过氧化物酶增生物激活受体γ激动剂对肝星状细胞α1(I)胶原表达的影响

目的观察过氧化物酶增生物激活受体γ(PPARγ)激动剂15d-PGJ2对肝星状细胞株(HSC-T6)前胶原α1(Ⅰ)表达的影响,以进一步探讨PPARγ在肝纤维化进程中的作用机制。方法体外培养HSC-T6细胞,取对数生长期的细胞分为空白对照组、TGFβ-对照组和15d-PGJ2处理组,TGF-β对照组和15d-PGJ2处理组均给予TGF-β因子(终浓度3 ng/ml)共孵育6 h,15d-PGJ2处理组再用1、2、3μmol/L的PPARγ激动剂15d-PGJ2作用24 h。应用RT-PCR、Westernblot方法观察分析各组间肝星状细胞PPARγ、前胶原α1(Ⅰ)基因表达的变化。结果15d-PGJ2能够显著上调PPARγmRNA和蛋白的表达水平,15d-PGJ2处理组的相对吸光度值较空白对照明显升高(P<0.05),而TGFβ-对照组与空白对照组差异无显著性意义(P>0.05)。在TGFβ-刺激下,TGF-β对照组前胶原α1(Ⅰ)mRNA水平均升高,同空白对照组相比差异有显著性意义(P<0.05);15d-PGJ2处理组细胞前胶原α1(Ⅰ)mRNA水平与空白对照组相比差异无显著性意义(P>0.05),但与TGFβ-对照组相比,其表达明显受抑制(P<0.05)。结论PPARγ激动剂15d-PGJ2能够通过上调PPARγ表达而抑制前胶原α1(Ⅰ)转录,提示PPARγ可抑制肝纤维化的发生发展。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠肾成纤维细胞转化生长因子β1/Smad信号途径的作用研究

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂阻断转化生长因子（TGF）β1致肾间质纤维化作用的机制，探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞株（NRK／49F），观察PPARγ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGFβ1诱导的纤维连接蛋白（FN）mRNA表达的影响。利用Western印迹技术观察PPARγ激动剂对TGFβ1诱导的FN和Smad蛋白表达的影响。结果（1）与1ng／ml TGFβ1组比较，5ng／ml TGFβ1组FN mRNA表达量增加了3．6倍（P〈0．01），5ng／ml TGFβ1刺激24h时较刺激前增加了2．4倍（P〈0．01），TGFβ1诱导FN mRNA表达呈一定范围内的剂量（0—5ne／ml）和时间（0—24h）依赖效应。（2）与5ng／ml TGFβ1组比较，10μmol 15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组FN mRNA表达量分别降低37．3％、41．5％和22．7％，FN蛋白表达量分别降低20．6％、38．1％和28．6％。（3）5ng／ml TGFβ1以时间（0．2h）依赖方式诱导p-Smad2／3蛋白表达量增加，作用1h时达到高峰；5ng／ml TGFβ1组p-Smad2／3蛋白表达量较对照组和2ng／ml TGFβ1组分别增加3．42倍和0．97倍。（4）15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组p-Smad2／3蛋白表达量与5ng／ml TGFβ1组比较分别降低61．2％、53．0％和59．S％。3种药物干预组之间p-Smad2／3蛋白表达量比较差异无统计学意义，各组Smad2和Smad3蛋白表达量无显著变化。结论PPART激动剂可以抑制TGFβ1诱导的肾间质成纤维细胞细胞外基质合成，其机制可能与阻断TGF-β1／Smad信号途径有关，提示PPARγ激动剂具有抗肾间质纤维化的潜在作用，可能成为延缓终末期肾功能衰竭的治疗新手段之一。     

