Aβ25～35对海马神经元的损伤及双苯氟嗪的保护作用

目的 观察Aβ25～35对原代培养的胎鼠海马神经元的损伤作用以及双苯氟嗪的保护作用.方法 将老化的Aβ25～35加入到培养7 d的海马神经细胞中,采用乳酸脱氢酶试剂盒测定海马神经元乳酸脱氢酶释放度(LDH%),观察神经元的损伤情况.选择1.0 μmol/L Aβ25～35制备海马神经元损伤模型,乳酸脱氢酶试剂盒测定海马神经元LDH%,激光扫描共聚焦显微镜测定钙荧光强度,观察双苯氟嗪对神经元损伤的保护作用.结果 Aβ25～35 0.1、1.0及10.0 μmol/L 均能明显升高海马神经元LDH%,造成神经元损伤.给予1.0和10.0 μmol/L双苯氟嗪均显著降低1.0 μmol/L Aβ25～35升高的LDH%,与空白对照组相比,模型组细胞内钙荧光强度显著升高,而双苯氟嗪(1.0和10.0 μmol/L)处理后明显降低.结论 双苯氟嗪对Aβ25～35造成的海马神经元损伤有保护作用,其机制可能与抑制钙超载有关.     

虾青素对Aβ25～35诱导小鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的 研究虾青素(AST)对Aβ25 ～35诱导小鼠皮层神经元损伤的保护作用.方法原代培养的小鼠皮层神经元用AST预孵育2h,再与老化的10 μmol/L Aβ25-35共孵育24h.采用MTT法测定细胞活力,Hoechst 33342染色观察细胞凋亡,DCFH-DA荧光法检测细胞内ROS水平,Rhodamine 123荧光法检测线粒体膜电位.结果 500～4 000 nmol/L的AST预处理能有效抑制10 μmol/L Aβ25～35诱导的神经元活力下降,降低细胞内ROS的水平.2 000 nmol/L AST对神经元线粒体膜电位的保护作用最明显,能显著抑制神经元凋亡.结论AST对Aβ25～35诱导小鼠皮层神经元损伤有明显的保护作用,其机制可能和保护线粒体功能有关.     

TO901317对海马神经元β-分泌酶表达及β-淀粉样肽生成的影响

目的研究肝X受体(LXR)配体TO901317对海马神经元淀粉样前体蛋白(APP)、α-分泌酶(ADAM10)和β-分泌酶(BACE1)mRNA表达的影响及与β-淀粉样肽(Aβ)生成的关系。方法大鼠海马神经元培养至第7天,在饲养液中加入2.0μmol/LTO901317,继续培养48h。应用RT-PCR方法研究海马神经元APP、ADAM10和BACE1等基因的mRNA的表达,放免法检测培养液Aβ含量的变化。结果TO901317降低海马神经元APP和BACE1 mRNA表达(P<0.01),减少培养液Aβ含量(P<0.01),但不影响ADAM10 mRNA表达(P>0.05)。结论TO901317激活LXR,能通过降低APP和BACE1的表达来减少海马神经元Aβ分泌。     

姜黄素及其衍生物对Aβ42引起神经元损伤的保护作用

目的 探讨姜黄素及其衍生物对Aβ42引起神经元损伤的保护作用及对阿尔茨海默病(AD)的治疗机制.方法 采用无血清体外培养胎鼠原代海马神经元,用神经元特异性标记物--微管相关蛋白免疫荧光染色鉴定.用化学法合成姜黄素及其衍生物,以质谱和核磁共振谱表征结构.体外培养的大鼠原代海马神经元用5 μmol/L Aβ42,同时分别加入1 μg/ml姜黄素以及衍生物作用24 h后,MTT法分析Aβ42对海马神经元的毒性作用和姜黄素以及衍生物对Aβ42引起神经元损伤的保护作用.结果 经质谱和核磁共振谱分析证实成功合成了母体姜黄素(P2)及3种姜黄素衍生物(P1、P3、P4).用10、5、2.5、1.25和0.625 μmol/L Aβ42处理后神经元的存活率分别为38%、63%、72%、79%和82%,而姜黄素(P1)及其衍生物(P3)能对抗Aβ42(5 μmol/L)对神经元的毒性作用,分别使神经元的存活率上升22%,26%.结论 Aβ42对海马神经元具有毒性作用,姜黄素及其衍生物对Aβ42引起的海马神经元损伤有明显的保护作用.     

