p53及p21waf1蛋白表达与人舌癌细胞多药耐药性的关系

目的探讨p53及p21waf1蛋白表达与人舌癌细胞系Tca8113多药耐药性(MDR)的关系。方法采用脂质体介导的转染技术,将野生型p53(wt-p53)基因导入人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM;分子信标(Molecular Beacon)法检测人舌癌细胞系Tca8113及其耐药细胞系Tca8113/BLM中p53基因的mRNA水平;W estern blot检测亲本、耐药细胞和转染细胞中p53、p21waf1、P-gp和MRP蛋白的表达变化;MTT法检测不同细胞的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞周期的改变,激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡。结果在人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM中p53基因的表达明显下调,并且未检测到p21waf1蛋白的表达;转染了wt-p53的耐药细胞Tca8113/BLM/p53中p53和p21waf1蛋白表达均显著上调,而P-gp和MRP的蛋白表达则明显下调,其对药物BLM的敏感性增加10.1倍(P<0.01);转染细胞的周期也发生改变,G2期细胞增加,G1和S期细胞减少,转染细胞明显出现凋亡。结论人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM多药耐药性的产生,可能通过p53和p21waf1的表达下调使得多药耐药性相关蛋白P-gp和MRP表达上调来实现。     

黄体酮对人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM的逆转作用研究

目的　研究黄体酮 (ProgresteroneProg)对人舌癌耐药细胞Tca8113 /BLM的逆转作用和机制。方法　以人舌癌耐药细胞Tca8113 /BLM为研究对象 ,以逆转剂维拉帕米 (VerapamiVera)为对照 ,采用MTT法检测Prog对细胞Tca8113 /BLM逆转 ;流式细胞仪检测Prog对细胞内阿霉素 (ADM)浓度聚积、细胞膜上P -gp的表达 ,以及对细胞周期的影响。结果　Tca8113、Tca8113 /BLM细胞对BLM的IC5 0分别为 10 1和 12 0 1;加用 2umol/LProg作用细胞后Tca8113、Tca8113 /BLM细胞对BLM的IC5 0分别为 9 5 6和 12 1,耐药细胞对BLM的增敏倍数为 9 92 ;ADM浓度在Tca8113 /BLM细胞内明显增加 (P <0 0 1) ,而亲本细胞Tca8113没有明显改变 ;细胞膜上的P -gp的阳性表达率也显著下降 ( P <0 0 1) ;细胞周期发生改变 ,G1细胞减少 ,G2期和S期细胞增多。结论　Prog能显著提高耐药细胞内药物的浓度 ,可逆转人舌癌耐药细胞Tca8113 /BLM对BLM的耐药作用 ,其逆转机制可能与P -gp的结合有关     

联合转染p53与血管生成抑素基因对人胃癌细胞系SG7901生长的影响

目的 探讨联合转染p53和血管生成抑素（AS）基因对人胃癌细胞系SG7901生长的影响。方法 用脂质体转染法分别将p53、AS基因、p53和AS基因转染人胃癌细胞系SG7901。以RT-PCR法检测转染后细胞目的基因的表达，通过细胞集落形成实验、MTT生长曲线、细胞周期检测观察其生物学特性变化。结果 p53或AS基因均能抑制转染细胞的生长，而联合转染两种基因的细胞生长抑制更明显。结论 p53和AS基因具有协同抑制恶性肿瘤细胞生长作用，提示联合多种基因可能有利于恶性肿瘤的基因治疗。     

重复加热对肝癌HepG2细胞多药耐药相关蛋白表达的影响

目的：探讨多次加热后对残存的肝癌HepG2细胞的多药耐药相关蛋白（MRP）基因／蛋白表达的影响。方法：HepG2细胞43℃加热，每次80min，2次／d，10个循环后，MTT法分析其对阿霉素的敏感性，免疫组化法检测细胞MRP蛋白的表达，RT-PCR法检测细胞MRP mRNA的表达。结果：热处理后的HepG2细胞对阿霉素产生化疗耐受性升高，MRP基因／蛋白的表达增强。结论：热处理后HepG2细胞对化疗药物的耐受性可能与其MRP基因／蛋白的表达增强有关。     

