Ⅳ型胶原和金属蛋白酶组织抑制剂-1在肾小球系膜细胞中的表达及福辛普利干预的意义

目的探讨Ⅳ型胶原（ColⅣ）及金属蛋白酶组织抑制剂－1（TIMP－1）在脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）中的表达及血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）福辛普利（FOS）干预的意义。方法建立体外培养的大鼠GMC，鉴定后3～10代用于实验。实验分为5组。对照组：仅加正常培养液；LPS组：加正常培养液及10μg／L LPS；FOS高、中、低剂量组：除正常培养液及10μg／L LPS外，分别加FOS1×10^-4mol／L（FOS1组）、1×10^-6mol／L（FOS2组）、1×10^-8mol／L（FOS3组）。各组细胞培养6、12和24h后采用ELISA法测定细胞培养上清液中ColⅣ和TIMP-1蛋白表达量，收集细胞提取RNA，采用实时荧光定量RT—PCR法检测其TIMP—1 mRNA表达的变化。结果1．正常培养的大鼠GMC均有一定量的ColⅣ和TIMP-1蛋白表达；LPS组在各时间点ColⅣ和TIMP-1蛋白分泌均高于对照组（Pa〈0．01），而FOS各组ColⅣ和TIMP-1蛋白分泌均低于LPS组（Pa〈0．01）。2．正常培养的大鼠GMC可表达一定量TIMP-1mRNA，LPS组在各时间点TIMP-1mRNA表达量均高于对照组，FOS各组表达量均低于LPS组。结论FOS抑制LPS诱导的GMC分泌ColⅣ，从蛋白和mRNA水平抑制LPS诱导的大鼠TIMP-1表达，而TIMP-1是调节ColⅣ降解的重要因子，为FOS的肾脏保护作用机制提供理论依据。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂抑制血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的探讨氧化应激对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP—1）表达的影响，观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）激动剂对AngⅡ诱导的MCP—1表达的抑制作用。方法体外培养人肾小球系膜细胞。分为正常对照组、不同水平AngⅡ（1、10、100nmol／L）刺激组及乙酰半胱氨酸（NAC，10μmol／L）和罗格列酮（10μmol／L）预处理30min后加入AngⅡ（100nmol／L）刺激组。应用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测各组MCP—1的表达，荧光探针2′，7′-二氯二氢荧光素乙酰乙酸（DCFDA）检测细胞内活性氧的变化。结果1．AngⅡ呈剂量依赖性的诱导肾小球系膜细胞MCP-1表达，1、10和100nmol／LAngⅡ刺激12h后MCP—1表达是对照组的1．80、2．51和3．57倍。2．AngⅡ可呈剂量依赖性诱导肾小球系膜细胞活性氧（ROS）的产生，1、10和100nmol／LAngⅡ刺激60min，ROS产生分别是对照组的1．82、2．92和4．08倍。3．Losartan完全阻断了AngⅡ诱导的ROS产生，而PD123319对AngⅡ诱导的ROS产生无抑制作用。4．抗氧化剂NAC显著抑制AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞MCP—1表达。5．PPARγ受体激动剂罗格列酮10μmoL／L可显著抑制AngⅡ诱导的系膜细胞ROS产生和MCP-1表达。结论AngⅡ通过诱导氧化应激促进肾小球系膜细胞MCP-1表达；PPARγ／激动剂通过抑制氧化应激阻断AngⅡ诱导的MCP—1表达。     

孕中期羊水来源胎儿间充质干细胞体外诱导为平滑肌细胞的研究

目的探讨孕中期羊水来源的胎儿间充质干细胞（MSC）体外诱导为平滑肌细胞的可能性。方法通过超声引导下羊膜腔穿刺获取人孕18～22周羊水，分离细胞，体外培养传代，机械方法挑取MSC克隆，体外扩增，流式细胞仪检测MSC表面抗原表达，以0．01ng／ml、0．1ng／ml、1ng／ml和10ng／ml浓度的转录生长因子B（TGF-β）分别诱导第3代Msc28d，免疫组化染色检测各浓度TGF-β诱导后a—Actin在细胞内表达情况，透射电镜观察1ng／mlTGF-β诱导28d后细胞内肌丝含量，激光共聚焦显微镜测定该浓度组细胞在乙酰胆碱刺激下细胞内液钙离子浓度的变化。结果羊水来源的胎儿MSC在体外培养体系中增殖迅速，流式细胞仪检测结果显示CD44表达阳性，CD34、CD45和HLA—DR阴性。经1ng／mlTGF-β诱导28d后，细胞形态呈长梭形平滑肌样，融合后细胞分布形成特征性的“峰”和“谷”状，同时表达平滑肌细胞特异性蛋白标志α—Actin，细胞内出现黑色棒状肌丝，激光共聚焦显微镜显示该浓度TGF-β诱导后细胞内液钙离子基础值明显高于未诱导的细胞，在乙酰胆碱刺激下，细胞内液钙离子呈波峰样释放。结论羊水来源的胎儿MSC在体外可以定向分化为平滑肌细胞。     

