RNA干涉技术在哺乳类细胞和人类疾病基因功能研究中的应用

RNA干涉技术是一种很有潜力的研究基因功能的新技术 ,它具有快捷、方便、高效和特异性高等特点 ,但用此技术研究哺乳类动物细胞基因功能和人类疾病相关基因功能才刚刚起步 ,本文对该技术在哺乳类细胞和人类疾病基因功能中的研究进展进行了评述     

寄生线虫功能基因组学的研究进展

寄生线虫病严重危害人和动物的健康,但目前防治寄生线虫病尚存在困难。随着分子生物学技术的迅速发展,运用生物技术手段来控制寄生线虫病将成为可能,由此而来,研究寄生线虫的基因功能具有非常重要的意义。本文简要概述了研究寄生虫功能基因组学的一些方法,如研究差异表达基因的方法、RNA干涉技术、寄生虫的转基因技术和生物信息学等,并综述了猪蛔虫、圆线科线虫、旋盘尾丝虫、旋毛虫、马来布鲁线虫和有齿食道口线虫等一些重要寄生线虫在功能基因组学上的研究进展。     

RNA干涉文库的设计与应用

人类基因组计划的巨大发展提供了大量原始生物学信息,但对其功能信息的了解还相当有限。RNA干涉技术为研究基因功能提供了一种快速而经济的方法。构建靶向大量基因的RNA干涉文库在基因组范围内实现基因的沉默,已成为研究细胞生物学行为的一种新的功能基因组学研究方法。近年来相继出现许多针对RNA干涉文库的设计策略,并在一定规模内成功实现遗传学筛选,为将RNA干涉文库用于功能基因组学的研究进行了意义深远地探索与尝试。     

RNA干涉临床应用的研究进展

RNA干涉(RNA interference，RNAi)是近年来疾病基因组学和功能基因组学领域的研究热点，它通过双链RNA(double-strand RNA，dsRNA)的介导特异性地降解相应序列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默，并广泛存在于各种生物。正是由于RNAi在基因组学研究中的巨大潜力，近年来，各国学者在RNAi临床应用方面进行了深入的研究，并取得了令人瞩目的成绩。本文着重就RNAi临床应用的研究进展做一介绍。     

爪蟾卵母细胞表达体系在功能基因组学研究中的应用

非洲爪蟾卵母细胞表达体系是一种功能强大、适用范围广的表达体系 ,同时 ,也是应用最早的表达体系之一。随着分子生物学的发展 ,以及检测技术的进步 ,其应用有了进一步的扩展 ,不同种类、不同功能的蛋白质均可以在其中表达 ,同时进行功能研究。本文着重介绍爪蟾卵母细胞的生物学特性 ,对于不同功能的蛋白质的表达及功能的研究 ,以及在功能基因组研究中的应用     

RNA干涉：沉默基因的机制及应用研究新进展

RNA干涉（RNAinterference,RNAi)是一种由双链RNA（double-strandedRNA,dsRNA）始动的序列特异性基因沉默机制，广泛存在于各种生物，乃至人类；对RNAi分子机制及生物学意义研究不断深入，已发现了许多参与RNAi的基因和蛋白质（酶类），并证明了RNAi与细胞分化及生物发育密切相关。同时RNAi也是一种研究基因表达调控和基因功能强有力的工具，本就RNAi的分子机制，生物学意义及其应用研究方面的新进展做一介绍。     

RNA干涉：沉默基因的机制及应用研究新进展

RNA干涉 (RNA interference,RNAi)是一种由双链 RNA(double- stranded RNA ,ds RNA)始动的序列特异性基因沉默机制 ,广泛存在于各种生物 ,乃至人类。对 RNAi分子机制及生物学意义研究不断深入 ,已发现了许多参与 RNAi的基因和蛋白质 (酶类 ) ,并证明了 RNAi与细胞分化及生物发育密切相关。同时 RNAi也是一种研究基因表达调控和基因功能强有力的工具。本文就 RNAi的分子机制、生物学意义及其应用研究方面的新进展做一介绍     

RNA干扰技术在生物医学领域中的应用

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)启动的序列特异的转录后基因沉默过程。在这一过程中,dsRNA被核酸内切酶切割成小干扰RNA(siRNA),siRNA与相关的蛋白结合成RNA诱导沉默复合体,这一复合体可识别并降解mRNA,导致基因沉默。它是一种比反义寡聚核苷酸技术更为有效的方法,具有更高的特异性,在生物医学领域有广阔的应用前景。文章就RNAi技术在功能基因组学、基因治疗(如人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、肿瘤)、神经性疾病及其药物设计等领域的实验及其应用研究及存在问题作一综述。     

非编码RNA及其调控功能的研究进展

过去认为,在生命活动中RNA只是配角,其作用是将遗传信息从DNA传递给蛋白质,而细胞内存在的小分子RNA（后来称之为非编码RNA,non-coding RNA,ncRNA）只不过是一些降解产物;但随着研究的不断深入,RNA生物学功能的多样性以及ncRNA调控功能的重要性得到了深刻认识。     

RNA干涉和基因沉寂

RNA干涉是新近认识到的一种自然现象，但已被作为一种研究基因功能的有效工具，广泛运用于植物、真菌、线虫、果蝇以及哺乳动物。随着人们对RNA干涉机制认识的不断深入，RNA干涉技术将不断完善并应用到更为广阔的领域，为人类揭示生物界功能基因组功能的奥秘作出突出贡献，同时为人们探索基因治疗提供新的思路。     

