miR-486调控PTEN影响LPS诱导的肺泡上皮细胞A549凋亡的实验研究

目的:探讨微小RNA-486(miR-486)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549凋亡的影响和机制。方法:以LPS处理肺泡上皮细胞,RT-qPCR测定miR-486表达变化。在肺泡上皮细胞中转染miR-486模拟物(miR-486 mimics),RT-qPCR检测LPS条件下的转染效果。流式细胞术测定凋亡变化,Western blot检测细胞中cleaved caspase-3(C-caspase-3)和C-caspase-9蛋白表达变化。靶基因预测软件预测第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)可能是miR-486的靶基因,利用萤光素酶报告载体鉴定靶向关系。在肺泡上皮细胞中共转染pcDNA 3.1-PTEN和miR-486 mimics,检测上调PTEN对miR-486 mimics调控LPS诱导的A549细胞凋亡的作用。结果:LPS处理后的肺泡上皮细胞中miR-486的表达水平显著下降(P0.05)。miR-486 mimics可以显著上调LPS条件下肺泡上皮细胞中miR-486的表达水平(P0.05)。LPS处理后的肺泡上皮细胞凋亡率及C-caspase-3和C-caspase-9蛋白表达水平显著升高(P0.05);上调miR-486可以显著下调LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡(P0.05)。miR-486靶向负调控PTEN的表达。pcDNA 3.1-PTEN可以显著提高miR-486 mimics转染后LPS诱导的肺泡上皮细胞中PTEN的表达,促进细胞凋亡和细胞中C-caspase-3和C-caspase-9蛋白的表达(P0.05)。结论:miR-486靶向抑制PTEN的表达,减少LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡。     

MicroRNA-3666调节白血病细胞PTEN基因的表达*

 目的： 探讨白血病细胞中microRNA-3666（miR-3666）对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因（PTEN)表达的调控作用。方法: qRT-PCR检测miR-3666在正常人外周血单个核细胞、不同类型白血病细胞系以及临床初诊未治的不同类型白血病细胞中的表达差异,利用TargetScan在线分析软件预测miR-3666潜在靶基因PTEN后,构建含有靶基因野生型3’端非翻译区域(3’UTR)及突变型3’UTR（缺失了整段预测的miR-3666结合序列）的双萤光素酶报告基因质粒,采用脂质体Lipofectamine 2000包裹双萤光素酶重组质粒及miR-3666 模拟体或阴性对照,共转染HEK293T 细胞,应用双萤光素酶检测试剂盒测定萤光素酶活性。FAM标记的miR-3666抑制体和阴性对照分别核转染至K562 细胞,FACS检测转染效率,并采用 Western blotting检测PTEN蛋白的表达。结果: miR-3666 在人白血病细胞系及原代白血病细胞中的表达明显高于正常人外周血单个核细胞,尤其高表达于K562细胞系及原代慢性粒细胞白血病细胞中;双萤光素酶报告基因测定系统验证PTEN是miR-3666的潜在靶基因;K562细胞中下调miR-3666后,Western blotting检测结果显示PTEN蛋白显著上调。结论: 白血病细胞中miR-3666 的表达上调,下调miR-3666后可以促进靶基因PTEN 的表达,miR-3666 有可能成为白血病治疗的新靶点。     

miR-15a在脓毒性休克内皮细胞模型中的表达及作用机制

目的探究miR-15a在脓毒性休克内皮细胞模型中表达的意义及作用机制。方法运用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测健康对照者(n=25),脓毒症患者(n=34)和脓毒性休克患者(n=26)血浆样本中miR-15a的表达水平。在人类脐静脉内皮细胞株HUVEC中转染miR-15a模拟物和miR-15a抑制物后,LPS刺激4 h后,TER(transendothelial electrical resistance)法测定各组HUVEC跨内皮电阻,并计算通透性。构建荧光素酶报告载体pMIR-肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MYLK)的3'UTR,利用荧光素酶活性检测鉴定miR-15a的预测靶基因MYLK。qRT-PCR和Western blot法分别检测MYLK的mRNA和蛋白质的表达水平。结果 miR-15a在脓毒性休克患者血浆中的含量较脓毒症患者显著下降(P0.05)。转染miR-15a模拟物能够抑制LPS作用HUVEC后细胞通透性的升高,而转染miR-15a抑制剂则能促进LPS作用HUVEC后细胞通透性的升高。转染miR-15a模拟物显著抑制荧光素酶的活性(P0.05),并显著下调HUVEC细胞中MYLK的mRNA(P0.05)和蛋白质的表达水平;相反地,转染miR-15a抑制物则显著上调了HUVEC细胞中MYLK的mRNA(P0.05)和蛋白质的表达水平。结论miR-15a能够抑制LPS作用HUVEC后细胞通透性的改变,其可能的作用机制是下调了MYLK的表达。     

