AngⅡ受体对内向整流性钾流的影响

目的　探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对心肌细胞内向整流性钾流 (IK1)的调节作用及其机制。方法　应用膜片钳技术研究AngⅡ对豚鼠单个心肌细胞IK1的影响。结果　AngⅡ促进IK1,内向整流作用减弱。单通道记录表明 ,IK1的加大是由AngⅡ激活了一种非常态钾电流 ,这不受Losartan和Glibenclamide (ATP敏感性钾通道阻滞剂 )的影响。结论　这种非常态钾电流由AT2 受体介导 ,可能是IK1的非常态激活或AngⅡ经AT2 受体激活的一种钾电流     

人参皂甙R_（b1）对在负膜电位开放的Ba~（2 ）和Ca~（2 ）通透Ca~（2 ）通道的阻滞作用

人参皂甙R_(b1)有抗心律失常抑制心肌收缩力等Ca~(2 )通道阻滞样作用。我们应用PC技术在培养的Wistar大鼠单个心室肌细胞上,以细胞贴附式记录了人参皂甙R_(b1)对该型钙通道单通道活动的影响。同时以钙通道激动剂Bay K8644为对照,证实了人参皂甙R_(b1)250μg/ml显著抑制钙单通道活动,使钙通道的开放概率减少、平均开放时间缩短,平均关闭时间延长,而对通过钙通道的离子流幅度无影响。Bay K8644 5μmmol/L使开放概率增加、平均开放时间延长、平均关闭时间缩短。     

PPARγ激动剂抑制AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞合成肿瘤坏死因子

目的:研究过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)激动剂(罗格列酮)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激乳鼠心肌细胞合成肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响,旨在探讨罗格列酮作用于心肌细胞时,在细胞因子调节中发挥的作用.方法:采用酶消化和差速贴壁法分离乳鼠心肌细胞.罗格列酮预处理30min后,用AngⅡ与乳鼠心肌细胞共同培养24h,然后分别采用ELISA和RT-PCR法检测细胞培养上清液TNF-α含量和心肌细胞TNF-αmRNA表达水平.结果:AngⅡ刺激乳鼠心肌细胞TNF-α蛋白质合成和mRNA表达增加,罗格列酮抑制AngⅡ的作用(P＜0.01),且在一定范围内,浓度越高作用越强.结论:罗格列酮抑制AngⅡ刺激的乳鼠心肌细胞TNF-αmRNA表达和蛋白质合成,罗格列酮这一作用为治疗慢性心力衰竭提供了新的思路.     

黄芪总皂甙对单个钙离子通道活动的影响

采用连细胞电压钳方法，在培养的大鼠乳鼠单个心肌细胞上记录Ｌ、Ｔ、Ｂ三型钙通道的单通道活动。浸浴液中加入黄芪总皂甙２００μｇ·ｍＬ－１后，开放时间、关闭时间、开放概率、电流幅值四项钙通道指标无明显改变。说明黄芪总皂甙对钙通道无影响。     

血管紧张素Ⅱ对心脏成纤维细胞TRPM7通道功能的影响

目的:研究心脏成纤维细胞(CFs)膜上的TRPM7通道的电生理特性。方法:将分离培养出来的乳鼠CFs用6种不同浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预至12h,分别测量各组胶原蛋白的表达水平,从而挑选出最佳诱导纤维化的AngⅡ浓度,最佳浓度的AngⅡ分别将CFs干预至5个不同的时间,记录相应的CFs膜上的TRPM7电流及各组的胶原蛋白水平。结果:诱导心脏纤维化最大的AngⅡ浓度是1nmol/L,最佳诱导纤维化浓度干预0,6,12,24,48h后CFs的TRPM7与胶原蛋白Ⅲ的表达水平最初升高,于12h达到最高水平,之后呈现递减水平,且在CFs膜上记录到的TRPM7内外向电流也呈现相应的先增加后降低趋势,与两种蛋白的表达水平正相关。结论:CFs膜上的TRPM7电流在AngⅡ的作用下,呈现先增加后减少的趋势,是AngⅡ介导CFs增殖与凋亡从而导致心脏纤维化的重要途径之一。     

