抗纤维蛋白单克隆抗体导向溶栓剂的制备及其溶栓效果

抗纤维蛋白单克隆抗体导向溶栓剂的制备及其溶栓效果袁洪卫林汉张一泉我们利用自制的抗人纤维蛋白β链七肽单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＡＦ８Ｅ５与尿激酶（ＵＫ）进行化学连接，并观察了其体外溶栓及体内溶栓的效果。材料和方法１ＭｃＡｂ制备抗人纤维蛋白ＭｃＡｂＡＦ８Ｅ５...     

抗P-gp单克隆抗体的制备和鉴定

ｍｄｒ１基因的表达产物Ｐ糖蛋白（Ｐ１７０,Ｐｇｐ）作为一种外排泵,在ＡＴＰ的参与下,可将细胞内的药物运到细胞外,从而使细胞产生多药耐药（ＭＤＲ）。我们利用杂交瘤技术制备了一株抗Ｐｇｐ单抗,并初步探讨了其在临床上的应用前景。材料和方法１细胞系ＨＬ...     

抗卵巢上皮癌单克隆抗体的制备和鉴定

以人的浆液性卵巢上皮癌细胞系ＨＯ－８９１０为抗原，制备分泌抗卵巢癌单克隆抗体的杂交瘤，经间接免疫荧光组化鉴定证实。制备的单克隆抗体ＯＣ１Ｃ３与ＨＯ－８９１０呈强阳性反应，与其他肿细胞系则无反应或反应极弱。在冰冻切片中，单克隆抗体ＯＣ１Ｃ３与卵巢恶性肿瘤呈强阳性反应（７／８），与绒癌有部分交叉反应（１／２），与正常卵巢和胚胎组织无反应。结果表明ＯＣ１Ｃ３是卵巢恶性肿瘤的一种特异性抗原的单克隆抗体。为     

抗HCCR单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗人宫颈癌癌基因（HCCR）单克隆抗体（mAb）,并进行鉴定。方法以HCCR重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,常规筛选杂交瘤细胞。腹水诱导法制备抗人HCCR单克隆抗体,并经蛋白A亲合层析进行纯化。用Western blot和免疫荧光等方法检测HCCR mAb的特异性。用纯化HCCR蛋白进行包被,建立间接ELISA方法,检测系列稀释的HCCR mAb,确定其灵敏度。结果筛选出2株分泌抗人HCCR mAb的杂交瘤细胞株。Western blot结果表明抗人HCCR抗体能与HCCR蛋白特异性结合,免疫荧光结果显示肝癌HepG2细胞中胞浆和胞膜均呈阳性染色。间接ELISA方法检测HCCR mAb的灵敏度可达到1μg/L。结论成功制备并鉴定了特异性抗人HCCR mAb的杂交瘤细胞株,为进一步深入研究HCCR的生物学特征和临床应用打下基础。     

抗胎儿血红蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的 制备和鉴定抗胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)单克隆抗体(mAb),为相关疾病的研究提供支持与工具.方法 用脐带血红细胞裂解物免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(NS-1)融合制备杂交瘤,经筛选和三次克隆化,从制备的腹水中纯化单克隆抗体.用ELISA以及western blot等方法鉴定单克隆抗体的特性(效价、Ig亚类、特异性以及亲和力).结果 筛选到3株可稳定分泌抗HbF单克隆抗体的杂交瘤细胞6A5、5C8、2C8,腹水效价分别为1×10-6、 2×10-6和4×10-6.单抗亚类均为IgG1,抗体亲和力分别为7.8×109、2.2×108和8.6×109.ELISA和western blot结果显示,6A5、5C8、2C8 mAb只与HbF的二聚体特异性结合,与其他类型血红蛋白不发生交叉反应.结论 获得3株能特异性识别HbF的高亲和力mAb,可结合二聚体与单体HbF,为临床检测HbF水平及相关研究提供了有效的工具.     

抗葡激酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗葡激酶单克隆抗体用于重组葡激酶生物活性的免疫检测。方法 用重组葡激酶免疫BAIB/c小鼠，将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经酶联免疫吸附试验筛选获得3株分泌抗葡激酶单克隆抗体细胞株。结果 经检测上述单克隆抗体与葡激酶有很强的亲和性，与宿主菌蛋白和人血清无交叉反应。结论 上述方法检测葡激酶生物活性具有亲和性、特异性高及快速、复合的特点，可用作动物和人类临床试验中检测葡激酶生物活性的一种手段。     

抗人纤维蛋白单克隆抗体SZ—63可变区基因的克隆及其基因工…

应用氯化铯－超离心法从抗人纤维蛋白单克隆抗体ＳＺ－６３杂交瘤细胞抽取总ＲＮＡ，经Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素柱层析分离出ｍＲＮＡ。采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，扩增出了ＳＺ－６３重链和轻链可变区基因。     

