地塞米松对补体介导的PMN功能损害的保护实验研究

目的；研究地塞米松对活化补体介导的ＰＭＮ功能损害的保护作用。方法：用酵母多糖经人血清（ＺＡＨＳ）作用于人体ＰＭＮ及小鼠体内ＰＭＮ，选择地塞米松（Ｄｅｘ）起显著保护作用的浓度和时间，进行体内，外保护效能试验。结果：（１）低剂量Ｄｅｘ（０．０８μｇ／ｍｌ）预处理，对极效量ＺＡＨＳ导致正常人，鼠ＰＭＮ功能损害无明显保护作用；大剂量Ｄｅｘ（１．２～１．６μｇ／ｍｌ）在ＰＭＮ应激后第５小时前表现出明显保护作     

血小板激活因子和维甲酸对中性粒细胞功能和ICAM－1，ELAM－1表达的影响

目的：探讨血小板激活因子（ＰＡＦ）和维甲酸（ＲＡ）对多形核中性粒细胞（ＰＭＮ）功能和肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１和Ｅ－选择素（ＥＬＡＭ－１）表达的影响。方法：采用作者创建的无创性分离法分离培养ＰＭＶＥＣ；将ＰＡＦ和ＲＡ分别加入培养有ＰＭＶＥＣ的９６孔板中，观察二者对ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ粘附的影响；ＥＬＩＳＡ法测定ＰＭＶＥＣ上ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１的表达；测定ＰＡＦ和ＲＡ对ＰＭＮ的趋化性、聚集和酸性磷酸酶的释放的影响。结果：（ｌ）ＰＭＶＥＣ用ＰＡＦ处理３．５ｈ后，它与ＰＭＮ的粘附率从５７．３％增加到７２．８％（Ｐ＜０．０１）。而用ＰＡＦ处理ＰＭＮ同样可增加ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ的粘附率。（２）ＲＡ可阻断未刺激ＰＭＮ与ＰＡＦ刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附，但对ＰＡＦ刺激的ＰＭＮ与未刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附却无作用。（３）ＰＡＦ可增加ＰＭＶＥＣ上ＩＣＡＭ－ｌ和ＥＬＡＭ－ｌ的表达、增加酵母多糖激活血清和组胺对ＰＭＮ的趋化性、增加ＰＭＮ的聚集和ＰＭＮ酸性磷酸酶的释放。（４）ＲＡ则可抑制ＰＡＦ诱导的ＰＭＮ聚集、酸性磷酸酶的释放及ＰＭＮ对酵母多糖刺激血清和组胺的趋化性，而ＩＣＡＭ－１和ＥＬＡＭ－１的表达却未改变     

左旋精氨酸对急性心肌梗塞大鼠选择素表达的影响

为探讨一氧化氮（ＮＯ）的前体左旋精氨酸（Ｌ－ａｒｇ）对急性心肌梗塞（ＡＭＩ）大鼠心肌有无保护作用及其作用机制。采用垂体后叶素（Ｐｉｔ）ＡＭＩ模型。设立正常对照组、阳性对照组、及Ｌ－ａｒｇ治疗组，观察中性粒细胞（ＰＭＮ）Ｌ－选择素及心肌微血管内皮细胞Ｐ－选择素的表达，并测定心肌梗塞范围、ＰＭＮ浸润数及血浆ＮＯ、丙二醛（ＭＤＡ）的浓度。结果表明：阳性对照组Ｌ－选择素及Ｐ－选择素表达上调，梗塞心肌ＰＭＮＩ巡润数、血浆ＭＤＡ的浓度明显升高，血浆ＮＯ的浓度降低。Ｌ－ａｒｇ治疗组上述指标改变的程度明显减轻（Ｐ〈０．０１）。心肌梗塞范围缩小，提示外源性Ｌ－ａｒｇ对ＡＭＩ有防治意义。其作用机制与ＮＯ抑制选择素的表达有关。     

血小板激活因子和维甲酸对中性粒细胞功能和ICAM—1,ELAM…

目的；探讨血小板激活因子（ＰＡＦ）和维甲酸（ＲＡ）对多表核中性粒细胞（ＰＭＮ）功能和肺微血管内皮细胞（ＭＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１和Ｅ－选择素（ＥＬＡＭ－１）表达的影响。方法；采用作者创建的无创性分离法分离培养ＰＭＶＥＣ：将ＰＡＦ和ＲＡ分别加入培养有ＰＭＶＥＣ的９０孔板中，观察二者对ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ粘附的影响，ＥＬＩＳＡ法测定ＰＭＶＥＣ上ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１的表达，测定ＰＡＦ和ＲＡ对ＰＭＮ的趋化     