联合转染p53与血管生成抑素基因对人胃癌细胞系SG7901生长的影响

目的探讨联合转染p53和血管生成抑素(AS)基因对人胃癌细胞系SG7901生长的影响。方法用脂质体转染法分别将p53、AS基因、p53和AS基因转染人胃癌细胞系SG7901。以RT-PCR法检测转染后细胞目的基因的表达,通过细胞集落形成实验、MTT生长曲线、细胞周期检测观察其生物学特性变化。结果p53或AS基因均能抑制转染细胞的生长,而联合转染两种基因的细胞生长抑制更明显。结论p53和AS基因具有协同抑制恶性肿瘤细胞生长作用,提示联合多种基因可能有利于恶性肿瘤的基因治疗。     

多药耐药相关蛋白及谷胱甘肽-S-转移酶π与人肺癌多药耐药细胞系SPC-A1/TAX耐药性关系研究

目的研究多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽-S-转移酶π(GST-π)与人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A1/TAX多药耐药性之间的关系。方法采用S-P免疫组化法检测细胞MRP、GST-π的表达;采用MTS法分别检测并比较SPC-A1、SPC-A1/TAX细胞对6种不同化疗药物的敏感性。结果耐药组MRP、GST-π表达均为阳性,亲本组MRP、GST-π表达均为阴性,耐药组与亲本组间差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);SPC-A1/TAX较SPC-A1除对原诱导药物TAX具有耐受性外,对其他5种抗肿瘤药物也表现出不同程度的耐药性。结论MRP、GST-π在SPC-A1/TAX细胞系中表达与该人肺腺癌多药耐药细胞系的MDR具有相关性,是其MDR产生的可能机制。     

p53/p21信号转导通路在石英诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化中的作用

目的观察石英诱导恶性转化的人胚肺成纤维细胞(T-HELF)中p53蛋白的表达量,并探讨p53蛋白对p21、细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)蛋白表达量及蛋白间相互作用的影响。方法利用胞浆胞核分离技术,分别提取人胚肺成纤维细胞(HELF)、T-HELF胞浆和胞核蛋白,运用Western blot检测p53、磷酸化p53及p21蛋白在细胞中的表达量及分布。利用RNA干扰技术,在T-HELF中转染2μg p53 siRNA,同时设立转染CMV-neo空白载体质粒的对照组,观察p53、磷酸化p53、p21、细胞周期蛋白D1和CDK4的蛋白表达量及改变。用免疫沉淀方法检测HELF和T-HELF中p21、细胞周期蛋白D1及CDK4蛋白结合物水平的变化,并在T-HELF中分别加入20μmol/L p53化学抑制剂pifithrin-α(PFT-α)和2μg p53转染质粒,观察其对p21、细胞周期蛋白D1及CDK4蛋白间相互作用的影响。结果石英刺激HELF可引起胞核中p53及磷酸化p53蛋白表达量显著增高(P<0.05),T-HELF胞核中p53的蛋白表达量较HELF显著降低(P<0.05)。转染p53 siRNA后,p53蛋白与对照组相比表达下降,p21及细胞周期蛋白D1蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),尚未观察到CDK4蛋白表达量的变化(P>0.05)。免疫沉淀结果显示抑制p53的表达可下调p21与细胞周期蛋白D1蛋白复合物的表达量(P<0.05),但尚未观察到其对p21、细胞周期蛋白D1与CDK4蛋白结合的影响(P>0.05)。结论 p53可通过调控p21、细胞周期蛋白D1的蛋白表达和蛋白间相互作用参与石英诱导的恶性转化过程。     

外源性p21（waf1）基因转染对人胃癌细胞系BGC-823增殖的影响

目的：探讨外源性p21waf1基因转染对人胃癌细胞系BGC-823细胞增殖的影响。方法：用脂质体介导的方法将pIRES-p21waf1真核表达载体转染人胃癌细胞系BGC-823,分为pIRES-p21waf1转染组、pIRES-neo空载体组及未转染组三个组别。应用实时荧光定量RT-PCR、Westernblot免疫印迹分别在基因和蛋白两个水平检测各组p21的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞DNA周期变化,所有数据进行统计学分析。结果：p21waf1转染组p21waf1mRNA和p21蛋白高表达（P〈0.01）;p21waf1转染组BGC-823细胞生长速度明显低于空载体组和未转染组（P〈0.01）;流式细胞仪观察到p21waf1转染组细胞的G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组（P〈0.01）,S期比例显著低于空载体组和未转染组（P〈0.01）,并出现凋亡峰。结论：p21waf1基因转染可以抑制人胃癌细胞系BGC-823细胞增殖并能诱导其发生细胞凋亡,可能为胃癌的基因治疗提供一条新的途径。     

