幽门螺杆菌克拉霉素耐药基因芯片的制备和应用

目的 建立一种寡核苷酸微阵列检测幽门螺杆菌23S rRNA基因A2142G、A2143G及C2182T点突变的方法.方法 根据23S rRNA基因A2142G、A2143G及C2182T突变位点设计相应探针,样本经不对称PCR扩增后,其产物与芯片杂交.非荧光标记引物扩增PCR产物克隆至T载体,测序验证芯片结果,并结合临床最低抑菌浓度实验判断该方法的正确性.结果 寡核苷酸微阵列技术与测序检测幽门螺杆菌23S rRNA基因多态性结果完全一致.经培养及鉴定幽门螺杆菌阳性的54份标本,杂交结果显示A2142位点均为野生型(54/54);A2143G突变率为11.11%(6/54),尚未发现A2143C和A2143T的突变;C2182T突变率为12.96%(7/54),尚未发现C2182A和C2182G的突变,其余均为野生型,上述结果与菌株体外试验MIC结果完全一致.结论 建立一种寡核苷酸微阵列技术检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药的23S rRNA基因多态性的方法,可以高通量并直接检测胃黏膜而不需进行细菌培养,推动个体化治疗方案的实施.     

101例胃黏膜幽门螺杆菌感染耐药基因突变分析

目的：比较荧光定量PCR方法与免疫组织化学法检测胃黏膜活检样本中幽门螺杆菌(Helicobacter p y l o r i, Hp)感染率,评估荧光定量PCR方法检测Hp对克拉霉素和左氧氟沙星耐药性的可行性。方法：分别通过荧光定量PCR方法与免疫组织化学法检测101例胃黏膜Hp感染情况,并比较两种方法检测Hp的阳性率,然后通过荧光定量PCR法检测Hp阳性样本中23S rRNA和GYRA的基因突变情况,再用Sanger测序法分析23S rRNA基因与GYRA基因突变类型。结果：101例胃黏膜样本中PCR法检测出Hp阳性70例(69.31%),Hp阴性31例(30.69%);免疫组织化学法检测出Hp阳性68例(67.33%),Hp阴性33例(32.67%);两种方法检测Hp阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。70例荧光定量PCR法检测Hp阳性样本中克拉霉素耐药30例(42.25%),左氧氟沙星耐药15例(21.13%),其中有8例(11.27%)对克拉霉素与左氧氟沙星双重耐药,克拉霉素与左氧氟沙星敏感型33例(47.14%)。结论：荧光定量PCR方法与免疫组织化学法检测Hp...     

舟山群岛渔民幽门螺杆菌克拉霉素耐药菌株23S rRNA全基因生物信息学研究

目的:通过对舟山群岛渔民胃镜检查患者分离胃黏膜幽门螺杆菌(Hp),对Hp克拉霉素的耐药情况和耐药基因进行研究,指导合理使用克拉霉素治疗Hp。方法:取188份胃镜活检标本,Hp培养后对188株Hp临床分离株采用E-test法行克拉霉素药敏试验。对17株克拉霉素耐药和3株敏感的Hp23SrRNA全基因序列和3株标准序列进行比对和生物信息学分析。结果:胃炎患者Hp培养阳性率为26.5%(27/102),溃疡患者培养阳性率为48.7%(38/78),胃癌患者培养阳性率为25.0%(2/8),溃疡患者Hp培养阳性率明显高于胃炎患者和胃癌患者。67例Hp菌株克拉霉素耐药23株,占34.3%(23/67),敏感株44株,占65.7%(44/67)。胃炎患者、溃疡患者和胃癌患者克拉霉素耐药率分别为29.6%(8/27)、36.8%(14/38)和50.0%(1/2)。17株克拉霉素耐药Hp菌株2143位点A>G突变率为29.4%,2182位点C>T突变率为11.8%;新的突变点C588U在6株耐药株中出现,而且该6株菌未见其他已知突变。结论:舟山群岛渔民溃疡患者Hp培养阳性率和克拉霉素耐药率明显高于胃炎患者。本地区分离的克拉...     

