脐血造血干细胞体外培养及其特性研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术(FCM),观察了脐血中粒-单系祖细胞(CFU-GM)和红系祖细胞(BFU-E)的数量和特性,并对其细胞增殖周期和骨髓及成人外周血做了比较.结果表明,脐血中含丰富的CFU-GM和BFU-E,其数量低于成人骨髓而大大超过外周血水平;脐血红系祖细胞对促红细胞生成素(EPO)和爆式促进活性(BPA)表现出更高的敏感性,而粒系祖细胞对集落刺激因子(CSF)的敏感性和骨髓比较似无明显差别;脐血S期、G_2+M期及S+G_2M期细胞数均明显低于骨髓,虽略高于外周血各期细胞数,但差别无显著性意义.提示脐血造血干细胞体外培养可以得活性较高的祖细胞.     

对192份脐血多个指标的综合评估

采用密闭式脐血采血法收集了１９２份脐血，对脐血的采集量、有核细胞数、经淋巴细胞分离液分离后的单个核细胞的回收率进行了评估用含有多种生长因子的半固体培养基对脐血所含的粒单祖细胞及红系祖细胞进行了检测，并和骨髓的同类祖细胞作了比较．结果，脐血的平均可采集量为９９ｍＬ，每份脐血所含有的有核细胞数为（１３６±４８）×１０８，分离后单个核细胞的回收率为（４２３±１６４）％，脐血的粒单祖细胞及红系祖细胞的集落产率均高于骨髓，差异有显著性，（Ｐ＜００５）．脐血形成的粒单及红系集落体积也较骨髓的同类集落体积大．结果表明脐血比骨髓更富含造血祖细胞     

人胎肝造血生长因子对造血祖细胞的刺激增殖作用

将胎肝提取液经超滤后取中分子蛋白(MMWP)和低分子蛋白(LMWP),用祖细胞培养方法检测其造血生长因子活性。结果显示MMWP具有刺激多向祖细胞(CFU-Mix)、粒单祖细胞(CFU-GM)和红系祖细胞(CFU-E)增殖的白介素-3(IL-3)、粒单集落刺激因子(GM-CSF)和红细胞生成素(Epo)活性。以重组的IL-3、GM-CSF和Epo作标准对照,初步测定每毫升MMWP约含12.5μgIL-3、10~5UGM-CSF和500UEpo。而LMWP在祖细胞培养中仅有少数集落生长,但无抑制现象出现。     

白血病红系、粒系造血祖细胞集落测定及血清调控作用研究

本文报告了应用我们已建立的红系造血细胞体外培养方法,并配合粒系造血祖细胞体外培养方法,观察了慢性粒细胞白血病(简称慢粒)红系和粒系造血祖细胞集落细胞的体外增殖特性、集落产率、集落细胞染色体核型变化,以及慢粒集落细胞对刺激因子反应特性。此     

昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响

目的 研究昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响.方法 制备并体外培养大鼠骨髓造血干/祖细胞、巨噬细胞;制备昆布多糖作用后的骨髓巨噬细胞条件培养液,测定培养液中造血生长因子促红细胞生成素(EPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)表达及活性;测定昆布多糖条件培养液作用后造血祖细胞的集落产率.结果 经昆布多糖诱导的骨髓巨噬细胞培养上清液可显著提高骨髓造血祖细胞的集落产率;经昆布多糖诱导后,骨髓巨噬细胞的EPO、GM-CSF和IL-3的表达增高.结论 昆布多糖可刺激骨髓巨噬细胞造血因子表达增高,从而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、红系祖细胞(CFU-E)、粒一单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化.     

重组人FLT3配基对人脐血CD34＋细胞的体外扩增作用

目的观察重组人ＦＬ（ｒｈＦＬ）对脐血ＣＤ＋３４细胞的体外扩增作用。方法用磁性细胞分离仪富集人脐血ＣＤ＋３４细胞。在ＣＤ＋３４细胞体外液体培养中加入不同的细胞因子,在不同时间取样测试ＣＤ＋３４细胞阳性百分率、晚期造血祖细胞（粒细胞巨噬细胞集落生成单位及红系爆增式集落形成单位）并计数细胞总数。结果用磁性细胞分离仪可快速富集脐血ＣＤ＋３４细胞,纯度高达８０％以上。ｒｈＦＬ可协同白细胞介素（ＩＬ）－３、ＩＬ－６、粒－巨噬细胞集落刺激因子及促红细胞生成素促进ＣＤ＋３４细胞总数在７天时扩增３．４倍,无ｒｈＦＬ的对照组ＣＤ＋３４细胞只扩增１．５倍,但对晚期造血祖细胞的扩增无明显协同作用。结论用排除法证实ｒｈＦＬ主要扩增了早期造血祖细胞。     

