延肾胶囊对慢性肾炎患者肾保护的临床研究

目的:观察延肾胶囊抑制慢性肾炎患者肾脏纤维化、延缓慢性肾衰竭的效果.方法:选择90例慢性肾炎患者,按随机编码分为苯那普利组、延肾胶囊组、延肾胶囊 苯那普利组,每组30例.治疗24周,观察尿蛋白、肾功能的动态变化及治疗前后血清Ⅲ型前胶原N末端肽(PⅢP)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及肾组织TGF-β1、Ⅳ型胶原免疫组化染色和肾病理组织学的变化.结果:(1)治疗后3组尿蛋白、肾功能和血清PⅢP、TGF-β1、AngⅡ浓度均较前明显好转,延肾胶囊组和苯那普利组相比无明显差异,延肾胶囊 苯那普利组效果最好(P＜0.05);(2)治疗后肾组织TGF-β1、Ⅳ型胶原免疫组化染色积分光密度(IOD)值和病变肾小管间质面积百分比均较前降低,其中IOD值以延肾胶囊 苯那普利组下降更为显著(P＜0.05),而病变肾小管间质面积百分比下降3组间无明显差异.结论:(1)延肾胶囊能明显降低慢性肾炎患者尿蛋白,延缓肾功能的恶化,减轻肾组织纤维化,与苯那普利合用效果更佳.(2)延肾胶囊对肾脏的保护作用可能与其降低AngⅡ和TGF-β1的高表达有关.     

连黄降浊颗粒对自发性高血压大鼠肾脏功能和结构的保护作用

目的：观察连黄降浊颗粒对自发性高血压（SHR）大鼠肾脏功能和结构的保护作用。方法：将29只SHR随机分为模型组、西药对照组（对照组）、连黄降浊颗粒低剂量组（低剂量组）、连黄降浊颗粒高剂量组（高剂量组）。分别给于相应浓度和剂量的药物灌胃12周,观察大鼠的血压、尿蛋白、肾功能和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素（ET）水平以及肾组织病理改变;并用半定量方法评价肾小球硬化程度、肾小管损伤程度及肾间质纤维化程度,用ELISA测定肾皮质转化生长因子-β1（TGF-β1）的蛋白定量。结果：连黄降浊颗粒能减少SHR尿蛋白、降低血压、改善肾功能、抑制AngⅡ和ET的合成,减轻肾脏病理损害,减轻肾小球硬化、肾小管损伤及肾间质纤维化程度,抑制肾脏TGF-β1表达,其效果优于苯那普利。结论：连黄降浊颗粒具有保护SHR肾功能和减轻肾脏病理损害的作用,其机制可能与减少尿蛋白、降低血压、抑制AngⅡ和ET的合成、减轻肾小球硬化和肾间质纤维化、抑制肾脏TGF-β1表达等有关。     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾脏骨桥蛋白表达及肾纤维化的影响

目的 探讨不同剂量厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾组织骨桥蛋白( OPN)表达及小管间质纤维化的影响.方法 将63只8周龄雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组(Ctrl组,n=7)、糖尿病组(DM组,n=14)、30 mg/kg肼屈嗪干预组(DM+ Hyd组,n=12)、25mg·kg-1· d-1厄贝沙坦干预组(DM+Irb25组,n=10)、50 mg·kg-1·d-1厄贝沙坦干预组(DM+Irb50组,n=9)和200 mg · kg-1·d-1厄贝沙坦干预组(DM+Irb200组,n=11).糖尿病模型造模成功后4周,灌胃法给予相应剂量的肼屈嗪和厄贝沙坦.第12周末,观察各组大鼠24h尿白蛋白排泄率(UAER)、内生肌酐清除率(Ccr);PAS及Masson染色观察各组大鼠肾脏病理形态和胶原纤维沉积;ELISA法测定各组大鼠肾组织AngⅡ含量;实时定量PCR检测大鼠肾组织转化生长因子(TGF)β1、OPN mRNA的表达.结果 药物干预各组大鼠UAER、Ccr较DM组显著减少(均P＜ 0.05).DM组大鼠肾小球肥大,系膜基质增生,肾小球及小管间质有大量胶原纤维沉积;药物干预后,肾小球及肾小管上述病变减轻.DM组大鼠肾组织AngⅡ水平及TGF-β1、OPN mRNA表达均显著升高(均P＜0.05),给予肼屈嗪及厄贝沙坦干预后,AngⅡ、TGF-β1、OPN mRNA表达显著降低(均P＜0.05),且随着厄贝沙坦剂量的递增而递减.相关分析结果显示,DM组大鼠肾组织AngⅡ水平与OPN mRNA的表达呈正相关(r=0.74,P＜0.01).结论 厄贝沙坦通过减少肾脏局部AngⅡ水平,进而减少肾脏TGF-β1、OPN mRNA的表达,最终减轻小管间质纤维化,发挥肾脏保护作用,且这种保护作用具有剂量依赖性.     