TGF-β1对白血病KG-1细胞株Gli1表达的影响

目的证明在白血病KG-1细胞株中存在TGF-β信号通路对Gli的调控作用。方法 (1)用0.1、1、10ng/mL TGF-β1分别作用于KG-1细胞,时间分别为6、12、24h。处理结束后收集细胞,提取mRNA,检测Gli1的表达。(2)5ng/mL TGF-β1、5ng/mL TGF-β1联合5μmol SIS3分别作用于KG-1细胞24h。处理结束后收集细胞,提取mRNA,检测Gli1的表达。结果 (1)1～10ng/mL TGF-β1分别作用于KG-1细胞6、12、24h,从12h起并至少持续至24h,其Gli1的mRNA表达较对照组明显减少;(2)5ng/mL TGF-β1、5ng/mL TGF-β1联合5μmol SIS3分别作用于KG-1细胞24h,其Gli1的mRNA表达与对照组比较:5ng/mL TGF-β1组较对照组降低,而5ng/mL TGF-β1联合5μmol SIS3组较对照组明显增高。结论应用TGF-β1可以降低KG-1细胞Gli1的表达,TGF-β1降低KG-1细胞细胞Gli1的表达是通过TGF-β/Smad3途径介导的,可被SIS3所抑制,不依赖于Ptch/Smo途径。     

应激性肾上腺素与动脉粥样硬化相关机制研究

目的观察心理应激时肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞脂质转运相关基因三磷酸腺苷综合盒转运体A1(ABCA1)、小凹蛋白(Caveolin-1)与细胞因子转化生长因子(TGF-β1)mRNA表达的影响,探讨应激性肾上腺素在动脉粥样硬化中的作用。方法不同浓度肾上腺素(1pmol/L-1μmol/L)处理THP-1源性巨噬细胞24h,运用逆转录多聚酶链反应检测其ABCA1、Caveolin-1与TGF-β1mRNA表达。结果1pmol/L-10nmol/L的肾上腺素对受试基因mRNA的表达与相应对照组比较其差异无显著性(P>0.05)。而100nmol/L及1μmol/L的肾上腺素下调TGF-β1和ABCA1mRNA水平,与各自对照组比较其差异有显著性(P<0.05);但100nmol/L及1μmol/L的肾上腺素对Cave-olin-1mRNA的表达无明显影响,与对照组比较其差异无显著性(P>0.05)。结论肾上腺素下调THP-1源性巨噬细胞TGF-β1与ABCA1mRNA水平,不影响Caveolin-1mRNA表达。     

罗格列酮对肺成纤维细胞TGF-β1信号转导途径的干预作用

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对人肺成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)、CTGF mRNA、核因子-κB(NF-κB)及激活子蛋白-1(AP-1)表达的影响及其罗格列酮对肺成纤维细胞TGF-β1信号转导途径的影响及可能机制.方法 以人肺成纤维细胞系(HLF-02)为研究对象,用Western blot法检测TGF-β1、姜黄素、吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)、罗格列酮作用后的CTGF、NF-κB及AP-1蛋白的表达,免疫组织化学方法 检测CTGF蛋白、RT-PCR技术测CTGF mRNA的表达.结果 ①与对照组比较,1 ng/mL TGF-β1作用15 min后,CTGF表达水平即增强(P＜0.01),并随着作用时间延长而逐渐增强.CTGF mRNA的表达亦随着时间的延长逐渐增加,作用24 h表达最多.②1 ng/mL TGF-β1作用30 min后,NF-κB及AP-1的表达水平增强(P＜0.01),以后表达趋于稳定,抑制剂(PDTC 100 μmol/L、姜黄素50 μmol/L)抑制这两条通路后CTGF的表达明显下降.③低(5 μmol/L)、中(10 μmol/L)、高(15 μmol/L)浓度罗格列酮预处理细胞30 min+TGF-β1作用24 h组较单纯TGF-β1处理24 h组CTGF、NF-κB及AP-1蛋白表达明显降低(P＜0.01),并且可以明显抑制1 ng/mL TGF-β1作用24 h引起的CTGF mRNA的表达(P＜0.01).结论 在体外,罗格列酮可通过NF-κB及AP-1信号转导途径启动人肺成纤维细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)抑制TGF-β1诱导CTGF转录和表达.     