静脉注射用免疫球蛋白非敏感型川崎病诊疗进展

川崎病（Kawasaki disease，KD）是儿童最常见的自身免疫性血管炎综合征。其病因及免疫发病机制未完全清楚，大量流行病学及临床观察提示KD的发病可能与感染因素所触发的急性免疫调节紊乱有关。目前仍未检测到导致KD的单一病原微生物，已报道多种细菌、病毒、支原体及其代谢产物（如链球菌和葡萄球菌所产生的超抗原）与KD发病有关。感染致免疫活性细胞（如T细胞、单核／巨噬细胞）异常活化，所产生的炎性细胞因子可能参与血管内皮损伤及干扰自身免疫耐受：如异常产生的白细胞介素-6（IL-6）可诱导P53基因表达，导致KD患儿免疫活性细胞凋亡延迟，干扰活化诱导的细胞凋亡（AICD），破坏外周自身免疫耐受。IL-6又可抑制CD4^＋CD25^＋调节性T细胞抑制功能，进一步干扰自身免疫稳定功能。IL-1β、IL-6及TNF—α等前炎症细胞因子可诱导血管内皮细胞表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及血管内皮黏附分子-1（VCAM-1）等黏附分子，导致中性粒细胞、单核／巨噬细胞、T细胞黏附聚集到血管内皮，启动血管炎综合征。     

基质金属蛋白酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1在肾小球硬化大鼠中的表达和意义

目的探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）在多柔比星诱导肾小球硬化大鼠中的表达和意义。方法40只雄性8周龄Wistar大鼠随机分为假手术和模型组。将模型组大鼠麻醉，在无菌条件下背侧切口行左肾切除术，1周后尾静脉注射多柔比星（5mg／kg）；假手术组大鼠麻醉后予以假手术，1周后尾静脉注射等容积9g／L盐水。造模12周末处死大鼠，取肾脏组织作病理检查，采用免疫组织化学方法检测肾组织Ⅳ型胶原（Col—Ⅳ）、纤维连接蛋白（FN）、MMP-2、-9和TIMP-1的蛋白表达。结果与假手术组比较，模型组大鼠肾组织MMP-2、-9蛋白表达显著减少（Pa〈0．01），Col—Ⅳ、FN、TIMP-1蛋白表达显著增高（Pa〈0．01），TIMP-1／MMP-9和TIMP-1／MMP-2比值显著增高（Pa〈0．01）。肾组织TIMP-1、TIMP-1／MMP-9和TIMP-1／MMP-2比值与肾小球硬化指数（GSI）呈显著正相关（Pa〈0．01）。而MMP-2、-9与GSI呈显著负相关（Pa〈0．01）。结论TIMP-1／MMP-2、TIMP-1／MMP-9比值失调，使肾小球细胞外基质（ECM）降解减少，导致ECM过度积聚，参与肾小球硬化的发生发展。     

地塞米松对脑缺氧缺血新生大鼠细胞凋亡抑制蛋白1 mRNA及Caspase-3活性的影响

目的：探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后细胞凋亡抑制蛋白1（cIAP1）基因表达、Caspase-3活性的变化及地塞米松（DEX）对其影响，阐明DEX预处理对HIBD神经保护的可能机制。方法：7日龄SD大鼠24只，随机分成DEX组、9g／L盐水组（NS组）、HIBD组、健康对照组。DEX、NS、HIBD组大鼠采用Rice方法制备HIBD模型。DEX和NS组在缺氧缺血前12h腹腔内分别注射DEX、等量9g／L盐水。取HIBD动物模型实验侧大脑半球，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测cIAP1基因表达，比色法测定Caspase-3活性。结果：与健康对照组比较，HIBD组大鼠cIAP1基因表达明显下降（P〈O．01），Caspase-3活性明显上升（P〈0．01）。与HIBD组比较，DEX组cIAP1基因表达明显上升，而Caspase-3活性明显下降。结论：脑缺氧缺血可导致cIAP1基因表达下调，Caspaes-3活性升高。DEX能通过上调cIAP基因表达，抑制Caspase-3活性，抑制细胞凋亡，起到神经保护作用。     