愈肾颗粒对血管紧张素Ⅱ刺激大鼠肾系膜细胞TGF-β表达的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1(TGF-β1) mRNA表达及中药愈肾颗粒的影响.方法:采用体外培养法培养大鼠肾小球系膜细胞,应用血清药理学方法制取中药复方愈肾颗粒血清、中药对照药物肾炎舒及西药对照药物泼尼松药物血清,利用Ang Ⅱ作为刺激因子,应用反转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察各组间TGF-β1 mRNA表达的情况.结果:(1)Ang Ⅱ能明显促进系膜细胞的TGF-β1 的表达;(2)愈肾颗粒低剂量、高剂量组的TGF-β1 mRNA相对光密度比值明显低于病理组(P<0.01),愈肾颗粒对TGF-β1的mRNA表达有下调作用;(3)对照药物肾炎舒可抑制TGF-β1的表达,但是对照药泼尼松对TGF-β1的表达,与病理组比较无统计学差异.结论:Ang Ⅱ能促进系膜细胞TGF-β1的mRNA表达.愈肾颗粒能明显抑制肾小球系膜细胞TGF-β1基因表达.     

LOX-1对食盐敏感性高血压大鼠肾损害进展的影响及中药干预作用

目的:围绕内皮氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)与高血压和肾损害的机制,从分子生物学方面探讨中药保肾片对LOX-1以及细胞增殖因子TGF-β、细胞外基质主要成分Ⅰ型胶原的影响.方法:对DS、DR系大鼠半数予以高食盐饮食,其余予对照饮食,另设高食盐饮食 中药保肾片高、低剂量2组.4周实验结束后断头处死,切取肾脏,测定有关生化指标,并提取总RNA,RT-PCR处理制备探针,Northern blot测定LOX-1、TGF-β、Ⅰ型胶原的mRNA表达.结果:(1)服用8%高食盐的DS大鼠主动脉及肾脏LOX-1 mRNA表达显著上调.(2)高食盐DS大鼠LOX-1升高同时可见TGF-β和Ⅰ型胶原mRNA表达增加.(3)DS高食盐大鼠见到血压升高,血胆固醇、甘油三酯升高,血肌酐升高,尿蛋白排泄增多.(4)中药保肾片与对照组相比,DS 8%高食盐大鼠的LOX-1、TGF-β、Ⅰ型胶原的mRNA表达显著降低,血压、血脂、血肌酐、尿蛋白亦见明显下降.结论:(1)LOX-1在高血压大鼠的主动脉上mRNA表达上调,可能与内皮依赖性血管舒张的损害有关.(2)食盐敏感性DS大鼠的高血压肾损害进展与LOX-1升高、多种细胞增殖因子及细胞外基质产生增加有关.(3)保肾片可显著降低LOX-1的mRNA表达及TGF-β、Ⅰ型胶原的产生,降低血压和蛋白尿,改善脂质水平和肾损害.中药保肾片治疗慢性肾衰竭、延缓高血压肾损害进展的作用机制与降低肾脏中LOX-1、TGF-β及Ⅰ型胶原的mRNA表达有关.     

