辐射诱导白血病细胞凋亡的时程、剂量效应及zVAD.fmk对凋亡的抑制作用

目的　探讨γ 射线辐射诱导白血病细胞凋亡的时程、剂量效应及其凋亡的发生机制。方法　将对数生长的p5 3基因突变的Jurkat细胞经 5、10、2 0Gy的γ 射线照射 ,其中一组在 10Gy照射前加入Caspase抑制剂zVAD .fmk。照射后继续培养 6、12、3 6、48h ,收获细胞 ,用AnnexinV标定、流式细胞术 (FCM)定量分析细胞凋亡百分率。结果　随培养时间的延长和照射剂量的增大 ,凋亡细胞数也增多。zVAD .fmk能抑制辐射诱导的细胞凋亡。结论　凋亡细胞数量与照射后细胞培养时间及γ 射线的照射剂量呈线性关系 ,γ 射线诱导细胞凋亡可独立于p5 3基因 ,而Caspase在γ 射线诱导细胞凋亡中发挥重要作用。     

X射线对胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2细胞增殖及凋亡的影响

目的探究不同剂量的x射线对胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2增殖和凋亡的影响。方法取处于对数生长期的SW1990和Capan-2细胞,经不同剂量的x射线（2、4、6、8和10Gy）照射后分别培养24、48和72h.CCK培法检测细胞增殖;采用AnnexinV／PI双染的方法检测SW1990和Capan-2细胞的凋亡;Westernblotting检测细胞凋亡相关蚩白的表达变化;RT—PCR检测细胞凋亡相关蛋白的mRNA表达。结果相比正常对照组,x射线能明显抑制SW1990和Capan-2细胞的增殖,井且这种,抑制作用呈剂量依赖性。细胞凋亡率在x射线的作用下也明显增加,并呈现剂量依赖性。Westernblotting结果显示x射线能增加两种细胞中促凋亡蛋白Bax的表达。RT-PCR结果显示x射线能降低抗凋亡蛋白Bel-2mRNA表达,上凋抗凋亡蛋白Bax mRNA表达。结论x射线能抑制胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2的增殖并提高其凋亡率,呈现一定的剂量依赖性,其机制可能与诱导胰腺癌细胞凋亡有关。     

NADH对X射线照射正常肝细胞L02后PARP和Caspase 3活性的影响

目的：为了研究NADH对X射线诱导的细胞凋亡和PARP、Caspase 3活性的影响。方法设假照射组、对照组及处理组。处理组正常肝细胞在6MV Varian 5．0Gy照射后立即加入含NADH（400μg／mL） RPMI 1640完全培养基,假照射组和对照组只加入培养液,培养24 h,用Annexin V／PI法检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测bcl－2和bax蛋白阳性表达率;免疫印迹检测PARP和Caspase3活性。结果处理组与对照组相比细胞凋亡率明显下降, bax蛋白阳性表达百分率明显下调,而bcl－2表达则明显上调（P＜0．05）。对照组PARP和Caspase 3蛋白均出现剪切片断,处理组未发现剪切片断形成。结论 NADH具有抗辐射诱导的L02肝细胞凋亡损伤作用,其作用机制可能通过bcl－2和bax调控线粒体途径有关。     

H_2O_2对PC12细胞Caspase-3和NF-κB P65基因表达的影响

目的 :探讨H2 O2 对PC12细胞半胱天冬酶 3(caspase 3)和核转录因子 kappaBP6 5 (uclearfactor kappaB ,NF κBP6 5 )基因表达的影响。方法 :不同剂量H2 O2 (0～ 4 0 0nmol·L-1)处理PC12细胞 8h ,采用RT PCR检测Caspase 3、NF κBP6 5mRNA表达变化 ,Westernblot检测Caspase 3P 2 0活性片段和NF κBP6 5蛋白表达的变化 ,用比色法检测Caspase 3相对活性。结果 :随H2 O2 浓度从 10 0～ 4 0 0nmol·L-1增加 ,Caspase 3、NF κBP6 5mRNA表达和Caspase 3P2 0活性片段及NF κBP6 5蛋白表达水平逐渐增加 ;随H2 O2 浓度从 5 0～ 4 0 0nmol·L-1增加 ,Cas pase 3相对活性增加 (P <0 .0 5 ) ,在 4 0 0nmol·L-1H2 O2 时Caspase 3相对活性达最大值。 结论 :H2 O2 可剂量依赖性的增加Caspase 3mRNA表达和Caspase 3P 2 0活性片段 ,增加Caspase 3活性 ;H2 O2 可剂量依赖性的增加NF κBP6 5mRNA表达和NF κBP6 5蛋白表达。     

氧化槐果碱对人结肠腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：观察氧化槐果碱（OSC）对人结肠腺癌细胞株 SW480的增殖抑制及诱导凋亡的作用,探讨其作用机制。方法体外培养 SW480细胞,使用 OSC（作用浓度分别为0.5～2 mg／mL）和阳性对照药5－氟尿嘧啶（作用浓度10μg／mL）作用于细胞12～48 h;采用 MTT 法测定 SW480细胞增殖情况,荧光双染观察细胞形态变化,计数凋亡细胞所占比例,流式细胞仪分析细胞周期变化及细胞凋亡率,Real －time PCR 检测凋亡基因 Caspase －3和 Bcl －2的表达。结果MTT 结果显示,各浓度 OSC 对体外培养的 SW480细胞增殖具有明显抑制作用,该作用呈一定的时间和剂量依赖性;OSC 作用后细胞的体积变小变圆,核变形、皱缩,凋亡细胞所占比例显著增加;流式细胞仪分析结果表明,随着 OSC 作用时间的延长,G0／G1期细胞比例增加,同时 S 期细胞比例也相应增加;凋亡基因 Caspase －3 mRNA 表达上调,Bcl －2 mRNA 表达下调。结论OSC 可抑制体外培养的 SW480细胞生长增殖,其作用机制与阻滞细胞周期进程、诱导细胞凋亡有关。     

