祛风宣肺方对咳嗽高敏感性豚鼠神经源性炎症的作用及机制研究

目的探讨祛风宣肺方对咳嗽高敏感性豚鼠神经源性炎症的作用及机制。方法 48只豚鼠随机分为正常组、模型组、辣椒平组及祛风宣肺方组,每组12只。采用环磷酰胺、卵蛋白和氢氧化铝制备咳嗽高敏感豚鼠模型。造模成功后正常组及模型组予生理盐水灌胃;辣椒平组予瞬时受体电位阳离子通道V1(TRPV1)抑制剂辣椒平腹腔注射(1μmol/kg),每日1次;祛风宣肺方组予祛风宣肺方灌胃(5 g/kg),每日1次。给药7 d后辣椒素雾化测定各组豚鼠的咳嗽次数,肺功能仪检测不同浓度氯化乙酰胆碱激发下豚鼠的气道阻力,HE染色法观察各组豚鼠肺组织的病理变化,RT-PCR法测定各组豚鼠肺组织中TRPV1、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)的基因表达。结果与正常组比较,模型组咳嗽次数,气道阻力,肺组织TRPV1、SP、CGRP基因表达增加(P0.05);与模型组比较,祛风宣肺方组、辣椒平组豚鼠咳嗽次数,气道阻力,肺组织TRPV1、SP、CGRP基因表达降低(P0.05);祛风宣肺方组肺组织TRPV1、SP、CGRP基因表达低于辣椒平组,差异有统计学意义(P0.01)。与正常组比较,模型组肺组织结构破坏及炎症反应明显,辣椒平组及祛风宣肺方组肺组织结构较模型组改善,炎症水平降低。结论祛风宣肺方可降低咳嗽高敏感豚鼠的气道敏感性,其作用机制可能与抑制TRPV1进而减轻气道神经源性炎症有关。     

蝉芩颗粒调控NGF-ERK1/2信号通路对PM2.5致大鼠气道神经源性炎症的影响

【目的】观察蝉芩颗粒调控神经生长因子(NGF)—细胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)信号通路对PM2.5所致大鼠气道神经源性炎症的影响。【方法】采用PM2.5气道滴注染毒大鼠模型,将40只SD大鼠随机分为5组,即盐水对照组,PM2.5组,蝉芩颗粒低、中、高剂量组,每组8只。盐水对照组、PM2.5组予生理盐水灌胃2周,蝉芩颗粒低、中、高剂量组分别给予剂量为4.42、9.36、12.78 g·kg~(-1)·d~(-1)的蝉芩颗粒灌胃2周。采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠肺组织和背根神经节NGF、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)、ERK1/2、磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)、丝裂原细胞外激酶1/2(MEK1/2)蛋白表达。采用免疫组化法检测肺组织NGF、P物质(SP)、SP受体(NK-1R)蛋白表达。【结果】(1)Western-blot结果:与盐水对照组比较,PM2.5组肺组织及背根神经节中NGF、pERK1/2、pMEK1/2蛋白表达升高(P0.05或P0.01)。与PM2.5组比较,蝉芩颗粒中、高剂量组大鼠肺组织及背根神经节中NGF、pERK1/2、pMEK1/2蛋白表达降低(P0.05或P0.01)。(2)免疫组化结果:与盐水对照组比较,PM2.5组大鼠肺组织NGF、NK-1R表达升高(P0.01);与PM2.5组比较,蝉芩颗粒各剂量组的大鼠肺组织中的NGF、NK-1R表达降低(P0.01)。【结论】蝉芩颗粒可通过NGF-ERK1/2信号通路减少下游速激肽的释放,从而减轻PM2.5所致大鼠气道神经源性炎症。     