芬戈莫德对血管紧张素Ⅱ介导的慢性肾脏病的影响

目的通过建立血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)灌注的大鼠肾损害模型,使用药物芬戈莫德(Fingolimod,FTY720)进行干预,来评估该药物对大鼠肾功能的影响,并探讨FTY720对AngⅡ灌注大鼠肾脏炎症改变的作用及可能涉及的机制,从而为肾脏疾病的治疗提供新的策略。方法 36只SPF级雄性SD大鼠随机分为3组:(1)模型组12只,即AngⅡ灌注组,皮下植入含AngⅡ的渗透性微量泵,持续灌注28 d(AngⅡ:400 ng·kg~(-1)·min~(-1));(2)干预组12只,即AngⅡ+FTY720干预组,在模型组的基础上,FTY720以0.5 g·kg~(-1)·d~(-1)灌胃28 d;(3)对照组12只,以等量的生理盐水灌胃28 d。每周称体质量,留24 h尿液,并于第28天处死各组大鼠,经心脏采血,并留取肾脏标本。放射免疫法检测各组大鼠血液中AngⅡ及肾匀浆组织中AngⅡ的浓度。对尿液及血液样本进行尿蛋白与血生化分析。光镜下观察各组大鼠肾组织病理学改变并行Jablonski评分。免疫印迹法检测炎症因子TNF-α、IL-6在肾脏中的表达。结果 (1)AngⅡ可导致模型组大鼠血肌酐、尿素氮水平升高,尿蛋白排泄明显增加,炎症因子TNF-α、IL-6在肾脏组织中的表达水平升高;(2)干预组的肾脏病理损伤较模型组减轻,且Jablonski评分明显低于模型组,血肌酐、尿素氮水平明显降低,尿蛋白明显减少,肾脏组织中炎症因子TNF-α、IL-6水平明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 FTY720可减轻AngⅡ诱导的大鼠肾脏的病理损伤,可能是通过减少炎症因子的表达发挥了减轻尿蛋白,改善肾功能的作用。     

冬虫夏草菌粉对5/6肾大部切除大鼠肾脏纤维化的抑制作用及机制

目的 探讨冬虫夏草菌粉对5/6肾大部切除术大鼠肾脏纤维化的抑制作用及其可能机制.方法 30只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组,n=10)、5/6肾大部切除模型组(SNx组,n=10)以及5/6肾大部切除+冬虫夏草菌粉干预组(CS组,n=10).术前及术后4、8、12周分别检测大鼠体质量、尿蛋白量变化,并于术后第12周末处死大鼠,检测血尿素氮、肌酐变化,取肾组织切片行HE、Masson染色观察肾脏病理变化,免疫组化观察转化生长因子β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβR Ⅰ)、Ⅱ型受体(TβR Ⅱ)的表达,免疫荧光观察E-c adherin、α-SMA的表达,Western印迹法检测肾脏组织TGF-β1、TβR Ⅰ、TβR Ⅱ、磷酸化(p)Smad2/3、Smad7、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 术后CS组大鼠的体质量高于SNx组,尿蛋白量及血尿素氮、血肌酐低于SNx组.肾脏组织病理分析显示,CS组肾小球硬化、肾小管间质损伤程度均显著低于SNx组(均P＜0.01).CS组TGF-β1、TβR Ⅰ、TβR Ⅱ、p-Smad2/3蛋白表达量均显著低于SNx组(均P＜0.05),E-cadherin蛋白表达量显著高于SNx组(P＜0.05),α-SMA蛋白表达量显著低于SNx组(P＜0.05),Smad7蛋白表达量显著高于SNx组(P＜0.05).结论 冬虫夏草菌粉对5/6肾大部切除大鼠肾脏纤维化具有明显的抑制作用,其机制可能是与其抑制TGF-β1及其下游信号通路以及抑制EMT的发生有关.     