UC-BSCs来源的外泌体对系统性红斑狼疮患者Th17/Treg平衡的影响北大核心CSCD

目的探究脐带血间充质干细胞(UC-MSC)来源的外泌体对系统性红斑狼疮(SLE)的免疫调节作用及其机制。方法分离SLE患者和健康对照人群外周血中的外周血单个核细胞(PBMC),使用UC-BSCs来源的外泌体处理SLE来源的PBMC,通过qRT-PCR分析不同处理后细胞中相应因子的mRNA水平,通过流式细胞术分析Th17/Treg含量,通过体外实验和生物信息学分析鉴定miR-19b与KLF13的靶向结合。结果相较于对照组人群,SLE患者来源的PBMC细胞中Th17亚群比例升高,同时Treg亚群比例降低,miR-19b水平明显降低且与KLF13水平负相关;体外实验显示,UC-BSC来源的外泌体处理可以调节Th17/Treg平衡,抑制炎症因子的表达。UC-BSC来源的外泌体能提高miR-19b水平进而靶向抑制KLF13表达。结论在SLE患者中,miR-19b与KLF13表达失调,而UC-BSC外泌体可以调节SLE患者Th17/Treg细胞平衡和炎症因子表达,这一过程可能与miR-19b/KLF13的相互作用有关。     

COMMD7基因活化PI3K/AKT信号通路促进HepG2细胞增殖转移的分子机制研究

目的探索肝癌相关基因COMMD7促进HepG2细胞增殖转移的分子机制。方法设计针对COMMD7基因的特异性siR NA(small interference RNA)转染人类肝癌细胞株HepG2,作为干扰组(Si-HepG 2);并设置PTEN抑制剂处理组(Si+BpVHepG2);空白对照组(HepG2);空载体对照组(N-HepG2)。qRT-PCR检测转染后各组COMMD7、PTEN基因mR NA的表达变化;Western blot检测各组COMMD7、PTEN、p-AKT和AKT蛋白的表达变化;MSP法检测PTEN基因甲基化水平;CCK8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞在转染前后转移及侵袭能力的改变。结果 siRNA-COMMD7转染HepG2细胞后,qR T-PCR检测结果显示,与空白对照组及空载体对照组相比较干扰组COMMD7基因的表达量降低89.9%,PTEN基因的表达量升高2.841倍,差异均有统计学意义(P0.05);Western blot检测结果显示,siRNA干扰组COMMD7表达明显降低,PTEN表达升高;下游p-AKT表达受到显著抑制;PTEN抑制剂处理组PTEN表达受到显著抑制,下游p-AKT的表达明显增强;MSP法检测结果显示,干扰组与空白对照组及空载体对照组比较,PTEN发生明显的去甲基化,表明抑制COMMD7表达可诱导PTEN去甲基化。CKK8实验结果显示,干扰组细胞较空白对照组、空载体对照组和PTEN抑制剂处理组增殖速度明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);Transwell实验实验结果显示,干扰组穿膜细胞数(17.4±2.7),较空载体对照组(36.2±3.2)、空白对照组(41.6±4.5)及PTEN抑制剂处理组(47.6±1.8)明显减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 siR NA干扰下调COMMD7基因的表达,可诱导HepG2细胞内抑癌基因PTEN的去甲基化,增加PTEN蛋白的表达而抑制PI3K/AKT信号通路,以降低HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

