磷酸化细胞外信号调节激酶1/2对糖尿病视网膜病变的作用

背景 糖尿病视网膜病变（DR）具有复杂的病理表现和发生机制,丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）参与高血糖对脑缺血损伤的作用,MAPK信号转导通路在DR发生和发展中的作用有待深入研究.目的 探讨DR与磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）的关系.方法 采用随机数字表法将60只SPF级8周龄SD大鼠随机分为对照组和糖尿病组,将枸橼酸缓冲液配置的链脲佐菌素（STZ）溶液按照60 mg/kg的剂量一次性腹腔内注射制备糖尿病大鼠模型,血糖＞16.7 mmol/L视为建模成功;对照组以同样的方法注射枸橼酸缓冲液.分别于造模后4周和12周处死大鼠并分离视网膜,采用苏木精-伊红染色法进行视网膜的组织形态学观察,采用免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜磷酸化ERK1/2和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的相对表达量.结果 造模后4周和12周,糖尿病组大鼠血糖水平均明显高于对照组大鼠,差异均有统计学意义（t=14.174、13.771,P＜0.05）.造模后12周,糖尿病组大鼠平均体质量明显低于对照组;糖尿病组大鼠饮水量明显多于对照组,差异均有统计学意义（t=8.670、18.725,P＜0.05）.与对照组大鼠比较,造模后12周糖尿病组大鼠视网膜变薄,外丛状层水肿,视网膜神经节细胞（RGCs）层、内核层及视细胞层细胞数量减少.免疫组织化学检测可见,造模后4周和12周糖尿病组大鼠视网膜中GFAP阳性细胞数增加,相对表达量（A值）分别为3 197.1±13.1和7 202.0±56.8,均明显高于对照组的2 152.8±16.1和2 337.0±8.6,差异均有统计学意义（t=6.327、16.417,P＜0.05）.造模后12周,糖尿病组视网膜磷酸化ERK1/2相对表达量（A值）为2 850.6±2.4,明显高于对照组的1 274.6±1.3,差异有统计学意义（t=12.771,P＜0.05）.结论 ERKl/2信号通路参与STZ诱导的糖尿病大鼠的早期DR,可能与RGCs和视细胞的凋亡及Müller细胞活化有关.     

RNA干扰在视网膜母细胞瘤治疗中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近几年发展起来的一种新兴的基因沉默技术,它是由双链RNA介导的靶向基因序列特异性转录后沉默机制。目前,RNAi技术已被广泛应用于各种肿瘤研究。本文主要论述RNAi在视网膜母细胞瘤治疗方面的应用及进展。     

微小RNA与视网膜发育相关性研究进展

微小RNA(miRNA)是相对分子质量较小、性质稳定的RNA,通过与目的mRNA的部分互补序列碱基互补配对而在转录后水平调节动物、植物的基因表达及抑制蛋白质合成.目前发现在视网膜中表达的miRNA有200多种,miRNA对基因的表达调控影响了视网膜的正常发育,与神经视网膜的发生、视网膜光感受器的分型及正常数量维持、神经节细胞的存活及轴突生长、视网膜色素上皮层的发育均有密切联系.此外,miRNA的调控还与视网膜损伤后的再生有关.miRNA对视网膜发育的调控主要通过直接靶向调节与此有关的某些目的基因的表达,或通过调节某些信号通路组分来实现,在视网膜发育过程中,miRNA功能的正常发挥为视网膜正常形态结构的形成提供了保障,从而为其发挥正常的生理功能提供了物质基础.现就脊椎动物视网膜中miRNA的生物学功能与视网膜发育的相关性研究进展进行综述.     