冠心病和脑梗塞患者中纤维蛋白原的临床意义

目的：研究血浆纤维蛋白原浓度与冠心病和脑梗塞之间的关系。同时研究纤维蛋白原浓度与冠心病伴发心绞痛、心肌梗塞、心力衰竭的关系以及纤维蛋白原浓度与脑梗塞的梗塞面积大小的关系。方法：选择冠心病和脑梗塞病人共42例。作为观察组，30例无冠心病。脑梗塞者作为对照组。测定血浆纤维蛋白原水平。结果：(1)观察组中有39例纤维蛋白原高于正常。占92．8％。对照组中仅为4例。占13．3％。(2)纤维蛋白原浓度与冠心病伴发心绞痛。心力衰竭呈正相关。与脑梗塞时梗塞面积的大小呈正相关。     

纤维蛋白原分子异常的临床意义

纤维蛋白原(Fg)的异常可分为质的缺陷(异常Fg血症)和量的异常(Fg缺乏症),两者均可分为先天性和获得性。异常Fg血症的特征是Fg分子结构异常改变了其功能特性,先天性异常Fg大多是基因点突变导致的个别氨基酸被置换。Fg缺乏症则可分为低Fg血症和无Fg血症。先天性无Fg血症是一种罕见的常染色体隐性遗传病,特征是Fg合成不足或完全缺乏,而其代谢过程正常。迄今已发现30余种导致该病的基因突变。本文就先天性Fg分子异常的临床意义进行综述。     

纤维蛋白原分子异常的临床意义

纤维蛋白原(Fg)的异常可分为质的缺陷(异常Fg血症)和量的异常(Fg缺乏症)，两者均可分为先天性和获得性。异常Fg血症的特征是Fg分子结构异常改变了其功能特性，先天性异常Fg大多是基因点突变导致的个别氨基酸被置换。Fg缺乏症则可分为低Fg血症和无Fg血症。先天性无Fg血症是一种罕见的常染色体隐性遗传病，特征是Fg合成不足或完全缺乏，而其代谢过程正常。迄今已发现30余种导致该病的基因突变。本文就先天性Fg分子异常的临床意义进行综述。     

两株CD45类单克隆抗体的产生及其特性

CD45即白细胞共同抗原,它是由同一结构基因经不同拼接后形成分子量不同的一组蛋白产物,至少包括220、205、190和180kDa的四种肽链,因而CD45尚有CD45RO、CD45RA和CD45RB的亚美。CD45具有受体蛋白的结构特征,其细胞内部分为酪氨酸磷酸酯酶,参与白细胞的激活、分化和生长调控。本实验旨在研制CD45类的单克隆抗体,为相应的基础和应用研究提供技术手段。应用杂交瘤技术共获得两个均为小鼠IgG1亚类的单克隆抗体,分别命名为NN26-2和LN2-2,它们与正常人外周血、骨髓单个核细胞、胸腺细胞和多种人白血病细胞系的反应性与CD45的分布相一致。免疫沉淀的结果表明NN26—2识别分子量为180～220kDa的蛋白成分,计算机软件分析也证明NN26-2和LN2-2同属CD45类抗体。本文报道的两个单克隆抗体已被第五届国际人白细胞分化抗原研讨会所接受,可以用于肿瘤组织免疫病理鉴别诊断、恶性淋巴瘤免疫分型、淋巴细胞亚群和造血干细胞分离。     

STUDIES OF IDIOTYPIC ANTIBODIES : PRODUCTION AND CHARACTERIZATION OF AUTOANTIIDIOTYPIC ANTISERA

Rabbits were immunized with a hapten-protein conjugate and sera were collected for 189 days. The antihapten antibodies were purified by affinity chromatography, then the same animal that synthesized the antibody was reinjected with polymerized F(ab')₂ fragments of antihapten antibodies. Sera were collected after autoimmunization and tested by an indirect radioimmunoassay technique for reaction with [¹²⁵I]F(ab')₂ fragments of the original antihapten antibody. Results showed that each individual responded to its own F(ab')₂ and the antisera were specific for antihapten antibodies of that individual. Quantitative allotype assays established the immunoglobulin nature of the labeled test antigen. Inhibition assays showed that the reaction was specifically inhibitable with hapten. The relationship of this system with other idiotypic systems and the possible autoimmune implications of autoantiidiotypic antibodies are discussed.     