SLE患者外周血单个核细胞中miR-148b、miR-152和靶基因dnmt1的表达及其临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中miR-148b、miR-152和其靶基因dnmt1的表达水平在发病机制中的作用以及与SLE实验室相关指标、临床疾病活动度的之间的关系。方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qPCR)方法检测74例SLE患者和44例健康者的PBMCs中miR-148b、miR-152、dnmt1的表达水平,统计学分析其与SLE疾病活动度及SLE相关检验指标的关系。结果 miR-148b、miR-152在SLE患者PBMCs中的表达水平显著高于健康对照(P0.05),dnmt1在SLE患者PBMCs中的表达水平显著低于健康对照(P0.05)。除miR-148b在低活动组与健康对照组差异无统计学意义(P0.05)外,miR-148b、miR-152和dnmt1在其他各组中的表达差异均有统计学意义。miR-152与ESR正相关(r=0.443,P=0.027);dnmt1与ANA抗体(r=-0.576,P=0.001)及SLEDAI评分均为负相关(r=-0.408,P=0.038)。结论 miR-148b、miR-152和dnmt1在SLE的发病机制中扮演着重要角色,可能作为疾病活动的参考指标,有助于指导疾病治疗和预后评估,并为SLE的治疗带来更多靶点。     

miR-221通过下调PTEN促进肺癌A549细胞增殖

目的:探讨微小RNA-221(miR-221)对肺癌A549细胞增殖的影响及其相关作用机制。方法:通过脂质体转染试剂Lipofectamine 2000把miR-221 mimics转染入肺癌细胞A549内,RT-q PCR检测miR-221和PTEN mRNA的表达;Western blot检测PTEN蛋白表达;CCK-8及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力。构建含PTEN 3'-UTR的萤光素酶报告载体,检验miR-221对PTEN的靶向调控作用。结果:转染miR-221后肺癌细胞中miR-221表达水平明显高于对照组及空白组(P0.01),PTEN mRNA及蛋白表达均显著下降(P0.05);细胞增殖及集落形成能力明显增强(P0.05);miR-221能抑制PTEN的萤光素酶活性。结论:miR-221能够抑制肺癌A549细胞中PTEN的表达,并促进细胞增殖。     

miR-499通过靶向调控PTEN基因减轻大鼠心肌损伤

目的:探究微小RNA-499(miR-499)对PTEN基因的靶向作用以及在大鼠心肌损伤中的作用机制。方法:构建大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤模型,RT-qPCR检测miR-499表达水平的变化;分离培养原代心肌细胞,分别转染miR-499模拟物和siR-PTEN,加入过氧化氢刺激后用CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测LDH释放量;分别使用TargetScan和萤光素酶实验预测验证miR-499和PTEN的靶向关系;RT-qPCR和Western blot检测miR-499模拟物和抑制剂对PTEN的mRNA和蛋白表达水平的影响;共转染anti-miR-499和siR-PTEN至细胞内,CCK-8和LDH检测试剂盒检测心肌细胞在过氧化氢刺激下细胞活力和LDH的变化。结果:在大鼠心肌I/R损伤模型中,miR-499表达水平显著迅速提升,之后逐渐呈时间依赖性下降(P0.05);miR-499模拟物和siR-PTEN使过氧化氢刺激下的心肌细胞活力显著提升,LDH释放量显著减少(P0.05);miR-499可靶向调控PTEN,miR-499模拟物促使PTEN表达显著下调,miR-499抑制剂则使PTEN表达显著上调(P0.05);转染siR-PTEN能够回补miR-499抑制剂对细胞的抑制作用(P0.05)。结论:miR-499可通过靶向PTEN减轻大鼠心肌细胞损伤。     

