海藻玉壶汤中海藻不同品种与甘草加减应用对甲状腺肿大模型大鼠甲状腺Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的探讨含高剂量反药组合的海藻玉壶汤中海藻不同品种与甘草加减应用对甲状腺肿大模型大鼠甲状腺Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响。方法选取Wistar大鼠144只,雌雄各半,随机分为空白组、模型组、阳性药优甲乐组(优甲乐组)、含羊栖菜的海藻玉壶汤全方组(羊栖菜全方组)、含海蒿子的海藻玉壶汤全方组(海蒿子全方组)、含羊栖菜的海藻玉壶汤去甘草组(羊栖菜去甘草组)、含海蒿子的海藻玉壶汤去甘草组(海蒿子去甘草组)、海灌玉壶汤去海藻组(全方去海藻组)、海藻玉壶汤去海藻甘草组(全方去海藻甘草组),共计9组。造模期间,除空白组外,其余各组大鼠灌服丙基硫氧嘧啶(PTU)10 mg/kg,每日1次,共给造模药14 d。造模后给予治疗药物,周期为28 d,其中,空白组与模型组给予等量蒸馏水灌胃,阳性药组灌服优甲乐,给药剂量为20μg/kg,每日1次,其余各给药组给予相应药液灌胃,大鼠每日给药1次,给药剂量为海蒿子/羊栖菜去甘草组12.6 g/kg,全方去海藻组13.5 g/kg,海蒿子/羊栖菜全方组18.0 g/kg,全方去海藻甘草组8.1 g/kg。在给药期间,为了稳定模型,除空白组外,每隔1 d,其余各组灌服PTU,剂量同前。给药结束后计算各组大鼠甲状腺系数,观察甲状腺组织病理形态,用RT-PCR法检测甲状腺组织中Bax、Bcl-2 mRNA的表达。结果与空白组比较,各组大鼠甲状腺系数明显升高(P<0.01);与模型组比较除优甲乐组外其余各给药组甲状腺系数明显降低(P<0.01)。甲状腺组织病理形态观察显示模型组与优甲乐组较空白组变化明显,甲状腺组织小叶排列紊乱,滤泡大小不一,滤泡上皮细胞弥漫性增生和肥大,其余各给药组有纠正作用,其中全方(海蒿子/羊栖菜)组组织病理形态最接近空白组。与空白组比较,模型组Bax mRNA表达降低(P<0.05);与模型组比较海藻玉壶汤全方及加减应用各组Bax mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01)。各组Bcl-2 mRNA表达无差异。与空白组比较,模型组Bax/Bcl-2降低(P<0.05),与模型组比较,海藻玉壶汤全方及加减应用各组数值均升高(P<0.05,P<0.01)。结论含高剂量反药组合的海藻玉壶汤中不同品种海藻与甘草加减应用,对甲状腺肿大模型大鼠甲状腺系数及甲状腺组织形态有纠正作用;其作用机制可能与其升高Bax/Bcl-2从而促进甲状腺细胞凋亡相关。     

海藻甘草反药组合配伍对海藻玉壶汤中5种活性成分溶出含量影响

目的对甘草单煎液、海藻甘草配伍及于复方海藻玉壶汤中配伍后药效组分甘草苷、甘草酸、连翘苷、橙皮苷、阿魏酸的溶出含量进行测定并比较其差异,从物质基础层面,初步探讨海藻甘草反药组合的配伍规律及机制。方法制备甘草单煎液(GC)、海藻甘草合煎液(GH)、海藻玉壶汤煎液(HYD)、海藻玉壶汤去海藻煎液(HYD-H)、海藻玉壶汤去甘草煎液(HYD-G)、海藻玉壶汤去海藻甘草煎液(HYD-GH),采用HPLC法对各组煎液中5中成分进行了含量测定,计算各组煎液5种成分的溶出含量并进行比较。结果甘草苷、甘草酸溶出含量由高到低为HYD-HHYDGCGH;连翘苷、橙皮苷、阿魏酸溶出含量由高到低分别为:HYD-HHYD-GHHYD-GHYD。结论 HPLC方法简便、灵敏、准确、重复性好,适合用于研究海藻甘草配伍及于复方中配伍后活性成分溶出含量的变化规律。海藻与甘草这对反药组合单独配伍时,表现出引起甘草中甘草苷、甘草酸的溶出含量降低的结果。二者在复方中配伍应用时,甘草苷、甘草酸的溶出含量与甘草组基本持平。而与复方全方组相比,去掉海藻甘草反药组合的拆方组表现出引起甘草苷、甘草酸、连翘苷、橙皮苷、阿魏酸溶出含量升高的结果,可为海藻玉壶汤临床应用及反药组合能否配伍应用研究提供参考。     

