早发冠心病患者高密度脂蛋白抗HUVEC凋亡的作用机制

目的通过细胞实验探究早发冠心病(PCHD)患者高密度脂蛋白(HDLPCHD)与健康人群HDL(HDLhealth)抗人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡作用是否有区别及其可能机制。方法采集PCHD患者和与之相匹配的健康人血样,并提取HDL;不同浓度氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理HUVEC 24 h,MTT检测细胞存活率,明确ox-LDL引起HUVEC凋亡的合适浓度;不同浓度、不同时间的HDLhealth预处理HUVEC后,再用合适浓度的oxLDL处理HUVEC 24 h,MTT检测细胞存活率,明确HDLhealth预处理HUVEC的最适浓度与最适作用时间;用最适浓度HDLhealth、HDLPCHD对HUVEC进行最适作用时间的预处理,再用合适浓度的ox-LDL处理HUVEC 24 h,MTT检测细胞存活率。Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒进行流式细胞检测,Western blot检测Caspase 3、Caspase 9的蛋白表达,用试剂盒测定活性氧(ROS)活性,使用Lipoprint脂蛋白分析仪分析HDLhealth和HDLPCHD亚组分(HDL1-HDL10)分布情况。结果 100 mg/L ox-LDL处理HUVEC 24 h后细胞存活率为60.34%,较空白处理组明显降低(P0.05);200 mg/L HDLhealth预处理HUVEC 18 h后,细胞存活率为82.01%,可以明显减弱ox-LDL对细胞的损伤;200 mg/L HDLhealth显著抑制100 mg/L ox-LDL诱导的HUVEC凋亡及Caspase 3、Caspase 9的蛋白表达和ROS产生;200 mg/L HDLPCHD预处理HUVEC 18 h后,细胞存活率为65.5%,其作用较HDLhealth减弱;200 mg/L HDLPCHD可抑制100 mg/L ox-LDL诱导的HUVEC凋亡及Caspase 3、Caspase 9的蛋白表达和ROS产生,但作用较HDLhealth减弱;HDLPCHD亚组分大颗粒(HDL1-HDL3)含量较HDLhealth低(28.5%±5.7%比46.8%±15.2%),而小颗粒(HDL8-HDL10)含量较HDLhealth高(21.4%±7.8%比10.9%±5.4%)。结论 HDLPCHD与HDLhealth比较,可能由于其亚组分大颗粒(HDL1-HDL3)含量较HDLhealth低,而小颗粒(HDL8-HDL10)含量较HDLhealth高,导致其抗氧化功能减弱,抑制ox-LDL诱导内皮细胞凋亡的功能亦减弱,从而减弱或丧失抗动脉粥样硬化的作用。     

干扰Sestrin2表达对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察干扰Sestrin2表达对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响。方法用ox-LDL处理HUVEC复制内皮细胞损伤模型。Western blot检测不同浓度ox-LDL处理HUVEC不同时间Sestrin2的蛋白表达水平及转染Sestrin2 siRNA后Sestrin2的蛋白表达水平;流式细胞术检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC凋亡率的影响;Western blot检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC中Caspase-3表达的影响及ox-LDL对HUVEC中JNK通路的影响。结果不同浓度(20、50和100 mg/L)的ox-LDL处理HUVEC 24 h均能明显上调Sestrin2表达;50 mg/L ox-LDL处理HUVEC不同时间(24 h和48 h)均能明显上调Sestrin2表达,24 h达高峰;转染Sestrin2 siRNA能明显抑制Sestrin2的表达;ox-LDL能明显诱导HUVEC凋亡,转染Sestrin2 siRNA能明显促进由ox-LDL诱导的HUVEC凋亡;ox-LDL能明显诱导p-JNK和p-c-Jun的表达,且SP600125能明显抑制由ox-LDL诱导的Sestrin2表达。结论 ox-LDL通过JNK/c-Jun信号通路诱导Sestrin2表达,干扰Sestrin2表达能明显促进ox-LDL诱导的HUVEC凋亡。     