MicroRNA-145通过ADAM28抑制人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化功能

目的:探讨微小RNA(miR-145)对人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化(EMT)功能的影响及其相关机制。方法:将A-498肾癌细胞株分别转染miR-145模拟物(M145)和模拟物阴性对照(MNC),分别作为M145组和MNC组,并设立空白对照(MC)组,采用RT-qPCR法检测各组细胞miR-145水平。Transwell实验检测3组细胞侵袭能力的变化。Western blot法检测3组细胞波型蛋白(vimentin)、E-cadherin和ADAM28表达水平。应用生物信息学方法预测miR-145的靶基因。采用Western blot法检测ADAM28过表达对miR-145抑制EMT的拮抗作用。双萤光素酶报告基因实验验证miR-145与ADAM28的关系。结果:与MC组相比,M145组miR-145的表达水平显著上调(P0.05)。M145组侵袭细胞数量显著低于MC组(P0.05)。M145组细胞vimentin蛋白表达量显著降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达量显著升高(P0.05),ADAM28蛋白表达量显著降低(P0.05)。ADAM28过表达M145组肾癌细胞中vimentin蛋白表达量显著升高(P0.05),E-cadherin蛋白表达量显著降低(P0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果显示ADAM28为miR-145的下游靶基因。结论:miR-145可能通过降低下游靶基因ADAM28水平影响EMT相关蛋白表达,从而抑制人肾癌细胞A-498的EMT过程。     

MiR-21在大肠癌中的表达及其对SW480细胞增殖侵袭的影响

目的检测microRNA-21(miR-21)在大肠癌患者中的表达情况,并探讨miR-21对大肠癌SW480细胞增殖和侵袭的影响。方法收集大肠癌患者标本32例,同时收取癌组织及相应的癌旁组织。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测各组织中miR-21的表达水平。以脂质体为载体将miR-21抑制剂转染至SW480细胞,分别用MTT方法与Transwell实验检测转染后SW480细胞的增殖侵袭能力变化,利用qRT-PCR和免疫印迹实验检测第10号染色体同源缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)mRNA和蛋白水平的改变。结果 miR-21在32例患者癌组织及正常黏膜组织中的表达量分别为(1.57±0.79)与(0.56±0.32),差异有统计学意义(P0.01)。下调miR-21的表达能够显著抑制SW480细胞的增殖和侵袭能力,PTEN mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P0.01)。结论 microRNA-21在大肠癌中高表达,下调microRNA-21表达抑制大肠癌SW480细胞增殖和侵袭可能与上调PTEN表达相关。     

miR-211通过靶向调控TFAM抑制人乳腺癌细胞系增殖

目的探讨miR-211靶向线粒体转录因子A(TFAM)对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法用miR-211及TFAM作为研究对象。首先,在乳腺癌细胞中转染miR-211 mimics或miR-211抑制剂以实现miR-211过表达或miR-211沉默,并检测miR-211过表达或沉默时TFAM蛋白质的表达水平;其次,构建了在TFAM的5'端有或无6对碱基突变的荧光酶报告基因质粒(mut-TFAM/wt-TFAM),与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测荧光酶活性变化;然后,构建pc DNA3.1/TFAM质粒,与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测TFAM蛋白质表达水平变化;最后,检测pc DNA3.1/TFAM和mimics NC/miR-211 mimics共转染后乳腺癌细胞增殖的增殖。结果miR-211过表达抑制TFAM蛋白质表达(P0.01),miR-211沉默促进TFAM蛋白质表达(P0.01);miR-211可靶向结合TFAM调控其表达;pc DNA3.1/TFAM可实现TFAM过表达(mRNA P0.01,蛋白质P0.01),并可恢复miR-211对TFAM的抑制作用;miR-211可抑制乳腺癌细胞的增殖和增殖(P0.05),TFAM可促进乳腺癌细胞增殖增殖(P0.01),TFAM可回复miR-211对乳腺癌细胞增殖增殖的抑制作用(P0.05)。结论 miR-211靶向TFAM基因抑制人乳腺癌细胞的增殖。     