双苯氟嗪对拟痴呆大鼠和老龄大鼠的脑保护作用研究

目的观察双苯氟嗪对拟痴呆大鼠和老龄大鼠的脑保护作用。方法选用雄性SD大鼠，按体煎随机分为正常对照组、模型对照组、尼莫地平5．0mg／kg刚性对照药组、双苯氟嗪3．0mg／kg组和双举氟嗪10．0mg／kg组。除对照组大鼠腹腔内注射生理盐水外，其他各组均腹腔注射氯化铝致痴呆模型，并分别给予生理盐水、双萃氟嗪或尼莫地平。测定血清中超氧化歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）的含量，并观测脑细胞胆碱乙酰转移酶（ChAT）的表达量；另选用21月龄的老龄大鼠，随机分为模型对照组、尼莫地平5．0mg／kg组和双苯氟嗪5．0mg／kg组，同时选用3月龄成年雄性大鼠作为正常对照组。观察灌胃给予双苯氟嗪对神经细胞内游离钙离子浓度（Ca^2＋）及细胞凋亡百分率的影响。结果双苯氟嗪可以显著升高拟痴呆大鼠血清中SOD、降低血清中MDA及增加海马和皮层两脑区ChAT的表达量，并且降低老龄大鼠海马和皮层两脑区细胞（Ca^2＋）。及细胞凋亡百分率。结论双苯氟嗪对痴呆大鼠具有脑保护作用，其作用机制可能与提高机体抗氧化能力、增强胆碱能神经功能、抑制细胞钙担载及细胞凋亡有关。     

Aβ25-35对海马和隔区胆碱能神经元毒性作用的形态学研究

目的　探讨不同浓度的Aβ2 5 35对原代培养的海马神经元和隔区胆碱能神经元存活的影响及其形态学观察。方法　应用SD大鼠海马神经元和隔区胆碱能神经元原代培养 ,比较在终浓度为 5μmol/L的Aβ2 5 35作用 48h和 1 0 μmol/L作用 2 4h两种情况下 ,神经元的存活情况 ,并用免疫组化及电镜观察神经元形态的变化。结果　终浓度为 5μmol/L的Aβ2 5 35作用 48h、和 1 0 μmol/L作用 2 4h后 ,可使海马和隔区胆碱能神经元存活率下降 ,MTT测定其存活率分别为正常对照的 78.91 %及 80 .57%、58.45 %及 61 .45 % ,免疫组化可见海马和隔区胆碱能神经元突起明显损伤 ,电镜可见核浓缩等凋亡的形态学改变。结论　Aβ2 5 35对体外培养的海马神经元和隔区胆碱能神经元有明显毒性作用 ,不同的浓度和作用时间毒性作用有差异 ,但对海马和隔区胆碱能神经元的毒性无差异性 ,并可引起神经突起损伤 ,神经元凋亡的形态学变化。     

金匮肾气丸对阿尔茨海默病大鼠模型海马神经元β-淀粉样蛋白和神经元核抗原表达的作用

目的探讨金匮肾气丸对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元β-淀粉样蛋白(Beta-amyloid)和神经元核抗原(Neu N)表达的影响。方法清洁级健康SD大鼠24只,分成三组:对照组,AD模型组,中药组。采用在单侧海马注射Aβ25-35建立AD大鼠模型,SABC免疫组化方法检测各组大鼠海马神经元中Beta-amyloid和Neu N的表达。结果 1AD模型组与对照组比较,大鼠海马Beta-amyloid阳性细胞数增多(P0.01),Neu N阳性细胞数减少(P0.01);2中药组与AD模型组比较,大鼠海马Beta-amyloid阳性细胞减少(P0.01),Neu N阳性细胞数增加(P0.01)。结论金匮肾气丸能抑制Beta-amyloid阳性细胞表达,促进Neu N阳性细胞的表达,从而起到防治AD的作用。     