SDF-1/CXCR4在舌癌组织中的表达及对舌癌细胞系Tca8113增殖、迁移和侵袭的影响研究

目的探讨SDF-1/CXCR4在舌癌组织中的表达及对舌癌细胞系Tca8113增殖、迁移和侵袭的影响。方法 RTPCR及Western blot检测舌癌组织及癌旁组织中SDF-1和CXCR4的mRNA和蛋白表达;培养人舌癌细胞系Tca8113,将细胞分为对照组、SDF-1组、SDF-1+AMD3100组、AMD3100组,Western blot检测四组细胞CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达,CCK8试验检测四组细胞增殖,Transwell小室检测四组细胞迁移和侵袭数。结果舌癌组织中SDF-1和CXCR4的mRNA和蛋白表达均显著高于癌旁组织(P0.01);SDF-1组CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭均显著高于另外三组(P0.01);SDF-1+AMD3100组CXCR4蛋白表达显著低于对照组和SDF-1组;MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭与对照组差异不显著(P0.05),但均显著低于SDF-1组;CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭均显著高于AMD3100组(P0.01);AMD3100组CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭均显著低于另外三组(P0.01)。结论 SDF-1和CXCR4在舌癌组织高表达,SDF-1可上调CXCR4在人舌癌细胞系Tca8113的表达,其过程能被AMD3100减弱。SDF-1/CXCR4可促进细胞的增殖、侵袭和迁移,此过程可被AMD3100抑制。     

硒对镉诱导的大鼠肝脏端粒酶逆转录酶和c-Myc及p53表达的影响

目的研究亚硒酸钠时氯化镉诱导的大鼠肝脏端粒酶逆转录酶（TERT）mRNA、c-Myc蛋白、p53蛋白表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为6组，对照组、硒组（5μmol／kg亚硒酸钠）、5μmol／kg氯化镉组、10μmol／kg氯化镉组、研（5μ／kg亚硒酸钠）＋5μmol／kg氯化镉组、硒（5μmol／kg亚硒酸钠）＋10μmol／kg氯化镉组。每组动物5只，染毒48h后取出肝脏，用RT-PCR方法检测TERP基因的表达，用免疫组织化学方法检测c-Myc蛋白和p53蛋白的表达。结果与对照组比较，5μmol／Lkg氯化镉组和10μmol／kg氯化镉组TERP表达增多，10μmol／L kg氯化镉组c-Myc蛋白表达增多，5μmol／L kg氯化镉组和10μmol／L kg氯化镉组p53蛋白表达增多。TERT的表达，硒＋10μmol／Lkg氯化镉组与10μmol／L kg氯化镉组比较降低；硒＋10μmol／L kg氯化镉组比10μmol／L kg氯化镉组c-Myc蛋白表达降低；硒＋5μmol／L kg氯化镉组、硒＋10μmol／L kg氯化镉组与相对应的镉组比较p53蛋白表达降低。结论镉在5～10μmol／L kg的剂量条件下可以诱导大鼠肝脏高表达TERT、c-Myc蛋白和p53蛋白，而硒对镉引起的TERT、c-Myc蛋白和p53蛋白的表达增高具有一定的拮抗作用。     

苦参碱对人舌癌Tca-8113细胞增殖抑制及机制研究

目的探讨分化诱导剂苦参碱（Matrine Mat）对人舌癌Tca-8113细胞系增殖抑制作用及其发生的机制。方法体外培养舌癌TCA-8113细胞,用不同浓度的苦参碱对体外培养的舌癌TCA-8113细胞进行干预。分别采用MTT：细胞周期检测;免疫细胞化学染色、间接免疫荧光联合流式细胞仪定量检测等方法,观察其对舌癌TCA-8113细胞的增殖抑制作用并探讨该作用发生的机制。统计学分析采用12．00统计软件包,计量资料用均数±标准差（x^-±s）表示,t检验做显著性比较,P〈0．05为显著性检验水准。结果经Mat处理后的舌癌TCA-8113细胞生长速度减慢．细胞周期明品阻滞;其PCNA表达明显下降。结论Mat对舌癌TCA-8113细胞的增殖有显著的抑制作用;其增殖抑制作用发生可能是通过对细胞周期阻滞及调控增殖相关基因表达发生。     