蛋白激酶Cα对T细胞生物学功能影响的研究

目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对T细胞增殖、凋亡、分化、细胞因子的生成、诱导性调节性T细胞(iTreg)生成的影响。方法分离野生型(PKCα+/+组)或PKCα基因敲除(PKCα-/-组)小鼠T细胞,体外培养,在T细胞表面受体(TCR)信号刺激下,利用3H胸腺嘧啶掺入法、CSFE/Annexin V染色结合流式细胞技术检测T细胞增殖及凋亡情况;收集细胞培养上清,用ELISA方法检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ和IL-17的生成。分离PKCα+/+组或PKCα-/-组小鼠CD4+T细胞,在TCR信号刺激下,按Th17细胞、iTreg分化条件进行体外诱导,用流式细胞技术检测细胞分化结果。结果与PKCα+/+组相比,PKCα缺失时,在TCR信号刺激下,T细胞的增殖降低,IL-2生成增多,IL-4和IL-17生成减少,Th17细胞分化减少,iTreg生成增加(均P结论 PKCα具有促炎作用。     

核心蛋白聚糖对转化生长因子β1诱导人近端肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨核心蛋白聚糖对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人。肾小管上皮细胞（HK-2）转分化的影响。方法将体外培养的HK-2细胞分为6组：阴性对照组（A组）;10ng／ml TGF-β1组（B组）;10ng／ml核心蛋白聚糖组（C组）;100ng／ml核心蛋白聚糖组（D组）;10ng／ml TGF-β1＋10ng／ml核心蛋白聚糖组（E组）;10ng／ml TGF-β1＋100ng／ml核心蛋白聚糖组（F组）。倒置显微镜下观察加入刺激因子48h后,各组细胞形态学变化;应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测核心蛋白聚糖对TGF-β1诱导的HK-2细胞内α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白、角蛋白mRNA表达的影响。结果B组与A组相比较,细胞形态发生明显变化,大部分细胞拉长呈梭形,似成纤维细胞;E组和F组比B组梭形样细胞明显减少,尤其是F组梭形样细胞减少更明显;C组和D组与A组细胞形态无明显区别,为椭圆形;B组与A组比较,波形蛋白、α-SMAmRNA表达明显提高,角蛋白mRNA表达减少。B组平均值分别为（0.828±0.297）、（0.332±0.025）、（0.075±0.040）,A组平均值分别为（0.033±0.060）、（0.003±0.000）、（0.348±0.012）,差异有统计学意义（P〈0.05）;E组和F组与B组相比,波形蛋白、α-SMA的表达有所下降,角蛋白的表达呈上升趋势（P〈0.05）,平均值分别为E组（0.234±0.313）、（0.214±0.196）、（0.098±0.056）,F组（0.155±0.053）、（0.122±0.130）、（0.215±0.122）。C组和D组与A组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论TGF-β1能诱导正常人肾小管上皮细胞发生转分化;核心蛋白聚糖对TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化具有抑制作用,且呈剂量依赖性。     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导小鼠胚胎Leydig细胞凋亡的体外实验研究

目的研究邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯EDi（2-ethylhexyl）phthalate，DEHP]对小鼠胚胎睾丸Leydig细胞凋亡诱导作用。方法DEHP50、100、200ug／ml分别作用于体外培养、纯化的胎龄16d（GD16）小鼠胚胎睾丸Leydig细胞。光镜、电镜观察Leydig细胞形态和超微结构变化，DNA末端原位标记染色法（TUNEL法）和Annexin-V／PI双染法流式细胞仪分别检测kydig细胞凋亡指数、凋亡细胞比例。结果DEHP处理组透射电镜可见凋亡典型的形态学变化，凋亡指数及凋亡细胞比例与对照组比较有显著或非常显著性差异（P〈0．05或P〈0．01）。结论DEHP能诱导小鼠胚胎睾丸Leydig细胞凋亡。     