RT-PCR法检测不同部位胃镜活检样本中幽门螺杆菌感染及耐药性的意义

目的应用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,分别对胃窦和胃体部进行幽门螺杆菌(Hp)鉴定及其对克拉霉素耐药基因突变检测,以了解同一患者不同部位Hp感染及耐药情况,更好地为临床用药提供指导。方法选取60例功能性消化不良,且经14C呼气试验确诊Hp阳性的患者,经胃镜分别在胃窦及胃体部采样活检,采用RT-PCR方法对此120例标本Hp感染情况进行鉴定,随后对Hp阳性的标本进行克拉霉素耐药基因A2142G和A2143G突变情况检测。结果 120例标本中有116例Hp阳性,其中胃窦部56例(93.3%),胃体部60例(100%),有4位患者(6.7%)不同部位Hp感染的鉴定结果不一致。在116例Hp阳性标本中,48例(41.4%)为野生型,67例(57.8%)为突变型,1例(0.9%)同时存在野生型及A2143G、A2142G突变型。在67例耐药Hp中,47例为A2143G纯合突变,18例为A2143G杂合突变,2例为A2142G纯合突变。在56位胃窦和胃体Hp感染均为阳性的患者中,有7位患者(12.5%)不同部位Hp对克拉霉素耐药基因突变存在差异,主要为A2143G纯合与杂合突变间的差异(5/7),敏感与耐药间的差异(1/7),以及混合感染与单纯耐药间的差异(1/7)。结论使用RT-PCR方法将胃窦及胃体两个典型部位分别进行Hp相关检测,可提高Hp的检出率,且有助于正确判断Hp的存在部位以及耐药Hp的突变位点和类型,进而优化临床治疗方案,指导抗菌素的选择,从而提高Hp的根除率。     

建立一种PCR产物直接测序检测HBVYMDD突变的方法

目的 建立检测HBV YMDD变异的PCR产物直接测序法,并与传统实时荧光PCR检测YMDD突变的结果进行比较分析.方法 选取103份慢性乙型肝炎患者血清标本,提取血清HBVDNA.用实时荧光PCR检测YMDD突变;用巢式pcR扩增HBV逆转录酶基因,对PCR产物进行DNA双向测序,NTI软件比对结果.采用Kappa一致性检验对DNA测序法检测的rt204位点突变与实时荧光PCR检测的YMDD突变结果进行比较.结果 PCR产物直接测序法可有效检测低病毒载量标本(500拷贝/ml)和高病毒载量(1010拷贝/ml)标本,同时可以避免高病毒载量标本的抑制效应.与实时荧光PCR相比较,YIDD突变检测符合率为100%,YVDD突变检测符合率97.1%,YIDD与YVDD共生突变符合率76.2%(Kappa=0.853,P<0.01).结论 本研究建立的PCR产物直接测序法检测HBV耐药相关基因突变,灵敏度高,检测范围宽,与实时荧光PCR检测结果有较高的符合率,并可同时检出YMDD、YIDD和YVDD.     

实时荧光PCR熔解曲线法在β-地中海贫血基因诊断和产前诊断中的临床应用评价

目的 对荧光PCR熔解曲线法用于β-地中海贫血(β-地贫)基因诊断和产前诊断进行临床评价.方法 收集2011年1至8月柳州市妇幼保健院外周血标本451份,其中经血液学表型分析为β-地贫阳性表型标本372份,β-地贫阴性表型标本79份.同时收集2011年6至9月夫妇双方经PCR-RDB探针法确诊为β-地贫基因携带者,在我院行β-地贫产前诊断的胎儿绒毛、羊水及脐带血标本共84份,其中孕10～ 13周胎儿绒毛标本16份、孕16 ～24周羊水标本64份、孕17周以上胎儿脐血标本4份.按双盲对照试验,分别采用荧光PCR熔解曲线法(可检测24种β珠蛋白基因突变)、PCR-反向点杂交(RDB)探针法(可检测17种β珠蛋白基因突变)和DNA测序法同时对451份外周血标本和84份胎儿绒毛、羊水、脐带血产前诊断标本进行检测.计算荧光PCR熔解曲线法和PCR-RDB探针法、DNA基因测序法检测结果的野生型符合率、突变型符合率和总符合率.结果 利用荧光熔解曲线法在451份外周血标本中共检出13种突变类型、19种基因型,其中有447份标本与PCR-RDB探针法的基因型检测结果相符,符合率为99.1％ (447/451),902个等位基因位点检出符合率为99.6％(898/902),有4份标本与PCR-RDB探针法的基因型检测结果不相符,经DNA测序法验证,有3份标本与荧光熔解曲线法的检测结果完全一致,1份标本的β珠蛋白基因突变不在荧光熔解曲线法检测范围而未被检出.450份外周血标本的荧光熔解曲线法检测结果与DNA测序法相符,符合率为99.8％ (450/451).利用荧光熔解曲线法在84份产前诊断胎儿标本中共检出8种突变类型、18种基因型,168个等位基因位点的检测结果与PCR-RDB探针法和DNA基因测序法检测结果符合率为100％.结论 荧光PCR熔解曲线法可同时检测多份待测标本,并可准确检出多种基因突变类型,可用于β-地贫的基因诊断和产前诊断.     