海藻玉壶汤及拆方对甲状腺肿大大鼠甲状腺激素水平和组织形态的影响

目的探讨海藻玉壶汤中加减运用反药组合对甲状腺肿大模型大鼠疗效的影响。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药(优甲乐)组、海藻玉壶汤全方组、海藻玉壶汤去反药组3组(分别为海藻玉壶汤减甘草组、海藻玉壶汤减海藻组、海藻玉壶汤减海藻甘草组),除空白组外,其余各组灌服丙硫氧嘧啶复制甲状腺肿大模型,以优甲乐作为阳性对照药,各给药组分别给予相应药物。检测各组大鼠甲状腺系数,甲状腺激素水平,甲状腺激素的合成、转运、调控等相关指标;光镜下观察大鼠甲状腺组织形态改变,并统计切片细胞核数、滤泡面积。结果海藻玉壶汤同阳性药一致,表现出对甲状腺肿大模型大鼠甲状腺激素水平的回调作用,且较好地恢复了模型大鼠甲状腺的形态。全方组与各拆方组比较甲状腺激素相关指标水平,其恢复情况为海藻玉壶汤组海藻玉壶汤减甘草组海藻玉壶汤减海藻组海藻玉壶汤减海藻甘草组;与各拆方组比较甲状腺组织病理形态,其改善情况为海藻玉壶汤组海藻玉壶汤减海藻甘草组海藻玉壶汤减海藻组海藻玉壶汤减甘草组。结论海藻玉壶汤全方组对甲状腺肿大大鼠甲状腺激素水平以及病理形态的改善要优于去掉反药的各拆方组,拆方组中海藻玉壶汤减海藻甘草组疗效最差。     

海藻玉壶汤加减海藻甘草反药组合对甲状腺肿大模型大鼠甲状腺功能及mTOR蛋白表达的影响

目的通过研究海藻甘草反药组合在海藻玉壶汤中的加减应用对甲状腺肿大模型大鼠甲状腺功能及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响,为海藻甘草反药组合配伍应用提供实验依据。方法选取雄性Wistar大鼠84只,随机分为空白组、模型组、优甲乐组(20.00μg/kg)、海藻玉壶汤组(10.08g/kg)、海藻玉壶汤减海藻组(9.00g/kg)、海藻玉壶汤减甘草组(9.18g/kg)和海藻玉壶汤减海藻甘草组(8.10g/kg),除空白组其余各组给予丙硫氧嘧啶复制甲状腺肿大病理模型,以优甲乐作为阳性对照药,其余各组给予相应药液。采用放射免疫法检测各组大鼠血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平,免疫组化法检测甲状腺组织Ki67蛋白表达情况,Western blotting检测甲状腺组织磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、mTOR蛋白表达情况。结果与模型组比较,优甲乐组大鼠血清T3、T4、FT3、FT4水平升高,TSH水平降低(P<0.01);海藻玉壶汤组及各拆方组大鼠血清T3、T4、FT3、...     