八肽胆囊收缩素对缺氧缺血性细胞损伤模型的干预作用

目的：研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对缺氧缺血神经细胞凋亡的干预作用,以及凋亡过程中对神经生长因子(NGF)蛋白及NGF mRNA表达的影响。方法体外培养新生大鼠大脑皮层神经细胞7 d,作为空白对照组(A组),用50μmol/L谷氨酸浸泡处理后建立缺氧缺血细胞损伤模型(B组/模型组),将CCK-8分别以浓度1×10-6 mol/L (C组)、1×10-7 mol/L (D组)、1×10-8 mol/L (E组)进行干预,作用后继续培养细胞24 h,采用原位末端标记技术检测各组细胞凋亡率、免疫细胞化学检测NGF蛋白表达,原位杂交技术检测NGF mRNA表达。结果 A组细胞有少量凋亡,凋亡率为(8.49±4.54)%,C组和D组细胞凋亡率分别为(3.87±5.64)%、(7.84±4.19)%,较B组的(17.53±6.93)%明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05),而E组凋亡率为(13.27±3.41)%,与B组比较差异无统计学意义(P>0.05);A组未检测出NGF蛋白表达(OD值0),C组[OD值(0.3432±0.00681)]和D组[OD值(0.3012±0.00187)]较B组[OD值(0.2837±0.00769)] NGF蛋白表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05),E组[OD值(0.2752±0.00373)]与B组比较差异无统计学意义(P>0.05);A组有少量NGF mRNA表达[OD值(0.2866±0.00441)],C组[OD值(0.3474±0.01004)]和D组[OD值(0.3294±0.01922)]较B组[OD值0.3012±0.00187)] NGF mRNA表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05),E组[OD值(0.2968±0.00378)]与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CCK-8能够抑制缺氧缺血细胞模型凋亡,减轻神经细胞损伤的程度,其神经保护机制与促进NGF蛋白及NGF mRNA表达增加有关。     

神经生长因子及其受体在哮喘大鼠肺组织的变化以及对气道炎症的影响

目的：探讨神经生长因子（NGF）和其受体酪氨酸激酶受体A (trkA)和总神经营养因子受体( p75)变化对哮喘大鼠气道炎症的影响。方法：通过鸡卵蛋白致敏激发建立哮喘模型,并将32只SD大鼠随机分为4组：正常对照组、哮喘组、外源性NGF干预组（NGF组）及抗NGF抗体干预组（抗NGF组）。各组测定支气管肺泡灌洗液(BALF)总细胞及细胞分类计数,并行支气管肺组织切片HE染色观察病理改变;通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测哮喘组和对照组肺组织NGF mRNA,4组肺组织trkA和p75 mRNA表达变化。结果：哮喘组与对照组比较,BALF总细胞计数、嗜酸性粒细胞（Eos）计数及淋巴细胞（Lym）计数显著增多（均P<0.001）,支气管肺组织炎症表现显著;肺组织NGF mRNA及trkA和p75 mRNA表达明显增强（均P<0.01）;哮喘组NGF mRNA与BALF细胞总数、Lym数呈正相关（均P<0.001）。NGF组与哮喘组比较,BALF总细胞、Eos及Lym计数均显著增多（均P<0.01）,支气管肺组织炎症表现更为显著,p75和trkA mRNA表达明显增强（均P<0.05）。抗NGF组与哮喘组比较,BALF总细胞、Eos及Lym计数显著减少（均P<0.001）,支气管肺组织炎症表现显著减轻,p75和trkA mRNA表达明显减弱（均P<0.01）。结论：致敏哮喘大鼠肺组织内NGF mRNA表达水平显著增高,并与气道炎症密切相关;NGF上调trkA和p75 mRNA表达,从而增强NGF的功能效应,共同参与哮喘的气道神经源性炎症。     

祛风宣肺方对咳嗽敏感性增高豚鼠TRPA1、SP、CGRP mRNA表达的影响

目的 探讨祛风宣肺方对咳嗽敏感性增高豚鼠气道神经源性炎症的作用机制.方法 将40只雄性SPF级健康豚鼠随机分为空白组、模型组、中药组、西药组,每组10只.除空白组外,其余各组建立咳嗽敏感性增高豚鼠模型,造模成功后,空白组及模型组予生理盐水灌胃,中药组予祛风宣肺方灌胃,西药组予1 mM HC-030031雾化,每天1次,...     