聚乙二醇重组生长激素治疗特发性矮小症儿童效果及对血清p53及p21waf/cip1表达的影响

目的 观察分析聚乙二醇重组人生长激素对特发性矮小症儿童的治疗效果及对血清p53及p21waf/cip1表达的影响,为临床合理应用提供依据。方法 选取2015年2月-2016年10月在本院接受治疗的121例特发性矮小症儿童作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和治疗组,其中对照组61例,治疗组60例,给予对照组常规营养治疗,治疗组在常规营养治疗基础上联合聚乙二醇重组人生长激素注射治疗,观察比较两组患者治疗效果和不良反应发生情况,治疗前、治疗后3个月、6个月以及治疗结束时IGF-1/IGFBP-3水平、血清p53以及p21waf/cip1表达水平差异。结果 疗程结束后,治疗组患者平均身高明显高于对照组(P<0.05);随着治疗时间延长,两组患者IGF-1和IGFBP-3水平均升高,与对照组相比,相同时间点治疗组IGF-1和IGFBP-3水平均明显高于对照组(P<0.05);治疗前后两组患者血清p53 mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05);p21waf/cip1mRNA表达随着治疗时间延长不断降低,同一时间点治疗组显著低于对照组(P<0.05)。结论 聚乙二醇重组生长激素对特发性矮小症儿童的治疗效果显著,有效促进患者身高增高,改善细胞增殖受阻状况,具有在临床广泛应用的价值。     

p53、p21waf1和增殖细胞核抗原诊断肺癌的评估

目的　评价p53、p21waf1和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达对肺癌的诊断价值。方法　采用免疫组化法检测114例肺癌和89例肺良性疾病组织标本p53、p21waf1和PCNA蛋白表达状况，计算三项指标及其组合诊断肺癌的各项参数。结果　(1)肺癌p53、p21waf1及PCNA表达阳性率分别为47.37%、75.44%和80.70%，明显高于肺良性疾病组织(P＜0.001)。其OR值分别为39.15,5.75和6.76。(2)p53、p21waf1及PCNA蛋白表达与肺癌TNM分期无关。不同病理类型p53和p21waf1蛋白表达也无差异，但鳞癌PCNA表达阳性率高于小细胞癌。(3)p53诊断肺癌的阳性似然比为21.08，高于p21waf1和PCNA，但灵敏度较低。(4)PCNA诊断鳞癌的Youden指数为0.5146，显著高于小细胞癌。但其阳性似然比为2.29，仍低于p53。(5)p53和PCNA平行试验的灵敏度为89.47%,特异度为60.67%,其综合评价参数最高。结论　(1)肺癌p53、p21waf1和PCNA表达均上调，三者与肺癌均有很强联系。(2)p53是一项很好的肺癌诊断单项指标。p53和PCNA平行试验诊断肺癌的综合价值较高。     

靶向p38反义寡核苷酸-脂质体复合物对人卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响

目的:探讨p38反义寡核苷酸(p38 anti-ODN)对卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响。方法:培养卵巢癌细胞株(CAOV3),以MTT比色法及克隆形成实验测定p38 anti-ODN抑制卵巢癌细胞株CAOV3增殖的作用。免疫印迹法测定p-p38、Cyclin D1及p21waf/cip1表达。免疫沉淀法纯化蛋白并p38试剂盒测定p38活性。结果:MTT实验及克隆分析法均显示p38 anti-ODN明显抑制CAOV3细胞增殖、p-p38表达、下调Cyclin D1表达,同时上调p21waf/cip1表达。结论:p38反义寡核苷酸可以抑制卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖,其机制与影响p38通路及下游CyclinD1、p21waf/cip1表达有关;干预p38通路是基因治疗卵巢癌的重要途径之一。     

Ellagic acid potentiates the effect of quercetin on p21waf1/cip1, p53, and MAP-kinases without affecting intracellular generation of reactive oxygen species in vitro