急性出血坏死性胰腺炎大鼠血浆和胰腺组织内皮素的变化及其意义

目的：测定急性出血坏死性胰腺炎（ＡＨＮＰ）大鼠血浆及胰腺组织内皮素（ＥＴ）含量变化，探讨其在发病机理中的作用。方法：５％牛磺胆酸钠溶液胆胰管注入，诱发大鼠ＡＨＮＰ。动态测定血浆及胰腺组织内皮素（ＥＴ）、胰腺血流量（ＰＢＦ）、肌醇三磷酸（ＩＰ３）和胰腺细胞［Ｃａ２＋］ｉ的变化，胰腺组织病理评分（ＰＭ）定量分析。结果：ＡＨＮＰ大鼠血浆及胰组织ＥＴ含量早期显著增加，血浆ＥＴ初始升高滞后于胰组织ＥＴ，两者间及两者与ＰＢＦ、ＩＰ３、［Ｃａ２＋］ｉ、ＰＭ呈显著相关性，但胰组织ＥＴ相关更密切。结论：胰组织ＥＴ可能介导了胰腺早期缺血，血浆ＥＴ进一步加重ＡＨＮＰ大鼠的病理生理改变。     

RT—PCR法检测HNP1基因在气管上皮细胞转染后的表达

采用脂质体转染法将人中性粒细胞防御素（ＨＮＰ１）的ｃＤＮＡ重组直核表达质粒ｐＢａｂｅ－Ｎｅ０－ＨＮＰ１导入无血清培养的人和兔的气管粘膜上皮细胞,利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法,在核酸水平检测ＨＮＰ１在气管上皮细胞的表达。结果：在人和兔的转染上皮细胞中均可检测到ＨＮＰ１ｍＲＮＡ的表达,而在未转染的上皮细胞中ＲＴ－ＰＣＲ检测结果呈一。这一结果与作者先前用免疫组化法在蛋白质水平上检测的结果一致     

急性出血坏死性胰腺炎大鼠血浆和胰腺组织内皮素的变化及 …

目的：测定急性出血坏死性胰腺炎（ＡＨＮＰ）大鼠血浆及胰腺组织内皮素（ＥＴ）含量变化。探讨其在发病机理中的作用；方法：５％牛磺胆酸钠溶液胆胰管注入，诱发大鼠ＡＨＮＰ，动态测定血浆及胰腺组织内皮素（ＥＴ），胰腺血流量（ＰＢＦ），肌醇三磷酸（ＩＰ３）和胰腺细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ的变化，胰腺组织病理评分（ＰＭ）定量分析。结果：ＡＨＮＰ大鼠血浆及胰组织ＥＴ含量早期显著增加，血浆ＥＴ初始升高滞后于胰组织ＥＴ，两     

一种新的黄芩类黄酮3‘,5,6’,7—四羟基—2‘,8—二甲氧基黄酮 …

目的：对新发现的一种黄芩类黄酮３’５。６’７－四羟基－２’,８－二甲氧基黄酮（ＴＤＦ）的免疫药理作用进行研究。方法：检测ＴＤＦ对人多形核细胞（ＰＭＮ）、单个核细胞（ＭＮＣ）化学发光反应、化学趋向性和ＰＨＡ诱导淋巴细胞增殖的影响。结果：ＴＤＦ本身不能激活ＰＭＮ和ＭＮＣ的氧呼吸爆发,ＴＤＦ对ＰＭＮ和ＭＮＣ无毒性作用;当ＴＤＦ与ＰＭＮ或ＭＮＣ预先孵育后,明显的抑制ｆＭＬＰ或ＯＺ激活ＰＭＮ以及ｆＭＬＰ激活     

