D17S30,D1S80和ApoB基因座多态性分布调查

应用ＰＣＲ技术和小型聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色检测法,对云南白族人群和云南汉族人群Ｄ１７Ｓ３０,Ｄ１Ｓ８０和ＡｐｏＢ基因座遗传多态性进行了调查．发现白族人群Ｄ１７Ｓ３０基因座有１１个等位基因,其频率范围为０００２７～０１８１８;Ｄ１Ｓ８０基因座有１９个等位基因,频率范围在０００４３～０２４１４．汉族人群Ｄ１７Ｓ３０基因座有１２个等位基因,其频率范围为０００４８～０１９２０;Ｄ１Ｓ８０基因座有１８个等位基因,频率范围为０００３０～０２６３３;ＡｐｏＢ基因座有１２个等位基因,频率范围为０００３９～０４６４８．调查还获得两个民族相应基因座的个人识别能力和杂合度等数据资料     

D1S80座位的等位基因扩增片段长度多态性分析

目的：对天津地区１１２ 名无关个体的Ｄ１Ｓ８０ 基因座位进行了扩增片段长度多态性分析，检测其等位基因和基因频率。方法： 应用聚合酶链反应，小型聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染方法观察长度多态性。结果：发现了２６ 个等位基因，大小在３５５～７７１ｂｐ 之间，基因频率为０．００４５～０．１３８４，杂合度为７３％ 。７０ 种基因型，个人鉴别力为０．９８５。对６ 个家系２３ 名相关个体的分析结果符合孟德尔定律。结论： Ｄ１Ｓ８０ 基因座位个人鉴别力高，ＰＣＲ方法简便、灵敏，可在个人识别和亲子鉴定中发挥重要作用     

D1S80,P33.6位点扩增片段长度多态性在法医学中的应用

用ＰＣＲ技术、小型垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显色法，分析血痕、精斑、混合斑中的Ｄ１Ｓ８０，Ｐ３３．６ＶＮＴＲ位点的扩增片段长度多态性（ＡｍｐＦＬＰ），获得了满意的结果将该方法运用于案件的鉴定，在破案中发挥了重要的作用     

PCR与RFLP相结合对临床标本真菌鉴定的研究

探讨快速、准确检测临床常用标本真菌分离、鉴定方法。方法PCR与RFLP相结合,应用9种临床重要真菌的通用引物,对常用临床标本(痰、BALF、胸水、尿、血)224份进行分离、鉴定,并对19例进行痰与非痰标本结果一致性、敏感性比较。 结果224份标本共检出真菌83株,阳性率37.03％,其中白色念珠菌35株(42.3％),假热带念珠菌30株(36.1％),热带念珠菌10株(12％),光滑念珠菌8株(9.6％)。19例痰与非痰标本47次检测,一致性、敏感性良好。结论PCR结合RFLP对真菌检测具有敏感、快速的特点,值得临床推广应用。     

pAW101-EcoRⅠ限制性片段在广东人群中的分布及其在法医学上的应用

用pAW1015kb的片段为探什,检测广东地区106例无血缘关系居民的EcoRI酶切限制性片段(RF)的分布情况。共发现长度各异的65条RF,每人只具有其中的1～2条。统计学分析证明,这些RF的分布符合哈一温氏平衡。无血缘关系的两个个体间具有完全相同的RF图谱的机会为0.00048(相当于l/2080)。家系调查结果表明,这些RF符合孟德尔遗传规律。本文是应用作者推导出来的计算RF大小的数学模式。此法在作亲权鉴定时,父权排除率可达0.914,相当于目前国内所用的血型测定法(包括HLA-A,-B抗原测定)所达到的总和,说明此方法在法医学个人识别和亲权鉴定中具有广阔的应用前景。     

