多聚左旋精氨酸通过p38/MAPK信号通路诱导NCI-H292细胞分泌IL-6、IL-8细胞

目的 研究多聚左旋精氨酸(PLA)诱导气道上皮细胞NCI-H292分泌炎症因子白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的机制.方法 将NCI-H292细胞按PLA浓度分组(0、2.5、5、10、20 mg/L),采用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测细胞中IL-6和IL-8 mRNA表达水平;按PLA加药时间分组(0、15、30、45、60 min),Western blot法检测p38/MAPK磷酸化水平;按对照组、PLA组、PLA+SB203580组和SB203580组分组,采用qRT-PCR法和ELISA法检测IL-6和IL-8的mRNA和蛋白表达量.结果 PLA能诱导NCI-H292细胞IL-6、IL-8 mRNA表达上调(P＜0.01),PLA也能增加NCI-H292细胞p38/MAPK磷酸化水平(P＜0.01),p38/MAPK阻断剂SB203580可抑制PLA诱导的NCI-H292细胞IL-6、IL-8 mRNA表达上调(P＜0.01)及p38/MAPK磷酸化水平的增加(P＜0.01).结论 p38/MAPK信号通路参与PLA诱导NCI-H292细胞炎症因子IL-6和IL-8 mRNA转录过程.     

PLA激活JNK信号通路促进NCI-H292细胞凋亡

目的 探讨多聚左旋精氨酸(PLA)诱导NCI-H292细胞凋亡的信号通路及分子机制.方法 将加入PLA 的浓度梯度分5组:0、10、20、40、60 mg/L,作用NCI-H292细胞24 h后Western blot法检测每组c-Jun氨基末端激酶( JNK)的磷酸化水平;设对照组、PLA 组(40 mg /L)、SP组(加入特异性JNK通路抑制剂SP600125)、PLA+SP组,加药24 h后流式细胞仪检测每组NCI-H292细胞凋亡率,Western blot法检测各组NCI-H292细胞内凋亡相关蛋白 Bcl-2/Bax、Caspase-3、P-JNK/JNK和β-actin蛋白的表达水平.结果 对照组、PLA组、SP组、 PLA+ SP组 NCI-H292细胞凋亡率分别为(5.13 ±1.07)%、(22.62 ± 1.66)%、(5.69 ± 0.14)%、(8.99 ± 3.73)% ;Western blot 法检测 PLA 诱导 NCI-H292 细胞内BCL-2/Bax比值降低( P＜0. 01),Caspase 3 表达升高( P＜0. 001),PLA诱导NCI-H292 细胞JNK 磷酸化水平增加(P＜0.001 ), SP600125 抑制 PLA 诱导 JNK 磷酸化( P ＜0.001).结论 PLA可能介导JNK信号通路引起NCI-H292细胞凋亡水平增加.     

左旋精氨酸对吸烟大鼠肺部炎症干预作用机制的研究

目的：探讨左旋精氨酸（L－Arg)干预吸烟大鼠肺部炎症变化的机制。方法：99只Wistar大鼠随机分为对照组,吸烟组,吸烟＋L－Arg组,实验大鼠计数肺泡灌洗液（BALF）中的中性粒细胞数,并测定其中IL－8的含量,观察肺组织的病理变化。结果：（1）BALF中的中性粒细胞数;吸烟组显高于对照组（P＜0．05）,吸烟＋L－A rg组高于对照组,低于吸烟组（P＜0．05）,BALF中IL－8含量;吸烟组在1周,2周及2个月显高于对照组（P＜0．05）,并与中性粒细胞数呈正相关,同时,吸烟＋L－Arg组IL－8的含量较吸烟组显减少（P＜0．05）,（2）HE染色显示,吸烟组肺组织有明显的炎症细胞浸润,吸烟1周后,支气管上皮细胞纤毛不完整,至2个月伴有支气管上皮细胞脱落,吸烟＋L－Arg组肺组织炎症变化及上皮细胞损伤较累,结论：吸烟引起的肺炎症症和损伤与IL－8含量升高有关;L－Arg干预可能通过抑制IL－8的产生而减轻吸烟引起的上述变化。     

左旋精氨酸甲酯对脑缺血再灌注期脑组织炎症反应的影响

目的:探讨局灶性脑缺血再灌注早期应用左旋精氨酸甲酯(L-NAME)对脑组织炎症反应的影响。方法:采用大脑中动脉线栓/再灌注模型,设定对照组、再灌注组、生理盐水(NS)组及L-NAME组,取缺血区组织检测髓过氧化物酶(MPO)活性,做细胞间黏附分子-1(ICAM-1)免疫组化染色,光镜下计数ICAM-1阳性血管数。结果:L-NAME组ICAM-1阳性血管数明显少于再灌注组及NS组(P<0.01)。L-NAME组MPO活性明显低于再灌注组及NS组(P<0.01)。结论:再灌注早期应用L-NAME能明显减少缺血区中性粒细胞浸润及ICAM-1的表达,有助于改善炎症反应导致的再灌注损伤。     

