锌指蛋白A20基因抑制缺氧诱导内皮细胞CD54的表达

 ［目的］探讨外源性锌指蛋白基因A20对缺氧诱导内皮细胞黏附分子CD54表达的影响。［方法］①培养原代人脐静脉内皮细胞，将细胞分组建立缺氧模型；②采用DOTAP脂质体介导pcDNA3.1EHA20质粒转染培养的内皮细胞,筛选抗G418的阳性克隆,经免疫荧光鉴定A20基因的表达；③采用免疫组化和原位杂交检测内皮细胞CD54的表达。［结果］A20基因在经G418筛选后的内皮细胞中得到高效表达。缺氧能诱导人内皮细胞CD54高表达，外源性A20基因能抑制75%以上由缺氧诱导的内皮细胞CD54表达,两者间相差明显(P＜0.05)。［结论］外源性A20基因能够显著抑制缺氧诱导的内皮细胞活化,有效抑制CD54的表达，可能在内皮细胞缺氧损伤中具有保护作用。     

转染锌指蛋白基因A20抑制内毒素诱导的内皮细胞IL-8表达的研究

目的探讨转染外源性锌指蛋白基因A20对内毒素诱导的内皮细胞白细胞介素-8(IL-8)表达的影响.方法DOTAP脂质体介导pcDNA3.1EHA20质粒转染人脐静脉内皮细胞,经G418筛选,免疫荧光检测A20基因的表达,双抗夹心EIISA法检测内皮细胞分泌IL-8的含量变化.结果A20基因在经G418筛选后的内皮细胞中得到高效表达;内毒素能刺激人内皮细胞分泌IL-8;A20基因能减少70%以上内毒素诱导的内皮细胞IL-8的分泌,两者间相差显著(P＜0.05).结论转染外源性A20基因能够显著抑制内毒素诱导的内皮细胞活化,有助于炎症的治疗.     

救心胶囊对缺氧损伤内皮细胞黏附分子表达的影响

【目的】以内皮细胞(EC)为研究对象，观察救心胶囊对缺氧损伤内皮细胞黏附分子释放的影响。【方法】运用免疫细胞化学技术，通过进行内皮细胞培养，观察内皮细胞缺氧损伤后，黏附分子(VCAM-1、ICAM-1)在细胞浆的表达情况。【结果】缺氧损伤使VCAM-1、ICAM-1表达显著升高。救心胶囊组，VCAM-1、ICAM-1表达显著降低【结论】救心胶囊能显著降低黏附分子表达，保护内皮细胞免受炎症介质损伤。     

锌指蛋白A20对刀豆蛋白A诱导肝损伤的保护作用

【目的】探讨锌指蛋白A20对刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)引起的肝损伤的保护作用。【方法】以刀豆蛋白A诱发小鼠肝损伤,制造肝损伤动物模型,采用尾静脉注射A20表达质粒的方法,观察A20转基因处理组和试验对照组肝组织内TNF-α(tumor necrosis factorα)、IFN-γ(interferon-γ)、IL-2(interleukin 2)细胞因子的表达水平以及肝病理损伤的程度。【结果】A20组ConA处理后肝组织TNF-α、IFN-γ、IL-2等细胞因子的mRNA表达水平及蛋白表达水平均显著低于A20对照组。病理学检查结果提示,A20处理组16 h后小鼠肝病理损伤较对照组有减轻(P<0.05)。【结论】A20能够有效抑制ConA引起的小鼠肝组织炎症反应,并减轻肝组织炎症损伤。     

救心胶囊对缺氧损伤内皮细胞黏附分子表达的影响*

[目的]以内皮细胞(EC)为研究对象,观察救心胶囊对缺氧损伤内皮细胞黏附分子释放的影响.[方法]运用免疫细胞化学技术,通过进行内皮细胞培养,观察内皮细胞缺氧损伤后,黏附分子(VCAM-1、ICAM-1)在细胞浆的表达情况.[结果]缺氧损伤使VCAM-1、ICAM-1表达显著升高.救心胶囊组,VCAM-1、ICAM-1表达显著降低.[结论]救心胶囊能显著降低黏附分子表达,保护内皮细胞免受炎症介质损伤.     