CCR7信号通路与视网膜新生血管

视网膜新生血管性疾病是致盲的主要原因。趋化因子受体7(C-C chemokine receptor type 7, CCR7)可通过细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulate kinase,ERK)通路促进血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达,导致血管渗漏、血管内皮细胞增生以及新生血管形成等改变。趋化因子受体7的检测可指导视网膜新生血管性疾病的诊治。     

lncRNA ADPGK-AS1对视网膜母细胞瘤细胞生物学行为的抑制作用及其调控机制

目的:探讨长链非编码RNA二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1(lncRNA ADPGK-AS1)对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响及其调控机制。方法:收集2017年2月至2018年11月在驻马店市中心医院和郑州大学第一附属医院接受RB手术治疗的RB患者39例39眼的术中瘤旁组织和瘤体组织标本,采用...     

Hsp70在视网膜母细胞瘤组织芯片中的表达及其意义

目的检测Hsp70在视网膜母细胞瘤和正常视网膜组织中的表达,并讨论其意义。方法利用组织芯片,采用免疫组化SA法检测视网膜母细胞瘤和正常视网膜组织中Hsp70的表达。结果视网膜母细胞瘤组织芯片中Hsp70在胞浆有高表达(13/16),在正常视网膜组织中表达阳性率低(1/5),二者间存在显著性差异(P=0.0254<0.05)。结论Hsp70在视网膜母细胞瘤中高表达,它可能参与了视网膜母细胞瘤的发病。     

微小RNA在视网膜中的表达及其与视网膜疾病的关系

微小RNA(microRNA.miRNAs)是一类调控基因表达的非编码小RNA.miRNA的表达具有组织特异性,并参与细胞生长、发育、分化、增生以及凋亡等过程.近年来,人们也发现miRNA在视网膜不同细胞中呈特异表达,尽管尚无直接证据,但这些差异表达的miRNA可能与视网膜疾病如视网膜色素变性以及糖尿病视网膜病变的发生发展有着密切的联系.本文对miRNA在视网膜中的特异表达以及miRNA在视网膜疾病中的作用等研究现状进行总结,同时对miRNA在视网膜相关疾病的治疗方面的前景进行探讨.     

过氧亚硝酸根联合碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化水平的影响

目的　探讨过氧亚硝酸根（ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ,ＯＮＯＯ－）和重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）共同作用对人晶状体上皮细胞细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）磷酸化水平的影响。初步探讨ＯＮＯＯ－导致白内障发生的可能机制。方法　将培养的ＨＬＥＣ细胞分为４组,对照组（未经ＯＮＯＯ－和ｂＦＧＦ处理）、ｂＦＧＦ单独处理组、ｂＦＧＦ＋ＯＮＯＯ－处理组［ｂＦＧＦ预处理１ｈ后加入不同浓度ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）处理１ｈ］和ＯＮＯＯ－ ＋ｂＦＧＦ处理组［不同浓度ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）预处理１ｈ后加入ｂＦＧＦ处理１ｈ］。检测各组细胞内ＥＲＫ磷酸化水平的变化。结果　ｂＦＧＦ单独处理组和ｂＦＧＦ ＋ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）处理组中磷酸化ＥＲＫ相对表达值分别为５．１７±０．３５、４．４２±０．１２、３．９１±０．１５和０．４９±０．０８,与对照组（１．００±０．０５）相比差异有统计学意义（Ｆ＝４０２．８３,Ｐ＜０．００１）,结果显示ＯＮＯＯ－可以抑制由ｂＦＧＦ诱导的ＥＲＫ磷酸化水平的增加（Ｆ＝３１０．３４,Ｐ＜０．０５）。ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ｂＦＧＦ处理组中磷酸化ＥＲＫ相对表达值分别为３．３６±０．０４、３．３２±０．０６和２．９２±０．０８,与对照组（１．００±０．０２）相比,所有处理组的ＥＲＫ磷酸化水平均显著增加（Ｆ＝５１８．９４,Ｐ＜０．００１）;５０μｍｏｌ·Ｌ－１和１００μｍｏｌ·Ｌ－１ＯＮＯＯ－处理细胞后经ｂＦＧＦ处理,ＥＲＫ磷酸化水平较ｂＦＧＦ单独处理组（３．０４±０．０５）显著增加（Ｆ＝３５．５３,Ｐ＜０．０５）,而２００μｍｏｌ·Ｌ－１ＯＮＯＯ－处理组与ｂＦＧＦ单独处理组相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　ＯＮＯＯ－诱导的白内障的发生可能与ＥＲＫ磷酸化的紊乱有关。     