补充左旋精氨酸的研究进展

近年来的研究表明,体内的多种组织细胞,如内皮细胞、神经元、神经胶质细胞、肝细胞、肾细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等等皆存在左旋-精氨酸-一氧化氮(L Arg NO)通路,L Arg NO通路的广泛性决定了其生理功能的广泛性和复杂性。目前对于NO的合成前体左旋精氨酸(L Arg)已日益受到医学及相关科学工作者的广泛关注,现就其研究进展综述如下。1　对心血管系统的影响实验证明高血压患者存在不同程度的内皮细胞功能障碍[1] ,具体表现在Ach等扩血管物质引发内皮依赖性血管舒张能力下降,补充L Arg可松弛离体血管,松弛冠状血管较松弛胸主动脉明显。Higashi等报道[2 ] 对轻度原发性高血压患者输入L Arg可使平均动脉压及肾血管阻力降低。高连如等[3 ] 报道在原发性高血压患者中,给予静脉滴注L Arg平均动脉压明显降低,心率加快,血浆内皮素(ET)降低,cGMP活性增高。提示L Arg在治疗原发性高血压的同时,可提高心率,增加心输出量,对内皮产生的ET有拮抗作用,说明L Arg对血压调节和高血压治疗方面有一定的作用。动脉粥样硬化病变以动脉内膜斑块形成为主要的特征,内膜损伤是内膜病变发生的关键环节,它使内皮功能紊乱...     

左旋卡尼汀对血液透析患者脂联素及炎症介质的影响

目的探讨左旋卡尼汀（L—CN）对维持性血液透析（MHD）患者脂联素（APN）及炎症介质的影响、方法80例MHD患者分为治疗组和对照组,每组各40例,治疗组应用L—CN1．0g溶于20mL生理盐水中于血液透析结束后静脉注射,每周3次,对照组予一般治疗,疗程12周,治疗前后检测血清APN、TNF－α、IL－6、L-CN等相关指标。结果治疗组应用L—CN12周后,随着L—CN水平升高,TNF—α及IL－6也明显低于对照组（P〈0．01）,APN水平治疗前后两组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论MHD患者静脉应用L—CN可能提高了APN受体的表达．改善MHD患者APN部分被抑制现象,减轻微炎症状态,有利于发挥APN的心血管保护作用。     

左旋精氨酸/一氧化氮通路对小鼠胰岛β细胞凋亡的影响

目的研究左旋精氨酸／一氧化氮通路对胰岛β细胞凋亡的影响，初步探讨一氧化氮（NO）诱导胰岛β细胞凋亡的作用。方法体外培养的NIT-1小鼠胰岛β细胞，用不同浓度的L-精氨酸（L-arg）处理，6h后采用Griess化学显色法检测细胞培养液内的NO水平，Annexin-V／PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡。而后联合应用hemoglobin处理细胞，分为3组：对照组；L-arg组；L-arg＋hemoglobin组；6h后检测NO的水平和细胞的凋亡，并用Western Blot检测P53蛋白的表达。结果与对照组比较，L-arg 4mg／mL处理组的NO水平最高（P〈0．05），细胞凋亡最明显（P〈0．05）；hemoglobin干预后，NO水平和细胞凋亡率均较L-arg单独处理组明显降低（P〈0．05），与正常对照组之间差异没有显著性（P〉0．05）；Western Blot提示L—arg组的P53蛋白的表达水平明显高于对照组和hemoglobin处理组（P〈0．05）。结论L-arg／NO通路可诱导NIT-1小鼠胰岛β细胞凋亡，并呈现一定程度的剂量依赖性；NO可能通过P53的活化诱导NIT-1胰岛细胞凋亡。     