雌激素和异黄酮类药物对内皮细胞粘附分子CD54表达的影响

为探讨雌激素和异黄酮类药物对内皮细胞粘附分子ＣＤ５４表达的影响,作者采用１０ｎｇ／ｍｌ肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）处理人脐静脉内皮细胞６小时,并加用不同浓度的异黄酮（ＷＺ１,ＷＺ２）和雌激素（ＷＺ３,ＷＺ４）进行干预４８小时,而后用流式细胞仪定量测定细胞表面粘附分子ＣＤ５４的表达,并进行统计学分析。结果：①１０ｎｇ／ｍｌ的ＴＮＦα可使内皮细胞表面粘附分子ＣＤ５４的表达升高４倍,与对照组相比具有统计学差异（Ｐ〈０．０５）;②１０＾－１０ｍｏｌ／Ｌ、１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ、１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ异黄酮和异卟黄酮对由ＴＮＦα诱导的内皮细胞的ＣＤ５４表达有轻度促进作用;③哌嗪雌酚酮和雌二醇预处理内皮细胞４８小时后再加ＴＮＦα激活,内皮细胞表面ＣＤ５４平均荧光强度与单纯ＴＮＦα组相比下降明显（Ｐ〈０．０５）,各浓度组之间不具统计     

异丙酚抑制高糖诱导的脐静脉内皮细胞黏附分子表达

 目的  研究异丙酚抑制高糖诱导的脐静脉内皮细胞黏附分子的表达并探讨其可能的机制。方法  采用Histopaque-1077溶液提取人外周血单核细胞。采用一氧化氮(NO)试剂盒检测脐静脉内皮细胞NO生成。采用Western blot检测内皮细胞黏附分子、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)(总蛋白,单体及双体)、eNOS磷酸化水平及caveolin-1表达。结果  高糖上调血管内皮细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule,VCAM-1)的表达,促进单核细胞-内皮黏附,并减少NO生成。异丙酚改善高糖环境下NO生成,并抑制VCAM-1表达及单核细胞-内皮黏附。异丙酚的作用可被eNOS抑制剂L-NAME所拮抗。异丙酚能上调高糖环境下eNOS-Ser1177磷酸化水平及双体/单体比值,下调高糖环境下eNOS-Thr495磷酸化水平及caveolin-1表达。结论  异丙酚通过调节高糖环境下eNOS的磷酸化水平、单体/双体比值及caveolin-1表达,改善内皮细胞NO生成,进而抑制内皮细胞黏附分子的表达及单核细胞-内皮细胞的黏附。     

胃癌中Syndecan-1、CD54、RAB5A的表达及其相关性研究

目的探讨Syndecan-1、CD54、RAB5A在胃癌原发灶中的表达情况及其三者之间的相关性.方法用免疫组织化学染色的方法分别检测了Syndecan-1、CD54和RAB5A在46例胃癌原发灶,癌旁3.0 cm,癌旁10.0 cm,正常组织（外伤或病理证实为良性溃疡）内的表达情况.结果 Syndecan-1在胃癌原发灶内的阳性表达率为15.22%（7/46）,癌旁3.0 cm组织,癌旁10.0 cm组织,正常组织中的阳性表达率分别为28.26%（13/46）、86.96%（40/46）100%（12/12）.CD54在胃癌原发灶内的阳性表达率为67.39%（31/46）,癌旁3.0cm,癌旁10.0 cm和正常组织中分别为54.35%（25/46）,8.70%（4/46）,0.00%（0/12）.RAB5A在胃癌组织中阳性表达率为78.26%（36/46）,癌旁3.0 cm,癌旁10.0 cm和正常组织阳性表达率分别为63.04%（29/46）,17.39%（8/46）和0.00%（0/12）;Syndecan-1的表达与CD54的表达在胃癌组织中呈负相关（r=-0.351,P=0.017）.Syndecan-1的表达与RAB5A在胃癌组织中呈负相关（r=-0.364,P=0.013）;CD54与RAB5A在胃癌组织中呈正相关（r=0.645,P=0.000）.结论 Syndecan-1在胃癌原发灶组织中呈低表达,与CD54、RAB5A呈负相关,CD54和RAB5A在胃癌原发灶组织中均呈高表达,并两者正相关,可能对肿瘤进展、恶性程度的判断和发生机制具有重要意义.     