微小RNA在视网膜疾病中表达及功能的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类内源性、非编码单链RNA,长度约为22个核苷酸,他们通过与靶mRNA的3’端非编码区结合来抑制基因的表达,参与调节组织器官的生长发育、分化、功能维持和凋亡等重要的生理过程.miRNA是近年来生命科学领域中的研究热点,越来越多的研究表明多种miRNA在眼部表达,其中超过250种miRNA在视网膜组织中表达并影响其生长、发育和功能.本文就近年来miRNA在视网膜疾病的表达及功能作一综述.     

血管抑素对视网膜微血管内皮细胞的细胞外 信号调节激酶水平的影响

目的观察血管抑素对体外培养的鼠视网膜微血管内皮细胞的细胞外信号调节激酶(ERK-1)活性的影响。方法利用l-lysine 耦联的sepharose 4B亲和层析柱从血浆中分离和纯化血管抑素。 原代培养鼠视网膜微血管内皮细胞分为4组:对照组,血管内皮因子(VEGF)10 ng/ml组, 血管抑素130 μg/ml组，VEGF(10 ng/ml)+血管抑素(130 μg/ml)组，Western-blotting检测血管抑素对血管内皮因子刺激后1、2、5、10、15、30 min的视网膜微血管内皮细胞ERK-1水平的影响。结果与对照组相比，经血管抑素处理后1 min，ERK-1水平开始下降，10 min时下降最为显著，30 min后对照组与血管抑素组ERK水平没有显著区别。VEGF刺激后，鼠视网膜微血管内皮细胞中ERK 1被迅速激活，5 min后达到高峰，VEGF组ERK水平较对照组提高了210%（P＜0.05）；30 min后, VEGF组ERK水平与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。而血管抑素能使ERK-1的表达量降低11.9%(1 min)、17.9%(2 min)、387%(5 min)、49.3%(10 min) （P＜0.05）、27.9%(15 min)、1.12%(30 min)。结论血管抑素在体外能有效的阻断VEGF由细胞外向细胞核传导的信号通路。(中华眼底病杂志,2005,21:170-173)     

Fas系统在视网膜母细胞瘤的表达

目的 观察视网膜母细胞瘤（ＲＢ）中Ｆａｓ和Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）的表达特征。方法 应用免疫组化法检测３２例ＲＢ标本中Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达。结果 Ｆａｓ和ＦａｓＬ在ＲＢ中的阳性表达率分别为７０．６％和６５．８％,二者呈正相关（Ｐ〈０．００１）。分化程度低的和经过放疗的表达率明显增高（Ｐ〈０．０５或０．０１）。其表达率与视神经受浸润与否、眼内期或青光眼期无关（Ｐ〉０．０５）。结论 ＲＢ中Ｆａｓ及ＦａｓＬ高表达,分化程度越低表达越强。Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达可作为临床判断ＲＢ恶性程度的指标之一。     

Expression of p63 and p73 in retinoblastoma: a clinicopathological correlation study

The aim of the study was to explore the expression profile of p63, p73 and their delta isoforms in the retinoblastoma tumor samples and to correlate with clinicopathological parameters. Immunohistochemistry was performed for p63, delta p63, p73 and delta p73 on the archival paraffin sections of retinoblastoma and correlated with clinicopathological features. Western blotting was performed to confirm immunoreactivity results. p63 immunoreactivity was observed in 59% (29/49) of the RB specimens. p63 was expressed in 60% (20/33) low risk tumors and in 56% (9/16) of high risk tumors. p73 was expressed in 77% (38/49) RB specimens. Among the 33 low risk tumors, p73 was expressed in 69% (23/33) tumors and among the 26 high risk tumors, p73 was expressed in 93% (15/16) tumors. High risk tumors showed significantly increased expression of p73 compared to tumors with low risk (P < 0.05). This is the first correlation between p63/p73 expression and histopathology in human RB tumors. Our study showed increased expression of p73 in high risk tumors (P < 0.05) compared to low risk tumors. Further functional studies are required to explore the role of p63, p73 and their respective isoforms in retinoblastoma.     