烧伤早期及丹参对中性粒细胞化学发光的影响

目的：探讨烧伤早期患者血清（ＥＢＰＳ）调理的中性普细胞（ＰＭＮ）对血管内皮细胞的损伤机制及丹能的保护作用,并对ＥＢＰＳ和丹参注射液（ＳＭ）调理ＰＭＮ的氧化活性及吞噬活性进行了研究。方法：以１００ｍＬ／ＬＥＢＰＳ,１００ｍＬ｜ＬＥＢＰＳ加１０ｍＬＳＭ及１００ｍＬ／Ｌ正常血清（ＮＨＳ）分别丐健康人全血ＰＭＮ孵育不同时间,检测ＰＭＮ生物化学发光（ＰＭＮ－ＣＬ）。结果：１００ｍＬＥＢＰＳ调理ＰＭＮ０￣１５     

慢性粒细胞白血病患者白细胞吞噬功能的观察

白细胞墨汁吞噬功能是检验机体免疫功能的指标之一［１］，已较多地应用于临床工作中，成熟中性粒细胞（ＰＭＮ）在机体防御中起着重要作用。本文采用墨汁吞噬试验检测慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）的ＰＭＮ吞噬功能，旨在了解ＣＭＬ患者ＰＭＮ吞噬功能与缓解的关系。１材料...     

蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质

目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质.方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法.结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%.EDNase的相对分子质量约为63 000.Mg2+,Mn2+和ca2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性.在pH 4.4～5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其最适pH值为4.8.该酶的最适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性.EDNase的等电点为6.20.在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52 g/L,Vmax为4.89 mg/(mL·min).该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用.结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶.     

虎血清免疫球蛋白(IgG)的纯化及纯度、活性鉴定

目的建立高纯度、高活性的虎血清IgG纯化方法。方法用饱和硫酸铵沉淀虎血清得到IgG粗品;结合Hitrap Protein A亲和层析预装柱及阴离子交换层析法对粗品IgG进一步分离纯化,采用PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法鉴定IgG纯度和免疫活性。结果80 mL虎血清亲和纯化得到84 mg IgG,阴离子交换层析纯化得到30 mg虎的IgG纯品。结论建立了简便快速、纯度高、活性好的虎血清IgG的分离纯化方法,为虎血清IgG二级抗体的制备提供了高纯度、活性好的一级抗体免疫原。     

酵母表达中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的初步纯化

目的：研究酵母表达中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的纯化方法。方法：表达上清用（NH4）2SO4盐析、凝胶过滤、阳、阴离子交换层析等方式进行纯化。通过比较产品纯度、收率与质量确定最佳实验方案。纯化产品用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western blot、等电聚焦与高效液相色谱进行鉴定。结果：获得较高纯度的NGAL。结论：（NH4）2SO4盐析、凝胶过滤和阳离子交换是纯化酵母表达NGAL的最佳实验方案。     

虎杖中白藜芦醇的纯化工艺研究

目的:研究虎杖中白藜芦醇的纯化工艺条件及参数,得到高纯度的白藜芦醇。方法:采用萃取和硅胶柱层析相结合的方法,得到高纯度的白藜芦醇。结果:原药液白藜芦醇的纯度为5.86%,得率为1.77%;经过萃取后白藜芦醇的纯度为61.00%,得率为1.61%;萃取后的样品采用硅胶柱层析纯化后白藜芦醇的纯度为98.38%,得率为1.17%。结论:采用萃取和硅胶柱层析相结合的方法,得到了高纯度的白藜芦醇。     

中压液相层析法纯化人VLDL主要载脂蛋白

目的 建立中压液相层析分离法纯化人VLDL主要载脂蛋白(apo) E、CⅠ、CⅡ和CⅢ的方法.方法 以低温乙醇法制备人血浆白蛋白后的残余组分FⅡ Ⅳ为原料,经一次性密度梯度超离心得到VLDL.脱脂后的VLDL(apoVLDL)经中压Sephacryl S-200柱层析得到apoE和apoCs粗品.apoE经肝素琼脂糖CL-6B亲和层析进一步纯化,apoCs经DEAE-Sephacel离子交换层析进行分离.结果 apoE经肝素琼脂糖CL-6B亲和层析进一步纯化,可得纯度为93.8%的纯品;apoCs经离子交换层析分离得到纯度为92%以上的apoCⅡ、apoCⅢ.所纯化各载脂蛋白apo E、CⅠ、CⅡ及CⅢ经免疫单扩和SDS-PAGE鉴定为免疫纯及电泳纯.结论 成功建立了一种可大量、快速、高分辨分离提纯载脂蛋白apo E、CⅠ、CⅡ及CⅢ的方法.     