酪氨酸激酶受体B及其配体脑源性神经营养因子水平对神经母细胞瘤耐药的影响

目的 研究酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptor,TrkB）及其配体脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）的表达水平对神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）细胞化疗敏感性的影响。方法 Western-blot技术检测不同纳摩尔浓度全反式维甲酸（all trans-retinoic acid,ATRA）诱导后TrkB蛋白水平变化;四甲基偶氮蓝比色（MTT）法检测细胞存活率;流式细胞仪（flow cytometer,FCM）检测细胞凋亡率;透射电镜检测凋亡细胞的形态。结果 （1）不同浓度ATRA（1、10、100nmol／L）处理神经母细胞瘤细胞SY5Y5d,TrkB蛋白水平随ATRA浓度增加而增加;（2）BDNF10ng／ml＋ATRA 10nmol／L＋顺铂（Cisplatin,CP）5μg／ml作用组细胞存活率、凋亡率同单用CP组比较均无显著差异,BDNF（50、100ng／m1）加相同浓度ATRA及CP组细胞存活率均明显高于单用CP组,凋亡率均明显低于单用CP组,BDNF 100ng／ml组存活率高于BDNF 50ng／ml组,凋亡率低于BDNF 50ng／ml组。ATRA 1nmol／L＋BDNF 50ng／ml＋CP 5μg／ml组细胞存活率、凋亡率同单用CP组比较无显著差异,ATRA 10、100 nmol／L加相同浓度BDNF及CP组细胞存活率均明显高于单用CP组,凋亡率均明显低于单用CP组,ATRA 100 1nmol／L组细胞存活率高于ATRA 10nmol／L组,凋亡率低于ATRA 10nmol／L组。（3）透射电镜技术观察到CP作用组可见到较多细胞呈凋亡改变,而ATRA 10nmol／L＋BDNF 50ng／ml＋CP 5μg／ml组细胞形态多数正常。结论 SY5Y对化疗药顺铂的敏感性受TrkB及BDNF水平的影响,二者水平越高越容易产生化疗耐药。     

血管活性肠肽对大鼠内毒素性休克肠道损伤保护作用的研究

目的探讨大鼠内毒素休克模型的肠道病变、血液TNF-α、IL-1β、IL-10改变和血管活性肠肽（VIP）的保护作用。方法28只成年SD大鼠随机分成3组：对照组（8只）,内毒素休克组（10只）和血管活性肠肽干预组（10只）。内毒素休克组大鼠左侧颈外静脉注射内毒素10mg／kg,血管活性肠肽干预组注射同量内毒素后,即刻注射血管活性肠肽5nmol,对照组注射等容量生理盐水。各组于实验开始后1、2、4、6h分别留取血液,用ELISA法测定TNF—α、IL-1β和IL-10水平。大鼠自然死亡和实验持续6h时放血处死,留取小肠段,进行病理学检查。结果内毒素休克组和血管活性肠肽干预组血液TNF—α、IL-1β和IL-10水平与对照组相比呈现升高（P〈0．05 or P〈0．01）,其中TNF—α于2h时达到高峰点,IL-1β和IL-10持续升高至6h时间点。血管活性肠肽干预组TNF—α和IL-1β升高幅度低于内毒素休克组,IL-10升高幅度高于内毒素休克组（P〈0．01）。注射内毒素后小肠光镜和电镜下均显示肠段病变,内毒素休克组病变明显较血管活性肠肽干预组严重。结论血管活性肠肽可减轻内毒素休克大鼠肠道病变,其保护机制与下调促炎症细胞因子和上调抑炎症细胞因子的表达有关。血管活性肠肽是脓毒症休克治疗中有潜力的免疫调节物质。     