双苯氟嗪对老龄大鼠学习记忆的改善作用及其机制

目的 观察双苯氟嗪对老龄大鼠学习记忆能力的影响并分析其机制。方法 选用雄性21月龄大鼠，灌胃给予双苯氟嗪5．0mg／kg90d后，跳台仪测定大鼠学习记忆能力，HE染色观察脑组织形态学变化，免疫组化法测定脑组织胆碱乙酰转移酶（choline acetyltransferase，ChAT）表达，生化分析法测定大鼠血清中SOD和MDA。结果 双苯氟嗪可缩短老龄大鼠的反应时间及受电击时间，减少错误次数，延长潜伏期，可显著增强老龄大鼠血清中SOD活力，降低MDA的含量，可以保护老龄大鼠脑损伤性改变，维持海马锥体细胞完整，并可提高老龄大鼠脑组织中ChAT表达。结论 双苯氟嗪可改善老龄大鼠的学习记忆能力，这种作用可能与其提高机体抗氧化能力及脑内胆碱能神经功能有关。     

β-淀粉样蛋白31～35对体外培养的胚胎大鼠海马神经元的影响

对SD大鼠海马神经元行原代培养，运用MTT比色法和细胞形态学分析法，比较不同浓度的β-淀粉样蛋白（βA）31～35对神经元存活及形态的影响。结果浓度≥10μmol／L的“老化”βA31～35对体外培养的海马神经元有毒性作用，可降低细胞存活，抑制神经元胞体和突起的发育，且呈剂量依赖关系。比βA25-35序列更小的βA31-35片段对体外培养的海马神经元有神经毒性作用，可引起神经突起损伤和神经元胞体的形态学变化，这种作用与βA的浓度和聚集状态有密切关系。     

雷公藤氯内酯醇对拟阿尔茨海默病样大鼠海马神经元的保护作用

目的 研究雷公藤氯内酯醇(T4)对拟阿尔茨海默病(AD)样大鼠海马神经元的保护作用及可能机制.方法 应用脑立体定向技术向SD大鼠海马背侧注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)25-35建立具有拟AD样AB沉积病理变化的大鼠模型.35只大鼠随机分为正常对照组、假注射组、模型组、T4低剂量(5μg/kg)组、T4高剂量(20μg/kg)组,每组7只.于模型制作后7 d收集脑组织标本,采用Western blot方法观察海马组织核因子(NF-κB)激活情况;酶联免疫吸附法检测海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)水平;TUNEL染色观察海马神经元凋亡情况.结果 与模型组相比,T4高、低剂量组海马组织NF-κB表达减少,TNF-α、IL-1β水平降低,凋亡神经元减少,高剂量组作用更明显(P＜0.01).结论 T4可能通过阻断NF-κB信号通路,发挥对拟AD样大鼠海马神经元的保护作用.     

硫化氢对Aβ25-35致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨H2S对Aβ25-35致PC12细胞损伤的保护作用.方法 应用NaHS作为H2S的供体,甲氮甲唑蓝法检测细胞成活率,Hoechst染色检测细胞凋亡,碘化丙啶染色流式细胞技术检测细胞凋亡率.结果 5～80 μmol/L的Aβ25-35呈浓度依赖性地引起PC12细胞的存活率显著降低(P＜0.01)、凋亡率明显升高(P＜0.01);100 μmol/L NaHS与20 μmol/L Aβ25-35共同作用于PC12细胞24 h后,NaHS浓度依赖性地阻断Aβ25-35引起的PC12细胞存活率降低,升高了的细胞凋亡率(P＜0.01).结论 H2S对Aβ25-35致PC12细胞损伤具有保护作用.     

人参总皂苷对β-淀粉样蛋白_(25～35)诱导的海马神经细胞毒性的保护作用

目的探讨人参总皂苷对β-淀粉样蛋白(Aβ_(25~35))诱导的海马神经细胞毒性的保护作用。方法建立大鼠海马神经细胞Aβ_(25~35)损伤模型。通过Neurofilament染色,测定细胞毒性以及乳酸脱氢酶(LDH)活性考察人参总皂苷对Aβ_(25~35)诱导的海马神经细胞毒性的保护作用;利用Hoechst33258进行免疫荧光染色实验,观察细胞形态,检测细胞凋亡情况;通过Fluo-3AM荧光探针技术在共聚焦显微镜下测定细胞内钙离子浓度(〔Ca~(2+)〕i)的变化情况。结果 1.5μmol/L Aβ_(25~35)为造成神经细胞毒性的最佳浓度。人参总皂苷50 mg/L,100 mg/L以及200 mg/L对Aβ_(25~35)诱导的海马神经细胞具有良好保护作用,呈现出一定的剂量依赖性。人参总皂苷100 mg/L可显著降低Aβ_(25~35)诱导的神经细胞凋亡,可明显抑制Aβ_(25~35)诱导的海马神经细胞〔Ca~(2+)〕i的升高。结论人参总皂苷可有效保护海马神经细胞免受Aβ_(25~35)毒性损伤,其作用机制与降低〔Ca~(2+)〕i有关。     