卵巢上皮癌组织中HLA I类抗原和CD54的表达及临床意义

用免疫组化ＳＡＢＣ法检测ＨＬＡＩ类抗原和ＣＤ５４的表达,结果表明,卵巢上皮癌４４份标本中,ＨＬＡＩ类抗原和ＣＤ５４的表达率分别为５９．０９％和４５．５１％,Ⅲ～Ⅳ期为ＨＬＡＩ类抗原阳性表达率显著低于Ｉ～Ⅱ期,有淋巴结转移者显著低无淋巴结转移者;肿瘤复发者显著低于未复发者。ＣＤ５４表达到与临床分期,组织分化,淋巴结转移,组织学类型及肿瘤复发无明显相关性,但无ＨＬＡＩ类抗原表达而ＣＤ５４表达的患者复发     

急性脊髓损伤时小鼠肺组织锌指蛋白A20表达

目的：研究急性脊髓损伤和（或）内毒素攻击时小鼠肺组织中锌指蛋白A20的表达规律.方法：将昆明种小白鼠220只随机分为对照组（N组,n=10）、脊髓损伤组（A组,n=70）、内毒素组（B组,n=70）和脊髓损伤合并内毒素组（AB,n=70）.以免疫组织化学（IHC）,RT-PCR和HE染色分别检测肺组织中A20蛋白、mRNA和病理损害.结果：IHCN组A20蛋白微量表达（0.142±0.012）;A组4～48h较N组显著升高（P〈0.05）;B组0.5h就出现高表达（0.202±0.020）,0.5～24h较N组显著升高（P〈0.05）,0.5～8h较A组显著升高（P〈0.05）;AB组表达最强,0.5～48h较N组显著升高（P〈0.05）,0.5～8h较A组显著升高（P〈0.05）,8～48h较B组显著升高（P〈0.05）.RT-PCRN组A20mRNA微量表达（0.883±0.033）;A组4～24h较N组显著升高（P〈0.05）;B组0.5～24h较N组显著升高（P〈0.05）,0.5～4h较A组显著升高（P〈0.05）;AB组表达最强,0.5～48h较N组显著升高（P〈0.05）,0.5～24h较A组显著升高（P〈0.05）,4～48h较B组显著升高（P〈0.05）.HEAB组：0.5～4h肺组织病理损害重,出现肺组织间质中性粒细胞浸润,上皮肿胀等,8h以后病理损害较前有所减轻,但仍比N组重.结论：在脊髓损伤的早期肺组织即出现锌指蛋白A20表达增高,合并感染时尤其明显.说明在脊髓损伤（或合并感染）情况下,锌指蛋白A20表达增加可能对机体内源性调控过度的炎症具有重要意义.     

急性脑出血患者外周血单核细胞CD36、CD54表达的临床意义

目的观察急性脑出血（ICH）患者外周血单核细胞CD36、CD54表达的变化及外周血血常规的特点。方法选择急性ICH患者（ICH组）31例及健康体检者（对照组）27例,检测血常规,用流式细胞技术检测外周血单核细胞CD36、CD54表达。结果与对照组比较,ICH组CD54表达率、白细胞计数、中性粒细胞比例均升高（P〈0．01）。发病72hICH组CD36表达率,显著高于对照组（P〈0．01）。治疗1周后外周血单核细胞CD54表达率仍明显高于对照组（P〈0．01）。结论ICH患者外周血单核细胞CD54表达上调,可能与白细胞计数升高共同参与IcH发生、发展,可作为ICH预后观察指标。     

锌指蛋白A20对抑制ox-LDL诱导的平滑肌细胞LOX-1、TLR-4表达的作用

目的 探讨锌指蛋白A20对氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的血管平滑肌细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX-1）和toll样受体-4（TLR-4）表达的作用.方法 体外培养SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）,简单随机化分成4组：A组（对照组）;B组（OX-LDL组）;C组（A20组）;D组（ox-LDL＋A20组）.收集以上各组细胞,用RT-PCR检测LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA的表达;提取核蛋白,并用western blot的方法检测NF-κ B核易位的量.结果 ox-LDL刺激大鼠主动脉平滑肌细胞后LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA的表达明显增加及核因子κ B（NF-κ B）的活化均明显增加.转染含A20基因质粒的平滑肌细胞TLR-4 mRNA的表达达到正常水平,LOX-1 mRNA的表达及NF-κ B的核移位的量甚至降低到正常水平以下.结论 ox-LDL诱导的平滑肌细胞LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA表达增加,可能由此激活TLR-4/NF-κB信号系统,启动动脉壁的炎症反应,触发动脉粥样硬化发生.A20明显抑制了ox-LDL对平滑肌细胞的上述诱导作用,可能由此阻断了ox-LDL引发的不断级联扩大的正反馈效应.阻止了动脉粥样硬化的发展.     