P2X7受体在原代培养星形胶质细胞生长中的作用

目的探讨ATP是否促进原代培养的星形胶质细胞（astrocytes,As）发生类似反应性星形胶质化的变化以及嘌呤类受体P2X7在该过程中的作用。方法原代As的分离和培养;实时照相观察As形态变化;用Br-dU掺入法及流式细胞观察As增殖变化;用荧光标记实时定量PCR（real-time RT-PCR）检测GFAP mRNA,P2X7mRNA,TGF-β1mRNA表达的变化;用Western blot检测GFAP表达;ELISA检测培养上清中TGF-β1的变化。结果成功分离并培养原代As,免疫荧光鉴定阳性率为99%。不同浓度ATP（50μmol/L,100μmol/L,500μmol/L）作用于As,均可使之表现出类似反应性胶质化的形态改变,表现为胞浆丰富,细胞突起增加且更为明显。ATP100μmol/L作用1d后,As的S期细胞数目明显增加,提示细胞增殖的活跃,5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxyuridine,5-BrdU）掺入法显示细胞核阳性率明显增加。500μmol/L浓度的ATP能促进As的GFAP mRNA,P2X7mRNA表达。用P2X7特异性的受体激动剂2′-3-′O-（4-benzoylbenzoyl）-adenosine-5′-triphosphate（BzATP）50μmol/L,75μmol/L,100μmol/L作用于原代培养的As,在培养基有Ca2＋情况下可明显促进GFAP表达。在培养基有Ca2＋的情况下BzATP作用2h及12h时As中TGF-β1mRNA升高。培养上清中TGF-β1蛋白的含量在8h及48h均有升高。TGF-β1中和抗体能部分抑制P2X7引起的As GFAP含量的增加。结论100μmol/L的ATP可以促进As增殖。各种浓度ATP均可促进As形态产生类似胶质化反应的变化。P2X7特异性受体激动剂BzATP可引发胶质化样反应,并且在有Ca2＋的情况下促进TGF-β1的转录和释放。TGF-β1参与了P2X7受体诱导的类似反应性星形胶质化过程。     

IL-5上调体外培养的人嗜酸性粒细胞TGF-β1的表达

目的研究白细胞介素-5（IL-5）对人嗜酸性粒细胞（Eos）中转化生长因子-β1（TGF—β1）表达的调控作用。方法采用改良的密度梯度离心法分离并体外培养人外周血Eos，实验组加入相同浓度的白细胞介素-4（IL-4）、IL-5和干扰素γ（IFNγ）以及不同浓度的IL-5共同培养，ELISA和RT—PCR法检测细胞培养上清液TGF—β1蛋白和mRNA的表达。结果与对照组相比，浓度均为10^-9mol／L的IL-4、IL-5在蛋白水平和转录水平对TGF-β1的表达均有上调作用，而IFNγ则表现为抑制；10^-11，10^-9、10^-7mol／L IL-5均能显著增强体外培养的Eos中TGF—β1蛋白的表达。结论Th2型细胞因子IL-5可以上调人嗜酸性粒细胞中TGF—β1的表达。     

过氧化物酶增生物激活受体γ激动剂对肝星状细胞α1(Ⅰ)胶原表达的影响

目的观察过氧化物酶增生物激活受体γ（PPARγ）激动剂15d—PGJ2对肝星状细胞株（HSC-T6）前胶原α1（Ⅰ）表达的影响，以进一步探讨PPARγ在肝纤维化进程中的作用机制。方法体外培养HSC—T6细胞。取对数生长期的细胞分为空白对照组、TGF-β对照组和15d-PGJ2处理组，TGFp对照组和15d—PGJ2处理组均给予TGF-β因子（终浓度3ng／ml）共孵育6h。15d—PGJ2处理组再用1、2、3μmol／L的PPARy激动剂15d—PGJ2作用24h。应用RT—PCR、Westernblot方法观察分析各组间肝星状细胞PPARy、前胶原α1（Ⅰ）基因表达的变化。结果15d—PGJ2能够显著上调PPARymRNA和蛋白的表达水平，15d-PGJ2处理组的相对吸光度值较空白对照明显升高（P〈0．05），而TGF—β对照组与空白对照组差异无显著性意义（P〉0．05）。在TGF-β刺激下，TGF-β对照组前胶原α1（Ⅰ）mRNA水平均升高，同空白对照组相比差异有显著性意义（P〈0．05）；15dPGJ2处理组细胞前胶原α1（Ⅰ）mRNA水平与空白对照组相比差异无显著性意义（P〉0．05），但与TGF-β8对照组相比，其表达明显受抑制（P〈0．05）。结论PPARy激动剂15d—PGJ2能够通过上调PPARy表达而抑制前胶原α1（Ⅰ）转录，提示PPAR7可抑制肝纤维化的发生发展。     