用TaqMan-MGB荧光探针法检测北京地区幽门螺杆菌A2142G/A2143G耐药突变

目的用Taq Man-MGB荧光探针法检测北京地区幽门螺杆菌克拉霉素耐药位点A2142G、A2143G突变情况。方法收集北京大学人民医院消化科门诊尿素酶试验及病理活检均阳性的患者233例,所有患者均应用MGB荧光探针法和一代测序法对耐药位点A2142G/A2143G进行检测,其中79例患者同时进行传统培养联合药敏法检测。分析耐药位点突变发生率与患者年龄、性别和消化性溃疡的关系。结果 79例传统培养联合药敏法检测的标本中成功培养出42例,占53%(42/79),其中耐药型菌株22例,敏感型菌株20例,而MGB荧光探针法成功检出77例,占97%(77/79),其中野生型28例,突变型49例。在传统培养+药敏法培养出的42例阳性标本中,两种方法检出的符合率为86%(36/42)。233例标本中,一代测序法成功检测出214例,占92%(214/233),其中野生型138例,突变型76例。在76例突变型标本中,含A2142G突变(包括A2142G和A2142G+野生)的标本占5%(4/76),含A2143G突变(包括A2143G和A2143G+野生)的标本占95%(72/76)。MGB荧光探针法成功检测出231例,占99%(231/233),其中野生型141例,突变型90例。在90例突变型标本中,含A2142G突变的标本占14%(13/90),含A2143G突变的标本占86%(77/90)。一代测序法和MGB荧光探针法在区分是否含有突变上的符合率为95%(203/214)。根据MGB荧光探针法检测结果将患者分为突变组与野生组,2组在年龄和性别上差异无统计学意义(t年龄=-0.685,P=0.493;χ~2_(性别)=0.065,P=0.890),而在消化性溃疡发生率上差异存在统计学意义(χ~2=6.653,P=0.044)。结论TaqMan MGB荧光探针法可应用于临床快速、敏感地检测患者胃黏膜标本中幽门螺杆菌克拉霉素A2142G、A2143G耐药位点突变情况。     

荧光聚合酶链反应熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌及异烟肼耐药突变的临床应用价值

目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)及异烟肼耐药突变的临床价值。方法对延安市传染病医院2018年4-12月住院的370例肺结核患者痰标本采用MGIT320进行MTBC培养及药敏试验,同时应用荧光PCR熔解曲线法进行MTBC和异烟肼耐药突变检测,对检出MTBC的差异进行分析,以培养法药敏为金标准,评估熔解曲线法耐药突变检测的灵敏度、特异度、一致性等。结果 370例患者培养法检出MTBC 175株,阳性率47.3%,熔解曲线法检出157株,阳性率42.4%,两种方法检测的结果差异无统计学意义(P=0.073),一致性中等(Kappa=0.510);同时与有异烟肼药敏结果的115株进行比较,熔解曲线法灵敏度95.0%,特异度93.7%,与培养法结果比较差异无统计学意义(P=0.125),具有高度一致性(Kappa=0.807)。结论熔解曲线法试剂盒可用于结核菌快速筛查及耐药突变检测,对异烟肼耐药突变检测具有高灵敏度和特异度,有助于缩短耐药结核病诊断时间。     

幽门螺杆菌对两种抗生素的耐药性及相关基因突变分析

目的分析浙江地区26株幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）对克拉霉素和左氧氟沙星的耐药性,探讨H.pylori对克拉霉素、左氧氟沙星的耐药性,及其与23SrRNA基因、gyrA基因突变的关系。方法采用E-test法测定H.pylori对克拉霉素和左氧氟沙星的最低抑菌浓度（MIC）,提取H.pylori基因组DNA,采用PCR法扩增23SrRNA和gyrA基因片段,并对扩增产物进行测序、分析。结果药敏实验结果显示26例临床分离株中,6例对克拉霉素耐药,6例对左氧氟沙星耐药,8例对克拉霉素和左氧氟沙星双重耐药。所有克拉霉素耐药菌株23SrRNA基因都存在A2143G突变;左氧氟沙星耐药菌株gyrA基因中的喹诺酮类耐药决定区（quinolone-resistance-determining region,QRDR）存在突变,主要在第87和91位氨基酸。结论 23SrRNA基因的A2143G突变是导致H.pylori对克拉霉素耐药的主要原因;gyrA基因的87和91位氨基酸突变是导致H.pylori对左氧氟沙星耐药的主要原因。     