大黄和精氨酸对重症急腹症患者凝血功能和炎症介质的影响

目的：探讨大黄和精氨酸对重症急腹症患者凝血功能和炎性介质的影响。方法：142例全身炎症反应综合征(SIRS)评分≥2分且APACHEⅡ评分≥13分的重症急腹症患者随机分为对照组(A组)、精氨酸治疗组(B组)、精氨酸加大黄治疗组(C组)，在入院0天、4天、8天检测抗凝血酶Ⅲ(A—Ⅲ)、血小板颗粒膜蛋白(GMP-140)、组织纤溶酶激活物(t—PA)及其抑制剂(PAI)、肿瘤坏死因子(TP4F)和白介素-6，并计算各组DIC和多器官功能障碍综合征(MODS)发生率。结果：B、C两组GMP-140值下降、t-PA活性升高、PAI活性降低，C组AT-Ⅲ活性升高、TNF活性和IL-6值有所降低，B、C两组DIC发生率低于A组(P＜0．05)，C组MODS发生率低于A、B组(P＜0．01)，三组患者病死率差异无显著性(P＞0．05)。结论：精氨酸改善外科危重患者凝血功能，大黄减轻外科危重患者炎症反应，二者联合应用有望降低MODS发生率。     

阿奇霉素对急性肺损伤大鼠炎症介质及炎症细胞的影响

目的:应用油酸(oleic acid,OA)静脉注射复制大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型,探讨支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、多形核白细胞(poly-morphonuclear leukocyte,PMN)在油酸性肺损伤中的变化规律;探讨阿奇霉素对OA致ALI大鼠的治疗作用及可能的作用机制,为临床治疗ALI提供一定的理论和实验依据.方法:应用OA静脉注射复制大鼠ALI模型.将90只SD大鼠随机分为3组:生理盐水对照组(NC组),油酸致急性肺损伤组(0A组),阿奇霉素治疗组(AZI组).每组分别在1、3、7 d抽取动脉血并放血迅速处死.测定动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、pH值、左上肺测湿/干重比(wet/dry weight,W/D值),下段行病理检查.右肺灌洗,测BALF中总蛋白(total proteins,TP)、TNF-α含量,并对BALF中炎症细胞进行分类计数.结果:与NC组比较.OA组各时间点W/D值、BALF中的TNF-α、TP及炎症细胞计数显著升高(P<0.01),PaO2降低(P<0.01),肺组织病理见充血、水肿、出血、炎性细胞浸润等急性肺损伤表现;AZI组与OA组相比,病理学观察肺组织病变减轻.PaO2升高(P<0.05),W/D、TNF-α、PMN均降低(P<0.05).结论:阿奇霉素可以减轻肺微血管渗漏,改善大鼠肺换气功能,降低BALF中TNF-α、PMN水平,调节肺部炎症介质及炎症细胞,对ALI有一定的治疗作用.     

左旋精氨酸抑制人血管平滑肌细胞合成胶原的作用

目的:探讨内皮素(ET-1)对人血管平滑肌细胞(HVSMC)合成胶原的影响并观察左旋精氨酸(L-arginine)对HVSMC合成胶原的影响。方法:将ET-110-8mol/L和不同浓度L-arginine加入体外培养HVSMC。培养24h之后测培养液中NO含量,测细胞内cGMP含量及3H-脯氨酸掺入量即总胶原含量。结果:加入梯度浓度L-arginine,NO水平呈剂量依赖性增加(P均<0.01);ET-1使胶原合成量增加80%(P<0.001),加入梯度浓度L-arginine较ET-1组胶原合成量分别减少了37%、41%、56%(P均<0.01),呈剂量依赖性;ET-1+L-arginine低、中、高浓度组较ET-1组细胞内cGMP含量明显增加(P均<0.01),且cGMP含量随L-arginine增加而增加;细胞内cGMP含量与胶原合成量呈良好负相关关系(r=-0.93)。结论:ET-1可引起HVSMC合成胶原增多;L-arginine可剂量依赖地抑制HVSMC合成胶原;L-arginine对胶原合成的抑制作用可能是通过cGMP途径起作用。     

多聚左旋赖氨酸促进大鼠肢芽细胞软骨分化的研究

目的:探讨多聚左旋赖氨酸(PL)对大鼠肢芽细胞向软骨细胞分化的促进作用及其可能机制。方法:取大鼠肢芽细胞在含不同剂量PL的培养液中培养4 d,根据培养细胞所形成的软骨集落形成情况、与阿尔新蓝结合量和Ⅱ型胶原的表达情况,判断PL促进肢芽细胞向软骨细胞分化现象;根据不同时间添加PL来推断其发挥最大作用的时间;用免疫组化检测神经钙粘附蛋白的表达。结果:PL促进培养中大鼠肢芽细胞软骨集落的形成的最佳剂量可能为10μg/mL;PL发挥最大作用的时间为培养的第24 h内;免疫组化显示:5μg/mL组中Ⅱ型胶原和神经钙粘附蛋白的表达增强。结论:PL在一定浓度范围内以剂量依赖性方式促进大鼠肢芽细胞向软骨细胞分化且可能是通过增强神经钙粘附蛋白的表达来完成的。     