不同血型脐血造血祖细胞混含培养的研究

采用单层琼脂法对脐血造血祖细胞培养进行了研究。结果：２０份新生儿脐血粒单祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）为９５．６±３６．５／１０￣６ＭＮＣ；两份不同血型的新生儿脐血细胞混合培养与单个新生儿脐血细胞培养比较，两者在祖细胞生成数量和生长特征方面无明显差别。本研究为临床混合不同血型的脐血造血祖细胞移植提供了一定的理论依据。     

集落刺激因子对造血的调控作用及其检测的临床意义

集落刺激因子(CSF)是指能够刺激多能造血干细胞和不同发育分化阶段的造血干细胞进行增殖、分化,并在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。CSF不仅在造血细胞的增殖和分化中起重要作用,而且也参与对成熟细胞的功能调节,促进炎症反应和抗感染免疫。CSF的研究对血液病的诊断、治疗具有重要意义。现就几个主要CSF对造血的调控作用及其检测的临床意义浅述如下。1CSF对造血的调控作用1.1粒-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种能够刺激红系、粒系、单核系、巨系及嗜酸系祖细胞增殖、分化并形成集落的多集落造血生长因子,其造血调控作用主要是可以刺激骨髓细胞生成由粒系和单核巨噬细胞组成的集落,促进中性粒细胞和单核细胞祖细胞增殖、分化、成熟。1.2粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是一种刺激粒细胞集落形成的系列特异性生长因子,对造血调控作用主要是促进粒系祖细胞的增殖和分化形成集落;诱导早期造血干/祖细胞从G0期进入G1-S期;与IL-3、GM-CSF及其他因子协同促进造血细胞的增殖与分化;诱导某些白血病细胞株分化成熟。1.3单核细胞集落刺激因子(M-CSF)又称CSF-1,由单核细胞、巨噬细胞、纤维母细胞、上皮细胞、血管内皮...     

脐血造血干细胞特性研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术（ＦＣＭ），观察了脐血中粒一单系祖细胞（ＣＰＵ－ＧＭ）、红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）的数量和特性，并对其细胞增殖周期和骨贿及成人外周血做了比较，实验提示脐血中含丰富的ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ，其数量低于成人骨髓而大大超过外周血水平，脐血红系祖细胞对ＥＰＯ、ＢＰＡ表现出更高的敏感性，而粒系祖细胞对ＣＳＦ的敏感性和骨髓比较似无明显差别．脐血Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期，及Ｓ＋Ｇ２Ｍ期细胞数均明显低于骨髓，虽略高于外周血各期细胞数，但差别无显著性意义．     

脐血血清对正常及白血病骨髓粒－单祖细胞生长的影响

利用粒－单祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）的体外培养，观察脐血血清（ＵＣＳ）对正常及白血病骨髓造血祖细胞生长的影响，结果表明：ＵＣＳ对正常及急性白血病（ＡＬ）患者完全缓解的骨髓ＣＦＵ－ＧＭ形成有一定增殖作用，而对初发／复发未治ＡＬ患者的骨髓ＣＦＵ－ＧＭ形成无类似作用。     

重组人白细胞介素-1β对人红系、粒系造血祖细胞集落形成的影响

为探讨重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)对人红系、粒系造血祖细胞的作用,采用96孔板微量培养法在体外进行培养。在培养中加入不同浓度的rhIL-β1(0～5ug/mL)后,观察BFU-E、CFU-E及CFU-GM的集落形成。结果加入不同浓度的IL-1β后,BFU-E、CFU-E的集落形成均受到抑制,且呈剂量依赖性,在IL-1β剂量为0.1和0.5μg/mL时,抑制作用更明显(JP<0.005,0.05),而IL-1β对CFU-GM的集落形成无明显影响。结果表明,IL-1β对红系造血祖细胞(BFU-E和CFU-E)影响的研究有助于解释某些慢性疾病性贫血(如类风湿性关节炎伴贫血等)的发生机制,提示IL-1β单克隆抗体有可能用于治疗慢性疾病性贫血。     

骨髓增生异常综合征患者血清造血抑制活性的研究

目的：通过研究骨髓增生异常综合征患者血清造血抑制活性,探讨致ＭＤＳ无效造血的可溶性因素。方法：以甲基纤维素半固体细胞培养法,观察患者血清对正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ,ＣＦＵ－ＧＭ的抑制作用,及对单个核细胞素集落生成的刺激作用;以ＤＮＡ末端标记技术,检测１例ＭＤＳ患者血清与正常骨髓单个核细胞共育后的凋亡细胞。     

造血基质干细胞的研究——Ⅳ.骨髓造血重建的细胞来源

通过对原位及异位移植股骨骨髓造血重建过程的研究,我们发现了移植物的骨内膜或骨皮质及骨小梁内细胞在诱导造血恢复上起着重要作用;骨皮质內含有造血微环境中的全部因素。本文观察了移植的骨皮质内造血重建的动态变化过程。即首先是基质细胞增殖、分化,包括骨小梁及血窦的形成,然后出现造血细胞增生。初步认为,作为诱导造血重建的环境因素的主要成分基质细胞来源于骨皮质。推断在正常机体中,骨髓内分化的基质细胞执行着支持实质细胞正常功能的作用,处于未分化的Go期的母细胞,则作为后备力量储存在骨皮质或骨小梁内(骨内膜细胞为中间阶段)。在整体调节下,二者保持着动态平衡状态。     