熔解曲线法在痰涂阴肺结核患者中的应用

目的 探讨熔解曲线法在痰涂阴肺结核患者中的应用价值,为结核病防治提供依据。方法 收集2020年1月至2021年9月于该院结核门诊就诊的1 040例患者痰标本,行金胺O染色,对痰涂阴标本进行痰培养、表型药敏试验、实时荧光定量PCR检测和熔解曲线检测;比较痰培养与实时荧光定量PCR检测结果,比较表型药敏试验与熔解曲线法检测结果,分析熔解曲线法的应用价值。结果 1 040份痰涂阴标本,痰培养检测为结核分枝杆菌复合群的有74例,阳性率为7.1%;实时荧光定量PCR检测为结核分枝杆菌复合群的有101例,阳性率为9.7%,表型药敏试验检测利福平耐药8例,耐药率为10.8%,熔解曲线法检测利福平耐药7例,耐药率为9.5%;实时荧光定量PCR检测与痰培养,表型药敏试验与熔解曲线法一致性分别为0.83、0.79。结论 实时荧光定量PCR与痰培养、熔解曲线法检测与表型药敏试验具有较好的一致性,在肺结核患者中的快速诊断及耐药突变检测中有很高的应用前景,特别是在痰涂阴肺结核患者中应用价值尤为突出。     

桂西地区克拉霉素耐药的Hp基因分型研究

目的 研究桂西地区对克拉霉素耐药的Hp基因分型.方法 于2007年3-10月在右江民族医学院附属医院胃镜室采集就诊患者胃黏膜标本,共采集患有胃炎、消化性溃疡的患者胃黏膜标本247份,分离培养获得126株Hp,E-teat进行药敏实验,REP-PCR方法进行基因分型,并运用NTsys_2软件进行聚类分析,同时收集携带耐药菌株病例的临床资料.结果 桂西地区对克拉霉素耐药的26株Hp按照相似性78%被分成6类基因型,分别是Ⅰ-Ⅵ类,每类分别有2、11、1、8、3、1株耐药性Hp;其中Ⅱ类菌株均来自胃溃疡,而且大多数来自壮族患者;Ⅳ类菌株均来自胃炎.结论 REP-PCR可以把对克拉霉素耐药的Hp分成6大类基因型,Hp感染患者的疾病类型、民族、家族胃病史等可能与基因型有关.     

基于可视化基因芯片技术指导幽门螺杆菌个体化治疗的临床研究

目的利用可视化基因芯片检测技术检测结果指导幽门螺杆菌"个体化"治疗,评价其优越性。方法 244例初诊幽门螺旋杆菌感染患者的胃黏膜组织,检测组织标本中幽门螺旋杆菌gyrA基因上喹诺酮耐药相关的Asn87(N87K)、Asp91(D91G/Y/N)突变位点和23s rRNA基因上克拉霉素耐药相关的A2142G、A2143G突变位点,以及人CYP2C19上与PPI代谢相关的等位基因2C19*2、2C19*3突变位点。根据检测结果喹诺酮和克拉霉素的敏感性分为敏感及耐药;PPI药物代谢活性分为强代谢型(EM)、中代谢型(IM)和弱代谢型(PM);结合检测结果给予幽门螺杆菌"个体化"四联根除治疗,并统计根除率。结果 244例中检出63例对抗生素耐药,耐药率25.80%(63/244),其中左氧氟沙星和克拉霉素耐药率耐药率2.86%(7/244)和20.49%(50/244),两者双重耐药率2.45%(6/244)。244例中检出CYP2C19代谢类型有242例(99.18%),其中EM、IM、PM、分别占40.08%(97/242)、58.26%(141/242)和1.65%(4/242)。242例检测结果阳性患者根据检测结果给予幽门螺杆菌个体化的"四联"治疗,240例完成治疗,初次根除率达到91.67%。EM、IM、PM的根除率分别为89.58%、92.86%和100%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论可视化基因芯片技术能够同时提供准确的CYP2C19代谢类型和克拉霉素、左氧氟沙星耐药情况,指导临床用药,具有较好的临床应用价值。     

