Duchenne／Becker肌营养不良症基因缺失的检测及缺失类型与临床？…

目的 了解Ｄｕｃｈｅｎｎｅ／Ｂｅｃｋｅｒ肌营养不良症基因缺失的分布及其与其与表型的关系。方法 采用１８对的多重聚合酶链反应分两步对９６例ＤＭＤ／ＢＭＤ进行筛查。结果 用第一组引物检出４９例缺失，第二组引物检出１１例缺失，分别占全长ｃＤＮＡ地检出缺失的７９％和１８％，两组引物检出缺失的总和占全部缺失的９７％。６０例缺失中，ＤＭＤ４２例，中间型３例，ＢＤＭ１３例，未分类２例。４３例缺失分布于外显子４－     

Duchenne/Becker肌营养不良症基因缺失的检测及缺失类型与临床表型的关系

目的了解Ｄｕｃｈｅｎｎｅ／Ｂｅｃｋｅｒ肌营养不良症（ＤＭＤ／ＢＭＤ）基因缺失的分布及其与表型的关系。方法采用１８对引物多重聚合酶链反应（ｍＰＣＲ）分两步对９６例ＤＭＤ／ＢＭＤ进行筛查。结果用第一组引物检出４９例缺失，第二组引物检出１１例缺失，分别占全长ｃＤＮＡ探针检出缺失的７９％和１８％，两组引物检出缺失的总和占全部缺失的９７％。６０例缺失中，ＤＭＤ４２例（７０％），中间型３例（５％），ＢＭＤ１３例（２２％），未分类２例（３％）。４３例（７２％）缺失分布于外显子４４～５２，１７例（２８％）分布于外显子１～１９。结论基因缺失主要分布于基因３′侧外显子４４～５２和５′侧外显子１２～１９两个热区。临床表型与基因缺失类型有密切关系，４１例移码缺失破坏了翻译阅读框架而导致基因功能丧失，表型为严重的ＤＭＤ，１１例整码缺失位于外显子２～４３，基因部分功能保留，表型为较轻的中间型和ＢＭＤ。     

杜氏肌营养不良患儿的相关基因研究

目的　对确诊为杜氏肌营养不良 (DMD)患儿血清进行基因和肌酸磷酸激酶 (CPK)检测 ,以研究DMD的基因缺失情况以及与CPK的关系。方法　①采用多重引物PCR的方法检测基因缺失 ;②应用多功能全自动生化仪检测CPK。结果　① 30例患儿中基因缺失者 17例 (5 6 7% ) ,单一缺失者 8例 (47 1% ) ,多重缺失 9例(5 2 9% )。其中外显子 5 1缺失占 6 4 7% (11人次 ) ,其次为 4 8缺失占 5 2 9% (9人次 ) ;4 5缺失占 35 2 % (6人次 ) ;4 4缺失占 17 6 % (3人次 ) ;12缺失占 11 8% (2人次 ) ;外显子 8、17、19缺失各 1人次 ,各占 5 9%。②外显子缺失者CPK(1196 2 78± 6 30 5 6 5 )IU/L与无外显子缺失者CPK (95 37 6 9± 4 30 3 85 )IU/L相比 ,单一缺失者CPK(1170 4 6 5± 6 5 6 1 10 )IU/L与多重缺失者CPK(12 192 2 2± 6 0 96 80 )IU/L比较 ;单纯外显子 5 1缺失CPK(135 4 2 10± 5 5 73 93)IU/L与外显子 5 1缺失合并 4 8缺失者CPK(12 2 16 2 5± 6 833 75 )IU/L相比 ,三组均P >0 0 5 ,无显著性差异。结论　①应用PCR技术检测DMD基因缺失检出率较高 ,多重缺失占 4 7 1% ,其中以外显子 5 1、4 8、4 5缺失最多见 ;②外显子缺失与否或缺多少与CPK增高程度无相关性     

假肥大型肌营养不良基因携带者检测方法的研究进展

假肥大型肌营养不良(DMD)在儿童神经肌肉系统疾病中发病率高，预后差，目前尚无有效的治疗方法，故携带者的检出对预防患儿出生具有重要意义。传统的检测方法漏诊率高，使用有限，近年来在基因检测方面取得了一定进展。文章主要介绍假肥大型肌营养不良基因携带者的基因检测方法，并将携带者分为缺失型和非缺失型分别进行综述。     

34例假肥大型肌营养不良的基因缺失与智能障碍的相关分析

３４例假肥大型肌营养不良的基因缺失与智能障碍的相关分析吴保仁谭庆荣宋林琳作者单位：７１００３２西安，第四军医大学西京医院神经内科假肥大型肌营养不良（Ｄｕｃｈｅｎｎｅ／Ｂｅｃｋｅｒｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓｔｒｏｐｈｙ，ＤＭＤ／ＢＭＤ）是临床上常见的一种Ｘ...     