黄芪总皂甙对单个钙离子通道活动的影响

采用连细胞电压钳方法，在培养的大鼠乳鼠单个心肌细胞上记录Ｌ，Ｔ，Ｂ三型钙通道的单通道活动。浸浴液中加入黄芪总皂甙２００μｇ．ｍＬ＾－＾１后，开放时间，关闭时间，开放概率，电流幅值四项钙道指标无明显改变。说明黄芪总皂甙对钙通道无影响。     

结缔组织生长因子在血管紧张素Ⅱ诱导的人近端肾小管上皮细胞肥大中的作用

目的　探讨结缔组织生长因子 (CTGF)在介导血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导的人肾近端小管细胞肥大中的作用。方法　用 [3 H] 亮氨酸掺入、考马斯亮蓝蛋白质定量技术分别观察抗CTGF抗体对AngⅡ诱导的人肾近端小管上皮细胞株 (HK 2 )细胞内蛋白质从头合成及细胞内蛋白质含量的影响 ;用流式细胞分析技术观察抗CTGF抗体对AngⅡ诱导的细胞周期分布改变的影响 ;用扫描电镜技术观察抗CTGF抗体对AngⅡ诱导细胞形态变化的影响。 结果　AngⅡ可以显著诱导细胞内[3 H] 亮氨酸掺入和细胞内总蛋白质含量增加的作用 ,呈浓度和时间依赖性 ;抗CTGF抗体对AngⅡ诱导的细胞内总蛋白质含量、[3 H] 亮氨酸掺入量的增加有抑制作用 ,呈浓度和时间依赖性。AngⅡ作用于细胞 4 8h后 ,细胞平均直径、G0 G1期细胞百分比显著增加 (均P <0 0 1) ,抗CTGF抗体可显著抑制AngⅡ诱导的细胞直径增加和细胞周期阻滞 (均P <0 0 5或P <0 0 1)。结论　AngⅡ可以诱导肾小管上皮细胞发生肥大 ,CTGF可能介导了AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞肥大效应。     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡及牛磺酸的作用

目的 观察外源性血管紧张家Ⅱ(AngⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用，并探讨牛磺酸对其可能的作用和影响。方法 利用培养的乳鼠心肌细胞，随机分成不同AngⅡ浓度(10^—9—10^—5M)诱导的细胞凋亡组和不同浓度牛磺酸(10、20、40mmol/L)作用组，观察培养24h后的各组心肌细胞存活率，光镜和电镜观察凋亡细胞形态结构变化．TUNEL法检测凋亡，流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果 10^—9M的AngⅡ可诱导心肌细胞发生凋亡，心肌细胞呈现特征性的凋亡形态结构变化；TUNEL检测观察到凋亡细胞核呈黄褐色改变；流式细胞仪PI染色呈现典型的亚二倍体峰。牛磺酸可以明显的降低血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡率(P＜0．05)。结论 一定浓度的AngⅡ可以引起体外培养的乳鼠心肌细胞发生调亡，且牛磺酸可对这种凋亡产生保护作用。     

淀粉样β-蛋白31-35片段对急性分离的海马神经元延时整流钾通道的影响(英文)