全反式维甲酸对大鼠肾小球硬化模型肾脏的保护作用

目的:探讨全反式维甲酸对大鼠肾小球硬化模型肾脏的保护作用.方法:用单侧肾切除加1周后静脉注射阿霉素(5 mg/kg)的方法建立大鼠肾小球硬化模型,分模型对照组、全反式维甲酸治疗组和苯那普利治疗组,设假手术组为正常对照组.检测各组术后第2、4、6周的尿蛋白及第6周的血清尿素氮、肌酐、总蛋白、白蛋白及肾组织病理改变,并应用免疫组化方法检测肾组织内纤连蛋白(FN)、层黏蛋白(LN)在肾小球的沉积和转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白质的表达.结果:全反式维甲酸和苯那普利治疗组比模型对照组尿蛋白排泄量明显减少,血肌酐和尿素氮水平下降,肾小球增生、硬化程度明显减轻(P<0.05) ;免疫组化显示,模型对照组肾小球内FN和LN沉积增多,肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白表达增高,全反式维甲酸和苯那普利治疗组则较模型对照组减少(P<0.05), 但二者间无明显差别(P>0.05).结论:同苯那普利一样,全反式维甲酸对大鼠肾小球硬化模型肾脏病变有部分保护作用.     

冬虫夏草对5／6肾切除大鼠肾脏TGF-β1的影响

目的观察冬虫夏草对肾小球硬化大鼠转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响，并探讨其作用机制。方法将36只正常Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和冬虫夏草组。模型组和冬虫夏草组行5／6肾切除术制备进行性肾小球硬化模型。冬虫夏草组每天给予冬虫夏草（2．5g·kg^-1·d^-1）水提液灌胃，模型组和正常对照组每天给予等量的自来水灌胃。末次术后4周各组分别处死大鼠6只，术后9周处死剩余6只。测定血生化指标和尿蛋白排泄量，检测大鼠肾组织中TGF-β1 mRNA、TGF-β1的表达。结果①模型组术后4周24h尿蛋白定量增高，血浆白蛋白降低，胆固醇与低密度脂蛋白增高，TGF-β1及其mRNA的表达均增高。与模型组相比，冬虫夏草组尿蛋白排泄减少，血胆固醇降低，低密度脂蛋白降低，TGF-β1 mRNA的表达明显减少，TGF-β1的表达减弱。②术后9周，模型组肾脏病变进一步加重，血肌酐升高。与之相比，冬虫夏草组尿蛋白排泄减少、血白蛋白增高；血胆固醇降低、低密度脂蛋白降低、血肌酐降低；TGF-β1 mRNA的表达明显减少、TGF-β1的表达减弱。结论随着大鼠肾小球硬化程度的加重，TGF-β1的表达增加；冬虫夏草干预治疗后，TGF-β1的表达明显下调，提示TGF-β1参与了肾小球硬化的进展，冬虫夏草可以延缓肾小球的硬化。     

苯那普利对肾小球硬化大鼠TGF-β1和TIMP-1表达的影响

目的探讨苯那普利对肾小球硬化大鼠TGF-β1和TIMP-1表达的影响.方法建立单侧肾切除术合并阿霉素静脉双次注射的大鼠肾小球硬化模型,设正常组、模型组和西药组,进行尿蛋白、肾功能、血脂检测和肾组织病理学检查,图像分析肾小球细胞外基质、转化生长因子β1(TGF-β1)和金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1)的变化.结果苯那普利组TC、TG和尿蛋白较模型组明显降低,肾脏病理提示系膜细胞和ECM明显减少,TGF-β1、和TIMP-1的表达降低(P＜0.05).结论苯那普利可以降低24h尿蛋白排出量、血脂,抑制系膜细胞增生,下调肾内TGF-β1和TIMP-1的表达,抑制ECM的沉积,从而防治肾小球硬化.