清心通络方通过调控Nrf2/HO-1通路改善小鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 研究清心通络方对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响,并探讨其机制是否与调控Nrf2/HO-1信号通路相关。方法 将45只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组和中药组,每组15只。中药组予清心通络方(1.08g·kg-1·d-1)灌胃给药,余各组予等体积生理盐水(0.2mL·d-1)灌胃,灌胃处理14d后通过结扎小鼠左侧冠状动脉左前降支30min后再灌注构建心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)模型,其中假手术组仅穿线不结扎。采用伊文思蓝和2,3,5-氯化三苯基四氮唑双重染色法测定小鼠心肌缺血和心肌梗死面积;采用生化试剂盒检测小鼠血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平;采用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)法检测心肌组织白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA 相对表达量;采用蛋白免疫印 迹法(Western blot)检测心肌组织PARP-1、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1的蛋白表达。利用H2O2模拟氧化应激损伤细胞模型,采用细胞凋亡试剂盒检测HL-1细胞的凋亡情况。结果 与假手术组相比,模型组小鼠心肌损伤加重,血清CK、CK-MB、LDH、AST水平升高(P 均<0.01);与模型组相比,中药组小鼠血清CK、LDH、AST水平均下降(P<0.05或P<0.01),且心梗面积明显减少(P<0.01)。与假手术组相比,模型组小鼠血清中SOD水平下降(P<0.05),MDA 含量升高(P<0.01);与模型组相比,中药 组小鼠血清SOD水平升高(P<0.01),MDA 含量下降(P<0.01)。炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α的mRNA表达在模型组中升高(P 均<0.01),中药处理后可显著降低上述炎症因子的mRNA 表达(P 均<0.01)。模型组心肌组织PARP-1、Bax蛋白表达较假手术组升高(P 均<0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达则下降(P 均<0.01);与模型组相比,中药组心肌组织PARP-1、Bax蛋白表达量减少(P 均<0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达量增加(P 均<0.05)。此外,H2O2 处理后的HL-1 细胞凋亡明显增加(P<0.01),不同浓度中药均可明显减少H2O2导致的细胞凋亡(P<0.01)。结论 清心通络方通过减轻炎症和氧化应激改善MIRI,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

不同品种甘草与海藻配伍不同剂量的海藻玉壶汤对甲状腺肿大大鼠肝肾功能影响研究

目的 探究海藻玉壶汤中甘草不同品种与海藻配伍不同剂量条件下对甲状腺肿大大鼠肝肾功能的影响,为研究十八反配伍禁忌实质奠定科学依据。方法 180只Wistar雄性大鼠,随机分为12组,每组15只,分别为空白组,模型组,阳性药组（优甲乐组）,海藻玉壶汤胀果甘草高、中、低剂量组（胀高组、胀中组、胀低组）,海藻玉壶汤乌拉尔甘草高、中、低剂量组（乌高组、乌中组、乌低组）,海藻玉壶汤光果甘草高、中、低剂量组（光高组、光中组、光低组）。采用丙硫氧嘧啶灌胃复制大鼠甲状腺肿大模型,优甲乐为阳性对照,检测大鼠肝、肾功能血清相关指标及组织切片病理学改变。结果 与空白组比较,模型组大鼠血清TP、ALB、GLB、A/G、ALT、AST、ALP、UREA、Cr水平均无显著性差异（P>0.05）;光镜下大鼠肝脏组织结构正常,肾脏组织可见微小病变。与空白组比较,乌高组、乌中组大鼠血清TP水平显著升高（P<0.05）,胀低组血清ALP水平显著升高（P<0.05）,光镜下各中药组大鼠肝脏组织结构正常。与空白组比较,胀低组、乌高组、乌中组、光中组、光低组大鼠血清UREA、Cr水平显著升高（P<0.05...     

海藻玉壶汤对Hep3B肝癌裸鼠肝功能及CyclinD1、Bax蛋白表达的影响

目的:观察海藻玉壶汤对人肝癌移植瘤裸鼠的抗癌作用,以及对肝功能指标血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartic transaminase,AST)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞凋亡调控基Bax蛋白表达的影响。方法:30只BALB/c裸鼠皮下接种Hep3B细胞,建立肝癌异位移植瘤模型,分为模型组(9 g·L~(-1)氯化钠溶液灌胃),阳性对照组(盐酸多柔比星腹腔注射),海藻玉壶汤高剂量组、中剂量组、低剂量组(海藻玉壶汤灌胃)。治疗21 d后,称量小鼠体质量,取肿瘤组织测瘤质量、常规HE染色;免疫组织化学检测肿瘤组织CyclinD1、Bax;生化分析仪检测血清ALT、AST。结果:各组小鼠体质量比较,差异无统计学意义(P0.05)。海藻玉壶汤高剂量组、中剂量组、低剂量组与模型组比较,移植瘤瘤质量较低,差异具有统计学意义(P0.05)。HE染色观察肿瘤组织病理学可见治疗组不同程度肿瘤细胞灶性坏死,胞核固缩深染。免疫组织化学可见海藻玉壶汤各组CyclinD1蛋白阳性表达下降(P0.05),Bax蛋白阳性表达增强(P0.05)。结论:海藻玉壶汤可剂量依赖性地抑制裸鼠Hep3B移植瘤生长,一定程度上保护肝功能,并通过影响细胞周期和凋亡发挥抗肿瘤作用。     