骨髓间充质干细胞拮抗氧化型低密度脂蛋白

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响及有关机制.方法 将对数生长期的HUVEC分成三组:对照组单纯培养HUVEC;ox-LDL组的HUVEC给予100 mg/L ox-LDL培养24 h;ox-LDL+ MSC组使用细胞培养池共同培养HUVEC和MSC,并加入100mg/L ox-LDL培养24 h.采用流式细胞术检测HUVEC的凋亡情况,采用ELISA检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)的含量,并通过Real-timePCR检测HUVEC中凋亡相关基因Bcl-2与Bax mRNA的表达情况.结果 在100 mg/L ox-LDL作用24 h后,细胞凋亡率明显上升,细胞培养上清液中TNF-α、VEGF含量明显上升,Bcl-2 mRNA表达下调,而Bax mRNA表达上调.MSC与HUVEC共培养可增加上清液中VEGF含量,减少TNF-α含量,上调Bcl-2 mRNA表达,下调Bax mRNA表达,使内皮细胞凋亡率明显下降.结论 MSC可以拮抗ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡,可能与其分泌VEGF、抑制炎性反应并上调Bcl-2 mRNA表达及下调BaxmRNA表达有关,为MSC治疗动脉粥样硬化等内皮损伤性疾病进一步提供了理论基础.     

甘木通总黄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导血管上皮细胞凋亡的影响及其相关通路分析

目的探讨甘木通总黄酮(total flavonoids of clematis filamentosa, TFC)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL)诱导血管上皮细胞凋亡的影响。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)随机分为对照组、ox-LDL组、低剂量组(TFC 25μg/ml)、中剂量组(TFC 50μg/ml)、高剂量组(TFC 100μg/ml)。检测细胞存活率和细胞凋亡率,采用二氢乙啶-活性氧荧光探针法检测活性氧水平;采用酶联免疫吸附法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛和一氧化氮(NO)水平,蛋白印迹分析法检测Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和沉默信息调节因子1(SIRT1)表达。结果与对照组比较,ox-LDL组HUVEC存活率、SOD、NO、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2及SIRT1蛋白表达水平显著降低,HUVEC凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达、活性氧及丙二醛水平显著升高(P0.05)。与ox-LDL组比较,低、中、高剂量组HUVEC存活率依次升高[(68.55±1.35)%、(76.63±2.34)%、(87.01±2.32)%vs(53.37±2.19)%,P0.05],HUVEC凋亡率依次降低[(16.08±0.43)%、(9.96±0.30)%、(3.77±0.26)%vs(23.49±0.87)%,P0.05]。与ox-LDL组比较,低、中、高剂量组细胞内Bax、Caspase-3蛋白表达、活性氧及丙二醛水平水平依次降低,Bcl-2蛋白、SOD、NO、SIRT1蛋白、p-PI3K和p-Akt水平依次升高(P0.05)。结论 TFC能够抑制ox-LDL诱导的HUVEC凋亡,可能与激活PI3K/Akt/SIRT1通路相关。     

非诺贝特对过氧化物酶体增殖物激活受体α和单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的观察非诺贝特对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、单核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARα)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法体外培养HUVEC株,第3~5代用于实验。实验分3组:1空白对照组;2ox-LDL组(100 mg/L);3非诺贝特组:先将非诺贝特10、50、100μmol/L分别作用于内皮细胞24 h,然后加ox-LDL(100 mg/L)作用于细胞24 h。采用细胞酶联免疫吸附法分析检测细胞培养上清液PPARα、MCP-1含量;采用四唑盐比色法检测各孔的吸收度(OD),以评价增殖效果。结果与空白对照组比较,100 mg/L ox-LDL促进内皮细胞增殖(PO.01),非诺贝特呈剂量依赖性地抑制ox-LDL诱导的内皮细胞增殖(P0.01)。100 mg/L ox-LDL促进MCP-1分泌。10、50、100μmol/L非诺贝特能明显促进ox-LDL诱导的HUVEC分泌PPARα(P0.01),促进效应呈浓度依赖性。10、50、100μmol/L非诺贝特能明显抑制ox-LDL诱导的HUVEC分泌MCP-1(P0.01),抑制效应呈浓度依赖性。结论非诺贝特呈剂量依赖性促进ox-LDL诱导的人HUVEC分泌PPARα,抑制人HUVEC分泌MCP-1,抑制内皮细胞增殖,保护内皮功能,从而发挥贝特类调脂外抗动脉粥样硬化作用。     