Duchenne型肌营养不良患儿认知损害的研究进展北大核心CSCD

Duchenne型肌营养不良(DMD)是由于抗肌萎缩蛋白基因突变所致的X连锁隐性遗传性神经肌肉病,约1/3的患儿存在认知损害,早期发现认知损害并给予适当干预对改善患儿生存质量具有重要意义。现就近年来关于DMD患儿认知损害的临床特点、发病机制、脑结构改变和干预措施等方面的研究进展作一综述。     

磷酸肌酸治疗Dystrophin缺失型肌营养不良临床研究

目的研究磷酸肌酸对进行性肌营养不良的治疗效果。方法20例确诊为Dystrophin缺失型进行性肌营养不良患儿静脉应用磷酸肌酸2周,比较治疗前后血清肌酶与临床症状改善情况,并对患者进行随访。结果20例中14例肌酶较治疗前有显著下降,6例无改变,差别有显著统计学意义(P<0.05)。随访15例中,12例于停用磷酸肌酸后1.5～2个月血肌酶恢复至治疗前水平,临床症状无明显改变或缓慢进行性加重。结论磷酸肌酸能显著降低血清肌酶,但药效维持时间短。     

Duchenne型肌营养不良基因治疗研究进展

Duchenne型肌营养不良（DMD）是由编码抗肌萎缩蛋白的DMD基因突变导致的X连锁隐性遗传病。它的特点是进行性肌无力和因缺乏抗肌萎缩蛋白而导致的骨骼肌和心肌退化。患儿多于2~5岁起病,常在20岁左右死于心力衰竭或呼吸功能不全。目前,临床上多采用支持疗法改善疾病症状,但并不能改变疾病的最终结局。基因治疗的兴起为该病的治愈提供了希望。本文总结了DMD的基因替代疗法,包括腺相关病毒介导的DMD基因转导技术、肌营养不良蛋白相关蛋白（utrophin）上调技术和成簇规律间隔的短回文重复序列基因编辑技术的研究进展,并为解决腺相关病毒载量、转基因产物的长期有效表达、utrophin蛋白表达量问题提出的建议进行综述,为研究者们进一步研究提供参考。     

色素失禁症NEMOΔ4～10基因片段缺失的初步研究

目的 了解我国色素失禁症病例的NEMO基因共有序列NEMOΔ4～10缺失情况。方法 儿童色素失禁症病例7例及其部分家庭成员共15人被纳入实验组,同期50例无血缘关系,无遗传性疾病儿童随机抽取作为正常对照。依据色素失禁症基因结构特点,选取NEMO基因特异引物In2／JF3R和假基因ΔNEMO特异引物Rev-2／JF3R,采用长链聚合酶链反应(PCR)进行检测。结果 7例患儿5例(5／7)(例1、2、3、4和6)有NEMO基因共有序列NEMOΔ4～10缺失,其中例1和例6母女患病,母亲1a和6a检测结果同样显示有NEMO基因共有序列NEMOΔ4～10缺失;7例患儿,只有例2和例4假基因ANEMO中出现共有序列NEMOΔ4～10缺失,相关家族成员假基因ANEMO无共有序列NEMOΔ4～10缺失。正常对照组50例NEMO和假基因ANEMO均未发现有共有序列NEMOΔ4～10缺失。结论 色素失禁症基因突变方式大部分为NEMO基因共有序列NEMOΔ4～10缺失。     

Real-time PCR of the 16S-rRNA gene in the diagnosis of neonatal bacteraemia

Abstract Objective: To evaluate a real-time PCR assay for the diagnosis of neonatal bacteraemia. Patients and methods: Two hundred ninety-five plasma samples from 288 newborns with suspected neonatal sepsis were collected prospectively for the purpose of polymerase chain reaction (PCR)-based bacterial detection. A real-time PCR targeting the bacterial gene for 16S-rRNA gene combined with four specific probes designed to detect Gram-negative bacteria, Staphylococcus aureus and coagulase-negative staphylococci (CoNS) was developed. All samples positive in the universal PCR were further sequenced for bacterial identification. Results: When applied to a material from 50 patients with positive blood culture and 245 patients with negative blood culture, the universal PCR showed a sensitivity of 42% (28-57), a specificity of 95% (92-97), a positive predictive value of 64% (45-80), and a negative predictive value of 89% (84-92) (95% confidence intervals in brackets). Conclusion: A new real-time PCR technique was for the first time applied to a well-defined prospectively and consecutively enrolled material of newborns with suspected sepsis, combining the benefits of real-time PCR with specific probes and sequencing. The method managed to detect bacteraemia with high specificity even though the sensitivity was low. Factors causing the low sensitivity are identified and further strategies to develop the method are described.     