异甘草酸镁对酒精性肝病大鼠肝组织Nrf2/HO-1信号通路和肝纤维化指标的影响

目的:研究异甘草酸镁(MgIG)对酒精性肝病(ALD)大鼠肝组织核因子2相关因子/血红素氧合酶(Nrf2/HO-1)信号通路和肝纤维化指标的影响.方法:喂养酒精液体饲料构建ALD大鼠模型,另取SD大鼠以普通饲料喂养作对照组,将建模成功大鼠随机分为模型组、MgIG低、中、高剂量组,每组10只.MgIG低、中、高剂量组分别腹腔注射15 mg/kg、30 mg/kg、45 mg/kg MgIG,1次/d,连续注射8周,对照组和模型组注射等体积生理盐水.采用生化试剂盒检测大鼠肝功能、肝组织甘油三酯(TG)及氧化应激指标含量,苏木精—伊红(HE)染色和Masson染色观察肝组织病理变化,酶联免疫吸附法检测纤维化指标,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测肝组织Nrf2、HO-1mRNA及蛋白表达.结果:模型组血清ALT、AST、TBi1、MDA、肝组织TG、LN、HA、PC-111含量、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显高于对照组,血清SOD、GSH水平明显低于对照组(P＜0.05);与模型组比较,MgIG中、高剂量组ALT、AST、TBi1、MDA、TG、LN、HA、PC-Ⅲ水平显著降低,SOD、GSH、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.05).结论:MgIG对ALD大鼠有保护作用,可能通过Nrf2/HO-1途径减轻氧化应激及改善肝纤维化,从而缓解酒精性肝损伤.     

活血通腑方对术后腹腔粘连大鼠Nrf2、HO-1及NQO1表达的影响

目的?探讨活血通腑方对术后腹腔粘连大鼠粘连部位Nrf2、HO-1及NQO1蛋白及mRNA的影响。方法?通过腹腔粘连评分评价腹腔粘连水平,Western blot法检测Nrf2核蛋白、HO-1和NQO1蛋白表达,qPCR检测Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA表达。结果?活血通腑方能够显著降低肉眼腹腔粘连评分（P＜0.01）。活血通腑方组Nrf2核蛋白、HO-1和NQO1蛋白表达以及mRNA表达显著升高（P<0.01）。结论?活血通腑方对术后腹腔粘连大鼠粘连部位Nrf2、HO-1及NQO1表达有显著影响,可能通过调节Nrf2及下游因子的表达进而提升抗氧化应激能力,发挥抗腹腔粘连效应。      

甘草酸对大鼠肝星状细胞氧化应激抑制作用的机制研究

目的 探讨甘草酸对大鼠肝星状细胞(HSC)的氧化应激及核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶(HO)-1信号通路的影响.方法 体外培养HSC细胞,将细胞分为5组:空白对照组、次氮基三乙酸铁(Fe-NTA)处理组、Fe-NTA+5 μmol/L甘草酸组、Fe-NTA+10 μmol/L甘草酸组及Fe-NTA+20 μmol/L甘草酸组;给药24 h后收集细胞,采用相关试剂盒检测HSC细胞中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、谷胱甘肽(GSH)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;RT-PCR和Western blot方法分别检测Nrf2和HO-1 mRNA及蛋白表达水平.结果 Fe-NTA处理组中MDA、NO含量明显升高,而GSH水平显著降低,SOD酶活性也显著降低;而甘草酸处理的3组细胞中MDA、NO含量显著降低,GSH水平显著升高,SOD酶活性也显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).Fe-NTA处理组中Nrf2和HO-1mRNA及蛋白表达水平与空白对照组比较显著降低,而甘草酸处理的3组细胞中Nrf2和HO-1mRNA及蛋白表达水平相对于Fe-NTA处理组显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 甘草酸有抗HSC细胞氧化应激损伤的作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关.     