新生儿缺氧缺血性脑病与T辅助细胞亚群功能失衡研究

目的研究缺氧缺血性脑病（HIE）新生儿T辅助细胞（Th）亚群功能失衡的特点，探讨，Th1和Th2类细胞因子与HIE严重程度之间的关系。方法酶联免疫吸附试验方法，对35例HIE患儿和15例健康对照者外周血单个核细胞（PBMO）经植物血凝素（PHA）刺激后，对培养上清液中Th1和Th2类细胞因子含量进行测定。结果经（PHA）刺激后，HIE组，Th1产生IFN-γ、IL-2水平（中位数）明显低于正常对照组（IFN-γ：106pg／ml比427pg／ml，P〈0．01。IL-2：527pg／ml比1218pg／ml，P〈0．01），而Th2产生IL-4、IL-6水平（中位数）则明显高于正常对照组（IL-4：248pg／ml vs．112pg／ml，P〈0．05。IL-6：643pg／mlVS．86pg／ml，P〈0．01）。相关分析发现：IL-6水平与HIE严重程度呈显著正相关，r=0．474，P〈0．01；IL-2、IFN-γ水平与HIE严重程度呈负相关，r分别为-0．352和-0．357，P值均〈0．05；IL-4水平与HIE严重程度无相关性，r=0．277，P〉0．05。结论HIE新生儿Th1类细胞因子水平明显降低，Th2类细胞因子水平明显增高，导致T辅助细胞亚群功能失衡，此在HIE的发病机制中起重要作用。Th类细胞因子水平与HIE严重程度相关。     

腺病毒介导的白介素10基因转导对鼠胰岛β细胞的保护作用

目的观察腺病毒介导的白介素10(IL-10)基因转导对体外及体内胰岛β细胞的保护作用。方法用携带有IL-10基因的重组腺病毒载体感染RINm5F细胞、昆明小鼠及链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠,ELISA检测IL-10基因表达、胰岛素水平,病理切片及免疫组化观察胰岛炎积分。结果 RINm5F细胞中检测到IL-10基因及蛋白的有效表达,含IL-10的重组腺病毒(Ad-IL-10)可抑制STZ致细胞凋亡作用。昆明小鼠腹腔注射Ad-IL-10后,再经STZ诱发为1型糖尿病,Ad-IL-10组胰岛炎积分明显降低。经STZ诱导的早期1型糖尿病小鼠,Ad-IL-10组与其他组相比平均血糖水平差别无统计学意义,小鼠胰岛炎症浸润程度与糖尿病对照组差别无统计学意义。结论腺病毒介导的IL-10可在胰岛RINm5F细胞有效表达,并且具有抗凋亡的能力。IL-10基因能够保护胰岛β细胞功能,促进胰岛素分泌,减少小鼠的胰岛炎和糖尿病的发生。IL-10基因对于已发生1型糖尿病早期的昆明小鼠无显著的治疗作用。     

干扰素β与丙种球蛋白治疗实验性周围神经病的机理研究

目的探讨干扰素β（IFN—β）和丙种球蛋白（IVIG）对空肠弯曲菌（CJ）脂多糖（LPS）诱导的免疫性周围神经病的治疗机理。方法健康Wister大鼠40只,体重205～230g,用CJ LPS成功诱导出免疫神经病后,随机分为IFN—β组、IVIG组、IFN—β联合IVIG组和正常对照组。IFN—β组：每隔1d,给予IFN—β1．3μg/kg皮下注射,共6周。IVIG组：每隔2周,静脉注射IVIG 400mg／（kg·d）,连续5d,共2次。IFN—β和IVIG联合组：IFN—β和IVIG的给药时间分别同IFN—β组和IVIG组。对照组：以PBS溶液（200μl/只）替代IFN-β或IVIG。分别于治疗前和治疗后第2、4、6周取血,用ELISA方法检测血清中抗GM1IgG、MMP-9和TNF—α滴度,第6周取坐骨神经进行病理学检查和免疫组化检测坐骨神经上特异性IgG结合。结果（1）3个治疗组治疗2周时,抗GM1IgG、MMP-9和TNF—α滴度与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）3个治疗组治疗4周时,抗GM1IgG、MMP-9和TNF—α滴度明显低于对照组（P〈0．01）;3组之间抗GM1IgG滴度比较差异无统计学意义（P〉0．05）;联合治疗组MMP-9和TNF—α水平低于单一治疗组（P〈0．05）。（3）3个治疗组治疗6周时,抗GM1IgG、MMP-9和TNF—α滴度、神经原纤维病变率和神经上特异性IgG结合明显低于对照组（P〈0．01）;各指标联合治疗组明显低于单一治疗组（P〈0．01）。结论IFN—β和IVIG通过对特异性体液免疫和细胞免疫的同时抑制,达到对CJ LPS诱导的免疫性周围神经病的治疗作用;IFN—β和IVIG联合应用疗效更佳。     