双去甲氧基姜黄素对星型孢菌素诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨双去甲氧基姜黄素(BDMC)对星型孢菌素(STS)诱导的原代心肌细胞凋亡的影响。方法常规培养C57BL/6J小鼠原代心肌细胞,分为4组:对照组、STS组、BDMC预处理+STS组、BDMC组。CCK-8法检测心肌细胞生存率,1unel检测心肌细胞凋亡情况,Caspase-3酶活性试剂盒检测caspase-3活性,活性氧检测试剂盒检测心肌细胞内活性氧(ROS)水平。结果终浓度为100μmol/L的BDMC预处理能显著提高心肌细胞生存率降低caspase-3酶活性,降低心肌细胞凋亡率和细胞内ROS水平(P0.05)。结论 BDMC可通过降低STS处理后的心肌细胞内ROS水平,抑制心肌细胞凋亡,达到保护损伤心肌细胞的作用。     

乙醛脱氢酶2通过抗氧化减少氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮祖细胞凋亡

目的探讨乙醛脱氢酶2(ALDH-2)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮祖细胞(EPC)氧化应激和凋亡中的作用及分子机制。方法培养人外周血EPC,分别用空白对照、10 mg/L ox-LDL和1μmol/L Alda-1(ALDH-2特异性激活剂)预处理+10 mg/L ox-LDL干预,再分别采用DAPI、JC-1和DCFH-DA染色EPC,检测EPC的凋亡水平、活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位,采用Western blot评价EPC的Caspase-3信号通路激活情况。结果对照组、ox-LDL组和Alda-1+ox-LDL组的EPC凋亡率分别为4.9%±0.4%、17.9%±2.9%和7.5%±0.8%,差异有显著性(P0.05,n=6)。对照组、ox-LDL组和Alda-1+ox-LDL组的EPC发生线粒体膜电位丢失的细胞比率分别为3.6%±0.7%、28.5%±5.3%和12.4%±1.3%,组间差异有显著性(P0.05,n=6)。ox-LDL组和Alda-1+ox-LDL组的ROS水平相对于对照组分别为319.7%±23.5%和152.7%±9.4%,差异有显著性(P0.05,n=6)。而ox-LDL能够增加Caspase-3表达,但Alda-1预处理可能抑制Caspase-3的表达(P0.05,n=6)。结论ALDH-2可以减少EPC内ROS水平,保护线粒体膜电位,减少EPC的凋亡,而这与Caspase-3有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对晚期糖基化终产物诱导HUVEC凋亡的影响及可能的作用机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对晚期糖基化终产物(AGE)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响及可能的作用机制。方法用200 mg/L AGE培养HUVEC 24 h;以50、100μmol/L EGCG预处理8 h后再用200 mg/L AGE作用于HUVEC;对照组用200 mg/L牛血清白蛋白作用于HUVEC 24 h。噻唑蓝比色法测定细胞活性,Hoechst-33258染色观察HUVEC形态变化,Annexin V-FITC/PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡,活性氧检测以反映HUVEC内氧化应激水平。结果与对照组相比,AGE组HUVEC发生染色质固缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学改变,细胞活性降低(P0.01),细胞凋亡率升高(P0.01),细胞内活性氧水平增加(P0.01)。EGCG预处理后能够使细胞凋亡的形态学改变明显减轻,细胞活性升高(P0.01),细胞凋亡率减低(P0.01),活性氧水平降低(P0.01);EGCG作用呈浓度依赖性。结论 EGCG呈浓度依赖性抑制AGE诱导的HUVEC凋亡,这一作用可能通过抑制HUVEC内氧化应激反应而实现。     