苦参碱对肺纤维化大鼠核因子E2相关因子2、血红素氧合酶-1的作用研究影响

目的观察博来霉素诱导的大鼠肺纤维化中核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）的表达,探讨苦参碱对肺纤维化的作用及Nrf2、HO-1表达的影响。方法 SD大鼠120只,随机分为五组：正常对照组（C）、模型组（M）、泼尼松处理组（P）、苦参碱50处理组（M50）、苦参碱100处理组（M100）。计算肺系数,病理学检查肺组织,免疫组化法（SP）分析每组肺组织中的Nrf2、HO-1蛋白水平,RT-PCR检测大鼠肺组织中Nrf2、HO-1 mRNA表达。结果造模后M、P、M50、M100组的Nrf2、HO-1表达高于C组（P〈0.05）。第7、14天时M组Nrf2、HO-1 mRNA表达比P、M50、M100组低（P〈0.05）;第28天M、P、M50、M100组Nrf2、HO-1 mRNA表达比第7、14天的表达偏低,第7天表达最高（P〈0.05）。直线相关分析显示Nrf2 mRNA表达与HO-1 mRNA呈正相关（P〈0.05）。结论苦参碱有抑制博来霉素诱导的肺纤维化的作用,其机制可能与早期上调Nrf2、HO-1表达、抑制氧化应激反应有关。     

当飞利肝宁胶囊调控肝脏氧化应激改善非酒精性脂肪性肝病小鼠的机制研究

目的:探讨当飞利肝宁胶囊对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠的治疗作用及潜在机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组和当飞利肝宁(0.42 g·kg~(-1)·d~(-1))组,每组10只。除正常组外,其他小鼠给予高脂饲料喂养12周,以诱导模型。造模后,各组小鼠灌胃给予相应药物干预,连续4周。末次给药后,取血清,收集肝组织。生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平;油红O染色和HE染色后观察肝组织形态学变化。试剂盒检测肝组织TC、TG、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;PCR检测肝脏核因子E2相关因子2(Nrf2)、细胞色素P450家族成员2E1(CYP2E1)、血红素氧合酶1(HO-1)、NADPH醌氧化还原酶(NQO1)、谷胱甘肽硫转移酶P1(GSTP1)的mRNA表达;Western blot检测肝脏Nrf2和CYP2E1的蛋白表达。结果:(1)与模型组相比,当飞利肝宁组小鼠血清ALT、AST、TC和LDL水平显著降低(P0.05)。(2)当飞利肝宁胶囊能明显降低模型小鼠的肝脏TG水平(P0.05),且明显减轻模型小鼠肝组织肝细胞脂肪变性、脂质堆积;与模型组相比,当飞利肝宁组小鼠肝脏SOD活性明显升高(P0.05),MDA含量显著降低(P0.05)。(3)模型组小鼠肝脏Nrf2、HO-1、GSTP1、NQO1及CYP2E1的mRNA表达水平较正常组均显著下降(P0.05,P0.01),当飞利肝宁胶囊干预可明显上调模型小鼠肝脏Nrf2、GSTP1及NQO1的mRNA表达水平(P0.05)。(4)模型组小鼠肝脏Nrf2和CYP2E1的蛋白表达水平较正常组明显降低(P0.05,P0.01),当飞利肝宁胶囊干预可明显升高模型小鼠肝脏Nrf2和CYP2E1的蛋白表达水平(P0.05)。结论:当飞利肝宁胶囊对高脂饮食诱导的NAFLD小鼠具有良好的治疗作用,其作用机制与降低Nrf2介导的肝脏氧化应激水平有关。     

