂交瘤细胞株-E_6。现将结果报告如下。 材料和方法 小鼠免疫脾细胞的制备及细胞融合按郭恒昌等介绍的方法进行。融合后的细胞置消毒玻璃干燥器内,加适量水,密封后按其体积的5～10％灌入CO_2气,放37℃电热恒温箱中培养,每2天结合换液观察细胞生长情况。7天后吸取上清液用双抗原夹心法的ELISA及上海医化所提供的试剂作PHA法测定抗HBs,选择效价高而细胞数少的阳性孔,以有限稀释法进行亚克隆,1周后用同样方法再亚克隆,     

白细胞介素23在小鼠乳腺癌中的抗肿瘤作用及其免疫机制

目的: 研究白细胞介素23(IL-23)在小鼠乳腺癌中的抗肿瘤作用及其免疫功能变化.方法: 将逆转录病毒介导转染IL-23基因的小鼠乳腺癌细胞(IL-23/MA-891)、转染逆转录病毒空载体的小鼠乳腺癌细胞(LXSN/ MA-891)及亲代小鼠乳腺癌细胞(MA-891)分别接种于小鼠皮下, 观察小鼠成瘤及肿瘤生长情况; 30 d时取3组小鼠脾脏和肿瘤组织, 用ELISA法检测3组小鼠脾细胞在MA-891诱导下IFN-?、 TNF-á、 IL-12和IL-4的产生情况; 用流式细胞术(FCM)检测肿瘤组织细胞表面分子MHC-Ⅰ、 MHC-Ⅱ、 CD80、 CD86的表达, 检测脾细胞中CD11c阳性细胞的比率, 并对脾细胞中CD4 、 CD8 淋巴细胞进行分选; 用免疫组织化学技术对3组肿瘤组织中CD4 、 CD8 淋巴细胞浸润情况进行检测.结果: IL-23基因转染组小鼠皮下结节生长速度明显慢于接种空载体转染组及未转染组; 接种IL-23/MA-891细胞的小鼠脾细胞可产生较水平的IFN-γ、 TNF-á和IL-12等Th1类及相关细胞因子, 与接种LXSN/MA-891细胞和MA-891细胞2组小鼠的脾细胞相比明显增高(P<0.01), 而Th2类细胞因子IL-4的水平却无统计学意义(P>0.05); 接种IL-23/MA-891细胞组小鼠脾细胞中CD11c阳性细胞率、 CD4 、 CD8 淋巴细胞比率以及肿瘤组织中CD4 、 CD8 淋巴细胞浸润程度均较LXSN/MA-891、 MA-891组明显增加(P<0.01); IL-23/MA-891细胞组小鼠肿瘤组织细胞表面MHC-Ⅰ、 MHC-Ⅱ、 CD80、 CD86分子的表达明显提高(P<0.01).结论: 转染IL-23基因的小鼠乳腺癌细胞所分泌的IL-23具有生物学活性, 增强了细胞免疫功能, 在小鼠体内发挥了明显的抗肿瘤作用.     

抗人胃癌单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗人胃癌细胞单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用国内胃癌细胞株GGC-81-40免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag融合,经ELISA法和IFS法筛选,获得了5个产生抗人胃癌细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系。这些杂交瘤细胞系具有双亲代生物学性质,现已传代培养一年多,染色体数为103～105条,免疫球蛋白分型:二株分泌的单抗为IgG_1,其它三株为IgM。它们均分泌高效价的抗体,ELISA测定效价为10~(-5) ,IFS效价为1:500;细胞结合试验与GGC-81-40呈现强阳性反应,但不与正常骨髓细胞,扁桃体T、B细胞以及外周血细胞反应。     

小鼠抗内质网相关的干扰素诱导病毒抑制蛋白(viperin)多克隆抗体的制备

目的 以纯化的内质网相关的干扰素诱导病毒抑制蛋白(viperin)免疫小鼠制备其多克隆抗体并鉴定其特异性。方法对BALB/c小鼠颅内注射鸭坦布苏病毒,刺激小鼠脑组织产生viperin,通过反转录PCR从小鼠大脑组织克隆viperin,并将其插入至pGEX-6P-1原核表达载体,转化至大肠杆菌Rosetta。用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对重组蛋白诱导表达,对其进行可溶性分析,以氯化钾染色切胶法对大量表达蛋白进行纯化;将纯化的重组viperin蛋白经腹部皮下免疫小鼠制备多克隆抗体,利用间接ELISA测定多抗效价,Western blot法和间接免疫荧光法(IFA)检测BHK-21仓鼠肾成纤维细胞瞬时表达的viperin蛋白鉴定viperin抗体的特异性和敏感性。结果 成功克隆并表达小鼠viperin基因,制备的抗体效价可达1∶25 600,小鼠抗viperin多克隆抗体可特异性识别BHK-21细胞表达的viperin蛋白。结论 成功制备特异性较好的小鼠抗viperin多克隆抗体。     

褪黑素对荷胃癌小鼠胸腺及脾CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的:研究褪黑素在抑制肿瘤过程中对荷胃癌小鼠胸腺及脾CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞表达变化的影响.方法:培养小鼠前胃癌细胞株(MFC),采用小鼠荷胃癌模型.用褪黑素干预1周后,测量小鼠胸腺、脾质量;并用流式细胞仪检测胸腺、脾Treg细胞;用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测胸腺、脾叉头型转录因子3 (Foxp3)的表达.结果:与正常对照组相比,小鼠胸腺、脾质量各组之间差异无统计学意义.在褪黑素抗肿瘤过程中,与正常对照组相比,荷瘤空白对照组小鼠胸腺与脾的Treg细胞均上升,褪黑素干预后降至正常水平;褪黑素还能使小鼠胸腺Foxp3 mRNA表达下降,脾Foxp3 mRNA反而上调;而小鼠胸腺、脾scurfin蛋白均明显下降.结论:褪黑素能下调荷胃癌小鼠胸腺、脾的CD4+CD25+Treg细胞及特异性转录蛋白scurfin及胸腺Foxp3 mRNA,使脾Foxp3 mRNA反而上调.褪黑素抗胃癌作用与免疫器官中CD4+CD25+Treg细胞免疫调节有关.