巨噬细胞过表达miR-125b促进其凋亡

目的探讨肺结核患儿外周血单个核细胞(PBMC)中miR-125b和靶基因Raf1原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RAF1)表达;观察miR-125b对巨噬细胞凋亡和细胞活力的调节。方法收集和分离肺结核患儿和健康儿童的PBMC,采用荧光定量PCR检测miR-125b和RAF1的mRNA表达水平,Western blot法检测RAF1的蛋白水平。THP-1巨噬细胞分别转染miR-125b模拟物(miR-125b mimic)、阴性对照模拟物(NC-mimic)、miR-125b抑制物(miR-125b inhibitor)以及阴性对照抑制物(NC-inhibitor),共培养48 h;利用Western blot法检测THP-1巨噬细胞中RAF1表达,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞活力。结果在结核患儿PBMC的miR-125b表达下调,RAF1的mRNA和蛋白水平都升高。在THP-1巨噬细胞中过表达miR-125b时,RAF1表达下调,促进巨噬细胞凋亡,降低细胞活力;在THP-1巨噬细胞中miR-125b表达被抑制时,RAF1表达升高,抑制巨噬细胞凋亡,提高细胞活力。结论结核患儿PBMC中miR-125b水平降低,上调THP-1巨噬细胞miR-125b水平促进巨噬细胞凋亡并抑制细胞活力。     

MicroRNA-9通过NRP1抑制胃癌SGC-7901细胞上皮-间充质转化功能

目的:研究微小RNA-9(microRNA-9,miR-9)对胃癌SGC-7901细胞上皮-间充质转化(EMT)功能的影响及其相关机制。方法:SGC-7901胃癌细胞株分别转染miR-9 mimics和阴性对照序列(negative control mimic,NCM),作为miR-9组和NCM组,并设立未转染对照(control)组,采用RT-qPCR法检测各组细胞miR-9的含量,Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力,Western blot法检测3组细胞的N-cadherin、E-cadherin、α-catenin和神经纤毛蛋白1(NRP1)表达水平。采用Western blot法检测NRP1过表达对miR-9抑制EMT的拮抗作用。双萤光素酶实验检测miR-9与NRP1的关系。结果:miR-9组的miR-9表达水平明显上调,为control组的538倍(P0.05)。miR-9组的迁移细胞数量明显低于control组(P0.05)。miR-9组的侵袭细胞数量明显低于control组(P0.05)。miR-9组细胞的N-cadherin和NRP1蛋白表达量明显降低,E-cadherin及α-catenin蛋白表达量明显升高。而NRP1及miR-9均过表达组胃癌细胞中N-cadherin蛋白表达量明显升高,E-cadherin及α-catenin蛋白表达量明显降低。双萤光素酶检验结果显示NRP1为miR-9的下游靶基因(P0.05)。结论:miR-9可能通过降低下游靶基因NRP1水平影响EMT相关蛋白表达,抑制胃癌SGC-7901细胞的EMT功能。     

MicroRNA-1284在胃癌中的表达及其作用机制研究

目的:探讨microRNA-1284(miR-1284)与胃癌的相关性及分子机制。方法:Real-time PCR检测63例胃癌患者的胃癌组织和匹配周围正常胃组织中miR-1284的表达水平及分析其与临床病理特征之间的关系。通过慢病毒载体的构建及包装生成上调miR-1284慢病毒载体并转染胃癌SGC-7901细胞,上调miR-1284后采用realtime PCR验证细胞miR-1284表达水平,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,生物信息学软件预测miR-1284潜在的靶基因,real-time PCR测定靶基因JAG1表达水平,Western blotting检测JAG1、Notch1和NF-κB的表达水平。结果:66.67%胃癌患者胃癌组织miR-1284表达明显低于正常胃组织(P0.05),miR-1284的表达在不同年龄、性别、TNM分期和淋巴结转移情况患者间的差异无统计学意义(P0.05),但在不同组织学分级患者间的差异有统计学意义(P0.05)。与LV-NC-GFP组和control组比较,LV-miR-1284组的miR-1284表达水平和细胞凋亡显著升高,细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞活性和细胞迁移能力减弱,JAG1、Notch1和NF-κB的表达水平降低,均有显著差异(P0.05)。结论:miR-1284可能通过调控其靶基因JAG1而发挥抑制胃癌发生发展的作用。     

