三氧化二砷（As2O3）诱导乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的实验研究

目的 观察不同浓度的三氧化二砷（As2O3）作用不同时间段后对乳腺癌细胞MCF-7的诱导凋亡作用和对β3GnT2 及β3GnT8表达的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法 不同浓度As2O3作用于乳腺癌细胞后,观察其对乳腺癌细胞生长状态的影响;用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察其对MCF-7细胞凋亡的影响;同时采用RT-PCR 和Western Blot 检测相关基因mRNA及蛋白的表达水平变化.结果 不同浓度的As2O3 均可抑制乳腺癌细胞株MCF-7生长,其抑制作用随剂量增大而加强,呈时间剂量依赖性.RT-PCR 结果显示：β3GnT2、β3GnT8在各个浓度As2O3剂量组作用下,与空白组比较,均有不同程度的变化.1μg/mL和2μg/mL浓度组、4μg/mL和40μg/mL浓度组在相同时间段下分别比较,均有统计学差异（P ＜0.05）.Western Blot 检测相关蛋白结果与mRNA表达水平基本一致.β3GnT2蛋白表达中,4μg/mL（4h）组、40μg/mL（4h） 组分别与4μg/mL（48h）浓度组比较,均有明显差异（P＜0.05）;而在β3GnT8蛋白表达中,40μg/mL（4h）、4μg/mL（48h） 浓度组分别与空白组比较,有显著性差异（P＜0.05）.结论 As2O3对MCF-7细胞有显著的体外生长抑制作用,其抑制作用呈剂量依赖性;As2O3在体外能诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡效应与剂量呈正相关;As2O3还能下调β3GnT2和β3GnT8基因的表达.     

长链非编码RNA LINC00222对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制的研究

目的　检测肺腺癌组织及细胞系中LncRNA LINC00222表达,探究其对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和相关作用机制。方法　采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法和Western blot 实验检测肺腺癌组织及细胞中LINC00222表达;构建LINC00222过表达载体,验证其转染效率;采用CCK-8法、Hoechst 33342/PI 染色法、划痕实验及Transwell实验分别检测过表达LINC00222对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响;采用Western blot 法检测肺腺癌细胞中P-GSK-3β,GSK-3β蛋白及β-catenin核蛋白表达;采用荧光霉素基因实验及RIP实验验证探究LINC00222影响肺腺癌生物学行为的相关作用机制。结果　肺腺癌组织中LINC00222 mRNA和蛋白表达明显低于癌旁正常组织,差异有统计学意义（t=7.388,15.100,均P<0.001）;肺腺癌细胞系中LINC00222表达明显低于人正常肺胚细胞（F=21.926,P<0.001）。过表达LINC00222后,肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力明显抑制,细胞凋亡数目明显增多（P<0.01）。过表达 LINC00222后,GSK-3β磷酸化明显降低, GSK-3β催化活性明显增强,β-catenin 核转位受到抑制（P<0.01）。LINC00222靶向调控结合GSK-3β和GSK-3β蛋白共沉淀中LINC00222表达显著高于IgG蛋白共沉淀（P<0.05）。结论　肺腺癌中LncRNA LINC00222低表达,其过表达可抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡,可能与其调控GSK-3β催化活性,抑制β-catenin 核转位有关。     

锯叶棕提取物对U266和RPM18226细胞的影响

目的探讨锯叶棕提取物对骨髓瘤细胞株U266和RPM18226细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养U266和RPM18226细胞与0---2μL,mL的不同浓度锯叶棕提取物共孵育,分别应用MTT比色法和TUNEL法测定细胞增殖及凋亡。结果锯叶棕提取物对U266细胞与RPM18226细胞的增殖具有明显的抑制作用,抑制生长50％（ED50S）的有效剂量分别为0．7和1．2μL／mL;同时在U266细胞实验中发现锯叶棕提取物0．5和1．0μL／mL共培养24h,其凋亡细胞计数分别为（9．0±0．7）％和（18．4±3．2）％,培养48h,测得凋亡细胞计数分别为（30．0±3．9）％和（45.3±5．0）％。数据显示锯叶棕提取物诱导MM细胞凋亡具有时间-剂量依赖性（P〈0．05）。结论锯叶棕提取物抑制MM细胞增殖并诱导其凋亡。     