Ultrasonic findings in intraocular retinoblastoma and correlation with histopathologic diagnosis

A and B-scan ultrasonographic records of 132 eyes of 126 patients with suspected retinoblastoma were evaluated retrospectively. Six patients had bilateral lesions. The results were compared with the histopathologic diagnoses obtained after enucleation in 129 cases and with the indirect ophthalmoscopic examination in 3 bilateral cases. Ultrasonographic diagnosis was correct in 115 cases (87.12%), false-negative in 12 cases (9.09%) and falsepositive in 5 cases (3.79%). Echographic tumor typing was made in 88 cases and the mixed tumor type was the most frequent with 74 cases (84.09%). Cystic, solid and diffuse infiltrating types were the other echographic diagnoses. Our experience confirms the accuracy of ultrasonography in the diagnosis of retinoblastoma.     

视网膜母细胞瘤136例临床及病理分析

目的探讨视网膜母细胞瘤的临床特点及病理特征。方法回顾分析我院1966年1月～2007年9月41年136例视网膜母细胞瘤病例。结果临床特点:(1)发病年龄多见于3岁以下的患儿;(2)多数患儿未能在早期视力减退时就诊;(3)以单眼发病多见。病理特征:(1)肿瘤多见于未分化型;(2)视神经无转移者多见。结论加强科普宣传,提倡优生优育。争取早期发现,早期行局部保守治疗,以保存患者的患眼和部分视力。     

E26转录因子-1在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨E26转录因子-1（Ets-1）在视网膜母细胞瘤（Rb）中的表达及其与肿瘤的血管化、浸润、转移的关系。方法利用原位杂交和免疫组织化学法分别检测Ets-1mRNA和蛋白在40例Rb中的表达。并以免疫组织化学法检测肿瘤中CD34的表达，以此计算肿瘤微血管密度的值。结果82．5％（33／40）的Rb中Ets-1mRNA呈阳性表达，Ets-1蛋白的阳性表达率为65％（26／40）。Ets-1主要表达于癌细胞和血管内皮细胞。Ets-1高表达组的微血管密度明显高于Ets-1低表达组（P〈0．01）。其表达与组织学分级和预后有关。结论Els-1可促进Rb的新生血管形成，与肿瘤的浸润和转移有关。     

细胞增殖因子ki-67在视网膜母细胞瘤裸小鼠移植瘤中的表达及意义

目的 研究视网膜母细胞瘤（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ,ＲＢ）移植瘤中的细胞增殖活性与其发生发展及浸润生长的相关性。方法 对２０例裸小鼠玻璃体腔ＲＢ移植瘤进行细胞增殖因子ｋｉ－６７蛋白表达的免疫组织化学染色,以正常视网膜组织标本作为正常对照。比较分析ＲＢ移植瘤眼内生长期（Ⅰ～Ⅲ级）及蔓延扩展浸润期（Ⅳ～Ⅴ级）ｋｉ－６７蛋白表达的情况。结果 正常视网膜组织中ｋｉ－６７蛋白表达阴性。２０例ＲＢ移植瘤细     

Quantitative analysis of apoptosis in retinoblastoma

Purpose: The rate of apoptosis in retinoblastoma (Rb) and the factors that may influence this rate, such as therapy prior to surgery, amount of necrosis in tumour tissue, differentiation and laterality of the tumour, were investigated.
Methods: Thirty-one specimens (25 enucleation, six exenteration) with Rb were studied. Prior to final surgery, three patients received systemic chemotherapy, one intravitreal chemotherapy, one transpupillary thermotherapy, one external beam radiotherapy and one high-dose oral methylprednisolone therapy. The apoptotic index (AI,%) was calculated by counting at least 1000 cells under light microscopy (× 100) using TUNEL (terminal deoxynu­cleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labelling) method.
Results: The mean AI was 2.75 ± 1.2. No statistically significant association was observed between rate of apoptosis and the presurgical treatment, extent of necrosis, tumour differentiation and laterality.
Conclusion: Apoptosis is an important mechanism of cell death, and may be a limiting factor for tumour progression. In this study, the rate of apoptosis was not affected by any of the studied parameters.     