独活寄生汤改善佐剂性关节炎大鼠氧化应激机制探讨

【目的】探讨独活寄生汤对佐剂性关节炎(AIA)大鼠抗氧化能力及对核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响。【方法】采用弗式完全佐剂成功诱导大鼠佐剂性关节炎模型。将90只大鼠随机分为正常组,模型组,甲氨喋呤组(剂量为0.5 g·kg~(-1),日2次),独活寄生汤低、中、高剂量组(剂量分别为0.75、1.5、3.0 g·kg-1,日2次),每组15只,连续给药24 d。采用荧光定量聚合酶链反应(q PCR)法检测各组大鼠滑膜组织超氧化物歧化酶(SOD)mRNA、丙二醛(MDA)mRNA、HO-1 mRNA表达变化,采用分光光度法检测各组大鼠滑膜组织SOD、MDA含量,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠滑膜组织胞核、胞质Nrf2和全细胞HO-1蛋白表达。【结果】独活寄生汤高、中剂量可上调模型大鼠滑膜组织SOD表达,降低MDA的表达,降低胞质Nrf2含量,升高胞核Nrf2含量,提高Nrf2核转位率,增强滑膜组织HO-1的表达,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。【结论】独活寄生汤具有增强抗氧化应激的能力,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2核转位,进而促进下游抗氧化因子HO-1的表达有关。     

合欢皮-白蒺藜药对对AngⅡ-ROS诱导下HSC-LX2细胞增殖及PKC/Nrf2/HO-1通路的影响

[目的]探讨合欢皮-白蒺藜含药血清对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导产生的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)作用下人源性肝星状细胞HSC-LX2的增殖及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)/核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧化酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)通路的影响。[方法]以HSC-LX2细胞为研究对象,先以AngⅡ诱导产生ROS,再以合欢皮-白蒺藜含药血清进行干预,MTT法检测HSC-LX2细胞的增殖情况,Western blot和Real-time PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、PKC、Nrf2、HO-1蛋白以及m RNA表达情况。[结果]MTT结果显示,与AngⅡ组比较,合欢皮-白蒺藜药对高、中、低剂量组均显著抑制HSC-LX2细胞增殖(均P<0.05)。Western blot结果显示,与AngⅡ组比较,合欢皮-白蒺藜药对高、中、低剂量组α-SMA蛋白表达减少(均P<0.001),低剂量组PKC蛋白表达减少(P<0.05),高、中剂量组Nrf2蛋白表达减少(P<0.001,P<0.01),高、中剂量组HO-1蛋白表达减少(P<0.001,P<0.001)。Real-time PCR结果显示,与AngⅡ组比较,合欢皮-白蒺藜药对高、中、低剂量组α-SMA mRNA表达减少(P<0.01,P<0.001,P<0.001),PKC mRNA表达减少(均P<0.001),Nrf2 mRNA表达减少(P<0.001,P<0.001,P<0.05),高、中剂量组HO-1 mRNA表达减少(均P<0.001)。[结论]HSC-LX2细胞经AngⅡ刺激后增殖活化明显,且α-SMA表达升高,此过程与PKC、Nrf2、HO-1蛋白的激活有关。合欢皮-白蒺藜可通过抑制HSC-LX2细胞增殖来阻止肝纤维化,其机制与抑制PKC、Nrf2、HO-1的表达有关。     