实验性视网膜脱离时神经生长因子对凋亡相关蛋白表达的影响

目的研究神经生长因子(NGF)对实验性视网膜脱离(RD)后视网膜细胞凋亡相关基因c-fos、bcl-2、Fas-L与caspase-3表达的影响。方法20只大鼠右眼和左眼分别设为实验组(NGF组)和实验对照组(PBS组),另设立正常对照2只。通过在视网膜下注射透明质酸钠的方法建立视网膜脱离(RD)动物模型后,右眼在玻璃体腔内注射NGF 5μg/次(1 g/L),每4 d注射1次,作为NGF组;左眼注射PBS作为实验对照组。两组在建立模型后1.5、3、6、12 h和1、2、4、8、16、32 d分别取眼球,采用免疫组化学法对视网膜细胞的bc l-2、Fas-L、caspase-3和c-fos进行标记。结果Fas-L、bc l-2、caspase-3和c-fos在实验各组均有表达,并随着时间的变化而变化。NGF组的各基因蛋白表达与PBS组相比差异有统计学意义(P<0.05)。NGF组的c-fos蛋白表达与PBS组相比,表达高峰时间延迟,且表达量下降(P<0.05)。结论实验性RD后给予外源性NGF能促进bc l-2基因的表达,抑制c-fos基因和Fas-L的表达,影响caspase-3的激活和表达,从而抑制RD后视网膜细胞凋亡的发生。     

P物质及其受体在小鼠免疫性肝炎中的作用

目的观察P物质（SP）及其受体NK-1R介导的神经源性炎症在小鼠免疫性肝炎发病中的作用和可能机制。方法小鼠尾静脉注射刀豆蛋白A（Con A）建立免疫性肝炎模型组,注射生理盐水作为对照组。HE染色观察肝脏病理变化;肝组织匀浆SP测定采用酶联免疫吸附(ELISA)法;同时应用RT PCR法对各组动物肝脏组织中NK-1RmRNA的表达水平进行相对定量比较。结果模型组肝脏损害严重,以肝细胞肿胀和免疫细胞浸润为特征;肝组织匀浆SP含量模型组(507.25±30.35) 显著高于对照组 (238.59±21.90) (P＜0.01);而且模型组NK-1R mRNA的表达显著上调（P＜0.05）。结论P物质及其受体参与了小鼠免疫性肝炎的起始阶段,并在炎症的激发和扩大方面发挥了重要作用。     

实验性视网膜脱离时神经生长因子对凋亡相关蛋白表达的影响

目的 研究神经生长因子(NGF)对实验性视网膜脱离(RD)后视网膜细胞凋亡相关基因c-fos、bcl-2、Fas-L与caspase-3表达的影响.方法 20只大鼠右眼和左眼分别设为实验组(NGF组)和实验对照组(PBS组),另设立正常对照2只.通过在视网膜下注射透明质酸钠的方法建立视网膜脱离(RD)动物模型后,右眼在玻璃体腔内注射NGF 5 μg/次(1 g/L),每4 d注射1次,作为NGF组;左眼注射PBS作为实验对照组.两组在建立模型后1.5、3、6、12 h和1、2、4、8、16、32 d分别取眼球,采用免疫组化学法对视网膜细胞的bcl-2、Fas-L、caspase-3和c-fos进行标记.结果 Fas-L、bcl-2、caspase-3和c-fos在实验各组均有表达,并随着时间的变化而变化.NGF组的各基因蛋白表达与PBS组相比差异有统计学意义(P<0.05).NGF组的c-fos蛋白表达与PBS组相比,表达高峰时间延迟,且表达量下降(P<0.05).结论 实验性RD后给予外源性NGF能促进bcl-2基因的表达,抑制c-fos基因和Fas-L的表达,影响caspase-3的激活和表达,从而抑制RD后视网膜细胞凋亡的发生.     