用实时定量PCR和DGGE技术检测先天性巨结肠SIP1基因的表达与异质性

目的 建立简单、有效的SIP1基因在先天性巨结肠症(Hirschsprung disease,HD)中表达情况及异质性筛查技术,并获取其相应的散发性HD人群频率分布.方法 采用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR) 方法 检测180例HD及正常人外周血SIP1基因的mRNA 转录水平;采用PCR-DGGE(PCR degenerating gel gradient elactrophoresis, PCR-DGGE)法检测SIP1基因外显子1-rs11544569和外显子2-rs57148397的异质性.结果 SIP1基因在62.2%(112/180)的正常人和90.5%(163/180)的HD中阳性表达.HD患儿中SIP1基因在mRNA转录水平的表达均高于正常人外周血(P＜0.05). rs11544569和rs57148397两位点分别有104例和119例HD观察到异质性,其发生率为57.8%和66.1%.180例正常人中均未发现异常电泳条带.结论 检测SIP1 mRNA 含量可作为判断HD的良好参考指标.PCR-DGGE是一种简单、灵敏、高效的SIP1基因多态性及异质性检测技术,可应用于医学实践.     

应用巢式聚合酶链反应和测序检测肺炎支原体23S rRNA中点突变

目的 建立快速检测肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)耐药性的实验方法并应用于临床以了解MP耐药现状.方法 应用巢式PCR直接检测咽拭子标本MP-23S rRNA基因并对扩增产物进行电泳检测或DNA测序分析;通过MP培养及体外药物敏感性试验测定临床分离株的红霉素最小抑菌浓度,以验证23S rRNA基因检测结果的可靠性.结果 200例临床标本经MP-IgM抗体、咽拭子MP种特异性16S rRNA基因巢式PCR扩增和MP分离培养测定证实为MP 64例.应用巢式PCR技术扩增MP-23S rRNA基因,并对扩增产物进行测序,将基因序列与基因库中MP标准株基因序列进行比较,与标准株序列相同的共计26例,其余38例存在23S rRNA点突变:35例在2063位点发生了A到G的点突变,1例在2063位点有A到C的点突变,2例在2064位点有A到G的点突变;耐药率为59.4%.MP耐药基因检测方法灵敏度达102 ccu/ml,MP培养及药物敏感性试验证实23S rRNA基因检测结果可靠.结论 建立的MP耐药基因检测方法能直接检测临床标本中的MP耐药基因.59%的受检标本23S rRNA基因发生点突变.     

急性T淋巴细胞白血病微小残留病实时荧光定量聚合酶链反应检测的意义

目的　研究采用实时荧光定量聚合酶链反应 (RQ-PCR)技术检测具有tal-1缺失的急性T淋巴细胞白血病(T ALL)患儿骨髓微小残留病 (MRD)水平的可行性,并探讨不同时间点MRD水平在预后和临床治疗干预上的意义。方法　采用最常见的tal 1缺失断裂点sildb1-tal1db1,对 50例T-ALL患儿初治标本进行阳性筛选;应用RQ-PCR技术检测所有阳性患儿初治标本的敏感度,并对这些患儿化疗达完全缓解(CR)及其后不同时间点的骨髓标本进行MRD定量检测,并以极限稀释法检测结果进行比较;对上述两种方法分别检测出的结果进行相关回归分析。结果　 ( 1 )在 50例T-ALL患儿中,共检测出 10例阳性患儿; (2)采用RQ-PCR技术和极限稀释法分别检测患儿CR期及其后各个时间点的 28份标本,有 24份标本两种方法检测结果均大于 10-5,两种方法检测结果的相关性很好(r=0 898,P<0.001); (3)在规律治疗的 8例患儿中,CR时骨髓MRD水平高于 10-4的 3例患儿皆在化疗过程中复发,而低于 10-4的 5例一直未复发。结论　RQ-PCR技术是一项特异性强,重现性好、精确快速的MRD定量检测手段。不同时间点的MRD水平升高对预后的意义不同,对及时调整治疗方案、改善预后有重要价值。     