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位功能片段的纯化及活性研究

目的 建立一种有效的尿素酶功能片段的纯化方法.方法 应用已构建的尿素酶B功能片段表达载体,IPTG诱导表达,包涵体鉴定试验判断目的蛋白表达形式,AKTA100上分别采用亲和层析和离子层析等多级纯化方式优化纯化条件,HPLC检测纯化蛋白纯度,尿素酶活性阻断试验对纯化后功能片段进行活性鉴定.结果 IPTG诱导后目的蛋白高表达,包涵体鉴定试验证实目的蛋白以可溶形式存在宿主细胞中,优化后方案得到目的蛋白纯度＞90%且能被尿素酶B免疫的兔血清识别,纯化后蛋白免疫家兔后产生兔抗血清能够特异性中和Hp尿素酶活性.结论 成功建立了尿素酶功能片段的纯化方法.     

蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ的分离方法研究

目的：探索蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ(antineoplastic polypeptide-Ⅲfrom APBMV,AP-Ⅲ)的分离和纯化方法。方法：蝎毒经预处理后,分别采用pharose FF阳离子交换凝胶柱(cm×5 cm交换柱,流速0．8 ml／min,梯度洗脱1 200 min)层析法和Sepharose FF阳离子交换凝胶柱与Sephadex G-50凝胶柱(柱：100cm×5 cm;流速：0．5 ml／min)联合层析法,分离AP-Ⅲ,用HPLC仪检测2种方法分离出的AP-Ⅲ的纯度及产率。结果：单独用Sepharose FF阳离子交换凝胶柱分离,AP-Ⅲ产率为2．24％,纯度为89％。Sephadex G-50凝胶柱与Sepharose FF阳离子交换凝胶柱联用,其产率及纯度分别提高至4．72％和％。结论：Sephadex G-50与Sepharose FF联用可提高AP-Ⅲ的产率及纯度,从而为开发和利用AP-Ⅲ提供了实验依据。     

中性粒细胞防御素体外杀钩端螺旋体活性观察

Defensins play an important role in oxygen-independent microbicidal mechanisms of neutrophils. They are effective against many bacteria, fungi and enveloped viruses. However, the effect of defensins upon leptospires has not been studied. In the present report, human defensins (i.e. HNP, a mixture of HNP1, HNP2 and HNP3 were prepared from human polymorphonuclear neutrophils by chromatography on Sephadex G-100 and then on Biogel P-10. Rabbit defensin NP1 was purified from rabbit peritoneal granulocytes by preparative acid urea polyacrylamide gel electrophoresis. By using the most-probable-number procedure, HNP and NP1 were tested in vitro for the killing of leptospira interrogans serogroup icteroheamorrhagiae serovar lai strain 017. NP1 was highly effective. When leptospires of strain 017 were incubated with 1 microgram/ml of NP1 at 30 degrees C for 4 hours, > 99% of these organisms were killed. HNP was less potent than NP1, and at 50 micrograms/ml, it killed > 90% of leptospires. As is also the case for the killing of bacteria, NP1 was active against leptospires in nutrient-free buffer, whereas HNP required the addition of glucose. The data suggest that defensins could play a major role in the killing of leptospires by neutrophils.     

人血浆中MBL-MASP复合物的纯化与分离

目的从人血浆中分离纯化甘露聚糖结合凝集素(MBL)和MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP)。方法用非活化Sepharose 4B两步亲和层析纯化MBL-MASP复合物．再以Sephacryl S-300柱凝胶过滤将MBL和MASP分离。在纯化MBL—MASP复合物的整个过程中，除凝胶过滤缓冲液外，均加入丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲磺酰氟(PMSF)和金属蛋白酶抑制剂1．10-邻二氮杂菲(1，10-phenanthroline)．并控制温度在4℃。结果获得高度纯化的MBL和酶原形式的MASP。SDS—PAGE和Western blotting表明所纯化的MBL相对分子质量为28000和32000肽链构成的功能性多聚体；配体结合测定和酵母菌凝集试验证实所纯化的MBL具有生物学活性：结论建立了一种比较简便的同时分离纯化MBL和MASP酶原的方法。