和厚朴酚对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的探讨和厚朴酚对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)所诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用及其机制。方法体外培养HUVECs,采用细胞增殖-毒性检测(CCK8试剂盒法)检测不同浓度(0.1、1、10、50、100μmol/L)和厚朴酚对正常HUVECs的毒性作用;采用100 mg/L ox-LDL诱导24 h建立HUVECs损伤细胞模型,同时给予不同浓度和厚朴酚,CCK8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测活性氧(ROS)水平,比色法测定细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)以及谷胱甘肽(GSH)的水平;采用流式细胞仪检测凋亡水平;免疫印迹法检测凋亡相关蛋白和内质网应激(ERS)相应的信号通路改变。结果低浓度(0.1、1、10μmol/L)和厚朴酚对HUVECs细胞无毒性作用,高浓度(50、100μmol/L)和厚朴酚干预下细胞增殖能力减弱。与对照组比较,ox-LDL组细胞增殖受到明显抑制(P0.05);而不同浓度和厚朴酚(0.1、1、10μmol/L)处理后,细胞增殖能力逐渐恢复(P0.05)。Ox-LDL组较对照组ROS水平明显增加(P0.05);而ROS水平随着厚朴酚浓度增加不断减少(P0.05)。同时,与ox-LDL组比较,和厚朴酚处理后细胞上清中SOD、CAT和GSH水平增加,MDA水平降低(P均0.05)。与ox-LDL组比较,和厚朴酚处理组HUVECs凋亡水平明显下降(P0.05),Bcl-2/Bax比率增加,cleaved caspase3表达下降(P均0.05)。而且与对照组比较,ox-LDL组内质网应激相关蛋白p-elF2α、p-PERK、ATF4和CHOP的表达增加,而和厚朴酚处理后上述蛋白表达均显著下降(P均0.05)。结论和厚朴酚可能通过抑制氧化应激和内质网应激保护ox-LDL诱导的内皮细胞损伤。     

琥珀酸通过活性氧途径诱导人脐静脉内皮细胞焦亡

目的探讨琥珀酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)焦亡的影响及其调控机制。方法用琥珀酸类似物琥珀酸二乙酯(DS)处理HUVEC 24 h,比色法检测细胞内琥珀酸含量,Western blot检测细胞焦亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D N端(GSDMD-N)的含量;ATP测定试剂盒以及活性氧(ROS)荧光探针分别检测琥珀酸对HUVEC的ATP以及ROS生成的影响。ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)检测ROS在琥珀酸诱导HUVEC焦亡中的作用。琥珀酸氧化抑制剂丙二酸二甲酯(DMM)检测琥珀酸氧化代谢对ROS产生的影响。结果DS促HUVEC内琥珀酸蓄积,上调焦亡相关蛋白Caspase-1、IL-1β、IL-18、GSDMD-N和NLRP3的表达,抑制ATP生成并上调ROS产生。NAC抑制琥珀酸诱导的ROS生成,并下调上述焦亡相关蛋白的表达。DMM下调琥珀酸诱导的ROS产生以及HUVEC的焦亡。结论琥珀酸通过氧化代谢上调ROS生成,进而促进HUVEC焦亡。     

沉默MAP4K4通过调控PPARγ/ABCA1通路缓解ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAP4K4)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用及其机制.方法 采用100mg/Lox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)建立细胞损伤模型.RT-PCR检测HUVEC 中MAP4K4的mRNA表达水平.Western blot 法测定MAP4K4、Ba...     

软脂酸通过丝裂原活化蛋白激酶通路促进血管内皮细胞凋亡

目的探讨软脂酸(PA)诱导的血管内皮细胞凋亡中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的作用。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分对照组、PA组、MAPK通路干预组[分别先用p38抑制剂SB203580、氨基末端激酶(JNK)抑制剂PD98059、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂SP600125干预]再分为PA+SB组、PA+PD组、PA+SP组。流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测caspase-3、磷酸化p38、JNK和ERK1/2表达水平;分光光度法检测caspase-3的活性。结果与对照组比较,PA组、PA+SB组、PA+PD组、PA+SP组HUVEC凋亡及caspase-3表达和活性明显增加,PA组磷酸化p38MAPK表达明显增加(P<0.05)。与PA组比较,PA+SB组HUVEC细胞凋亡率、caspase-3表达和活性明显降低(P<0.05);而PA+PD组和PA+SP组HUVEC凋亡率、caspase-3表达和活性无明显变化(P>0.05)。结论 PA通过p38MAPK通路促进内皮细胞凋亡。     