miR-221通过调节PTEN影响肺癌细胞对吉非替尼的耐药性

目的:探讨微小RNA-221(miR-221)在人肺癌细胞对吉非替尼耐药中的作用及其相关机制。方法:RT-qPCR检测人肺腺癌吉非替尼敏感细胞PC9和吉非替尼耐药细胞PC9/GR中miR-221的表达;通过脂质体试剂Lipofectamine 2000把miR-221 inhibitor转染入肺癌PC9/GR细胞内,CCK-8法检测细胞对吉非替尼敏感度的变化,Western blot检测第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)的蛋白表达。构建含PTEN 3’-UTR的萤光素酶报告载体,验证miR-221对PTEN的靶向调控作用。结果:PC9/GR细胞的miR-221表达水平明显高于PC9细胞(P0.05)。PC9/GR细胞中PTEN表达水平低于PC9细胞(P0.05)。转染miR-221 inhibitor后,吉非替尼对PC9/GR细胞的IC_(50)明显降低,PTEN的蛋白表达增加(P0.05)。萤光素酶活性检测实验显示抑制miR-221表达能增强PTEN的萤光素酶活性(P0.05)。结论:miR-221可能通过抑制PTEN的表达,增强肺癌细胞对吉非替尼的耐药性。     

miR-429在食管鳞癌中的表达及对细胞增殖迁移的影响

目的探讨微小RNA-429(miR-429)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其对细胞增殖及迁移的影响。方法选取本院45例ESCC患者手术切除的癌组织(ESCC组)及癌旁组织(正常组)标本为研究对象,并采用实时荧光定量(q RT-PCR)检测两组miR-429表达水平。体外培养ESCC癌细胞株系ECa109及人正常食管上皮细胞株Het-1A,将转染试剂、miR-429阴性对照质粒、miR-429mimic质粒分别转染ECa109细胞,命名为空白组、阴性转染组、miR-429过表达组,同时应用生物信息学工具预测miR-429的靶基因为CTl0激酶调节子样蛋白(CRKL),荧光素酶活性检测miR-429与CRKL的靶向调控关系。采用qRT-PCR法检测细胞中miR-429与CRKLmRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测细胞中CRKL蛋白表达。MTT法检测细胞增殖情况,Transwell检测细胞迁移能力。结果与正常组相比,ESCC组miR-429表达水平显著降低(P0.05);荧光素酶活性测定显示3'UTR-Wt细胞中miR-429过表达组荧光素酶活性显著低于阴性对照组(P 0.05),3'UTR-Mut细胞中miR-429阴性转染组与过表达组比较差异无统计学意义(P 0.05);与Het-1A细胞相比,ECa109细胞中miR-429表达水平显著降低(P0.05),而CRKL mRNA及蛋白表达水平显著升高(P 0.05);与空白组、阴性转染组相比,miR-429过表达组miR-429表达水平显著升高(P 0.05),而CRKL mRNA及蛋白表达水平显著降低(P 0.05);与空白组、阴性转染组相比,miR-429过表达组细胞增殖率及迁移数量均显著降低(P 0.05)。结论 ESCC中miR-429呈低表达,其可通过下调CRKL表达进而抑制ESCC细胞增殖及迁移。     

miR-124a通过抑制TGF-β通路促进人胎盘间充质干细胞向胰腺祖细胞分化

目的 研究miR-124a参与抑制TGFBR1和BMPR1B的转录后调控,及其对人胎盘间充质干细胞(PMSCs)向胰腺祖细胞分化的影响.方法 用慢病毒过表达miR-124a前体,建立PMSCs中过表达miR-124a细胞模型;转染miR-124a反义寡核苷酸,抑制miR-124a表达;real-time PCR分析miR-124a与其调控的靶基因TGFBR1和BMPR1B的表达调控关系;real-time PCR、Western blot和免疫荧光化学染色检测miR-124a过表达后,胰腺祖细胞特征基因和蛋白表达变化.结果 PMSCs中过表达和抑制表达miR-124a,能反向调控其靶基因TGFBR1和BMPR1B的表达;miR-124a过表达后,胰腺祖细胞特异性基因PDX-1、Nkx6.1、NGN3和β细胞特征基因Insulin的表达量显著上升(P＜0.05),PDX-1和Insulin的蛋白表达水平也同样升高.结论 miR-124a可能通过抑制TGFBR1的表达,阻断TGF-β/TGF-β R信号,使细胞发生间质上皮转化,并可能通过抑制BMPR1B的表达阻碍细胞向成骨方向分化,从而 指导胎盘间充质干细胞向胰腺祖细胞分化.     