β 淀粉样蛋白 (amyloidβ protein ,AβP)的神经毒性作用已被广泛报道 ,其毒性作用机制可能与改变细胞膜上原有离子通道尤其是钾通道的活动有关。目前 ,AβP对K 通道的作用报道不一 ;在单通道水平上AβP对K 通道产生的早期效应尚不清楚。本研究采用单通道膜片钳技术 ,观察了AβP的 31 35片段 (AβP31 35 )对急性分离的海马神经细胞内面向外式 (inside out)膜片的延迟整流钾电流 (IK)单通道活动的影响 ,旨在从通道水平揭示AβP的神经毒性机制。结果发现 :①IK 通道的电导较低 ,分布在 9～ 38pS范围之内 ,平均电导只有 (2 4.4± 7.9) pS (n =2 9) ;通道电流的翻转电位 (- 6 5mV)接近K 的平衡电位 ;140mmol/LCsCl取代溶液中KCl后 ,通道电流能立即消失 ,但含有EGTA的无Ca2 浴液对通道活动没有影响。②经灌流系统给予膜片内侧 5 μmol/L的AβP31 35后 ,IK 通道平均开放频率和开放概率 (PO)分别下降了 (70 .45± 35 .75 ) % (P <0 .0 1)和 (86 .91± 1.13) % (P <0 .0 1) ,有些膜片甚至显示出通道活动的完全丧失 (PO=0 )。③给予 5 μmol/L的AβP31 35后 ,IK通道的平均开放时间减少了 (4 7.0 7± 38.8) % (P <0 .0 5 ) ;平均电流幅度虽有 (16 .6± 12 .6 ) %的增加 ,却无统计学意义 (P >0 .0 5 )。以上表明     

姜黄素对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠原代心肌细胞LOX-1mRNA表达的影响

目的 观察姜黄素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠原代培养心肌细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA表达的影响.方法 体外培养SD大鼠乳鼠原代心肌细胞,按细胞处理方式不同分为4组:阴性对照组(A组),AngⅡ组(B组),AngⅡ+LOX-1抗体组(C组),AngⅡ+姜黄素组(D组).C、D组分别给...     

AngⅡ对背景钾流的影响

目的：应用膜片钳技术研究了生物活性递质－血管紧张素Ⅱ（AngⅡ)对豚鼠单个心肌细胞内向整流性钾流（IK1）的影响。方法：探讨递质－受体－通道间的相互作用。结果：AngⅡ促进IK1,内向整流作用减弱。单通道记录表明,IK1的加大是由AngⅡ激活了一种非常态钾电流,它不受Losartan和Glibenclamide（ATP敏感性钾通道阻滞剂）的影响,提示这种非常态钾电流由AT2受体介导,可能是IK1的非常态激活或AngⅡ经AT2受体激活的一种钾电流。     

Rg_2与R_f对钙通道作用的单通道分析

在单个Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心室肌细胞上，用连细胞电压钳法，观察人参三醇组皂甙单体Ｒｇ２、Ｒｆ６０μｍｏｌ·Ｌ－１对钙通道单通道活动的影响，并与钙通道阻滞剂异博定７９μｍｏｌ·Ｌ－１、钙通道激动剂ＢＡＫ８６４４５μｍｏｌ·Ｌ－１对照，证明Ｒｇ２对钙通道有阻滞作用，其机理在于使钙通道的开放时间缩短、开放概率减少、关闭时间延长，而对Ｂａａ＋流幅值无明显影响，Ｒｆ可缩短Ｌ型钙通道的开放时间、延长关闭时间、降低开放概率。     

HO-1对AngⅡ诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的作用

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的作用.方法 原代培养1～2 d Wistar乳鼠心肌细胞,随机分为对照组、AngⅡ组(加入AngⅡ)、HO-1诱导组(加入AngⅡ和HO-1 诱导剂氯化血红素hemin)和HO-1抑制组(加入AngⅡ和HO-1抑制剂锌原卟啉-9 ZnppIX).采用Western blotting检测心肌细胞HO-1蛋白的表达,Hoechst及流式细胞仪Annexin-V/PI检测细胞凋亡.结果 AngⅡ组较对照组心肌细胞凋亡率明显升高(P ＜0.05);HO-1诱导组较AngⅡ组细胞凋亡率明显下降(P＜0.05),HO-1蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);而HO-1抑制组较AngⅡ组心肌细胞凋亡率及HO-1蛋白表达水平均无明显变化(P＞0.05).结论 HO-1对AngⅡ诱导的乳鼠心肌细胞凋亡具有抑制作用.     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，AngⅡ)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)增殖规律及凋亡的影响。方法：用MTT、细胞计数和^3H-TdR掺入法研究不同浓度和作用时间下AngⅡ对VSMCs增殖的影响；用流式细胞技术研究AngⅡ对VSMCs周期与凋亡的影响；用透射电镜观察AngⅡ作用下VSMCs超微结构的变化。结果：AngⅡ能促进VSMCs增殖，在一定范围内，其作用强度与AngⅡ浓度及作用时间呈正相关；AngⅡ在高浓度(10^-4mol／L)时，使VSMCs凋亡率增加：AngⅡ促使细胞周期由G0／G1向S／G2-M期转变，使细胞由收缩表型向合成表型转变。结论：AngⅡ对VSMCs的促增殖作用具有剂量和时间依赖性，大剂量AngⅡ有诱导VSMCs凋亡的倾向。     