高分辨率熔解曲线法检测药物性耳聋相关线粒体12S rRNA突变

目的建立一种基于高分辨率熔解曲线(HRM)技术的药物性耳聋相关线粒体12S rRNA基因1494CT和1555AG突变快速检测方法。方法采用定点诱变克隆策略构建突变质粒DNA标准品;建立突变位点靶序列PCR扩增及HRM分析方法,并检测106例非综合征耳聋患者标本,以DNA直接测序法进行验证。结果建立的HRM检测方法能准确检出线粒体12S rRNA基因1494CT和1555AG突变,各基因型HRM曲线特征明显且易于分析判断;106例非综合征耳聋患者标本中检出6例1555AG突变,检测结果与DNA测序结果一致。结论建立了药物性耳聋相关人类线粒体12S rRNA基因1494CT和1555AG突变HRM检测方法,操作简单快速、结果准确可靠,可应用于人群筛查和临床常规分子诊断。     

幽门螺杆菌对左氧氟沙星、克拉霉素耐药性及基因突变分析

目的 分析幽门螺杆菌(Hp)对左氧氟沙星、克拉霉素的耐药表型及与耐药相关基因突变(基因型)的相关性,为临床制定Hp个体化根除治疗方案提供实验依据。方法 分别选择2021年6月至12月和2018年8月至2019年3月在南京医科大学附属南京医院就诊的未经治疗的292例和350例Hp阳性患者的胃黏膜组织进行分离培养,用E-test药敏试验法检测左氧氟沙星、克拉霉素的耐药性,用卡方检验分析不同性别、年龄患者耐药表型的差异;用基因测序方法检测耐药相关基因型,并分析与耐药表型的一致性。结果 在左氧氟沙星耐药性研究的292例病例中,有120例(41.10%)表型耐药,不同性别(P=0.031)、年龄(P<0.01)患者间耐药率差异均有统计学意义;耐药相关基因型中有123例(42.12%)突变,与表型的一致性很高(Kappa=0.951,P<0.01),且主要耐药基因gyrA的第87位突变与表型的一致性略高于第91位突变。在克拉霉素耐药性研究的350例病例中,有168例(48.00%)表型耐药,不同性别(P=0.165)、年龄(P=0.192)患者间耐药率差异均无统计学意义;耐药相关基因型...     

与克拉霉素耐药相关的幽门螺杆菌基因23S rRNA序列分析

幽门螺杆菌是寄生于人体胃部的革兰阴性杆菌,是胃溃疡、十二指肠球部溃疡和胃癌的主要致病因素之一,与胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤关系密切.随着大环内酯类抗生素广泛应用于治疗幽门螺杆菌感染,幽门螺杆菌的耐药现象日益严重.现已证实,幽门螺杆菌对克拉霉素耐药主要与其23S rRNA基因的点突变有关.为此,本研究通过对江苏苏中沿海地区分离培养的幽门螺杆菌菌株的23S rRNA部分基因片段进行序列分析,希望了解本地区幽门螺杆菌耐药菌株的基因突变和耐药的关系.     

一种快速同步检测肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变的新方法

目的 建立基于CycleavePCR技术的肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变株快速检测方法.方法 收集102株分离自2005-2008年上海市交通大学附属儿童医院住院患儿的肺炎支原体及136份2009年11-12月上海市交通大学附属儿童医院呼吸道感染的住院患儿经鼻采集鼻咽部痰标本,根据肺炎支原体无突变敏感株与突变耐药株23S rRNA基因2063/2064位的碱基差异及上下游保守序列分别设计新型特异性探针(Cycling探针)及引物,建立肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变株检测方法,以含有被检测靶序列的重组质粒为阳性对照,以常见呼吸道病原菌DNA为阴性对照,评价其敏感度及特异度.采用自建方法检测所有标本,并与常规PCR及测序结果比较.结果 该方法可准确检出并鉴别大环内酯类敏感及耐药突变株阳性对照,102株临床分离株中83株对大环内酯类耐药,测序表明82株发生23S rRNA基因A2063G突变,1株A2064G突变,与CycleavePCR检测结果相符,136份痰标本检测结果也与常规PCR扩增及测序结果相符.所有阴性对照样品均未出现假阳性.与常规PCR及测序方法相比,CycleavePCR法的敏感度和特异度均达100%.该方法的检测下限为10拷贝/PCR反应,扩增检测可在1.5 h内完成.结论 建立了一种基于CycleavePCR技术的肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变株快速检测方法,可同步提供病原菌及其耐药性信息,为肺炎支原体感染诊断及临床合理选用抗菌药物提供参考.     