蛋白激酶C- 核因子相关因子2 调节大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶-1 的表达

目的：探讨蛋白激酶C(PKC)- 红系衍生的核因子相关因子2 (Nrf2) 对香烟烟雾提取物(CSE) 诱导 的大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶-1(HO-1) 表达的影响。方法：将25 只SD 大鼠的气道上皮细胞随机分为对 照组、CSE3h 组、RO318220(PKC 抑制剂) 组、Nrf2 siRNA 组和Nrf2 siRNA+RO318220 组,每组5 只。对照组 用DMEM/F12 正常培养,CSE3h 组用10% CSE 共培养3 h;RO318220 组则用3 mol/L RO318220 预处理0.5 h,余处理同CSE3h 组;Nrf2 siRNA 组先用Nrf2 siRNA 预处理,余处理同CSE3h 组;Nrf2 siRNA+RO318220 组则先用3 mol/L RO318220 和Nrf2 siRNA 预处理,余处理同CSE3h 组。用Western 印迹法分别检测HO-1, Nrf2 和PKC 蛋白表达,细胞免疫化学法观察HO-1 蛋白表达,反转录- 聚合酶链反应(RT-PCR) 法检测HO-1 mRNA 表达,免疫荧光法观察Nrf2 核转位,测定HO-1 活性。结果：CSE 明显诱导Nrf2 核转位,其诱导作 用可被RO318220 阻断。HO-1 蛋白在CSE3h 组强阳性表达,在对照组、RO318220 组、Nrf2 siRNA 组和Nrf2 siRNA+RO318220 组均弱阳性表达。CSE3h 组PKC 蛋白、HO-1 mRNA 和蛋白表达较对照组显著升高,HO-1 活性较对照组明显增强(P<0.05)。PKC 蛋白表达水平在Nrf2 siRNA 组和CSE3h 组无明显差异(P>0.05)。结论： CSE 通过PKC 信号通路诱导Nrf2 核转位,上调HO-1 的表达水平。     

荔枝核皂苷对糖调节受损大鼠胰腺组织氧化应激的改善作用及其机制

目的：研究荔枝核皂苷（SL）对糖调节受损（IGR）大鼠氧化应激及核转录因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶1（HO-1）信号通路的作用,阐明其相关机制。方法：采用高脂饲料喂养制备IGR大鼠模型,随机分为模型组、二甲双胍组（0.20 g·kg^-1）、低剂量SL组（0.05 g·kg^-1）、中剂量SL组（0.10 g·kg^-1）和高剂量SL组（0.20 g·kg^-1）,同时设正常对照组,每组12只,连续给药6周。观察SL对实验大鼠糖脂代谢的影响,采用实时荧光定量（Real-time PCR）法检测大鼠胰腺组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和HO-1 mRNA表达水平,Western blotting法检测大鼠胰腺组织胞核、胞质Nrf2和全细胞HO-1蛋白表达水平,采用SOD和MDA试剂盒检测大鼠胰腺组织中SOD活性和MDA水平。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠空腹血糖（FBG）和血脂水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,胰腺组织中SOD活性和mRNA表达水平降低（P<0.01）,MDA水平和mRNA表达水平升高（P<0.01）,胞核和胞质中Nrf2蛋白表达水平和核转位率升高（P<0.01）,HO-1 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较,二甲双胍组和中、高剂量SL组大鼠FBG和血清甘油三酯（TG）水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,胰腺组织中SOD活性和mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,MDA水平和mRNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,胞质中Nrf2表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,胞核中Nrf2表达水平和核转位率升高（P<0.05或P<0.01）,HO-1 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。结论：SL具有改善糖脂代谢和增强抗氧化应激作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路、促进Nrf2核转位及增强下游抗氧化基因HO-1表达有关。     

异氟烷预处理激活Nrf2-ARE通路保护H9c2心肌细胞缺氧-复氧损伤

目的 研究异氟烷预处理对大鼠胚胎心肌细胞(H9c2)缺氧-复氧损伤及Nrf2-ARE信号通路的影响.方法 用大鼠H9c2细胞低氧模拟缺血性损伤,并将细胞分为空白对照组、缺氧-复氧组、异氟烷预处理组、转染Nrf2 siRNA组、转染非特异性siRNA组(Scramble组)、异氟烷预处理的Scramble组和异氟烷预处理的siRNA组.采用MTT法检测H9c2细胞存活率,TUNEL染色检测细胞凋亡,分别使用硫代巴比妥酸法(TBA)和分光光度法测定MDA和GSH水平,qRT-PCR及Western blot检测Nrf2、HO-1和NQO1基因的表达.结果 与空白对照组比较,缺氧-复氧组细胞活力降低,凋亡细胞数上升,MDA水平升高,GSH水平降低,同时H9c2细胞中Nrf2、HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达降低,差异均具有统计学意义(JP＜0.01).与缺氧-复氧组比较,异氟烷可提高H9c2细胞活力,降低凋亡细胞数,并降低MDA水平,升高GSH水平,上调Nrf2、HO-1和NQO1的表达(P＜0.05).siRNA转染组Nrf2的mRNA和蛋白表达与缺氧-复氧组和Scramble组相比均降低(P＜0.05),2％异氟烷对siRNA转染组Nrf2 mRNA和蛋白表达均无影响(P＞0.05);经2％异氟烷处理的siRNA转染组H9c2细胞存活率与空白对照组、2％异氟烷处理组和2％异氟烷处理的Scramble组相比降低,凋亡细胞数增多,MDA水平升高,GSH水平降低(P＜0.05).结论 异氟烷预处理对H9c2细胞缺氧-复氧损伤具有保护作用,这种保护作用与激活Nrf2-ARE信号通路有关.     