人多能造血祖细胞与前红系祖细胞体外培养的研究

本文以Messner培养体系为基础,并加以改良,在一个培养体系内培养出了人多能造血祖细胞(CFU-Mix)和前红系祖细胞(BFU-E),集落产率高于文献报道。同时,我们改进了细胞离心方法,使单个细胞集落形态完整,记数准确,为研究造血干细胞的分化提供了条件。     

人HLA半相合混合脐血在SCID小鼠移植的实验研究

目的：探讨不同供者来源脐血混合移植的可行性和植入特性。方法：分别将两份人HLA半相合混合脐血或单份脐血输入经亚致量照射后的严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠，观察两组脐血在SCID小鼠体内的植入状况及多系造血重建特性。结果：混合脐血和单份脐血移植均可在受鼠体内植入，形成供－受混合嵌合体，并能重建多系造血，存活率和植入率无统计学意义（P＞0．05）。用多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸（PCR－SSO）探针检测人HLA－DQB1基因发现，HLA半相合混合脐血移植可有1份或2份脐血植入，其中造血祖细胞含量和体外克隆形成能力高者，更易于植入，造血重建特性与单一脐血移植比较无统计学意义。结论：HLA半相合人混合脐血可同时在SCID小鼠体内植入，形成来自供－受三者的多嵌合状态，并能重建造血及免疫功能。     

造血基质祖细胞在机体局部照射后迁徙规律——2.外周血含量的变化

应用局部照射法对小鼠造血基质祖细胞(CFU-F)在循环血中迁徙规律进行了研究。小鼠在局部照射20Gy后6小时循环血中能检到CFU-F,24小时达到高峰,之后下降,到96小时出现第二高峰,以后逐渐下降,6天趋于消失。正常情况下,循环血中未见CFU-F?;全身大剂量照射后,基质破坏,无再生来源,外周血中也未见CFU-F存在。可见,小鼠在局部照射后,其屏蔽部位造血基质祖细胞很快向受照部位迁徙参与造血重建。     

脐血与成人鲜血治疗重型肝炎的疗效比较

观察脐血、成人鲜血治疗重型肝炎的疗效。结果显示：脐血降低血，己胆红素及谷草转氨酶水平、升高血小板、补体、膜白细胞介素２受体（ｍＩＬ－２Ｒ）及胆碱脂酶活力、缩短凝血酶原时间的效果均明显优于成人鲜血。脐血还能提高白蛋白水平，减轻病人的自觉症状，降低重型肝炎的病死率，尚未发现任何不良反应。     

人脐血免疫学细胞的生物学特性

目的：由于脐血比骨髓含有更原始、更强的增殖、分化能力，能重建长期造血的干／祖细胞，这些细胞可在体外大量扩增，使脐血移植有望取代骨髓移植；方法：利用脐血中包含某些细胞，如CD8^ T细胞能在小鼠体内产生细胞因子或者CD34^ 细胞具有内在性增殖潜能或NOD／SCID基质是一种特别的环境来支持外源干细胞移植；结果：脐造血细胞作为基因治疗的理想靶细胞；结论：随着国际上对脐血免疫细胞的生物学特性与功能研究不断深入，进一步确证CBSCT的有效性及巨大应用价值。     

小鼠骨髓内皮细胞对脐血造血细胞体外扩增的作用

目的：观察骨髓内皮细胞对脐血造血细胞体外扩增的影响。方法：体外培养骨髓内皮细胞株细胞,收集无血清条件培养液（命名为ECM）。用MiniMACS磁珠法分离脐血CD34+细胞。检测CD34+细胞经ECM体外液体培养24 h后或与骨髓内皮细胞层(ECL)共培养24 h后脐血造血细胞的扩增倍数,并观察在加入bFGF的培养条件下收集的骨髓内皮细胞条件培养液（bFGF-ECM）是否能加强对脐血造血细胞的扩增作用。 结果：ECM,ECL 皆能显著扩增脐血早期或晚期造血细胞,且二者对早期造血细胞的扩增效果是类似的;bFGF-ECM对脐血造血细胞的扩增倍数明显高于用ECM扩增的倍数。结论：小鼠骨髓内皮细胞对脐血造血细胞有明显的体外扩增作用。     

脐血浆治疗大鼠实验性肝衰竭及其机制的研究

本文采用脐血浆治疗实验性肝衰竭大鼠模型，并与成人血浆的疗效进行了比较。结果表明，脐血浆降低大鼠死亡率、血谷丙转氨酶水平，总胆红素浓度及使甲胎蛋白水平升高均明显高于成人血浆的作用（Ｐ＜０．０５）．肝脏病理组织学也显示脐血浆具有减轻病理损害和较快修复坏死组织的作用。提示脐血浆中含有促进肝细胞再生的因子，具有显著提高实验性大鼠肝衰竭的存活率。