慢病毒介导RNAi干扰β-catenin对小鼠骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

本研究通过构建β-连环蛋白（β-catenin）特异的RNAi慢病毒表达载体,探讨阻断Wnt／β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞（MSC）生物学行为的影响。设计3对针对β-cateninmRNA不同位点的shRNA编码序列,分别连接到慢病毒载体质粒PLB中,构建PLB-β-catenin／shRNAl,PLB-β-catenin／shRNA2和PLB-β-catenin／shR-NA3;将重组质粒与慢病毒包装质粒及包膜蛋白质粒共转染293FT细胞,收获病毒颗粒,浓缩后测定病毒滴度,感染Msc细胞,并应用流式细胞术分选GFP阳性细胞,Westernblot和RT-PCR验证其对细胞内β-catenin基因表达的抑制效果,筛选干扰效率最高质粒;CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V／7-AAD法检测干扰后细胞凋亡情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测MSC迁移能力。结果表明：构建的特异性慢病毒siRNA干扰组（PLB-β-catenin／shRNA2）能有效抑制β-catenin的mRNA和蛋白表达,并抑制细胞的增殖;而空载体对照组（PLBgroup）和正常对照组（controlgroup）细胞增殖无明显变化,两组之间无显著的统计学差异（P〉0．05）;流式细胞术检测结果显示,采用血清饥饿法处理后,干扰组细胞的凋亡率明显增加,但两对照组之间无统计学差异（P〉0．05）;细胞划痕和Tran-swell实验显示,干扰组MSC的迁移能力明显降低,对照组细胞迁移能力无明显变化。结论：构建的特异RNAi慢病毒能够有效抑制β-catenin基因的表达,减少细胞内目的基因mRNA和蛋白的水平,从而对MSC细胞的增殖、凋亡和迁移能力产生重要影响。     

Shh信号阻断对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响

目的研究胚胎发育相关信号通路Sonichedgehog（Shh）对人胰腺癌细胞系PANC-1生物学行为的影响。方法试验组以cyclopamine阻断Shh信号通路,并设立对照,四唑蓝（MTT）比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞增殖指数（PI）和凋亡指数（越）,Transwell侵袭小室检测两组PANC-1细胞侵袭能力的变化。结果cyclopamine对PANC-1细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时问依赖性。cyelopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0／G1期,细胞凋亡增加;PANC-1的AI为15．2±0．54,PI为38．3±0．23（P〈0．05）.Transwell侵袭小室检测对照组穿透细胞数为（96±4）个,而实验组穿透数为（43±5）个。结论shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制癌细胞的侵袭能力。     

京尼平苷调控Wnt/β-cantenin信号通路抑制胃癌转移的机制研究

目的 探讨京尼平苷（GEN）抑制人胃癌SGC-7901细胞转移的作用及其可能机制。方法 培养人胃癌SGC-7901细胞,使用GEN处理细胞,通过CCK8法检测GEN对SGC-7901细胞增殖的影响,运用Transwell实验检测GEN对SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的作用,运用Westernblot和q-PCR检测GEN对SGC-7901细胞β-catenin、E-cadherin、Vimentin和Snail蛋白及mRNA表达的作用;运用Wnt通路激活剂（LiCl）和GEN联合处理SGC-7901细胞后,观察对SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响,对β-catenin、E-cadherin、Vimentin和Snail蛋白及mRNA表达的影响。结果 Transwell实验结果显示,GEN能够抑制SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力下降,差异有统计学意义（P<0.05）。Westernblot和q-PCR结果表明,GEN能够促进E-cadherin的表达,抑制β-catenin、Vimentin和Snail的表达,差异有统计学意义（P<0.05）。与GEN组比较,W...     

丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的探讨丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制。方法 CCK8实验检测5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理人食管癌细胞EC9706 48 h及80μmol/L的丙泊酚处理细胞12h、24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况;80μmol/L的丙泊酚处理细胞72 h后,Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞的侵袭及凋亡情况;Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-13、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase 3)、β-catenin、细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达。结果 40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理组细胞存活率显著低于0μmol/L组(P0.05),在24 h、48 h、72 h的细胞存活率显著低于对照组0 h(P0.05);丙泊酚组细胞侵袭数及MMP-2、MMP-13、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率和Cleaved caspase 3蛋白显著高于对照组(P0.05)。结论丙泊酚可通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制食管癌细胞增殖及侵袭能力,诱导细胞的凋亡。     

雷帕霉素抑制人肾癌ACHN细胞生长及转移的实验研究

[目的]观察雷帕霉素（RPM）对人肾癌细胞株ACHN生长、周期、凋亡及转移的影响,探讨RPM抑制肾癌细胞生长、转移的可能机制及临床应用前景.[方法]体外培养肾癌ACHN细胞,用不同浓度（10 ng/mL、25 ng/mL）的RPM干预ACHN细胞.采用MTT法检测RPM对于ACHN细胞增殖的影响;流式细胞仪检测ACHN细胞周期及凋亡的变化;Transwell 小室法检测细胞体外侵袭能力的变化;动物体内荷瘤实验检测对ACHN侵袭转移的影响.[结果]RPM能显著抑制ACHN细胞生长增殖,且呈时间和浓度依赖性,差别有显著性意义（P〈0.05）,并促进肿瘤细胞的早期凋亡（P〈0.05）.[结论]RPM明显抑制人肾癌ACHN细胞的生长及迁移,以RPM为基础的肾癌治疗方案可能在临床中具有良好的应用前景.     

趋化因子CXCL7通过血管形成途径促进结直肠癌增殖、迁移及侵袭的机制研究

目的 探究趋化因子CXCL7对结直肠癌（CRC）细胞增殖、转移及侵袭的影响与血管生成的关系,阐明CXCL7促进CRC发展的分子机制。方法 采用qPCR及ELISA法筛选出高、低表达CRC细胞株为研究对象,采用CCK-8、EdU染色以及平板克隆形成实验测定CXCL7对结直肠癌细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测周期和细胞凋亡情况;细胞划痕实验测定CXCL7对结直肠癌细胞迁移能力的作用;Transwell实验测定CXCL7对结直肠癌细胞侵袭能力的影响。ELISA试剂盒测量培养血清VEGF水平,Western blot检测血管内皮生长因子受体（VEGF-R）表达水平。结果 细胞增殖实验48 h、72 h时各组吸光度比较：CXCL7干扰组>NC组>空白对照组,差异有统计学意义（F=7.567,17.475,P<0.05）;Transwell实验中迁移与侵袭细胞数比较：CXCL7干扰组>空白对照组>NC组,差异有统计学意义（P<0.05）;处理CRC细胞6 h后,结果显示空白对照组和NC组仅有少量小管形成,而CXCL7干扰组却形成了大量网状结构的小管。管腔形成数...     

吲哚美辛对结肠癌细胞HCT116的影响及机制探讨

目的:研究吲哚美辛对结肠癌细胞株HCT116增殖及体外侵袭的影响并对其机制进行探讨。方法:应用WST-8法和体外侵袭小室测定吲哚美辛对结肠癌细胞株HCT116增殖和侵袭能力的影响;Westen-blotting方法检测吲哚美辛作用后HCT116细胞β-连环素(β-Catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)蛋白的表达。结果:吲哚美辛能够明显抑制结肠癌细胞株HCT116的增殖,呈时间-剂量依赖性,作用24、48、72h的IC50值分别为440.36、323.90、254.37μmol/L;吲哚美辛能够明显抑制结肠癌细胞株HCT116的体外侵袭,呈剂量依赖性;吲哚美辛作用24、48、72h后,β-Catenin、CyclinD1、MMP-7蛋白表达均有下降。结论:吲哚美辛能抑制结肠癌细胞株HCT116的增殖与迁移,其作用机制之一可能是通过Wnt/β-catenin信号通路。     