FMS样酪氨酸激酶3靶向RNA干扰对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖和凋亡的影响

目的探讨短发夹状干扰RNA（shRNA）诱导FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）的靶向抑制对急性单核细胞白血病（AMOL）细胞株THP-1增殖、凋亡的影响。方法设计并体外转录合成FLT3靶向shRNA（FLT3-shRNA）,转染THP-1细胞。以半定量逆转录PCR（RT-PCR）、流式细胞法（FCM）检测细胞FLT3在mRNA、蛋白水平表达,细胞计数试剂8（CCK-8）检测细胞增殖活力,FCM法检测细胞周期,DNA梯度条带（DNA Ladder）和Annexin V—FITC染色法分析细胞凋亡。结果合成的FLT3-shRNA 15nmol／L转染48h对FLT3 mRNA和蛋白的抑制率分别达（72．95±2．07）％、（65．39±5．57）％。shRNA干扰后细胞增殖活力受到抑制,48h抑制率达（36．66±3．67）％,72h达（35．56±0．73）％。转染48h细胞周期出现G0／G1期到S期的阻滞,FLT3-shRNA组G0／G1期的细胞百分比（65．71±4．47）％明显高于对照组,S期（25．11±2．70）％低于对照组。FLT3-shRNA作用48h有明显的凋亡条带出现,Annexin V-FITC检测细胞的早期凋亡率（18．59±2．07）％明显高于对照组。结论由shRNA诱导的FLT3靶向干扰可有效的抑制THP-1细胞增殖、诱导凋亡,显示其在儿童AMOL治疗中具有潜在的价值。     

刺五加皂甙诱导PCI2细胞对缺血的耐受与缺氧诱导因子-1α的表达

目的研究刺五加皂甙（ASS）预处理诱导PCl2细胞对缺血的耐受及缺氧诱导因子．1α（HIF-α）的表达。方法采用氧葡萄糖剥夺（OGD）方法在PCl2细胞上建立缺血模型。用MTT、比色分析法观察ASS预处理是否对缺血的PCl2细胞有保护作用及JC保护作用能否被P13K抑制剂LY294002所阻断。用Westem-blot法检测PCl2细胞予ASS预处理后磷酸化糖原合成激酶．3β（p-GSK-3β）和HIF-1α的表达及其表达诱导作用是否被LY294002所抑制。结果MTT结果显示，缺血9h处理后，PCl2细胞活力明显降低（P〈0．05）；ASS预处理对细胞具有保护作用，细胞活力有明显增加（F=552．6 P〈0．01）；ASS保护作用可被LY294002处理部分阻断，细胞活力有部分降低（P〈0．01）与正常对照组比，ASS预处理后p-GSK-3β和HIF-1α蛋白的表达均明显增加。ASS表达诱导作用可被LY294002处理所抑制，p-GSK-3β表达明显减少，HIF-1α表达部分减少。结论ASS预处理可诱导PCl2细胞对缺血的耐受；ASS预处理诱导PCl2细胞表达的HIF-1α蛋白可能与P13K／Ak／GSK-3信号通路的激活有关。     

阿霉素诱导Jurkat白血病细胞凋亡及上调Fas协配体和Fas相关死亡域

目的研究阿霉素诱导门血病细胞凋亡的剂量及时间关系，探索其相关的分子机制。方法分别以0．1、0．2、0．5、10mg／L的阿霉素处理人类Jurkat白血病细胞6、12、24、48h。其中一份样本在加入0．2mg／L阿霉素前用zVAD-fmk（苄氧羰-撷氨酰丙氨酰天冬氨酰氟甲基酮）颅处理。应用AnV／PI双染细胞，在流式细胞仪上分析AnV／PI双阳性的凋亡细胞。采用WGstem Blot技术检测FasL和FADD（Fas相关死亡域）的表达。结果6h时所有剂量的阿霉素诱导的凋亡细胞无显著差异（P〉0．05）．在12h，只有10mg／L诱导细胞明显凋亡。当细胞与0.2和0.5mg／L的阿霉素共同培养24h或36h，观察到调亡细胞显著增加（P〈0．001）。在zVAD-fmk存住的情况下。当细胞与阿霉素一同培养时，由阿霉素诱导的细胞凋亡完全受到抑制（P〈0.001）。随着阿霉索作用时间增加，FasL和FADD表达水平相应增加。结论在阿霉素诱导的白血病细胞凋亡中，阿霉素以剂量和时间依赖方式诱导细胞凋亡；上渊FasL可能启动FasL信号通路的激话．而caspase是最终的执行者。     