建立PCR熔解曲线法检测HBV基因型

摘要：目的：建立检测HBV基因型的PCR熔解曲线法,并验证该方法临床应用的可靠性。 方法：依据文献报道的HBV B、C型全基因组序列,分别设计B、C型的特异引物序列,建立HBV基因分型的PCR熔解曲线法。用该法检测186例HBV DNA阳性血清样本,并从中选取51例样本,用商品化的HBV基因分型试剂盒进行检测,用Kappa一致性检验对两法检测结果进行比较。 结果：186例标本中,PCR熔解曲线法检测到B型133例（71.5％）,C型37例（19.9％）,B/C混合型16例（占8.6％）。选取的51例样本中,熔解曲线法与市售试剂盒检测B型符合率100％,C型符合率100％,B/C混合型符合率81.25％,总符合率94.1％（Kappa=0.909,P＜0.05）。 结论：建立的PCR熔解曲线法操作简便,与商品试剂盒的检测结果有较高的符合率,可用于临床上HBV B、C以及B/C混合型的检测。     

儿童肺炎支原体23S rRNA基因位点突变检测分析

目的了解儿童肺炎支原体(MP)大环内酯类耐药基因(23SrRNA)位点突变,以及与临床资料的相关性。方法收集该院354份肺炎患儿的呼吸道标本,采用实时荧光定量PCR法检测MP及23SrRNA位点突变(A2063G或/和A2064G)情况,并将MP阳性患儿分成位点突变组和未突变组,比较两组之间的临床资料。结果 354份呼吸道标本中,166份检测为MP阳性(46.9%),且135份MP阳性标本中存在23SrRNA基因位点突变(阳性检出率81.3%),31份未检测到23SrRNA基因位点突变。分析突变组和非突变组的临床资料发现两组在年龄和性别方面比较差异无统计学意义(P0.05),但突变组的重症肺炎和肺外并发症发生率高于未突变组(P0.05),且平均住院时间和平均发热时间均较未突变组长(P0.05)。结论 MP 23SrRNA基因位点突变的较高检出率提示MP对大环内酯类耐药率较高,这为临床MP的感染、治疗提供一定的参考依据。     

幽门螺杆菌克拉霉素耐药及患者CYP2C19基因型快速检测指导根除治疗的研究

综合分析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)克拉霉素耐药根除治疗感染者的临床效果。选取我院2014年10月~2015年10月拟对14C呼气试验及快速尿素酶试验检测均符合HP感染者32例,按照不同的治疗方法随机分为试验组与对照组,各16例。试验组将提取的胃粘膜组织采用实时定量荧光检测法(Real time,PCR)进行HP耐药根除治疗+患者CYP2C19基因型检测,依据不同的检测结果,制定个体化的HP根除方案;对照组直接采用阿莫西林+克拉霉素+奥美拉唑治疗。试验组的HP根除率为87.5%,对照组的HP根除率为68.75%,试验组的HP根除率显著高于对照组(P0.05);本地区人群的CYP2C19对克拉霉素基因耐药发生率为28.8%,HP的23S rRNA基因位点突变率(即HP对克拉霉素的耐药发生率)为66.7%;根据CYP2C19基因型可分为UM(快代谢型)、IM(中间代谢型)、PM(弱代谢型);试验组的UM、IM、PM的HP根除率分别为55.11%、71.26%、92.32%,UM与PM的HP根除率比较差异较大(P0.05),UM与IM的HP根除率比较差异无统计学意义(P0.05)。试验组的HP根除率比较理想,HP的根除治疗效果较为显著。     

应用巢氏PCR对成人社区获得性肺炎患者咽拭子中肺炎支原体DNA的检测及耐药分析

目的 了解肺炎支原体（MP）在成人社区获得性肺炎（CAP）患者中的感染情况与成人MP耐大环内脂类抗生素的分子机制.方法 收集北京友谊医院成人CAP住院患者咽拭子标本,巢氏PCR扩增红霉素作用靶位23S rRNA基因,电泳检测阳性标本行双脱氧末端终止法全自动DNA测序,测序结果与NCBI已登录的MP标准株23S rRNA基因作比对,分析差异基因.结果 共收集成人CAP住院病例97例,其中咽拭子阳性25例,阳性率25.8%.15例为耐药株,耐药率为60.0%,均出现2 063位A-G的点突变.结论 北京地区成人MP存在耐药现象,主要对大环内酯类抗菌药物耐药,耐药分子机制与国内外文献报道基本相似.