地榆皂苷Ⅱ抑制结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和诱导凋亡的体外实验研究

目的 探讨地榆皂苷Ⅱ对结肠癌细胞HT-29增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用并探讨其作用机制。方法 采用CCK-8法检测地榆皂苷Ⅱ对细胞增殖的影响,采用划痕试验检测地榆皂苷Ⅱ对细胞迁移能力的影响,采用Transwell小室实验检测地榆皂苷Ⅱ对细胞侵袭能力的影响,采用流式细胞术测定地榆皂苷Ⅱ对细胞凋亡的影响,分别采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法测定地榆皂苷Ⅱ对细胞中蛋白激酶B (AKT)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信号通路mRNA和蛋白表达的影响。结果 地榆皂苷Ⅱ(0、1、5、10、20、40、60和80μmol/mL)可剂量依赖性抑制结肠癌细胞HT-29的增殖;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20μmol/mL)可剂量依赖性抑制结肠癌细胞HT-29的迁移能力;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20μmol/mL)可剂量依赖性抑制结肠癌细胞HT-29的侵袭能力;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20μmol/mL)可剂量依赖性促进结肠癌细胞HT-29的凋亡;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20μmol/mL)可剂量依赖性降低结肠癌细胞HT-29中AKT和PI3K mRNA的表达,增加Ca...     

沉默环磷腺苷效应元件结合蛋白1对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的：探究环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein, CREB1）基因沉默对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法：针对人CREB1的基因序列设计并构建2条短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA），采用慢病毒转染shRNA至人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞系抑制其CREB1的表达。将实验组分为shCREB1#1组和shCREB1#2组，同时将shSCR空载质粒转染至上述细胞系作为阴性对照组。采用实时定量PCR和Western-blot法检测转染效率；CCK-8法检测细胞的增殖能力；集落形成实验检测细胞的集落形成能力；流式细胞术检测细胞周期和凋亡率；细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力；Western-blot法检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达。结果： 在MCF-7和MDA-MB-231细胞中，相较于shSCR组，shCREB1#1和shCREB1#2组中CREB1基因的mRNA和蛋白表达水平均下降（P＜0.001）。沉默CREB1后，MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力减弱且细胞的凋亡率升高（P＜0.05）。此外，沉默CREB1可使细胞周期蛋白CDK2、CDK4、CDK6、Cyclin D1以及抗凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达水平下调而促凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达水平上调。 结论：沉默CREB1可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并诱导细胞凋亡。     

敲除成纤维细胞生长因子2基因抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移侵袭并促进细胞凋亡

目的 探索成纤维细胞生长因子2(FGF2)敲除对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖、迁移侵袭和凋亡的影响及作用机制。方法 将FGF2-sgRNA基因序列转入载体lenticrispv2构建CRISPR-cas9-FGF2稳转细胞系，Western blot检测CRISPR-cas9-FGF2稳转细胞系FGF2的蛋白敲除情况及相关凋亡蛋白指标和周期蛋白指标，将MCF-7细胞分为CRISPR-cas9-NC组（对照组）和CRISPR-cas9-FGF2组（FGF2基因敲除组），使用CCK-8实验和细胞集落形成实验检测细胞增殖能力，细胞划痕实验和transwell实验检测细胞迁移侵袭能力，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果 （1）设计的三条FGF2-sgRNA序列均与载体lenticrispv2连接成功。（2）用Western blot检测表明FGF2-sgRNA1敲除作用更明显（P <0.000 1）。（3）与对照组细胞相比，FGF2基因敲除组细胞的增殖、迁移侵袭能力明显降低（P <0.01）；周期蛋白CDK2和cyclinA蛋白表达显著降低（P <0.001）,Bax促凋亡蛋...     