雌激素和异黄酮类药物对内皮细胞粘附分子CD54表达的影响

为探讨雌激素和异黄酮类药物对内皮细胞粘附分子CD54表达的影响,作者采用10ng/ml肿瘤坏死因子(TNFα)处理人脐静脉内皮细胞6小时,并加用不同浓度的异黄酮(WZ1,WZ2)和雌激素(WZ3,WZ4)进行干预48小时,而后用流式细胞仪定量测定细胞表面粘附分子CD54的表达,并进行统计学分析.结果:①10ng/ml的TNFα可使内皮细胞表面粘附分子CD54的表达升高4倍,与对照组相比具有统计学差异(P＜0.05);②10-10mol/L、10-8mol/L、10-6mol/L异黄酮和异卟黄酮对由TNFα诱导的内皮细胞的CD54表达有轻度促进作用;③哌嗪雌酚酮和雌二醇预处理内皮细胞48小时后再加TNFα激活,内皮细胞表面CD54平均荧光强度与单纯TNFα组相比下降明显(P＜0.05),各浓度组之间不具统计学差异(P＞0.05).以上结果提示:异黄酮和异卟黄酮对内皮细胞粘附分子CD54的表达无抑制作用;哌嗪雌酚酮和雌二醇可在一定程度上抑制CD54的表达,从而为抗粘附疗法提供了一条新思路.     

氯化锂调节趋化因子Fractalkine表达抑制缺氧复氧诱导的血管内皮细胞损伤

目的:观察缺氧复氧诱导人脐静脉血管内皮细胞(Human umbillcal vein endothelial cells,HUVECs)损伤和趋化因子(Fractalkine,FKN)表达变化及氯化锂(Lithium chloride,LiCl)的干预效应。方法:体外培养HUVECs并随机分为对照组、缺氧复氧组和LiCl 5、10 mmol/L组。MTT法测定HUVECs的存活率,流式细胞术检测HUVECs凋亡率,免疫细胞荧光技术检测HUVECs的FKN蛋白表达,RT-PCR技术检测HUVECs的FKN mRNA表达。结果:与对照组比较,缺氧复氧组HUVECs存活率显著降低但凋亡率显著增高(P<0.01)且FKN mRNA和蛋白质表达也显著增高(P<0.01);与缺氧复氧组比较,LiCl 5、10 mmol/L组HUVECs存活率显著增高但凋亡率显著降低(P<0.01)且FKNmRNA和蛋白质表达也明显降低(P<0.05)。结论:缺氧复氧上调FKN表达诱导HUVECs损伤(存活率降低、凋亡率增加);LiCl预处理能够下调FKN表达,显著减轻缺氧复氧导致的HUVECs损伤。     

CD56、CD54在甲状腺病变中的表达及意义

目的：检测CD56、CD54在甲状腺病变组织中的表达情况,探讨CD56、CD54的表达在甲状腺病变鉴别诊断中的作用。方法分别收集海南医学院附属医院病理科73例甲状腺乳头状癌、64例良性病变组织蜡块。将137例石蜡标本制做组织芯片。应用免疫组织化学技术检测CD56、CD54蛋白在甲状腺病变组织中的表达情况。结果 CD56在甲状腺乳头状癌组织中大多表达缺失,表达率为14%,在良性甲状腺病变组织中表达率高(92.2%),两者间表达率差异具有显著统计学意义(P<0.01)。CD54在甲状腺乳头状癌及桥本氏甲状腺炎组织中表达增高(69.9%vs 75.0%),呈弥漫阳性表达,这两组间表达差异无统计学意义(P>0.05);在其他良性甲状腺组织包括结节性甲状腺肿和滤泡性腺瘤中,CD54表达较低(3.8%),主要呈散在弱阳性表达,与甲状腺乳头状癌组织相比,其表达差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论 CD56在甲状腺乳头状癌中表达缺失,在甲状腺良性病变组织中表达增高;CD54在甲状腺乳头状癌及桥本氏甲状腺炎中高表达,联合检测CD56、CD54对甲状腺病变的鉴别诊断具有重要作用。     