β淀粉样肽和谷氨酸能神经元的相互影响在阿尔茨海默病中的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer,s disease,AD,老年痴呆),是世界范围内最常见的痴呆类型.据《2018年全球阿尔茨海默报告》显示,2018年全球每3秒就会新发一例痴呆病例,全世界有5000万人患有痴呆,预计到2030年发病人数将达到8200万,治疗和护理费用达2万亿美元.我国作为一个人口大国,形势同样十分严...     

米诺环素对慢性脑低灌注大鼠海马神经元β位点剪切酶1和β淀粉样蛋白表达的影响

目的观察不同剂量米诺环素对慢性脑低灌注大鼠海马神经元β位点剪切酶1(BACE1)和β淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响。方法选择SD大鼠144只,随机分为假手术组、对照组、慢性脑低灌注组(模型组)、米诺环素低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组24只。采用双侧颈总动脉永久结扎建立大鼠慢性脑低灌注模型,低、中、高剂量组在慢性脑低灌注模型的基础上分别给予5mg/(kg·d)、50mg/(kg·d)、500mg/(kg·d)的米诺环素连续灌胃。观察时间点分别为造模后1、2、3个月,采用免疫组织化学法检测海马CA1区神经元BACE1和Aβ表达。结果模型组1、2、3个月BACE1和Aβ表达较假手术组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组明显增加(P<0.05)。高剂量组2、3个月BACE1表达较低剂量组明显降低[(1.40±1.77)个/视野vs(10.50±4.83)个/视野,(1.25±1.24)个/视野vs(12.35±2.57)个/视野,P<0.05],3个月BACE1表达较中剂量组明显降低[(1.25±1.24)个/视野vs(12.00±1.02)个/视野,P<0.05]。结论米诺环素能抑制慢性脑低灌注大鼠海马神经元BACE-1和Aβ表达,高剂量米诺环素对BACE-1抑制作用明显。     

丁基苯肽抑制糖尿病小鼠脑梗死后脑内淀粉样蛋白的表达

目的评估糖尿病脑缺血实验动物的脑损伤及Aβ的表达水平。方法腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导小鼠糖尿病(DM)模型,通过短暂性双侧颈总动脉夹闭(CCAO)手术在糖尿病模型上建立脑缺血模型。通过免疫组织化学方法检测脑内神经元丢失、神经胶质细胞活化及痴呆相关蛋白Aβ的表达水平。结果免疫组织化学检测表明,糖尿病加剧脑梗死导致的神经元丢失、胶质细胞活化及Aβ表达的增高;给予NBP治疗有效抑制糖尿病脑梗死所致的神经元丢失、胶质细胞活化及Aβ表达。结论糖尿病加剧了脑缺血后实验动物的脑损伤及痴呆相关蛋白的表达水平,NBP治疗能成为一种防治脑缺血损伤及脑卒中后痴呆的新途径。     

黄芪对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用

目的观察黄芪对谷氨酸（Glu）损伤海马神经元的保护作用。方法胚鼠原代培养海马神经元,以不同浓度的黄芪（100g/L、200g/L和400g/L）干预24h,加入125μmol/L谷氨酸损伤海马神经元15min。采用MTT法检测细胞活性;生化法测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活力的变化;膜联蛋白-V-FITC（Annexin V-FITC）和碘化吡啶（PI）双标染色以及Hoechst染色观察细胞凋亡情况。结果黄芪可明显改善谷氨酸损伤后细胞的活性,抑制谷氨酸损伤后培养液中LDH的活力,降低谷氨酸引起的细胞凋亡率。结论黄芪具有明显的拮抗谷氨酸损伤海马神经元的作用。     