黄芩素对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨黄芩素对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖和迁移能力的影响及分子机制.方法 以不同浓度黄芩素处理MM细胞株RPMI 8226和U266细胞不同时间后,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测黄芩素对MM细胞增殖的影响;用黄芩素和(或)IL-6处理RPMI 8226、U266细胞,激光共聚焦及Western blot检测处理前后细胞中β连环素(β-catenin)蛋白表达;Transwell小室实验检测不同浓度黄芩素处理前后RPMI 8226和U266细胞的迁移能力;RT-PCR检测不同浓度黄芩素处理前后细胞内β-catenin、c-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)和细胞迁移相关基因整联蛋白β7(integrin β7)基因mRNA表达.结果 黄芩素呈浓度和时间依赖性抑制RPMI 8226和U266细胞的增殖;激光共聚焦及Westem blot结果显示黄芩素能够抑制β-catenin的表达从而抵抗IL-6对MM细胞的促增殖作用;RT-PCR检测显示黄芩素能够抑制β-catenin、c-myc、cyclin D1和integrin β7的mRNA表达;Transwell小室迁移实验表明,在基质细胞衍生因子(SDF-1)的趋化下,黄芩素以浓度依赖的方式降低MM细胞的迁移能力.结论 黄芩素具有抑制MM细胞增殖和迁移的作用,其分子机制与抑制增殖相关基因β-catenin、c-myc、cyclin D1和integrin β7的表达有关.     

丙泊酚对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移及相关标志物表达的影响

目的 探讨不同浓度丙泊酚对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及对程序性死亡配体1(PD-L1)、细胞增殖核抗原(Ki-67)等相关标志物的影响。方法 体外培养人乳腺癌雌激素受体阳性细胞系MCF-7,随机将MCF-7分为3组，对每一组加入不同浓度的丙泊酚，即P₀组(空白对照组)、P₂₅组(25μg/ml丙泊酚组)和P₅₀组(50μg/ml丙泊酚组)。对三组细胞分别进行克隆形成实验、Transwell细胞迁移实验、侵袭实验、划痕愈合实验以研究各组细胞的增殖、以及细胞的迁移、侵袭变化差异。使用Western blot检测不同浓度丙泊酚做用下对人乳腺癌相关蛋白表达改变情况。结果 与P₀组及P₂₅组相比，P₅₀组乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞迁移、侵袭能力显著升高(P<0.05)。通过Western blot实验发现：P₅₀组的PD-L1、Ki-67蛋白表达显著高于P₀组(P<0.05),其中PD...     

Shh信号阻断对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响

目的研究胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog(Shh)对人胰腺癌细胞系PANC-1生物学行为的影响。方法试验组以cyclopamine阻断Shh信号通路,并设立对照,四唑蓝(MTT)比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI),Transwell侵袭小室检测两组PANC-1细胞侵袭能力的变化。结果cyclopamine对PANC-1细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性。cyclopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加;PANC-1的AI为15.2±0.54,PI为38.3±0.23(P<0.05)。Transwell侵袭小室检测对照组穿透细胞数为(96±4)个,而实验组穿透数为(43±5)个。结论shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制癌细胞的侵袭能力。     