应用DHPLC技术检测非缺失型DMD致病基因的新突变

目的建立检测Duchenne型肌营养不良症（Duchenne muscular dystrophy,DMD）致病基因dystrophin突变的快速、敏感的微小突变筛查系统。方法选择经多重PCR检测未发现dystrophin基因大尺度缺失的DMD患儿20例,年龄在2—10岁,以其基因组DNA为模板,通过PCR反应,分别扩增dystrophin基因外显子及侧翼序列,采用变性高效液相色谱（DHPLC）技术进行突变筛查,对DHPLC峰形变异的外显子片段行PCR产物直接测序,确定突变的具体位点和类型。结果筛查了包括2个缺失热点区dystrophin基因的68个外显子和3＇UTR部分片段,分别在4例患儿中检测出该基因的4种致病突变：c．6808_6811delTTHA,c．4959_4960insA,c．8656C〉T和c．8608C〉T。前两例引起移码突变分别导致p．ku2270Metfsx9和p．Ser1654LysfsX5,后两例为无义突变分别导致p．R2886X和p.R2870X。其中c．6808_6811delTTA,c．49594960insA和c．8656C〉T为文献未曾报道的新突变。结论DHPLC可以作为有效地筛查DMD微小突变的检测方法。     

47例儿童急性淋巴细胞白血病IgH和TCR基因重排

目的 检测４７例儿童急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）ＩｇＨ和ＴＣＲ基因重排，以便选择恰当的组合用于微小残留病（ＭＲＤ）的检测。方法 以Ｃｈｅｌｅｘ１００为介质，从初诊的ＡＬ患儿骨髓涂片中提取ＤＮＡ，借助聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测ＩｇＨ、ＴＣＲβ、ＴＣＲδ和ＴＣＲγ基因重排。结果 在Ｂ－ＡＬＬ（４２例）中，ＩｇＨ、ＴＣＲβ、ＴＣＲδ和ＴＣＲγ基因重排的检出结果分别为３２／４２例、１５／４２例、１９／     

Prenatal deletion detection in a sporadic case of Duchenne muscular dystrophy without genotype information from the affected individual

We describe the application of deletion screening by amplification of deletion-prone exons via polymerase chain reaction (PCR) in a family with a sporadic case of Duchenne muscular dystrophy (DMD). No DNA was available from the affected patient who died 12 years beforehand at the age of 18 years. Material obtained prenatally from two male fetuses exhibited an identical deletion. These findings effectivly transformed a sporadic case into a familial case and a numerical carrier risk was substituted by obligate carrier status. Additionally an indirect genotype analysis was replaced by the possibility of direct DNA analysis. Genetic counselling, formerly based upon incomplete data, can now be aided by precise risk assessment.     

细菌16S rRNA基因荧光定量PCR诊断新生儿败血症

目的探讨新生儿败血症的快速可靠诊断方法,以提高临床检测细菌的速度及准确性。方法以细菌16SrRNA基因为靶序列,设计通用引物及TaqMan探针,建立细菌16SrRNA基因实时荧光定量PCR反应体系;选择临床引起新生儿败血症的常见菌如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大肠埃希菌等进行浓度梯度实验;对临床疑为新生儿败血症的830例感染性疾病的新生儿抽取静脉血分别做细菌16SrRNA基因荧光定量PCR和血培养检测。结果临床常见分离株金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌荧光定量PCR检测结果均为阳性;巨细胞病毒、EB病毒、乙肝病毒,新型隐球菌及白色念珠菌,人基因组DNA及空白对照均为阴性。细菌荧光定量PCR最低能检测到3个细菌,其荧光定量CT值为37．90;对临床疑为感染性疾病的830例患儿标本中,荧光定量PCR检测血标本阳性率5．18％（43／830）,血培养阳性率2．41％（20／830）,前者明显高于后者,差异具有统计学意义,P〈0．01,30例非感染性疾病患儿血标本荧光定量PCR检测及细菌培养均为阴性。若以血培养作为对照,荧光定量PCR方法的诊断敏感性为100％,特异性为97．16％,正确诊断指数为0．972。结论建立了细菌16SrRNA基因荧光定量PCR诊断新生儿败血症方法。其检测快速、简便,为新生儿败血症提供早期、敏感的病原学诊断依据。