miR-21通过PDCD4调控肝癌细胞的生长和侵袭

目的探讨miR-21在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织和细胞中的表达及其可能调控的靶基因。方法检测miR-21在HCC组织和细胞系中的表达,使用miR-21抑制剂后,观察HCC细胞活力和侵袭能力的变化;运用生物信息学分析预测miR-21可能的靶基因。应用miR-21抑制剂后,双荧光素酶报告基因系统检测其对靶基因活性的影响。结果HCC组织中miR-21表达水平显著高于癌旁组织(P0.05);HCC细胞中miR-21的表达水平显著高于肝细胞(P0.01)。抑制miR-21后,HCC细胞的活力和侵袭能力降低(P0.01)。抑癌基因程序性死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织(P0.01),在肝癌细胞中的表达水平显著低于肝细胞(P0.01)。干扰PDCD4后,肝癌细胞的活力和侵袭能力提高(P0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,使用miR-21抑制剂后,PDCD4表达上调(P0.01),肝癌细胞的侵袭和增殖能力降低(P0.01)。干扰PDCD4后,肝癌细胞的侵袭和增殖能力升高(P0.001)。结论miR-21可通过PDCD4调控肝癌细胞的生长和侵袭。     

miR-137通过TWIST1调控乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移及凋亡

目的:探讨微小RNA-137(miR-137)对乳腺癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响和分子机制。方法:在乳腺癌MDA-MB-231细胞中转染miR-137模拟物(miR-137 mimics),RT-qPCR检测miR-137表达量,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测侵袭和迁移,Western blot检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、cleaved caspase-3(C-caspase-3)和Bax的蛋白水平。生物信息学软件预测TWIST1可能是miR-137的靶基因后用萤光素酶报告基因鉴定。Western blot检测miR-137 mimics对TWIST1蛋白表达影响。在乳腺癌细胞中共转染TWIST1过表达载体和miR-137 mimics,测定细胞凋亡、侵袭、迁移及MMP-9、C-caspase-3、Bax蛋白水平的变化。结果:转染miR-137 mimics后的乳腺癌细胞中miR-137水平升高,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力降低,C-caspase-3和Bax的蛋白水平增高,MMP-9蛋白表达减少(P0.05)。萤光素酶报告载体鉴定显示miR-137靶向调控TWIST1,并且miR-137 mimics能够抑制乳腺癌细胞中TWIST1表达。与共转染阴性对照载体和miR-137 mimics的细胞比较,TWIST1过表达载体和miR-137 mimics共转染后的乳腺癌细胞TWIST1和MMP-9蛋白表达水平升高,C-caspase-3和Bax蛋白水平减少,细胞凋亡率降低,细胞侵袭和迁移能力增强(P0.05)。结论:miR-137靶向TWIST1抑制乳腺癌细胞侵袭迁移并诱导细胞凋亡。     

miR-140在骨肉瘤组织中表达降低及其过表达可促进骨肉瘤U2细胞的凋亡

目的探讨骨肉瘤组织中miR-140的表达,以及过表达miR-140后对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。方法用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测40例骨肉瘤患者肿瘤组织与癌旁组织中miR-140的表达。用脂质体法瞬时将人工合成的成熟miR-140片段(miR-140 mimic)转染至骨肉瘤U2细胞中;用qRT-PCR法检测细胞中miR-140的表达,CCK-8法及流式细胞仪检测细胞的增殖及凋亡,Transwell小室检测细胞的侵袭能力,Western印迹法检测miR-140靶基因组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)的表达。结果 72.5%(29/40)的骨肉瘤组织miR-140表达明显低于瘤旁组织(P0.05)。转染miR-140 mimic后U2细胞miR-140的表达水平明显上调(P0.05),细胞增殖能力明显降低(P0.05),凋亡率明显升高(P0.05),侵袭能力明显下降(P0.05),细胞中HDAC4蛋白的表达水平明显下降(P0.05)。结论 miR-140在骨肉瘤中低表达;过表达miR-140后可抑制骨肉瘤U2细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡。这一作用可能部分依赖于miR-140靶向抑制HDAC4的表达。