Expression of multidrug resistance proteins in retinoblastoma

AIM: To elucidate the mechanism of multidrug resistance in retinoblastoma, and to acquire more insights into in vivo drug resistance. METHODS: Three anticancer drug resistant Y79 human RB cells were generated against vincristine, etoposide or carboplatin, which are used for conventional chemotherapy in RB. Primary cultures from enucleated eyes after chemotherapy (PCNC) were also prepared. Their chemosensitivity to chemotherapeutic agents (vincristine, etoposide and carboplatin) were measured using MTT assay. Western blot analysis was performed to evaluate the expression of p53, Bcl-2 and various multidrug resistant proteins in retinoblastoma cells. RESULTS: Following exposure to chemotherapeutic drugs, PCNC showed less sensitivity to drugs. No significant changes observed in the p53 expression, whereas Bcl-2 expression was found to be increased in the drug resistant cells as well as in PCNC. Increased expression of P-glycoprotein (P-gp) was observed in drug resistant Y79 cells; however there was no significant change in the expression of P-gp found between primary cultures of primarily enucleated eyes and PCNC. Multidrug resistance protein 1 (Mrp-1) expression was found to be elevated in the drug resistant Y79 cells as well as in PCNC. No significant change in the expression of lung resistance associated protein (Lrp) was observed in the drug resistant Y79 cells as well as in PCNC. CONCLUSION: Our results suggest that multidrug resistant proteins are intrinsically present in retinoblastoma which causes treatment failure in managing retinoblastoma with chemotherapy.     

HSP60在人视网膜母细胞瘤中表达的研究

目的 研究热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)在未接受治疗的视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)患者的视网膜内原发肿瘤细胞和脉络膜、视神经等侵袭部位的肿瘤细胞中的表达,初步分析HSP60在眼球不同部位Rb细胞的表达特点及其可能与Rb细胞凋亡的关系.方法 收集22例(22眼)未接受治疗的Rb患者所摘除眼球的石蜡切片.用免疫组织化学方法测定HSP60、HSP10和Caspase 3在视网膜内和脉络膜、视神经等侵袭部位的表达.结果 22例患者手术后病理检查眼内均见肿瘤细胞.侵袭部位见肿瘤细胞的患者21例,其中肿瘤单独侵犯视神经7例(33.3％),肿瘤单独侵犯脉络膜5例(23.8％),肿瘤同时侵犯视神经和脉络膜9例(42.9％).脉络膜与视神经部位肿瘤细胞HSP60、HSP10的表达均比眼内肿瘤细胞高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).脉络膜与视神经部位肿瘤细胞Caspase 3的表达比眼内肿瘤细胞低,差异均有统计学意义(均为P=0.000).结论 Rb肿瘤细胞在从视网膜内向外侵袭的过程中,可能通过升高HSP60、降低Caspase 3来促进侵袭部位肿瘤细胞的存活.但是HSP60在侵袭部位的升高是肿瘤细胞向外侵袭的原因还是结果,以及是否会进一步增强肿瘤细胞向远处转移等还需进一步研究.     

维生素D及其类似物治疗视网膜母细胞瘤的研究进展

视网膜母细胞瘤的维生素D疗法是一种非诱变的化学疗法。本文综述了20a来,国内外许多学者对维生素D及其类似物治疗视网膜母细胞瘤进行的广泛研究,其抗癌作用已经得到肯定。现分别从维生素D及其类似物治疗视网膜母细胞瘤的分子机制、毒副作用及其应用前景方面进行综述。