缺氧促进牛视网膜血管内皮细胞VEGF的表达

目的探讨缺氧对视网膜血管内皮细胞VEGF表达的影响。方法采用细胞克隆、机械除杂法培养视网膜血管内皮细胞;四唑盐比色试验(MTT)比较正常和缺氧状态下牛视网膜血管内皮细胞的细胞数目。应用ELISA法检测正常和缺氧状态下牛视网膜血管内皮细胞VEGF的表达。缺氧状态下加入VEGF抗体后,检测VEGF的表达。结果正常状态下即可检测到VEGF的表达。缺氧状态下,牛视网膜血管内皮细胞VEGF的表达显著增加(P<0.01)。结论缺氧环境能刺激培养的牛视网膜血管内皮细胞的增殖。缺氧能刺激培养的牛视网膜血管内皮细胞VEGF的表达。     

CD40L诱导ECV-304细胞VCAM-1表达的分子机制

目的研究人类脐静脉内皮细胞(ECV-304)、CD40/CD40L系统诱导血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的分子机制.方法体外培养ECV-304,免疫印迹分析法及TransAMTM系统分别检测CD40L干预前后转染核因子-кB(NF-кB)P65的表达量及活性.阳离子脂质体介导法短暂转染NF-кB(P65)正反义寡核苷酸(ODN),流式细胞仪检测VCAM-1表达.结果CD40L干预后24 h,VCAM-1的表达显著升高(P<0.05);未干预内皮细胞核内几乎无P65蛋白的表达,CD40L刺激30 min后,P65蛋白表达显著升高(P<0.01);CD40L干预后内皮细胞核抽提物的NF-кB(P65)转录因子活性明显升高.阳离子脂质体转染P65反义ODN至内皮细胞,可以显著抑制rhsCD40L介导的VCAM-1的表达(P<0.05),转染P65正义ODN则不能抑制rhsCD40L介导的VCAM-1的表达.结论NF-кB的活化可能部分参与了CD40/CD40L介导VCAM-1表达的信号转导途径.     

刀豆蛋白A诱导人脐静脉内皮细胞表达P-ERKl／2

目的：探讨刀豆蛋白A （Concanavalin A,ConA）对CRL2480细胞（人脐静脉内皮细胞系）细胞外调节蛋白激酶（Extracellular signal-regulated kinase,ERK）1/2磷酸化的影响。方法采用MTT法检测ConA对CRL2480细胞活化的影响;采用Western印迹法检测CRL2480细胞磷酸化（p）-ERK1/2的表达;采用细胞免疫荧光技术检测p-ERK1/2在细胞内的分布。结果在5~20μg/ml范围,ConA刺激CRL2480细胞8 h的活化指数具有剂量依赖性;20μg/ml ConA显著增加CRL2480细胞的活化（P〈0.05）。ConA能够增加CRL2480细胞的p-ERK1/2表达水平（P〈0.05）,ERK途径抑制剂PD98059和U0126明显抑制p-ERK1/2表达。免疫荧光染色结果显示ConA刺激细胞的荧光信号明显高于对照细胞,荧光分布于细胞浆、细胞核周围和细胞核内。结论 ConA能够激活CRL2480细胞表达p-ERK1/2。     

携蜂毒素基因腺病毒感染对HepG2细胞CD54表达的影响

目的研究蜂毒素基因转染对肝癌细胞生物学性状的影响。方法将蜂毒素基因置于甲胎蛋白(AFP)转录调控序列驱动下,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组于腺病毒质粒中;将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,脂质体介导转染293细胞进行腺病毒的包装。携有蜂毒素基因的腺病毒感染肝癌细胞后,RT-PCR实验观察蜂毒素基因是否可以被转录,流式细胞术检测CD54表达情况。结果携蜂毒素基因的重组腺病毒载体构建成功;RT-PCR实验表明蜂毒素基因可以得到转录;流式细胞术结果表明,蜂毒素基因转染可以抑制CD54分子的表达。结论蜂毒素基因转染肝癌细胞后,可改变肿瘤细胞的生物学行为,使其恶性度降低。     

舌苔形成与CD54和EGF-R表达关系的初步研究

目的探讨舌苔形成与CD54和EGF-R表达的关系。方法采用免疫组化S-P法检测不同舌苔黏膜组织中CD54和EGF-R表达的情况。结果CD54在薄白苔中表达最高,剥苔中表达最低;EGF-R在薄白苔中表达最高,正常对照和剥苔中无表达。结论CD54和EGF-R表达水平的变化与舌苔形成有密切的关系。