左旋精氨酸对糖尿病大鼠的肾脏保护作用

目的：探讨左旋精氨酸（L—arginine,L—Arg）对链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的糖尿病大鼠肾脏保护作用及机制。方法：建立STZ诱导的糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病模型组（DM组）和DM4周后L—Arg治疗组（L—Arg组）,并以正常组作对照。观察8周后,测定各组大鼠尿白蛋白排泄率（UAER）、血肌酐（SCr）和血尿素氮（BUN）,光镜观察肾组织形态。检测血清和肾皮质中氧化亚氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）含量,测定肾脏线粒体膜电位及肿胀度。结果：与DM组相比,L—Arg组大鼠UAER,SCr,BUN显著降低（P〈0．05）,肾脏病理形态得到一定改善;血清和肾皮质中NO及SOD含量显著升高（P〈0．01,P〈0．05）,MDA显著降低（P〈0．05）;肾脏线粒体膜电位显著升高（P〈0．05）,肿胀度趋势增强。结论：左旋精氨酸对糖尿病大鼠。肾脏的保护作用可能与增加NO合成,同时保护肾脏线粒体的功能有关。     

左旋-精氨酸对糖尿病肾病鼠的影响

目的 :了解左旋 精氨酸 (L arginine)对糖尿病 (DM )鼠肾脏的影响并初步探讨其机制。方法 :将实验大鼠分 3组 ,正常对照组 (A组 ) 8只 ;DM组 (B组 ) 8只 ;DM 4周后 +0 .5 %L arginine组 (C组 ) 8只。观察 8周。结果 :第 1周末开始 ,B、C组Ccr和UAE较A组明显升高 ,B、C组之间无显著差异 ;尿NO-2 /NO-3 第 1,2周B、C较A组明显升高 ,B、C组之间无显著差异 ,第 8周B、C组较A组降低 ,但C组较B组升高。第 8周末肾脏病理变化为 ,B组肾小球系膜区增宽 ,肾小球毛细血管基底膜弥漫性增厚 ,系膜及基质PAS阳性物增多 ,但C组上述变化明显较B组轻。ABC染色Laminin阳性物可见B组肾小球系膜区弥漫性增宽 ,肾小管基底膜阳性物呈宽带状沉积 ,而C组肾小球系膜区稍宽 ,肾小管基底膜阳性物呈线状沉积 ,χ2 检验P <0 .0 5。B、C组肾皮质NO-2 /NO-3 与PAS阳性物灰度值呈直线正相关。结论 :糖尿病肾病进程中内源性NO表现为初期的升高到发展中的下降趋势。内源性NO生成增多是导致糖尿病肾病早期肾小球高灌注、高滤过的重要原因之一 ,在糖尿病肾病发展中补充小剂量L arginine能减轻肾小球基底膜的增厚和基质的增生 ,延缓肾小球硬化 ,对肾脏起保护作用。     

左旋精氨酸对静脉移植保护作用的综合研究

目的:观察左旋精氨酸(L-Arg)对自体移植静脉内膜增生的影响,探讨其作用机制.方法:(1)动物实验:60只新西兰兔,随机分为左旋精氨酸实验组、生理盐水对照组.所有动物术日建立自体静脉旁路移植模型:于术后1、2、4、6周及8周取材,统计学分析各组间差异.(2)临床试验部分:将33例欲行非体外循环冠脉搭桥手术的患者随机分成两组,对照组给予常规血管保存液处理血管桥,观察组给予含L-Arg的血管保存液处理血管桥.结果:(1)移植4周后,各组静脉均有内膜及中膜较正常颈静脉明显增厚表现,左旋精氨酸组内膜及中膜增厚较对照组轻.两组静脉桥的管腔狭窄程度进行比较存在明显差异.(2)两组手术成功率无显著性差异(P＞0.05).观察组术后细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)、内皮素-1(ET-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平均较术前有明显降低(P＜0.05),且与对照组比较有统计学意义(P＜0.05).结论:(1)兔静泳移植至股动脉后内膜及中膜增厚.(2)左旋精氨酸联合降脂药物能抑制移植静脉内膜及中膜增生,减少静泳桥狭窄.(3)含有左旋精氨酸的血管保护液可一定程度上改善血管内皮细胞的功能,从而延缓血管硬化,并有效控制病情进展.     