PD098059抑制血管紧张素Ⅱ对心肌细胞活力的影响

目的 :观察分裂酶原激活的蛋白激酶系统 (MAPK)特异阻断剂PD0 980 5 9对心肌细胞活力与增殖能力的影响 ,探讨细胞内信号传递通路的阻断是否能有效地干预细胞能量代谢 ,为寻找新的心衰的预防与治疗药物提供实验依据。方法 :利用培养的乳鼠心肌细胞 ,根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于MTT产生蓝紫色结晶产物formazan这一原理 ,应用比色法测定血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对培养心肌细胞的活力的影响和PD0 980 5 9的干预作用。结果 :与对照组相比 ,AngⅡ在 12h之内使formazan产物的OD值逐渐上升 ,12h达到高峰 ,此后开始下降 ,至 2 4h已低于正常水平 ,它们的OD值之间均有显著的统计学差异 (P <0 0 5或 0 0 1) ,PD0 980 5 9可以显著的拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响。 结论 :该结果提示PD0 980 5 9可以显著的拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响。这对了解AngⅡ在心功能不全代偿和心衰发生中的作用及临床上应用细胞内信号系统阻断剂治疗和预防心衰具有重要参考价值     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导培养乳鼠非心肌细胞增殖的影响

[目的]探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养乳鼠非心肌细胞增殖的影响.[方法]在AngⅡ诱导培养的SD乳鼠非心肌细胞中,应用Ang-(1-7),通过测定非心肌细胞DNA、蛋白质合成、细胞数目等指标,观察非心肌细胞增殖情况.[结果]Ang-(1-7)呈剂量依赖性抑制AngⅡ诱导培养的乳鼠非心肌细胞的DNA及蛋白质合成,与单纯AngⅡ组相比,Ang-(1-7)10、10-8、10-7、10-6mol/L分别减少[3H]thymidine掺入21%、31%、35%、36%,减少[3H]Leucine掺入15%、25%、31%、32%.Ang-(1-7)还能减少AngⅡ诱导培养的乳鼠非心肌细胞数目(AngⅡ组吸光度0.86±0.10;AngⅡ+Ang-(1-7)组0.78±0.09,P＜0.05),其作用能被非选择性血管紧张素Ⅱ拮抗剂[Sar1Thr8]AngⅡ抑制.[结论]Ang-(1-7)能抑制AngⅡ诱导的乳鼠非心肌细胞增殖.     

MAPKs阻断剂对乳鼠心肌细胞能量代谢的影响

目的 :在原代培养的心肌细胞上观察分裂酶原激活的蛋白激酶系统 (MAPKs)特异阻断剂PD0 980 5 9对心肌细胞活力与增殖能力的影响 ,旨在探讨细胞内信号传递通路的阻断是否能有效地干预细胞能量代谢 ,为寻找新的心衰预防与治疗药物提供实验依据 .方法 :利用培养的乳鼠心肌细胞 ,根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于MTT产生蓝紫色结晶产物formazan这一原理 ,应用比色法测定血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对培养心肌细胞的活力的影响和PD0 980 5 9的干预作用 .结果 :AngⅡ在 12h内使formazan产物的值逐渐上升 ,12h达到高峰 (A值 :0 .36 4 3± 0 .0 2 4 1) ,此后开始下降 ,至2 4h已低于正常水平 (A值 :0 .2 785± 0 .0 912 ) ,它们的值之间均有显著性统计学差异 (P <0 .0 5或 0 .0 1) ,PD0 980 5 9可以显著地拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响 .结论 :PD0 980 5 9可以显著地拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响     