细胞焦亡在胆红素诱导小胶质细胞损伤中的作用研究

目的 探讨细胞焦亡是否参与胆红素诱导原代培养大鼠大脑皮质小胶质细胞的损伤。方法 原代培养大鼠大脑皮质小胶质细胞,随机分为胆红素组（30 μmol/L胆红素刺激）、VX-765+胆红素组（30 μmol/L VX-765预处理1 h,再用30 μmol/L胆红素刺激）、对照组（等体积二甲基亚砜处理）。改良MTT法检测小胶质细胞存活率;Western blot法检测焦亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、gasdermin D（GSDMD）表达;乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞毒性作用;不同分子量染料EtBr/EthD2（分子量394 Da/1 293 Da）染色检测细胞膜孔大小;ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子IL-1β水平。结果 胆红素刺激后,小胶质细胞存活率随时间依赖性下降;LDH释放呈时间依赖性增加;胆红素组小分子染料EtBr通过细胞膜阳性率明显高于对照组（P < 0.001）,但各组大分子染料EthD2通过率比较差异无统计学意义（P > 0.05）;胆红素刺激后0.5 h活化型Caspase-1、6 h活化型GSDMD表达增加（P < 0.05）;IL-1β水平在胆红素刺激后6 h明显增加,24 h达高峰（P < 0.001）。与胆红素组相比,VX-765+胆红素组细胞存活率升高（P < 0.05）,活化型GSDMD表达、EtBr通过率、LDH及IL-1β释放均减少（P < 0.05）。结论 细胞焦亡参与胆红素诱导的原代培养小胶质细胞损伤。     

激活的Notch1信号系统抑制前软骨干细胞凋亡及其机制研究

目的研究激活的Notch1信号系统抑制体外培养的前软骨干细胞（precartilainous stem cells，PSCs）凋亡及其机制。方法用RT-PCR检测PSCs细胞中Notch信号系统的表达，并分别向培养细胞中加入Notchl激活剂rhNF-kB、抑制剂γ-secretase inhibitor Ⅱ（MW167）和Bcl-2抑制剂HA14—1，空白对照加PBS缓冲液，在凋亡诱导剂Celecoxib诱导后，用MTT检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡和WesternBlot检测Hes-1及Bcl-2蛋白的表达。结果PSCs细胞中存在Notch1／Jagged1信号通路，rhNF-kB组细胞活力增加，凋亡较少，Hes-1蛋白和Bcb2蛋白表达明显增加，而MW17组、HA14—1组和对照组细胞凋亡明显，差异有显著性意义（P〈0．05），且HA14—1组和HA14-1协同rhNF_kB组无Bcl-2表达。结论激活的Notch1信号系统通过促进靶基因Hes-1和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达来抑制PSCs细胞凋亡。     

细胞焦亡在胆红素诱导小胶质细胞损伤中的作用研究

目的 探讨细胞焦亡是否参与胆红素诱导原代培养大鼠大脑皮质小胶质细胞的损伤。方法 原代培养大鼠大脑皮质小胶质细胞,随机分为胆红素组（30 μmol/L胆红素刺激）、VX-765+胆红素组（30 μmol/L VX-765预处理1 h,再用30 μmol/L胆红素刺激）、对照组（等体积二甲基亚砜处理）。改良MTT法检测小胶质细胞存活率;Western blot法检测焦亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、gasdermin D（GSDMD）表达;乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞毒性作用;不同分子量染料EtBr/EthD2（分子量394 Da/1 293 Da）染色检测细胞膜孔大小;ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子IL-1β水平。结果 胆红素刺激后,小胶质细胞存活率随时间依赖性下降;LDH释放呈时间依赖性增加;胆红素组小分子染料EtBr通过细胞膜阳性率明显高于对照组（P < 0.001）,但各组大分子染料EthD2通过率比较差异无统计学意义（P > 0.05）;胆红素刺激后0.5 h活化型Caspase-1、6 h活化型GSDMD表达增加（P < 0.05）;IL-1β水平在胆红素刺激后6 h明显增加,24 h达高峰（P < 0.001）。与胆红素组相比,VX-765+胆红素组细胞存活率升高（P < 0.05）,活化型GSDMD表达、EtBr通过率、LDH及IL-1β释放均减少（P < 0.05）。结论 细胞焦亡参与胆红素诱导的原代培养小胶质细胞损伤。