后基因组时代的功能基因组学

摘要：人类基因组计划的完成意味着从结构基因组学到功能基因组学的跨越，把我们带进了后基因组时代。功能基因组学是在结构基因组学丰富信息资源的基础上，应用先进的基因表达技术、生物功能检测技术和生物信息学技术分析研究基因的表达、调控和功能；探讨生物的生长、发育规律的新型交叉学科。本文综述了后基因组时代功能基因组学的主要研究内容和方法。     

Dicer酶及其在RNA干扰中的作用

RNA干扰(RNAInterference,RNAi)是双链RNA引起的同源mRNA特异性降解的现象。Dicer酶是核糖核酸酶Ⅲ(RibonucleaseⅢ,RNaseⅢ)家族的成员,在RNA干扰的起始阶段起着重要作用。Dicer酶最早在果蝇中发现,包括Dicer-1和Dicer-2,分别以Dicer-1/R3D1-L、Dicer-2/R2D2复合物的形式作用于微小RNA(microRNA,miRNA)和小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)的产生。Dicer酶除了在RNAi中发挥重要作用外,还在调节动物生殖发育中起作用。     

RNA 干扰研究的新进展

RNA干扰技术(RNA interference, RNAi) 诞生5年来,无论在技术本身的改进上还是应用上都有了很大的发展,尤其是siRNA的产生和引入方法有了一系列的改进,使siRNA的长期稳定表达成为可能.RNAi的生殖细胞传递现象的发现,进一步拓宽了RNAi的应用潜力.然而,除了对靶基因的沉默效应外,引入的siRNA还可以导致siRNA序列特异性、而非靶基因特异性的基因沉默现象(off-target效应).这就提示,在注释特定siRNA产生的沉默效应时要特别注意,尤其是将siRNA用于疾病治疗时.     

RNA干扰的组织靶向性

RNA干扰是一种转录后基因沉默现象,可通过双链诱导使靶基因失活。为了增强对组织靶向性的治疗应用,目前研究有利用载体的特异性及基因重组构建进行调控作用于靶组织,也可以小分子基团特异性化学修饰小RNA双链或载体及其他微粒等方法提高组织靶向性。现已有部分RNA干扰治疗应用于临床,且通过组织靶向作用可拓展疾病治疗途径。     

病毒反RNA干扰研究进展

RNA 干扰（RNAi）是生物体长期进化发展过程中形成的一种对外源遗传因子的特异性降解机制。RNAi 的机制是通过一段小片段双链RNA的作用序列特异性地使一段目的基因失活。随着病毒分子遗传学的发展,我们对于宿主对于RNAi防御系统研究的愈加深入。令人感兴趣的是很多病毒已经发展了拮抗RNAi作用的机制通路从而得以逃脱RNAi介导的基因抑制。研究发现,无论植物还是动物病毒均可以利用自身原料合成抑制蛋白,干扰RNAi 的进行。迄今为止,RNAi 已被发现在自然届中所有真核生物内广泛分布,并且已经逐步演变为一种研究基因功能的重要手段。最重要的是RNAi 更具有应用于基因治疗的美好前景。因此,对于病毒反RNAi 机制的研究显得格外有意义。     

RNA干扰技术新进展

20世纪90年代初,科学家在矮牵牛花中导入与花青素合成有关的查尔酮合成酶基因,原以为转基因的牵牛花会变得更鲜艳,结果却发现一些花反而变成白色,这种现象引起人们的高度关注,之后的研究将这种过度表达内源基因而引发的基因沉默称为共阻遏。     

应用RNA干扰技术抑制人胃癌细胞环氧合酶-2基因的表达研究

目的 研究应用RNA干扰技术进行抑制胃癌SGC-7901细胞COX-2的表达研究。方法 依据siRNA设计原则,针对人COX-2的mRNA序列,设计并合成3条21bp的双链RNA,瞬时转染人胃癌细胞SGC-7901,Western blot验证基因沉默效率以筛选合适的siRNA序列;根据筛选出的有效序列,合成编码短发卡RNA的双链寡核苷酸,定向克隆到含有U6 RNA聚合酶Ⅲ启动子的pSilencer? 2.1-U6 neo 真核表达载体,稳定转染胃癌细胞SGC-7901中,经G418筛选,获得克隆细胞。 结果 筛选出一条有效的干扰序列,位于291-311bp,成功构建表达载体,COX-2在蛋白水平的表达明显被抑制。结论：利用化学合成siRNA进行初筛,再构建shRNA表达载体,可快速实现目的基因的表达抑制。     

Argonaute蛋白家族在RNAi中的作用

RNA干扰是一种双链RNA诱导的基因沉默现象。Argonaute蛋白组成了一个高度保守的家族,该蛋白家族包括许多成员,它们组成了RNA诱导的沉默复合体的核心元件,是RNA干扰所必须的。Argo-naute蛋白选择性地与miRNA和siRNA结合,并与Dicer酶相互作用,其PIWI盒子与Dicer的RNaseⅢ结构域直接相互作用,PIWI与Dicer之间的相互作用可能会促进miRNA/siRNA的释放。Argonaute蛋白很可能是RNA干扰中核酸内切酶活性的执行者。