阿魏酸钠抑制心肌成纤维细胞增殖的作用及机制

目的:研究阿魏酸钠(SF)对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用及其机制。方法:培养新生鼠心肌成纤维细胞分为3组:对照组、AngⅡ(10-7mol/L)组和AngⅡ+SF组。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期改变;免疫荧光法检测TGFβ1蛋白表达。结果:AngⅡ作用24h后MTTOD值显著高于对照组(P<0.01)。不同浓度SF(0.04mg/ml,0.08mg/ml,0.16mg/ml)组MTTOD值均显著低于AngⅡ组(P<0.01),呈剂量依赖性。AngⅡ组S期细胞百分率明显高于对照组,G0/G1期细胞百分率则明显低于对照组(P<0.01)。AngⅡ+SF组S期细胞百分率显著低于AngⅡ组,G0/G1期细胞百分率显著高于AngⅡ组(P<0.01),且呈剂量依赖性。AngⅡ组TGFβ1蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),AngⅡ+SF组显著低于AngⅡ组(P<0.01)。结论:阿魏酸钠可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,其效应呈现剂量依赖性,作用机制与降低TGFβ1蛋白表达有关。     

血管紧张素Ⅱ对的人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响

目的 :研究血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mR NA表达的影响。方法 :采用体外培养人近端肾小管上皮细胞株 (HPTC) ,分别观察不同浓度(0、10 -9、10 -7、10 -5mol·L-1)AngⅡ处理 48h ,或用AngⅡ (浓度为 10 -7mol·L-1)处理不同时间 (0、12、2 4、48、72h)对HPTC结缔组织生长因子 (CTGF)mRNA表达的影响 ,CTGFmRNA表达采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法测定。结果 :AngⅡ (10 -7mol·L-1)作用于HPTC12h后 ,细胞CTGFmRNA的表达开始增加 ,72h达最高水平 ,与对照组相比 ,AngⅡ作用 48h后显著增加〔(0 0 97± 0 0 15 )vs(0 63 2± 0 0 41) ,P <0 0 1〕 ;无AngⅡ的DMEM培养HPTC ,72h内细胞CTGFmRNA水平未见明显改变 (P >0 0 5 )。不同浓度 (10 -9、10 -7、10 -5mol·L-1)AngⅡ作用于HPTC 48h ,CTGFmRNA的表达均有增加 ,分别是对照组 (0mol·L-1)的 1 5、5 5和 7 4倍 (P <0 0 1) ,对扩增产物进行测序证实与基因库中人CTGF的cDNA序列一致。结论 :AngⅡ呈时间和剂量依赖性地刺激HPTCCTGFmRNA表达 ,此结果提示AngⅡ可能通过促进CTGF表达而参与小管间质纤维化的发生     

TNF-α对培养乳鼠心肌成纤维细胞的作用

目的:探讨不同浓度TNF-α对培养乳鼠心肌成纤维细胞增殖、分泌AngⅡ、胶原及AT1受体表达的影响。方法:原代培养SD乳鼠心肌成纤维细胞,采用MTT法检测心肌成纤维细胞增殖,羟脯氨酸测定法观察成纤维细胞培养上清胶原含量,酶免法检测心肌成纤维细胞培养液AngⅡ含量,免疫细胞化学法观察心肌成纤维细胞膜AT1受体的表达变化。结果:TNF-α呈浓度依赖性的促进培养的乳鼠心肌成纤维细胞分泌AngⅡ和胶原,促进心肌成纤维细胞增殖及AT1受体的表达。结论:TNF-α促进心肌成纤维细胞分泌AngⅡ介导了心肌纤维化而参与心肌改建。