应激性肾上腺素对THP-1细胞TGF-β1与ABCA1 mRNA表达的影响

目的探讨心理应激时肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞TGF-β1与ABCA11 mRNA表达的影响。方法不同浓度肾上腺素（1pmol／L-1μmol／L）处理THP-1源巨噬细胞24h，运用逆转录多聚酶链反应检测其TGF-β1与ABCA1 mRNA表达。结果1pmol／L-10nmol／L的肾上腺素对受试基因mRNA的表达与相应对照组比较，差异无统计学意义。而100nmol／L及1μmol／L的肾上腺素下调TGF-β1和ABCA1 mRNA水平，与各自对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论一定浓度的肾上腺素下调THP-1源性巨噬细胞TGF-β1与ABCA1mRNA水平。     

TGF-β1对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾间质炎症进展中的作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2),用不同浓度(0~10 ng/mL)TGF-β1刺激24 h或用5 ng/mL TGF-β1刺激不同时间(0~48 h),荧光定量PCR技术和ELISA方法分别检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、正常T细胞活化后表达和分泌调节蛋白(RANTES)的mRNA和蛋白表达的变化。结果TGF-β1能诱导HK-2细胞MCP-1、IL-8、RANTES的表达上调,且呈剂量和时间依赖效应。2 ng/mL TGF-β1作用24 h即可诱导MCP-1和IL-8 mRNA明显升高,5 ng/mLTGF-β1作用时达高峰。MCP-1和IL-8蛋白分泌分别于刺激后36 h和24 h达高峰。2 ng/mL和5 ng/mL TGF-β1均可诱导RANTES mRNA明显升高,2 h时RANTES mRNA表达开始升高,24 h达高峰;RANTES蛋白基础分泌水平极低,TGF-β1作用24 h时RANTES蛋白分泌开始升高,36 h达高峰。结论TGF-β1诱导能明显上调趋化因子MCP-1、IL-8和RANTES的mRNA表达和蛋白分泌。因此,有效干预TGF-β1诱导的趋化因子的表达可能成为减轻肾间质炎症的途径之一。     

TGF-β1对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾间质炎症进展中的作用.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2),用不同浓度(0～10 ng/mL)TGF-β1刺激24 h或用5 ng/mL TGF-β1刺激不同时间(0～48 h),荧光定量PCR技术和ELISA方法分别检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、正常T细胞活化后表达和分泌调节蛋白(RANTES)的mRNA和蛋白表达的变化.结果 TGF-β1能诱导HK-2细胞MCP-1、IL-8、RANTES的表达上调,且呈剂量和时间依赖效应.2 ng/mL TGF-β1作用24 h即可诱导MCP-1和IL-8 mRNA明显升高,5 ng/mLTGF-β1作用时达高峰.MCP-1和IL-8蛋白分泌分别于刺激后36 h和24 h达高峰.2 ng/mL和5 ng/mL TGF-β1均可诱导RANTES mRNA明显升高,2 h时RANTES mRNA表达开始升高,24 h达高峰;RANTES蛋白基础分泌水平极低,TGF-β1作用24 h时RANTES蛋白分泌开始升高,36 h达高峰.结论 TGF-β1诱导能明显上调趋化因子MCP-1、IL-8和RANTES的mRNA表达和蛋白分泌.因此,有效干预TGF-β1诱导的趋化因子的表达可能成为减轻肾间质炎症的途径之一.     