大鼠创伤性脑损伤后Nrf2通路相关因子的表达

目的 观察大鼠创伤性脑损伤后脑组织内核因子E2相关性因子2(Nrf2)及该通路下游分子血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)的表达.方法 采用改良Feeney自由落体模型制作大鼠脑外伤模型,对照组仅开骨窗不制作脑外伤.采用Western Blot法检测脑外伤24h后损伤灶周围脑组织细胞核内Nrf2蛋白含量,RT-PCR法检测HO-1 mRNA、NQO1mRNA水平.结果 脑外伤后脑组织细胞核内Nrf2蛋白含量显著增加,HO-1 mRNA、NQO1 mRNA水平亦明显增加(均P＜0.01).结论 脑外伤后脑组织内Nrf2通路被激活.     

Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对胰岛细胞半胱天冬酶-3表达的影响

目的 探讨核因子相关因子2 (Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路相互作用对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛细胞凋亡和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响及其可能机制.方法 将60只雄性Wistar大鼠分为正常对照组(NC组,n=20)、糖尿病模型组(DM组,n=20)和叔丁基对苯二酚干预组(tBHQ组,n=20),干预8周后处死所有大鼠,TUNEL检测胰岛细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清及胰腺组织中丙二醛(MDA)水平,Western blot检测AKT、p-AKT、总Nrf2、核Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)、Caspase-3在胰岛细胞中蛋白表达水平.结果 与NC组比较,DM组胰岛细胞凋亡率显著增加(P=0.000),而tBHQ组胰岛细胞凋亡率明显低于DM组(P=0.000).DM组血清及胰腺组织中MDA水平较NC组明显升高(P=0.000),而tBHQ组血清及胰腺组织中MDA水平明显低于DM组(P=0.000).DM组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均较NC组显著降低(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平较NC组明显升高(P=0.000);与DM组比较,tBHQ组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均明显增加(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P=0.017);AKT蛋白表达水平在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对抑制胰岛细胞Caspase-3的表达及延缓胰岛细胞凋亡进程产生重要的保护作用.     

制大黄-川芎药对对CIN大鼠肾组织Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的:在前期发现制大黄-川芎药对能抑制对比剂肾病(contrast-induced nephropathy,CIN)大鼠肾小管上皮细胞凋亡的基础上,进一步从核因子E2相关因子/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)通路探讨该药对的作用机制。方法:将32只雄性SD大鼠分为正常组(A组)、模型组(B组)、药对组(C组)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(D组)。C组于造模前7 d每日灌胃制大黄-川芎水煎液,D组造模前3 d每日腹腔注射NAC(150μg/g)。B、C、D三组按照文献方法制备CIN模型。造模后24 h处死动物,并腹主动脉采取血测定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);代谢笼收集24 h尿液,并测定尿液中急性肾损伤(AKI)标志物N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)、γ-谷氨酰转肽酶(U-γ-GT);分别提取肾组织中核蛋白和总蛋白,采用Western blotting方法检测肾组织中Nrf2和HO-1蛋白表达。结果:与A组比较,B组大鼠Scr、BUN、尿NAG、U-γ-GT均明显升高(P0.01),肾组织中Nrf2、HO-1蛋白表达明显上调(P0.01);与B组比较,C、D组Scr、BUN明显降低(P0.05),尿NAG、U-γ-GT显著降低(P0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:Nrf2/HO-1通路活化参与了CIN大鼠急性肾损伤过程,且制大黄-川芎药对可通过抑制该通路活化保护CIN大鼠肾功能。