左旋精氨酸对大鼠心脏移植物血管病变的抑制作用

目的　研究左旋精氨酸对大鼠心脏移植物血管病变的抑制作用及其机理。方法　采用大鼠异位心脏移植模型。对照组 :移植后 2不用左旋精氨酸 ;实验组 :移植后按 80 0mg·kg- 1 ·d- 1 将左旋精氨酸加入饮水中。于移植后 2个月和 3个月检测各组的心脏移植物 ,血管病变评分和血浆一氧化氮含量。结果　移植后 2个月 ,实验组的移植物存活率为 90 5 % ,显著高于对照组的6 1 5 % (P <0 .0 5 )。移植后 2个月和 3个月 ,实验组血浆一氧化氮含量均显著高于对照组 ,分别为 (10 5 .37± 10 .6 6 ) μmol Lvs(6 8.5 4± 6 .83) μmol L(P <0 .0 5 ) ,和 …     

左旋精氨酸对急性心肌梗塞大鼠选择素表达的影响

为探讨一氧化氮（ＮＯ）的前体左旋精氨酸（Ｌ－ａｒｇ）对急性心肌梗塞（ＡＭＩ）大鼠心肌有无保护作用及其作用机制。采用垂体后叶素（Ｐｉｔ）ＡＭＩ模型。设立正常对照组、阳性对照组、及Ｌ－ａｒｇ治疗组，观察中性粒细胞（ＰＭＮ）Ｌ－选择素及心肌微血管内皮细胞Ｐ－选择素的表达，并测定心肌梗塞范围、ＰＭＮ浸润数及血浆ＮＯ、丙二醛（ＭＤＡ）的浓度。结果表明：阳性对照组Ｌ－选择素及Ｐ－选择素表达上调，梗塞心肌ＰＭＮＩ巡润数、血浆ＭＤＡ的浓度明显升高，血浆ＮＯ的浓度降低。Ｌ－ａｒｇ治疗组上述指标改变的程度明显减轻（Ｐ〈０．０１）。心肌梗塞范围缩小，提示外源性Ｌ－ａｒｇ对ＡＭＩ有防治意义。其作用机制与ＮＯ抑制选择素的表达有关。     

EGCG对人肺癌细胞NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系增殖凋亡、周期的作用机制.方法 对数生长期NSCLC细胞系NCI-H1975和NCI-H520,分为空白对照组(0 mol/LEGCG)和不同剂量(20、40、80、160、320 mol/L) EGCG组,分别处理作用24、48、72 h,CCK-8法检测细胞凋亡率;细胞流式细胞术检测细胞凋亡和周期;Western blot检测细胞周期、凋亡相关蛋白表达及NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路变化;细胞分为:Control siRNA组、EGFR siRNA组和EGFRsiRNA+EGCG组,采用siRNA转染技术,分析下调EGFR对NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路的影响.结果 分组的相应浓度EGCG组NCI-H1975和NCI-H520细胞的增殖显著降低(P＜0.05),同时G1/G0细胞比例增高,G1/S期细胞比例下降(P＜0.05),CyclinD1、CyclinE、CDK6蛋白表达降低(P＜0.05),但对CDK4无明显影响(P＞0.05),同时细胞凋亡增多,Cleaved caspase 3和Cleaved caspase 9蛋白表达上调(P＜0.05).P-P65、Bcl2、P-EGFR、P-AKT蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,但对P-ERK没有明显的影响.而EGCG+EGFR siRNA组,相比于EGFR siRNA组,明显降低各蛋白的表达,升高Bax蛋白(P＜0.05).结论 EGCG下调NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路抑制NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖、促进凋亡,并阻断细胞周期.     

叶酸对低氧诱导THP-1细胞产生炎症介质的影响

目的 探讨叶酸对低氧诱导人单核细胞系THP-1细胞产生炎症介质的影响及对核因子-κB的效应.方法 采用不同叶酸浓度(0.4 μg/mL,4μg/mL和40 μg/mL)预处理细胞30min,再在1％O2条件下培养细胞24h诱导低氧损伤,收集细胞以及培养上清.通过MTT法检测不同浓度叶酸对细胞活性的影响;ELISA法和实时荧光定量PCR分别检测细胞炎性介质(IL-1β和IL-8)的蛋白和mRNA表达水平;Western blot测定细胞NF-κB p65的蛋白表达.结果 0.4～40μg/mL浓度叶酸对THP-1细胞的活性没有影响(P＞0.05);叶酸能降低低氧所致THP-1细胞产生炎症介质IL-1β和IL-8蛋白以及mRNA的高表达(P＜0.05),同时下调NF-κB p65蛋白表达(P＜0.05),并呈现剂量反应关系.结论 叶酸能够缓解低氧所引起的细胞炎症反应,其作用可能与抑制THP-1细胞NF-κB通路的激活及其炎症介质的释放相关.