Role of caspases in Ox-LDL-induced apoptotic cascade in human coronary artery endothelial cells

Oxidized low-density lipoprotein (ox-LDL) induces apoptosis in endothelial cells. However, steps leading to ox-LDL-induced apoptosis remain unclear. We examined the role of ox-LDL and its newly described receptor LOX-1 in the expression of intracellular pro- and antiapoptotic proteins and caspase pathways in human coronary artery endothelial cells (HCAECs). Cells were cultured and treated with different concentrations (10 to 80 microg/mL) of ox-LDL for different times (2 to 24 hours). Ox-LDL induced apoptosis in HCAECs in a concentration- and time-dependent manner. Ox-LDL also activated caspase-9 and caspase-3, but not caspase-8. After ox-LDL treatment, there was a significant release of activators of caspase-9, including cytochrome c and Smac from mitochondria to cytoplasmic compartment, and their release was not affected by treatment of cells with inhibitors of either caspase-8 or caspase-9. Ox-LDL also decreased expression of antiapoptotic proteins Bcl-2 and c-IAP (inhibitory apoptotic protein)-1, which are involved in the release of cytochrome c and Smac and activation of caspase-9, in a concentration- and time-dependent manner. On the other hand, ox-LDL did not change the expression of Fas-associated death domain-like interleukin-1beta-converting enzyme-inhibitory protein (FLIP) and proapoptotic protein Fas, which are required for the activation of caspase-8. Further, ox-LDL did not cause the truncation of Bid, which implies the activation of caspase-8. In other experiments, pretreatment of HCAECs with the caspase-9 inhibitor z-LEHD-fmk, but not the caspase-8 inhibitor z-IETD-fmk, blocked ox-LDL-induced activation of caspase-3 and apoptosis. As expected, pretreatment with the caspase-3 inhibitor DEVD-CHO inhibited ox-LDL-induced activation of caspase-3 and resultant apoptosis. The proapoptotic effects of ox-LDL were mediated by its receptor LOX-1, because pretreatment of HCAECs with antisense-LOX-1, but not sense-LOX-1, blocked these effects of ox-LDL. These findings suggest that ox-LDL through its receptor LOX-1 decreases the expression of antiapoptotic proteins Bcl-2 and c-IAP-1. This is followed by activation of apoptotic signaling pathway, involving release of cytochrome c and Smac and activation of caspase-9 and then caspase-3.     

氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞Fractalkine表达的影响及机制分析

目的 观察氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞Fractalkine表达的影响并探讨其可能作用机制.方法 采用胰蛋白酶消化法原代培养人脐静脉内皮细胞,取2～5代用于实验,随机分为:①对照组用RPMI1640培养基;②氧化型低密度脂蛋白不同浓度(5、25、50和75 mg/L)组;③氧化型低密度脂蛋白作用不同时间(6、12、24、48和72 h)组;④氧化型低密度脂蛋白+p38MAPK特异性阻断剂SB203580组;⑤p38MAPK特异性阻断剂SB203580组.用RT-PCR及EusA法检测Fractalkine mRNA及蛋白表达水平,用Western blot法检测p38MAPK磷酸化表达水平.结果 ①氧化型低密度脂蛋白在一定浓度范围及作用时间呈时间-剂量依赖方式诱导Fractalkine mRNA及蛋白表达增加,最佳作用时间为48 h,最佳作用浓度为50 mg/L;②与对照组比较,氧化型低密度脂蛋白诱导组人脐静脉内皮细胞p38MAPK磷酸化表达水平显著增加(P<0.05);使用SB203580干预后p38MAPK磷酸化水平明显下降,与氧化型低密度脂蛋白诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05).③预先用p38MAPK特异性阻断剂SB203580(20 μmol/L)与内皮细胞共同孵育60 min后,再加入氧化型低密度脂蛋白作用48 h后,Fractalkine表达水平明显降低,与氧化型低密度脂蛋白组比较有统计学差异(P<0.05).结论 氧化型低密度脂蛋白可诱导内皮细胞Fractalkine表达增加,其作用机制可能是通过p38MAPK信号转导通路.     