Aβ25～35诱导阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元HSP70的表达

目的利用β-淀粉样蛋白(Aβ25～35)毒性作用诱导大鼠阿尔茨海默病(AD)模型,研究热休克蛋白70(HSP70)在海马神经元损伤中的表达.方法将大鼠随机分为2组:AD模型组、溶媒体组,在双侧海马分别注射2 μl(10 μg)Aβ25～35 、2 μl生理盐水;于海马注射第1,7,14,21天采用免疫组织化学、积分光密度分析等手段对各组大鼠脑HSP70的表达进行观察.结果 AD模型组手术第7天大鼠记忆明显减退(P<0.05),且HSP70在海马神经元内表达第1天时最高,第1～21天呈递减趋势,其中第14天锐减.结论 Aβ25～35通过氧化应激和损伤海马神经元等过程使HSP70的表达明显降低,HSP70表达是AD大鼠脑内神经元存活的重要标志.     

氟桂利嗪对体外培养海马神经元缺血缺氧损伤的影响及其机制的初步研究

目的　利用氟桂利嗪 (FNZ)研究钙离子拮抗剂对体外培养海马神经元缺血缺氧损伤的作用及其作用机制。方法　利用体外培养的海马神经元 ,通过去除培养液中的糖和氧气来模拟脑缺血缺氧 ,观察不同浓度FNZ对缺血缺氧海马神经元的形态学、乳酸脱氢酶 (LDH)和细胞存活率的影响 ,并观察FNZ对Bcl 2、BDNF蛋白表达的影响。结果　在一定浓度范围之内 ,FNZ可对缺血缺氧神经元起到保护作用 ,过高浓度不但没有保护作用 ,反而加重损伤。缺血缺氧可使Bcl 2蛋白表达明显下降 ,BDNF蛋白表达明显上升 ,FNZ(5 0 μmol/L)可使缺血缺氧神经元Bcl 2表达明显升高 ,BDNF表达下降。结论　在一定浓度范围之内FNZ可保护缺血缺氧神经元 ,可能与诱导Bcl 2蛋白表达和抑制BDNF蛋白表达有关 ;过高浓度FNZ有可能存在某种潜在毒性。     

蒺藜皂苷对β-淀粉样肽(25-35)所致衰老小鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制

目的 研究蒺藜皂苷对凝聚态β-淀粉样肽(25～35)(Aβ25～35)致小鼠学习记忆障碍的改善作用及探讨其可能的作用机制.方法 采用一次性小鼠右侧脑室注射Aβ25～35 3 μl造成AD小鼠模型,应用避暗实验、Morris水迷宫实验观察腹腔注射蒺藜皂苷(50,150,450 mg/kg)对Aβ25～35模型小鼠记忆障碍的改善作用,并于侧脑室注射后14 d测定各组小鼠脑组织中一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶( iNOS)的活性.结果 单侧侧脑室一次注射Aβ25～35 3 μl可引起小鼠学习记忆障碍,同时使小鼠脑组织内NO含量增加, NOS和iNOS活性显著升高,而连续注射蒺藜皂苷14 d治疗后,可不同程度改善Aβ25～35造成的学习记忆障碍,同时蒺藜皂苷50 mg/kg治疗组可显著降低NO含量和NOS、iNOS的活性(P<0.05),而蒺藜皂苷150 mg/kg和450 mg/kg治疗组均可显著降低NO含量和NOS、iNOS的活性(P<0.01).结论 侧脑室注射Aβ25～35可引起小鼠学习记忆障碍,而蒺藜皂苷可能通过抑制iNOS/NO参与的在体条件下对Aβ25～35神经毒性的介导,改善Aβ25～35致小鼠学习记忆障碍.     

大黄酚对β-淀粉样蛋白25～35致小鼠学习记忆障碍的改善作用

μl可引起小鼠学习记忆障碍,同时使脑组织NO含量增加和NOS、iNOS活性升高(P<0.01);而大黄酚(0.1,1.0,10.0 mg/kg,ip,17 d)可不同程度改善Aβ25～35造成的学习记忆障碍,并降低脑组织NO含量及NOS、iNOS活性(P<0.01).结论 侧脑室注射Aβ25～35可引起小鼠学习记忆障碍,而大黄酚可能通过抑制iNOS/NO参与的在体条件下对Aβ25～35神经毒性的介导,改善Aβ25～35致小鼠学习记忆障碍.