噻唑烷二酮类药物对急性脑损伤后IL-1β和TNF-α表达的影响

目的 探讨过氧化酶增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激活剂噻唑烷二酮类药物对创伤性脑损伤(TBI)大鼠模型脑组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL-1β)表达的影响.方法 采用改进的Feeney自由落体脑损伤装置制作TBI大鼠模型,分别给予生理盐水或吡格列酮,并与假手术组大鼠比较,7 d后收集脑组织,采用RT-PCR或Western Blotting法检测各组PPAR-γ mRNA、TNF-α及IL-1β的mRNA及蛋白表达差异.结果 创伤性脑损伤大鼠脑组织与对照组及假手术组相比,PPAR-γ mRNA表达显著增强(P<0.05),同时TNF-α、IL-1β蛋白及mRNA表达也显著上调(P<0.05),而应用吡格列酮治疗进一步增加了大鼠脑组织PPAR-γ的表达,并有效抑制TNF-α及IL-1β的上调表达(P<0.05).结论 PPAR-γ激动剂吡格列酮对减轻创伤性脑损伤后持续存在的炎症反应具有一定的保护作用,其机制可能与降低脑组织中TNF-α及IL-1β等炎性细胞因子的含量有关.     

穗花杉双黄酮激活PPAR-α/γ抑制THP-1源性巨噬细胞向M1型极化

目的 探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法 设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组：不同浓度的（5、10 μmol/L）穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组：溶媒3‰DMSO;无药对照组：不加穗花杉双黄酮处理。显微镜下观察细胞形态学;通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平;通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度;通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白,利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达。结果 穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的THP-1细胞向M1极化;穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA,上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达（P<0.05）,同时上调M1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达（P<0.05）。随着穗花杉双黄酮浓度的增加和作用时间的延长,其抑制细胞的增殖效果增强（P<0.05）,且高浓度具有杀伤作用。穗花杉双黄酮可与PPAR-α/γ关键靶点蛋白活性位点非共价结合并激活该蛋白。结论 穗花杉双黄酮可通激活PPAR-α/γ,恢复Arg-1、Fizz1基因表达,抑制巨噬细胞向M1型分化。     

刺槐素对鞭毛蛋白诱导的小鼠骨髓巨噬细胞NLRC4炎症小体活化的影响

目的：研究刺槐素（Acacetin）对鞭毛蛋白诱导的小鼠骨髓巨噬细胞Nod样受体家族蛋白4(the nod-like receptor family card domaincontaining protein 4,NLRC4)活化的影响。方法：将小鼠骨髓巨噬细胞分为对照组、脂多糖（LPS）组、LPS+鞭毛蛋白组及LPS+Acacetin+鞭毛蛋白组,对照组加入完全培养基,LPS组用LPS(50 ng/mL)预处理3 h,LPS+鞭毛蛋白组用LPS(50 ng/mL)预处理3 h后加入鞭毛蛋白（10μmol/L）刺激0.5 h;LPS+刺槐素+鞭毛蛋白组用LPS(50 ng/mL)预处理3 h后再加入Acacetin(10μmol/L)处理0.5 h,最后加入鞭毛蛋白（10μmol/L）刺激0.5 h;采用WB检测细胞裂解液Pro-caspase-1和Pro-IL-1β的表达,上清液中caspase-1和IL-1β的蛋白表达;ELISA法检测上清液中IL-1β、IL-18和TNF-α的含量,LDH检测试剂盒检测细胞上清液中LDH的活性。结果：与对照组相比,LPS+鞭毛蛋白组细胞上清液中c...     

褐藻多糖硫酸酯对TGF-β1孵育的人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan FPS)对TGF-β1下刺激人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2分泌的影响,探讨其在慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure CRF)防治中的意义。方法用TGF-β1作为刺激因子,孵育体外培养的人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell HMC),并分别用不同浓度的FPS干预,具体分组如下:模型组(TGF-β14 ng/ml)、FPS高剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 100 ug/ml)、FPS中剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 50 ug/ml)、FPS低剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS25 ug/ml)、FPS对照组(FPS 100ug/ml)、正常对照组。ELISA技术检测HMC培养上清液中MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平,Re-altime PCR技术检测HMC的MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,TGF-β1能减少HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01),增加HMC的TIMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01);FPS能阻断TGF-β1刺激下HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达减少、TIMP-2蛋白及mRNA表达增加(P0.01,P0.05);FPS对照组与正常对照相比MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯能阻断TGF-β1刺激下人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的比例失衡,阻断了由MMP-2、TIMP-2比例失衡导致的ECM积聚,从而延缓了慢性肾衰竭的进展。     