人类D1S80位点的Amp-FLP分析在法科学实践中的应用

用Ａｍｐ－ＦＬＰ技术分析Ｄ１Ｓ８０位点的多态性，对８５例亲子鉴定案和２例强奸杀人案进行了鉴定。在８５例亲子鉴定案中，３５例排除了错误被控父亲，５０例未排除。在３５例中，Ｄ１Ｓ８０位点排除了３０例，排除机率为３５．２９％，其中有２例只有Ｄ１Ｓ８０位点排除了亲子关系；其余遗传标记排除３３，排除机率为３８．８２％，有５例Ｄ１Ｓ８０未排除。在５０例未排除亲子关系的案例中，由Ｄ１Ｓ８０位点得到的单项父权指数（ＰＩ）为２．０５７６～１１１．１１１１，在提高父权相对机会（ＲＣＰ）上起了很大作用。５０例中，４１例的ＲＣＰ达到了９９．７３０％以上，肯定了父权，９例达到９９．３００％～９９．６４９％，证明被控男子很可能是孩子生父。Ｄ１Ｓ８０位点的个人鉴别能力高，在法医学亲子鉴定和个人识别中具有重要的作用。     

DMD／BMD基因诊断的新体系—Amp—FLP单体型连锁分析

应用同位素掺入的多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增抗肌萎缩蛋白(dystrophin)基因内含子44、45、49、50中的CA重复序列,在聚丙烯酰胺凝胶电泳后放射自显影检测扩增产物。中国人在这4个位点均具有长度多态性:各位点等位片段数目分别为9、7、11、4,多态性信息含量(PIC)分别为0.872、0.772、0.870、0.710。应用这4个位点及先前报道的5‘CA及3‘CA进行了非缺失型DMD家系的单体型连锁分析及产前基因诊断,并用此方法检出了1例缺失。由此建立了以PCR为基础的DMD/BMD基因诊断新体系—Amp-FLP(扩增片段长度多态性连锁分析),此方法简便快速、灵敏高效,使缺失型与非缺失型DMD/BMD的基因诊断连贯性一次完成,有效地提高了DMD/BMD基因诊断的效率和成功率。     

MALDI-TOF MS技术和AFLP技术在肺炎链球菌同源性分析中的应用

目的 探讨基质辅助激光解吸飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术和扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphis...     

新型原位PCR技术在HBVcccDNA检测中的应用

目的 通过利用环扩增方法检测在HBVcccDNA肝组织中的表达,明确HBVcccDNA在肝组织中的分布状况,为进一步研究HBVcccDNA在乙型肝炎的致病机制及探讨乙肝治疗的新途径提供分子病理学基础.方法 采用PSAD酶消化、滚环扩增方法及使用根据HBVcccDNA与HBVrcDNA结构上的差异而设计的地高辛标记的原位跨缺口引物进行原位PCR,然后用免疫组织化学方法进行显色,显微镜下观察HBVcccDNA在肝组织中表达分布,并对结果进行评价分析.结论 滚环扩增方法用来检测肝组织中HBVcccDNA的表达,具有敏感性高、特异性强的特点,对研究乙型肝炎致病机制和评价抗病毒药物的疗效及新药的研发等方面其有重要的意义.     

应用PCR结合ASO探针斑点杂交技术检测β地中海贫血家系

应用聚合酶链反应和等位基因特异寡核苷酸斑点杂交技术对1例β地中海贫血家素进行基因诊断,确定先证者基因型为CD41-42(-TTCT)/CD 17(A-T)双重杂合子,先证者父母的基因型分别为CD41-42(-TTCT)/β~A和CD17(A-T)β~A杂合子.     

用Amp—Flp方法分析D1S80位点多态性

目的：为了解广西壮族人群D1S80位点群体遗传资料,方法,使用扩增片段长度多态性（Amp-Flp)和PCR结合聚丙烯酰胺凝电脉及银染技术,对300名文本地区壮族无关个体D1S80位点多态性分析,结果,观察到23个等位基因,74个基因型,杂合度,非交排除率,个体识别力及多态信息含量分别为0.824,0.763,0.968,0.875,其基因频率分布符合Hardy-weinberg定律,对5个家系相关个体分析符合孟德尔定律,结认,该方法具有快速,简便,特异性强,灵敏度高特点。     