Anticarcinogenic effects attributed to polyphenols in fruits may be based on synergistic, additive, or antagonistic interactions of many compounds. In a previous study, it was demonstrated that quercetin and ellagic acid interacted synergistically in the induction of apoptosis in the human leukemia cell line, MOLT-4. To investigate possible cellular mechanisms, this study evaluated whether synergistic effects might be detectable within proapoptotic or antiproliferative signal transduction pathways. We found that quercetin and combinations of quercetin and ellagic acid nonsynergistically increased p53 protein levels. In contrast, ellagic acid potentiated the effects of quercetin for p21(cip1/waf1) protein levels and p53 phosphorylation at serine 15, possibly explaining the synergistic effect observed in apoptosis induction. Phosphorylation of the mitogen-activated protein (MAP) kinases, c-jun N-terminal (JNK)1,2 and p38, was also increased by the combination of ellagic acid and quercetin, whereas quercetin alone induced only p38. We further evaluated whether the generation of reactive oxygen species (ROS) and/or quercetin stability were influenced by interactions of ellagic acid with quercetin. Quercetin increased the generation of ROS, which was neither potentiated nor inhibited by ellagic acid. The stability of intracellular and extracellular quercetin was not influenced by the presence of ellagic acid. In summary, quercetin and ellagic acid combined increase the activation of p53 and p21(cip1/waf1) and the MAP kinases, JNK1,2 and p38, in a more than additive manner, suggesting a mechanism by which quercetin and ellagic acid synergistically induce apoptosis in cancer cells.     

P33~(ING1b)、P53与HPV_(16/18)在宫颈癌中表达的相关性

目的:研究P 33ING1b、P 53蛋白及HPV16/18在宫颈癌中表达的相关性。方法:应用免疫组织化学SP方法检测了80例宫颈癌组织中P 33ING1b和P 53蛋白的表达,分析HPV16/18型在宫颈癌中的感染率与P 33ING1b及P 53的关系。结果:P 33ING1b、P 53蛋白的阳性率分别为41.25%和57.50%,共阳性表达25例(31.25%),两者间有相关性(P<0.01)。HPV 16阳性为54例(67.50%);HPV 18阳性为17例(21.25%)。HPV 16阳性例数中有39例P 53阳性(72.2%),有31例P 33ING1b阳性(57.41%),HPV 18阳性例数中有11例P 53阳性(64.71%),有9例P 33ING1b阳性(52.94%);宫颈癌组织中HPV16/18的感染与P 33ING1b、P 53蛋白表达之间均有相关性(P<0.01)。结论:P 33ING1b、P 53蛋白在宫颈癌中的表达呈正相关关系,HPV16/18在宫颈癌中的感染与P 33ING1b、P 53蛋白表达均有相关性。     

乳腺癌中MDR1/P-gp与CerbB-2、p53表达的关系及临床意义

目的探讨乳腺癌中多药耐药基因MDR1/P-gp与CerbB-2、p53表达的关系及临床意义。方法采用免疫组化SP法,检测186例手术切除的乳腺癌组织中P-gp与CerbB-2、p53蛋白的表达。结果乳腺癌组织中P-gp与CerbB-2、p53蛋白的阳性表达率分别为41.4%、51.1%、38.7%。P-gp蛋白阳性组CerbB-2过表达率高于P-gp蛋白阴性组,过表达率分别为37.66%、20.18%,差异有显著性意义(P<0.01)。P-gp蛋白阳性组p53过表达率也高于P-gp蛋白阴性组,过表达率分别为28.57%、15.60%,差异有显著性(P<0.05)。P-gp表达与患者原发肿瘤的大小、淋巴结转移状况、TNM分期、病理类型以及E、P激素受体状况无关(P>0.05)。CerbB-2、p53表达在淋巴结转移的乳腺癌患者中明显升高。结论乳腺癌中存在MDR1/P-gp与CerbB-2、P53基因共表达,与多药耐药有关。联合检测可为乳腺癌患者综合治疗方案的选择提供重要的依据。     

P-gp和p53在肺癌组织中的表达及其临床预后意义

目的　探讨P -糖蛋白 (P -gp)、p5 3在肺癌组织中的表达及其临床意义。方法　应用免疫组化检测了 4 0例化疗组和 4 4例非化疗组的肺癌中P -gp、p5 3的表达水平 ,比较P -gp、p5 3的表达与生存率的关系。结果　肺癌组织中P -gp的阳性表达率为 4 0 .5 % ,p5 3的阳性表达率为 70 .2 % ;P -gp及p5 3在肺癌组织中的表达无相关性(P =0 .6 73,R =- 0 .0 4 7) ;二者表达与性别、年龄、分化程度、临床分期、病理类型无关 (P <0 .0 5 ) ;化疗组中P -gp、p5 3表达阳性者化疗后其生存时间明显短于阴性表达者 (P <0 .0 5 )。结论　P -gp和p5 3可作为临床判断化疗疗效的参考指标及预测肺癌患者预后的指标