神经生长因子调控哮喘神经源性炎症Ras-MAPK信号转导通路

目的：探讨神经生长因子调控哮喘气道神经源性炎症的信号转导通路。方法：36只SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘组及抗NGF组。制作卵蛋白致敏大鼠哮喘模型，采用免疫组织化学方法观察正常大鼠和哮喘大鼠背根节和肺组织中pan-Ras，pERK，c-fos蛋白的表达，并以抗NGF抗体干预，了解其对哮喘大鼠pan-Ras，pERK，c-fos蛋白表达的影响。应用MAPK特异性抑制剂PD98059以及蛋白激酶C特异性激动剂PMA作用正常人支气管上皮细胞（NHBEC），免疫印迹法半定量检测Ras-MAPK信号转导途径中total-ERK，pERK及c-fos蛋白表达变化。结果：哮喘大鼠背根节及肺组织中pan-Ras，pERK，c-fos免疫反应较正常对照组大鼠明显上调（P〈0．01），经抗NGF干预后背根节和肺组织中pan-Ras，pERK，c-fos免疫反应较哮喘组大鼠明显减弱（P〈0．01）。免疫印迹结果显示NGF组磷酸化的ERK1／2蛋白及c-fos蛋白水平较正常对照组显著增高。PD98059可明显抑制ERK1／2的活化及c-fos蛋白的产生。PMA可刺激NGF诱导NHBEC表达磷酸化ERK1／2及c-fos蛋白。结论：NGF可能调控了哮喘神经源性炎症Ras-MAPK信号转导通路。     

哮喘豚鼠气道内NK-1R mRNA表达及其含量的研究

目的:研究哮喘豚鼠气道内神经激肽1受体(NK-1R)mRNA的分布及相对含量.方法:用卵蛋白超声雾化法制作哮喘豚鼠模型;原位杂交技术检测NK-1R mRNA,光镜观察其在气道内表达的部位.图像分析测定NK-1R mRNA的相对含量.结果:哮喘组NK-1R mRNA表达程度明显高于正常组;NK-1RmRNA分布于气管上皮细胞上层细胞表面、黏膜下层、血管周围上皮细胞、炎性细胞的表面和平滑肌细胞、腺体细胞表面.结论:NK-1R参与了卵蛋白诱导的哮喘豚鼠发病机制.     

大鼠局灶-局灶缺血预处理后脑组织c-fos的表达及神经细胞凋亡测定

目的:探讨脑缺血预处理后脑组织原癌基因c-fos的表达及其对神经细胞凋亡的影响.方法:90只大鼠随机等分为假手术组(A组)、假预处理缺血组(B组)和预处理缺血组(C组)3组.采用Longa法建立局灶脑缺血(MCAO模型,短暂性脑缺血20 min作为预处理(PC,PC)后24 h给予永久性MCAO(PMCAO.各组大鼠均于第2次手术12 h(n=25)或24 h(n=5)后用红四氯氮唑(TTC)染色观察脑梗死的体积,采用流式细胞仪检测大鼠前脑皮质细胞凋亡率,采用原位杂交和免疫组织化学方法对脑缺血再灌注后前脑皮质c-fos mRNA和蛋白进行检测.结果:C组PMCAO后12 h、24 h脑梗死体积较B组减小(P＜0.05);C组前脑皮质c-fos mRNA的表达高于A、B组(P＜0.05或0.01,c-fos)蛋白的表达高于A组(P＜0.01、低于B组(P＜0.05), 而凋亡细胞百分率较B组下降(P＜0.01).结论:脑缺血预处理可诱导c-fos mRNA和蛋白的表达,并抑制缺血诱导的神经细胞凋亡.     