Effects of Fucoidan on the expression of MMP2 and TIMP-2 in human mesangial cells cultured with growth factor β1

目的 观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan FPS)对TGF-β1下刺激人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2分泌的影响,探讨其在慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure CRF)防治中的意义.方法 用TGF-β1作为刺激因子,孵育体外培养的人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell HMC),并分别用不同浓度的FPS干预,具体分组如下:模型组(TGF-β14 ng/ml)、FPS高剂量组(TGF-β14 ng/ml +FPS 100 ug/ml)、FPS中剂量组(TGF-β14 ng/ml + FPS 50 ug/ml)、FPS低剂量组(TGF-β14 ng/ml + FPS 25 ug/ml)、FPS对照组(FPS 100ug/ml)、正常对照组.ELISA技术检测HMC培养上清液中MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平,Realtime PCR技术检测HMC 的MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平.结果 与正常对照组相比,TGF-β1能减少HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达 (P＜0.01),增加HMC的TIMP-2蛋白及mRNA表达 (P＜0.01);FPS能阻断TGF-β1刺激下HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达减少、TIMP-2蛋白及mRNA表达增加(P＜0.01,P＜0.05);FPS对照组与正常对照相比MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 褐藻多糖硫酸酯能阻断TGF-β1刺激下人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的比例失衡,阻断了由MMP-2、TIMP-2比例失衡导致的ECM积聚,从而延缓了慢性肾衰竭的进展.     

COX-2选择性抑制剂西乐葆对IL-1β诱导下A549细胞COX-2表达的影响

目的研究西乐葆对A549细胞COX-2表达的影响。方法分别使用5、10和15μmol/mL的西乐葆对IL-1β诱导下A549细胞COX-2的表达进行干预,收集上清-20℃冻存用于检测PGE2,细胞用PBS洗两次提取RNA。不加西乐葆为对照组。实验重复4次。结果5、10和15μmol/mL的西乐葆干预组COX-2OD值/β-actinOD值分别为(1.4362±0.1061),(1.0142±0.079),(0.6896±0.097)与空白组(1.8058±0.132)相比较有明显降低,差异有显著性(P<0.05)。5μmol/mL组分别与10μmol/mL、15μmol/mL组相比,10μmol/mL组与15μmol/mL组相比都有统计学意义(P<0.05);5、10和15μmol/mL的西乐葆干预组PGE2分别为(17.25±0.98)×10-6mg/L,(11.33±1.49)×10-6mg/L和(10.23±2.00)×10-6mg/L较空白对照组(22.36±1.49)×10-6mg/L明显降低,差异有显著性(P<0.05)。5μmol/mL组分别与10μmol/mL、15μmol/mL组相比,10μmol/mL组与15μmol/mL组相比都有统计学意义(P<0.05)。结论西乐葆抑制人肺上皮细胞COX-2表达,其对IL-1β诱导下人肺上皮细胞COX-2mRNA表达和PGE2的分泌的影响是浓度依赖性的     

PPARγ激动剂对RSV感染的A549细胞MCP-1、MIP-1α、IL-8表达的作用及机制

目的研究A549细胞呼吸道合胞病毒(RSV)感染不同时间后单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、白介素-8(IL-8)在mRNA和蛋白水平的变化,进一步观察15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)和罗格列酮干预后MCP-1、MIP-1α、IL-8 mRNA表达和蛋白水平的变化,探讨PPARγ激动剂对RSV感染趋化因子表达的影响及机制。方法建立RSV感染的细胞模型,将传代培养的细胞随机分成6组:A组(15d-PGJ2+RSV组)、B组(罗格列酮+RSV组)、C组(RSV组)、D组(PDTC+RSV组)、E组(PPARγ拮抗剂GW9662+罗格列酮+RSV组)、F组(细胞对照组),各组分别在培养12、24、48h收获细胞及上清液待测。应用ELISA检测MCP-1、MIP-1α、IL-8蛋白水平,实时定量RT-PCR检测MCP-1、MIP-1α、IL-8 mRNA表达。结果 C组与F组相比,MCP-1、MIP-1α、IL-8 mRNA及蛋白的表达均在12h开始升高,其中mRNA表达在24h达高峰,48h有所下降,与12h比较差异无统计学意义(P均>0.05);而蛋白表达在48h达高峰,与12h比较差异有统计学意义(P均<0.05);D组各时间点3种趋化因子蛋白和mRNA表达均明显低于C组(P均<0.05),但仍高于F组(P均<0.05)。A组、B组与C组相比,各时间点MCP-1、MIP-1α、IL-8蛋白及mRNA表达均明显降低(P均<0.01);E组与C组3种趋化因子蛋白及mRNA表达的差异无统计学意义,但仍高于F组(P均<0.05)。结论 RSV感染可导致MCP-1、MIP-1α、IL-8 mRNA及蛋白表达升高;15d-PGJ2、罗格列酮均可抑制上述作用,其作用可被GW9662所阻断;PPARγ激动剂的作用机制与抑制NF-κB通路激活有关。     