抗人活化血小板不同颗粒膜蛋白的单抗在临床上的初步应用

本文利用单位点免疫放射结合试验来比较抗人血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、溶酶体膜蛋白(LIMP-CD63)、溶酶体膜相关蛋白(Lamp-1,Lamp-2)的单抗在检测血小板活化程度方面的应用价值。血小板表面GMP-140的分子数在被检的冠心病、急性心肌梗塞、风湿性心脏病及肺原性心脏病中均呈显著升高(P<0.01);LIMP-CD63分子数仅在冠心病及肺心病中呈显著升高(P<0.05);Lamp-1分子数仅在肺心病中呈显著升高;而Lamp-2分子数均未见显著改变。结果提示4种抗血小板活化标志蛋白的单抗中,GMP-140的单抗可作为疾病状态下判断体内血小板活化程度的指标,LIMP-CD63次之,而Lamp的单抗在疾病中应用价值不大。     

人源抗CEA噬菌体抗体库的构建及筛选

目的构建人癌胚抗原(CEA)特异性噬菌体抗体库,制备人源抗CEA单克隆抗体(mAb)。方法用常规RT-PCR法,直接从10例结肠癌患者肠系膜淋巴结中的淋巴细胞克隆出免疫球蛋白Fd段和κ链基因,建成噬菌体抗体库。对抗体库进行5轮吸附-洗脱-扩增的亲和选择后,以ELISA法鉴定抗CEA噬菌体。结果RT-PCR可有效地扩增出Fd和κ基因并以此构建成容量为5.2×106的噬菌体抗体库。经5轮亲和选择可使特异性噬菌体抗体得到高度富集,并成功获得抗CEA噬菌体抗体阳性克隆。结论抗CEA噬菌体抗体库的构建和人源抗CEA mAb的制备,为CEA阳性表达肿瘤的靶向治疗奠定基础。     

抗角蛋白单克隆抗体用于羊水栓塞病例病理诊断的研究

目的　研究羊水栓塞病例肺动脉及肺泡壁毛细血管中角蛋白阳性物质的表达 ,探讨其病理诊断的客观性指标。方法　应用抗角蛋白 16单克隆抗体对 14例羊水栓塞病例的肺组织切片进行免疫组织化学LSAB法染色 ,并以 2例正常人体皮肤组织为阳性对照 ,显微镜下观察其角蛋白表达情况。结果　 14例羊水栓塞病例的肺组织和 2例正常人体皮肤组织的切片中角蛋白免疫组织化学染色均表达为阳性。结论　免疫组织化学LSAB法抗角蛋白染色是确诊羊水栓塞客观而灵敏的方法。     

SPECIFIC INHIBITION OF WHEAL-AND-ERYTHEMA RESPONSES WITH UNIVALENT HAPTENS AND UNIVALENT ANTIBODY FRAGMENTS

Wheal-and-erythema responses were studied in normal human volunteers and in a single human subject who is sensitive to the 2,4-dinitrophenyl group. In the normal subjects, reactive skin sites were established by intradermal injection of purified rabbit antibody specific for the 2,4-dinitrophenyl group. In both the active and passively sensitized subjects, wheal-and-erythema was elicited by intradermal injection of a 2,4-dinitrophenyl protein, but not by injection of the same conjugate mixed with certain low molecular weight 2,4-dinitrophenyl haptens or with univalent fragments split by papain from anti-2,4-dinitrophenyl antibody. The latter fragments, unlike intact, bivalent, antibody, do not sensitize normal human skin sites. From these and other observations it is concluded that the wheal-and-erythema response in human skin requires mutually multivalent antigen and antibody. This requirement suggests that multimolecular complexes, containing at least 2 antigen and 2 antibody molecules, are essential in the pathogenesis of this allergic response.     

高纤维素饮食治疗糖尿病30例疗效观察

对30例非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM）患者在维持原糖尿病饮食的基础上,每日服用中国南瓜干粉30g,服用时间为半年。结果有23例"三多一少"症状明显改善．血糖明显降低,尿糖由＋＋＋～＋＋＋＋降至±～＋．总有效率76．7％,无效者7例。本文结果表明,在维持糖尿病饮食的基础上,添加中国南瓜干粉．对NIDDM的临床症状、尿糖、血糖、体重等的改善可起到积极的作用。     

抗人纤维蛋白单克隆抗体SZ－63可变区基因的克隆及其基因工程抗体的研究

应用氯化铯－超离心法从抗人纤维蛋白单克隆抗体ＳＺ一６３杂交瘤细胞抽取总ＲＮＡ，经Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素柱层析分离出ｍＲＮＡ。采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，扩增出了ＳＺ－６３重链和轻链可变区基因。应用基因重组技术将ＳＺ－６３可变区基因片段与人免疫球蛋白γ１重链ＣＨ１和轻链恒区基因进行拼接，构建噬菌体ＳＺ－６３／ＨｕＦａｂ表达载体，并在大肠杆菌中表达。表达的嵌合抗体Ｆａｂ片段为可溶性，ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测证实能特异地与人纤维蛋白呈结合反应，表达量约为２１０μｇ／Ｌ。     

特定蛋白的理化特性与临床意义

血液中含有多种蛋白质执行着多重功能。这些蛋白质，如载体蛋白、抗体、酶、凝血因子等，它们在血液中的改变与多种疾病有着密切的关系。但由于这些特定蛋白质在血液巾含量少，因此检测比较困难。随着检测方法的不断改进，血浆蛋白的检测范围逐步扩大，不仪可检测血液中的特定蛋白，还可检测尿液、脑脊液、胸腹水中的特定蛋白。目前特定蛋白的检测已成为临床不可缺少的检验项目。[第一段]