脉络丛上皮细胞改良体外纯化培养及其分泌神经再生相关因子的特点

目的 探讨脉络丛上皮细胞(CPECs)的体外纯化培养方法及其分泌脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、睫状神经营养因子(CNTF)和胶质源性神经营养因子(GDNF)的特点.方法 取SD新生大鼠侧脑室脉络丛,分离CPECs并进行传代培养及纯化,采用免疫荧光化学法进行CPECs鉴定.将CPECs分为原代培养组(A组)、传1代培养组(B组)及传2代培养组(C组),并检测各组BDNF、NGF、CNTF和GDNF mRNA及蛋白的表达情况.结果 经荧光显微镜鉴定,所获细胞均为CPECs.BDNF、GDNF的mRNA及蛋白在A组、B组及C组均有表达,B组及C组的表达均较A组降低,C组的表达较B组低(P ＜0.05);NGF、CNTF的mRNA及蛋白在A组、B组及C组也均有表达,B组及C组的表达较A组增加,C组的表达较B组低(P＜0.05).结论 改良体外纯化培养CPECs方法可行.CPECs体外具有分泌BDNF、NGF、CNTF和GDNF的能力,而且具有一定周期规律性.     

哮喘及呼吸道合胞病毒感染小鼠的神经生长因子、白血病抑制因子的表达及地塞米松的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)、白血病抑制因子(LIF)在支气管哮喘小鼠及呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠的表达,两者是否存在相同的神经源性机制,寻找治疗哮喘的新靶点。方法100只健康Balb/c纯系小鼠随机分为5组:正常对照组,RSV组,哮喘组,哮喘合并RSV组,地塞米松组。HE染色观察肺组织病理变化,RT-PCR技术进行肺组织NGF mRNA及LIF mRNA的定量分析,免疫组织化学方法检测NGF蛋白及LIF蛋白。结果 RSV组镜下可见肺泡隔增宽,肺泡上皮肿胀,间质水肿。哮喘组及哮喘合并RSV组小鼠肺泡间隔增宽,支气管管腔变小,管壁增厚,小血管、细支气管及肺泡周围可见大量炎症性细胞,上述改变哮喘合并RSV组较哮喘组表现明显,而地塞米松组较RSV组表现减轻,正常对照组无炎症细胞浸润。各组均有NGF mRNA及LIF mRNA、NGF蛋白及LIF蛋白表达,哮喘合并RSV组表达最强,哮喘组及RSV组均较正常对照组表达增多,地塞米松组较RSV组表达减少。结论 RSV感染时肺组织NGF及LIF表达有所增加,合并哮喘时表达显著增加,地塞米松干预对NGF及LIF的表达均有一定的抑制作用。     

神经生长因子对新生大鼠HIBD后海马区凋亡相关蛋白表达的影响

目的:应用新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,观察神经生长因子对海马区细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax的影响,探讨其神经保护作用的分子生物学机制. 方法:72只大鼠随机分为对照组、HIBD组和NGF治疗组. 应用改良RICE法制作大鼠HIBD模型,TUNEL法检测各组动物海马区细胞凋亡数,免疫组化染色观察Bcl-2, Bax蛋白的表达. 结果:与假手术组相比,新生大鼠HIBD后海马区存在不同程度的细胞凋亡,Bcl-2表达轻度升高,Bax表达明显升高. 与HIBD组比较,NGF治疗后,凋亡细胞减少(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.01),Bax表达下降(P＜0.01). 结论:HIBD后,新生大鼠海马区细胞存在细胞凋亡,NGF治疗增强Bcl-2表达,减少损伤基因Bax表达,抑制细胞凋亡,具有脑保护作用.     

NGF参与支气管哮喘大鼠气道炎症的发生及作用机制

目的 探讨神经生长因子(nerve growth factor, NGF)对支气管哮喘大鼠气道炎症的影响及作用机制.方法 24只雄性SD大鼠分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)和抗NGF组(C组),每组8只.测定各组支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)总细胞及细胞分类计数;HE染色观察气道病理改变;RT-PCR和ELISA法检测各组大鼠白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、NGF mRNA和蛋白表达水平.结果 B组与A组比较,BALF中细胞总数及细胞分类计数增多(P＜0.05);IL-4、NGF mRNA和蛋白表达增加(P＜0.01);而IFN-γ mRNA和蛋白表达减少(P＜0.01).C组与B组比较,BALF中细胞总数及细胞分类计数减少(P＜0.05);IL-4、NGF mRNA和蛋白表达减弱(P＜0.01);而IFN-γ mRNA和蛋白表达水平无显著差异.B组BALF中NGF含量与细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞呈正相关(r=0.833、0.944、0.949,P＜0.05);与IL-4含量呈正相关(r=0.944,P＜0.01),与IFN-γ含量不相关(r=0.122,P＞0.05);与肺组织中IL-4 mRNA表达水平呈正相关(r=0.848,P＜0.05),与IFN-γ mRNA表达不相关(r=0.611,P＞0.05).结论 NGF与哮喘大鼠气道炎症密切相关,它可以通过使Th2型细胞因子分泌亢进参与哮喘的发生.     