T-RFLP快速分析慢性腹泻患者肠道菌群及其应用研究

目的 建立快速检测分析人体肠道菌群的方法，协助慢性腹泻病原学诊断。方法 上游引物的5’端用6-FAM进行荧光标记，PCR反应结束后选择适当的限制性内切酶酶切消化，在测序仪上通过毛细管电泳即可检测5’末端荧光标记的限制性片段。利用不同细菌产生的不同峰谱达到快速对细菌定性、定量的目的。对30例慢性腹泻患者和221例健康人进行肠道菌群分析，从而探讨菌群变化情况。结果 该法能够对人体肠道菌群进行定性和定量分析，30例腹泻患者均发现肠道菌群紊乱。结论 该法快速、特异、敏感。一个样品中能同时检测多种细菌，是一种很有希望的新技术。     

广西壮、汉族绝经后妇女维生素D受体基因多态性的研究

目的　探讨维生素D受体 (vitaminDreceptor,VDR)基因多态性 ,以获得在广西壮、汉族妇女VDR受体基因频率分布数据。方法　用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (polymerasechainreaction ristrictionfragmentlengthpolymorphism ,PCR RFLP)方法检测壮、汉族绝经后妇女各 80例的VDR基因型。结果　壮、汉族绝经后妇女BB、Bb和bb基因型频率分别为 0 0 6 5比 0 0 5 4、0 739比 0 6 6和 0 1 96比 0 2 86 (P >0 0 5 ) ;壮、汉族绝经后妇女B和b等位基因频率分别为 0 4 31比 0 381和 0 5 6 9比0 6 1 9(P >0 0 5 )。结论　广西壮、汉族绝经后妇女VDR基因多态性无显著性差异。     

云南汉族D1S80位点基因频率分布调查

采用ＰＣＲ技术、小型聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳银染检测法，对１６９例云南汉族进行了Ｄ１Ｓ８０位点的ＶＮＴＲ扩增片段长度多态性（Ａｍｐ－ＦＬＰ）分析，发现了１８个等位基因，５１种基因型，其分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｎｂｅｒｇ定律．片断大小分布于４００～７５０ｂｐ之间，基因频率为０．００３０～０．２６３３．杂合度为８７％，个人识别能力为０．９５８６，对９个家系的相关个体分析符合孟德尔定律．     

PCR-RFLP技术DLA-DRB1基因分型在狗卵巢移植配型中的应用

目的 探讨狗组织相容性系统（ＤＬＡ）－ＤＲＢ１基因分型方法及用于狗卵巢移植配型的可行性。方法 选择特定的引物和６种限制性内切酶,采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ｐｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术建立了ＤＬＡ－ＤＲＢ１基因分型的方法。     

PCR与RFLP相结合检测全血中真菌感染的研究

目的建立从临床可疑真菌感染的全血标本中检测常见真菌基因的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测方法。方法采用PCR-RFLP检测方法检测临床可疑真菌感染的全血标本。提取DNA,用真菌的通用引物ITS1-ITS4扩增真菌ITS1-5.8SrDNA-ITS2区域,并对扩增产物进行MspI酶切分析鉴定,检测是否有真菌感染,并将真菌定位到种。应用此方法鉴定了100例临床可疑真菌感染全血标本,并与传统血培养方法进行对比。结果 100例疑似标本的真菌培养阳性率为26%,而经PCR扩增阳性率为31%。结论 PCR-RFLP检测全血中真菌基因具有快速、敏感性、特异性,有助于临床真菌感染的快速诊断,有一定的临床应用前景。     

T-RFLP快速分析慢性腹泻患者肠道菌群及其应用研究

目的建立快速检测分析人体肠道菌群的方法,协助慢性腹泻病原学诊断。方法上游引物的5'端用6-FAM进行荧光标记,PCR 反应结束后选择适当的限制性内切酶酶切消化,在测序仪上通过毛细管电泳即可检测5'末端荧光标记的限制性片段。利用不同细菌产生的不同峰谱达到快速对细菌定性、定量的目的。对30例慢性腹泻患者和22例健康人进行肠道菌群分析,从而探讨菌群变化情况。结果该法能够对人体肠道菌群进行定性和定量分析,30例腹泻患者均发现肠道菌群紊乱。结论该法快速、特异、敏感。一个样品中能同时检测多种细菌,是一种很有希望的新技术。