PARP-1在脱氧胆酸钠促结肠癌细胞增殖中的作用

结肠癌的发生与肠腔内脱氧胆酸引起的DNA损伤有关,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）对DNA损伤具有修复作用.目的：探讨PARP-1在脱氧胆酸钠促结肠癌细胞增殖中的作用及其可能机制.方法：选用不同浓度的脱氧胆酸钠、PARP-1抑制剂5-氨基异喹啉酮（5-AIQ）或两者联合分别作用于人结肠腺癌细胞株HT-29.MTT实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,免疫细胞化学染色检测环氧合酶-2（COX-2）、caspase-3、PARP-1蛋白表达.结果：10～50 μmol/L脱氧胆酸钠能促进HT-29细胞增殖,增加COX-2、PARP-1蛋白表达,减低caspaae-3蛋自表达.100μmol/L 5-AIQ单独作用对HT-29细胞增殖无明显影响,但能减低COX-2、PARP-1蛋白表达.与单独作用相比,10μmol/L脱氧胆酸钠与100 μmol/L 5-AIQ联合能显著抑制HT-29细胞生长,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,COX-2、PARP-1蛋白表达减低,caspase-3蛋白表达无明显变化.结论：COX-2与PARP-1在脱氧胆酸钠促结肠癌细胞增殖的过程中可能存在相互作用,PARP-1抑制剂5-AIQ可能用于预防脱氧胆酸诱发的结肠癌.     

人剪切修复基因D介导ox-LDL促进HUVEC凋亡作用

目的探讨人剪切修复基因D(XPD)是否介导氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡。方法以ox-LDL建立HUVEC凋亡模型。用脂质体将XPD-siRNA转染HUVEC,给予ox-LDL处理。实验分6组:空白对照组;阴性对照siRNA组;XPD-siRNA组;ox-LDL组;ox-LDL+阴性对照siRNA组;ox-LDL+XPDsiRNA组。MTT测定细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期;用RT-PCR和Western blot检测XPD、Bax和Bcl-2的表达。结果建立HUVEC凋亡模型ox-LDL的最佳浓度为100 mg/L。与阴性对照siRNA组相比,XPDsiRNA组的细胞凋亡率明显下降(P0.05),存活率明显增加(P0.01),G0/G1期细胞减少(P0.05)、S期细胞增加(P0.05),XPD、Bax表达降低(P均0.05),Bcl-2表达增高(P0.05);与空白对照组相比,ox-LDL组细胞凋亡率明显增加(P0.01),细胞存活率下降(P0.05),G0/G1期细胞增加(P0.05)、S期细胞明显减少(P0.01),XPD、Bax表达升高(P均0.05),Bcl-2表达降低(P0.05);与ox-LDL+阴性对照siRNA组相比,ox-LDL+XPD-siRNA组细胞凋亡率下降(P0.05),细胞存活率明显增加(P0.01),G0/G1期细胞减少(P0.05)、S期细胞增加(P0.05),XPD、Bax表达降低(P均0.05),Bcl-2表达增高(P0.05)。结论 XPD能介导ox-LDL促进HUVEC凋亡作用。     

氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是否可以诱导血管内皮细胞产生胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)。方法:将25mg/L及50mg/L的ox-LDL与原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共育6h,用RT-PCR检测HUVEC TSLP mRNA的表达、免疫组织化学染色检测HUVEC TSLP蛋白的表达,ELISA法检测培养上清中TSLP的浓度。结果:对照组HUVEC几乎不表达TSLP;ox-LDL刺激6h后,HUVEC可表达TSLPmRNA,胞浆中存在TSLP;上清中TSLP的浓度显著高于对照组,并且随ox-LDL刺激浓度的升高,TSLP的表达升高。结论:ox-LDL可诱导血管内皮细胞产生TSLP,这一作用可能在血管的炎症反应中起作用。     