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后Caspase-3和c-fos表达的影响

目的研究神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后Caspase-3和c-fos表达的影响。方法 SD大鼠45只,随机分成3组(n=15):假手术组、脊髓损伤模型组(模型组)和神经干细胞移植组。假手术组仅打开锥板但不离断脊髓;模型组动物锥板打开后横向断开脊髓,止血并逐层缝合;神经干细胞移植组椎板打开后横向断开脊髓,止血并注入神经干细胞悬液,再逐层缝合。手术后1、2、3和14 d对大鼠进行神经功能评分(BBB评分)。14 d后处死动物,取脊髓组织,部分用于制备切片并进行TUNEL标记,检测神经细胞(神经元)的凋亡;对另一部分脊髓组织进行蛋白提取,Western blotting检测Caspase-3和c-fos蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组和神经干细胞移植组BBB评分均显著下降(P<0.05);但神经干细胞移植组神经功能改善情况好于模型组(P<0.05)。模型组和神经干细胞移植组的细胞凋亡率均显著高于假手术组(P<0.05);神经干细胞移植组细胞凋亡率明显低于模型组(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,模型组和神经干细胞移植组大鼠脊髓组织中Caspase-3和c-fos的表达量显著高于假手术组(P<0.05);神经干细胞移植组大鼠脊髓组织中Caspase-3和c-fos的表达量显著低于模型组(P<0.05)。结论在大鼠脊髓损伤后,神经干细胞移植能够加快大鼠损伤后的恢复并降低细胞凋亡率,使Caspase-3和c-fos的表达量减少,对大鼠脊髓损伤具有治疗作用。     

NRAGE对肠上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨神经生长因子受体作用黑色素瘤抗原基因同源蛋白(neurotrophin receptor-interacting MAGE homolog,NRAGE)是否参与肠缺血再灌注（ischemia and reperfusion,I/R）损伤的过程及其对肠上皮细胞凋亡及occludin蛋白的影响。方法制备SD大鼠小肠I/R损伤模型,取肠组织行免疫组化染色,观察NRAGE蛋白的表达变化;体外肠上皮永生化细胞株IEC-6给予缺氧及复氧后观察细胞NRAGE的表达变化;将NRAGE过表达慢病毒（Lv-NRAGE组）、NRAGE干扰表达慢病毒（sh-NRAGE组）及对照慢病毒（Lv-control组）感染IEC-6细胞,并设置不加慢病毒的对照组(NC组),Western blot及RT-PCR观察各组细胞NRAGE蛋白及mRNA的表达变化,流式细胞术观察各组IEC-6细胞的凋亡情况,Western blot观察感染慢病毒后紧密连接蛋白occludin蛋白的表达变化。结果I/R损伤后肠黏膜上皮细胞NRAGE表达较sham组升高(P<0.01);体外IEC-6细胞缺氧6 h后NRAGE蛋白的表达增加（P<0.01）,NRAGE mRNA表达升高（P<0.01）。感染慢病毒48 h后,相比于Lv-control组,Lv-NRAGE组早期凋亡率增加（P<0.01）,occludin蛋白表达降低（P<0.01）,sh-NRAGE组早期凋亡率降低（P<0.01）,occludin蛋白表达增高（P<0.001）。结论 NRAGE参与了I/R损伤过程,并促进肠上皮细胞凋亡,降低occludin蛋白的表达。     