5-氟尿嘧啶促进HPV阳性宫颈癌细胞凋亡的Wnt/β-catenin信号通路机制研究

【目的】探讨5-氟尿嘧啶促进HPV阳性宫颈癌细胞凋亡的Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路机制。【方法】HPV阳性宫颈癌细胞SiHa随机分为对照组、低剂量组(10μmol/L 5-氟尿嘧啶)、高剂量组(40μmol/L 5-氟尿嘧啶)和Wnt抑制剂(ICG-001)组(10μmol/L ICG-001),除对照组给予无菌磷酸盐缓冲液外,其余各组分别给予对应剂量的药物。比较各组细胞的增殖、凋亡情况(凋亡率和凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9)及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白(Wnt、β-catenin)的表达水平。【结果】5-氟尿嘧啶能明显抑制HPV阳性宫颈癌细胞增殖,提高细胞凋亡率和细胞凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-9的表达水平(P<0.05);5-氟尿嘧啶处理后Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt和β-catenin的表达明显减弱(P<0.05),且随着剂量的增加,上述效果越明显(P<0.05)。【结论】5-氟尿嘧啶促进HPV阳性宫颈癌细胞凋亡,可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

白藜芦醇通过抑制Wnt通路对人卵巢癌细胞增殖、迁移影响的机制研究

目的探讨白藜芦醇对人上皮性卵巢癌细胞SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测对照组(二甲基亚砜)、20μg/ml、40μg/ml的白藜芦醇和阳性对照组(40μg/ml顺铂)作用于SKOV3细胞48 h后对细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测白藜芦醇对SKOV3细胞法迁移能力的影响; Transwell实验检测白藜芦醇对SKOV3细胞侵袭能力的影响; Western blot和q-RT-PCR分别检测白藜芦醇对SKOV3细胞内Wnt3a、β-catenin蛋白质以及mRNA表达的影响。结果白藜芦醇可显著抑制SKOV3细胞的增殖抑制率,且在一定范围内呈浓度依赖性(P 0. 05);此外,白藜芦醇可显著抑制SKOV3细胞的迁移距离(P 0. 05),抑制SKOV3细胞侵袭数(P 0. 05); Western blot和q-RT-PCR实验结果显示白藜芦醇可抑制SKOV3细胞内Wnt3a、β-catenin蛋白质以及mRNA表达水平。结论白藜芦醇可抑制人上皮性卵巢癌细胞SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,这一作用可能与抑制Wnt3a/β-catenin信号转导通路有关。     

沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的探讨沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法将卵巢癌细胞分为Blank组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(siRNA-NC)组和携带wee1基因片段(siRNA-wee1)组,利用siRNA技术在卵巢癌细胞中沉默wee1基因,采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法(WB)检测3组卵巢癌细胞wee1 RNA及蛋白表达水平,采用细胞划痕试验、Transwell试验观察卵巢癌细胞平板集落形成数及卵巢癌细胞迁移、侵袭能力,采用WB观察卵巢癌细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)的表达情况。结果siRNA-wee1组卵巢癌细胞wee1 RNA和蛋白表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05),卵巢癌细胞集落形成数少于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),卵巢癌细胞迁移、侵袭能力低于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-catenin、Cyclin-D1和MMP-7表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05)。结论沉默wee1基因可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,进而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

MiR-144调控Wnt4/β-catenin信号通路抑制多发性骨髓瘤细胞恶性生物学行为的研究

目的:探讨miR-144对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制。方法:RT-PCR检测miR-144在多发性骨髓瘤细胞及多发性骨髓瘤(MM)患者血浆中的表达情况;MTT法检测miR-144模拟物转染至骨髓瘤细胞后细胞的增殖情况及细胞克隆形成能力;流式细胞术检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞周期分布情况;Tunel法检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞的凋亡情况;Transwell细胞侵袭实验与迁移实验检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞的侵袭及迁移能力;Western blot法检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞的MMP-9、MMP-2的蛋白表达水平及Wnt4/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。结果:MM细胞株及MM患者血中miR-144表达水平明显低于正常对照组(P0.05)。过表达miR-144的骨髓瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力明显降低(P0.05),细胞凋亡水平增加(P0.05)。过表达miR-144的骨髓瘤细胞的MMP-9、MMP-2、Wnt4/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平均明显低于对照组(P0.05)。结论:MiR-144能抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导其凋亡,其具体机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关。