二十二碳六烯酸对白介素1β诱导的动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响及机制探究

目的探讨二十二碳六烯酸（DHA）对白介素1β（IL-1β）诱导的动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响及机制。方法血管平滑肌细胞（VSMCs）培养及传代后,分为对照组、IL-1β组、DHA组、IL-1β和DHA处理组四组,其中对照组细胞加入50μL磷酸盐缓冲液（PBS）;IL-1β组细胞加入10 ng/mL IL-1β;DHA组细胞加入80μmol/L DHA;IL-1β和DHA处理组加入10 ng/mL IL-1β和80μmol/L DHA,培养48 h后,噻唑蓝（MTT）法和Transwell法检测VSMCs的增殖和迁移情况;qRT-PCR和Western blotting技术检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP）-1、TIMP-2和Notch3的表达情况。结果 VSMCs的增殖率和迁移能力经IL-1β处理后显著增高,而IL-1β和DHA处理组显著低于IL-1β处理组（F=25.537,P=0.003）;MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达量经IL-1β处理后显著增高,而经IL-1β和DHA共处理后显著低于IL-1β组（MMP-2：F=34.286,P=0.000;TIMP-2：F=21.034,P=0.009;MMP-9：F=31.732,P=0.000;TIMP-1：F=18.213,P=0.021）;IL-1β组细胞Notch3表达量显著降低,IL-1β和DHA处理组中Notch3的表达水平则显著高于IL-1β处理组（F=39.235,P=0.000）。结论 DHA可通过Notch信号通路抑制VSMCs的增殖和迁移。     

多巴胺D1样受体在介导调节CD4~+T淋巴细胞功能中的作用

目的:从分子水平揭示CD4+T淋巴细胞表达D1受体和D5受体mRNA的现象,探讨这些受体在调节CD4+T淋巴细胞功能中的作用。方法:采用免疫磁珠分离和纯化小鼠淋巴结CD4+T淋巴细胞。用抗CD3/CD28抗体刺激活化CD4+T淋巴细胞,并用D1样受体激动剂SKF38393、拮抗剂SCH23390分别作用于CD4+T淋巴细胞,然后采用real-time PCR法检测CD4+T淋巴细胞上D1受体和D5受体mRNA的表达,Th1细胞特异性转录因子(T-box expressed in T cells,T-bet)和细胞因子干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的表达,Th2细胞特异性转录因子GATA binding protein 3(GATA 3)和细胞因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)的表达,Th17细胞特异性转录因子(retinoid acid-related orphan receptor gammat,RoRγt)和细胞因子IL-17、IL-22的表达。结果 :D1样受体激动剂SKF38393(10-8和10-7mol/L)作用于CD4+T淋巴细胞后,CD4+T淋巴细胞表达D1样受体mRNA增高,IFN-γ的表达降低,GATA 3、IL-4的表达增高,但T-bet、RoRγt、IL-17和IL-22的表达没有变化,SCH23390(10-7mol/L)能阻断SKF38393的这些作用。结论:CD4+T淋巴细胞能表达多巴胺D1样受体,CD4+T淋巴细胞上D1样受体的激活可促进CD4+T淋巴细胞向Th2细胞分化、抑制Th1细胞功能及增强Th2细胞功能。