黄芪对大鼠脑缺血再灌注损伤c-fos和Bcl-2表达及细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡和凋亡基因c-fos、Bcl-2表达的影响。方法 40只Wistar大鼠,体质量180～220 g,随机分为黄芪组、缺血4 h再灌注1 h组(Ⅰ组)、缺血4 h再灌注12 h组(Ⅱ组)、缺血4 h再灌注24 h组(Ⅲ组)和对照组。线栓法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型。切片分别行HE染色,应用免疫组织化学染色检测神经细胞凋亡基因c-fos、Bcl-2蛋白表达。结果对照组、Ⅰ组脑细胞未见明显变化,Ⅱ组轻度脑细胞水肿,Ⅲ组脑细胞明显水肿,黄芪组损伤区范围变小,肿胀减轻。与对照组比较,其余各组脑细胞c-fos和Bcl-2阳性表达率增高(P<0.01);黄芪组c-fos和Bcl-2阳性表达率较Ⅱ、Ⅲ组降低(P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和黄芪组细胞凋亡指数较对照组明显增加(P<0.01);黄芪组较Ⅱ、Ⅲ组明显降低(P<0.01)。结论黄芪在脑缺血再灌注损伤后可抑制c-fos表达、增加Bcl-2表达,减轻脑细胞凋亡。     

沉默RND3表达对氧糖缺失/复氧复糖损伤海马神经细胞炎症反应和细胞凋亡的影响

目的 探讨沉默Rho家族GTP酶3(RND3)表达对氧糖缺失/复氧复糖(OGD/R)损伤海马神经细胞炎症反应和细胞凋亡的影响.方法 使用包有沉默RND3表达的短发夹RNA(shRND3)及其阴性对照(shRND3-NC)序列的慢病毒载体分别对海马神经细胞进行转染.转染成功后对细胞进行2 h的缺氧缺糖培养再行复氧复糖建立OGD/R模型.CCK-8法检测细胞活力,RT-qPCR检测RND3及炎症和凋亡相关分子的mRNA表达,Elisa检测细胞上清液中炎症因子的浓度,Western Blot检测RND3和凋亡蛋白以及胞核内NF-κB的蛋白表达,Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果 与正常细胞相比,OGD/R损伤后细胞活力降低(P＜0.001),炎症因子(TNF-α、IL-6和 IL-1β)和 NF-κB 表达升高(P＜0.001),促凋亡蛋白(Caspase-3和Bax)表达升高(P＜0.001),抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达降低(P＜0.001),细胞的凋亡率升高(P＜0.001).与沉默RND3阴性组相比,沉默RND3后,细胞活力增加(P＜0.01),炎症因子(TNF-α、IL-6和IL-1 β)和NF-κB表达降低(P＜0.001),促凋亡蛋白(Caspase-3和Bax)表达降低(P＜0.001),抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达升高(P＜0.001),细胞的凋亡率下降(P＜0.001).结论 沉默RND3表达通过抑制炎症反应和细胞凋亡减轻海马神经细胞的OGD/R损伤,沉默RND3抑制炎症反应的机制可能与抑制NF-κB通路有关.     

苯丁酸钠联合奥沙利铂对结肠癌细胞HT29的凋亡作用

目的:探讨苯丁酸钠(SPB)联合奥沙利铂(L-OHP)诱导HT29细胞的凋亡作用及其机制。方法:结肠癌HT29细胞分为空白对照组、奥沙利铂组、苯丁酸钠(1 mmoL/L)+奥沙利铂组、苯丁酸钠(2 mmoL/L)+奥沙利铂组,MTT法测定各组细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡率;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3和核转录因子NK-κB的表达。结果:苯丁酸钠能降低奥沙利铂诱导的HT29细胞存活率,随着其浓度增高,细胞凋亡率逐渐升高(P<0.01),细胞中Caspase-3蛋白和NK-κB蛋白表达则逐渐降低(P<0.05),均呈浓度依赖性。结论:苯丁酸钠(SPB)联合奥沙利铂(L-OHP)可诱导HT29细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-3和NK-κB信号传导通路有关。