芪丹通脉片联合骨髓间充质干细胞修复损伤内皮细胞半胱天冬酶和c-凋亡抑制因子的表达

目的：研究中药复方芪丹通脉片（QDTMP）逆转内皮细胞损伤的机制,为中药治疗及干细胞修复血管疾病提供理论依据。方法：采用全骨髓贴壁法和酶消化法分别分离骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stemcell,MSC）和人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）,采用免疫荧光法对HUVEC的标志性抗原FⅧ进行鉴定。将HUVEC接种在Tanswell下室,用高同型半胱氨酸（HCY）诱导凋亡,24h后将MSC接种在Tanswell上室,并分别加入0.15%、1.5%、15%QDTMT血清,以流式细胞仪观察凋亡情况,透射电子显微镜观察HCY诱导HUVEC凋亡的形态学改变,采用Westen blot法检测半胱天冬蛋白酶（caspase）-3,及其抑制蛋白c-凋亡抑制因子（IAP）-1,c-IAP-2的表达。结果：损伤（EC＋HCY）组的HUVEC细胞凋亡率较正常对照（EC）组显著增加（P〈0.01）;修复干预后的凋亡率明显下降（P〈0.05-〈0.01）,Westen blot法结果显示各修复组活化的caspase-3明显减弱,并且各修复组的c-IPI-1,c-IPI-2的表达增强,其中各种变化都以QDTMP15%血清组的变化最明显。结论：含QDTMP血清联合MSC能通过提高c-IPI-1,c-IPI-2抑制caspase-3的活化,逆转由HCY诱导的HUVEC凋亡。     

血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因沉默抑制人脐静脉内皮细胞表达分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1

目的探讨血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因沉默后能否抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的表达。方法分别用不同浓度的氧化型低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共孵育,及预先对人脐静脉内皮细胞转染pGenesil-1 LOX-1 shRNA后再用氧化型低密度脂蛋白刺激,半定量RT-PCR、Western blot及酶联免疫吸附法检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的mRNA和蛋白表达。结果氧化型低密度脂蛋白能呈浓度依赖性诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的mRNA和蛋白表达(P<0.01)。用RNA干扰抑制血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达后,显著抑制了氧化型低密度脂蛋白诱导的分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论氧化型低密度脂蛋白能呈浓度依赖性诱导人脐静脉内皮细胞中分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1表达;这种诱导作用可以被血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因沉默抑制。     

氧化低密度脂蛋白、荷叶生物碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的影响

目的：了解不同浓度氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）及荷叶生物碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1（ABCA1）表达的影响。方法：用佛波酯（PMA）诱导THP-1源性单核细胞分化为巨噬细胞：以不同浓度的ox-LDL孵育其24h;50mg/L的ox-LDL孵育使该细胞成为泡沫细胞,再以不同浓度荷叶生物碱对其进行干预24h。以PCR和蛋白质免疫印迹法（Western blot）分别检测不同浓度ox-LDL及荷叶生物碱干预下各组细胞ABCA1的表达。以油红O染色观察各组细胞。结果：镜下：ox-LDL处理组细胞内脂滴的大小与多少随着ox-LDL的浓度的增加而增加;随荷叶生物碱浓度的升高而减少。ABCA1mRNA表达量：ox-LDL各组的表达量均较空白对照组明显升高[25mg/L组：（1.4677±0.0907）,50mg/L组：（2.0510±0.1065）,100 mg/L组：（1.5356±0.0903）比0mg/L组：（1.00）,P均〈0.05],荷叶生物碱各组细胞的表达量[荷叶生物碱25mg/L：（1.0460±0.0580）,50mg/L：（0.8391±0.0661）,100mg/L：（1.1003±0.0752）]表达量均较单纯50mg/L ox-LDL干预组（0.5136±0.0632）明显升高（P均〈0.05）。ABCA1蛋白的表达与ABCA1mRNA表达水平改变相一致。结论：ox-LDL可上调PMA诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞内ABCA1的表达,使其细胞内脂质蓄积。荷叶生物碱既使上述细胞内ABCA1表达上调,又使其细胞内脂质蓄积减少。