Caspase8、3蛋白在PUVA诱导K562细胞凋亡时的变化

目的研究Caspase8、3蛋白在补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病K562细胞凋亡时的变化。方法用不同浓度的中药补骨脂中提取的PSO和（或）不同照射时间、波长为360nm的UVA作用于K562细胞,检测细胞凋亡率、在电镜下细胞超微结构改变及Caspase8、3蛋白的表达,用多因素方差分析法对定量资料进行统计分析。结果PSO、UVA照射及PUVA均可使细胞凋亡率增加,后两者上调Caspase8、3蛋白的表达,PUVA的作用显著强于前两者;PUVA处理后的K562细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变。结论PUVA可通过激活Caspase8、3基因诱导K562细胞凋亡。     

Caspase 3在大肠杆菌E.coli BL21中表达和活性的研究

目的：研究凋亡蛋白酶Caspase 3在大肠杆菌中的表达及活性. 方法：用PCR法扩增出Caspase 3基因cDNA,然后插入pCMV-Myc载体,扩增后克隆至表达载体pGEX-6p,使用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导Caspase 3蛋白的表达;应用SDS-PAGE和Western blot法鉴定其性质. 结果：经测定诱导3h后Caspase 3活性最高. 结论：可在大肠杆菌E.coli BL21中诱导表达出有活性的Caspase 3,为研究其在细胞凋亡中的作用奠定了基础.     

Livin反义寡核苷酸诱导人肾癌细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨Livin反义寡核苷酸(ASODN)对人肾癌细胞株786.O Livin mRNA及蛋白表达的抑制作用以及对细胞凋亡的影响.方法 设计合成全硫代磷酸化修饰的Livin ASODN,脂质体辅助转染至786-O细胞内.采用RT-PCR检测转染后Livin mRNA的变化,细胞免疫化学、激光扫描共聚焦显微镜观察Livin蛋白在细胞内的分布、转染后表达的变化及细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,激酶法测定Caspase3活性的变化.结果 转染Livin ASODN后,RT-PCR显示786-O细胞表达Livin mRNA减少(P＜0.01),激光扫描共聚焦显微镜下见细胞表达Livin蛋白减少、细胞形态发生变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),Caspase3活性明显增加(P＜0.01).结论 Livin ASODN能明显下调786-O细胞Livin基因的表达,诱导细胞凋亡.抑制Caspase3活性是Livin抑制细胞凋亡的途径之一.     

羧基-D-氨基葡萄糖对人食管癌Eca-109细胞caspase-3活化及bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养Eca-109细胞;倒置显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞内半胱氨酸酶3(caspase-3)活化程度及bcl-2蛋白表达的变化;Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞凋亡率.结果 COPADG作用显著增加Eca-109细胞凋亡率,且Eca-109细胞内caspase-3活性和bcl-2表达平均荧光强度明显增高.结论 COPADG能显著诱导Eca-109细胞凋亡发生,并使Eca-109细胞内caspase-3显著活化以及bcl-2蛋白表达下调,并可能通过该机制诱导细胞凋亡的发生.     

PI3K/Akt/GSK-3β信号通路在肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤中的调控作用及重组人红细胞生成素预保护效应

目的 探讨PI3K/Akt/GSK-3β通路对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的调控及重组人红细胞生成素(rHuEPO)的预保护作用.方法 正常培养的HK-2细胞,分为7组,正常对照组、缺血再灌注(I/R)组、LY294002干预组(PI3K/Akt阻断剂 10 μmol/L)、LiCl干预组(GSK-3β阻断剂 20 μmol/L)、rHuEPO干预组(20 U/L)、rHuEPO+LY294002双干预组、rHuEPO +LiCl双干预组.Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)、Akt Ser473、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、GSK-3β Ser9及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3活性;MTT法检测细胞活力;AnnexinⅤ/PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡. 结果缺血再灌注损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调[(15.2±1.4)%]、Akt活性水平下降、GSK-3β及Caspase 3酶活性水平上调,与正常对照组相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与I/R组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一步上调[(18.2±2.1)%]、Akt活性水平下调、GSK-3β及Caspase 3酶活性上调;LiCl干预使细胞凋亡率下调[(12.3±0.8)%]、Akt活性水平上调、GSK-3β及Caspase 3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).rHuEPO干预与I/R组相比,细胞凋亡率下降[(11.1±1.6)%]、Akt活性水平升高而GSK-3β及Caspase 3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与rHuEPO干预组比较,rHuEPO+LY294002双干预组细胞凋亡率升高[(13.4±1.9)%]、Akt活性水平下降而GSK-3β及Caspase 3酶活性上调;rHuEPO+LiCl双干预组细胞凋亡率下调[(7.5±1.3)%]、Akt活性水平上升而GSK-3β及Caspase 3酶活性下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 缺血再灌注损伤可引起肾小管上皮细胞凋亡,Akt活性降低及GSK-3β活性升高,影响Caspase 3依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一.rHuEPO可通过增强Akt活性,降低GSK-3β及Caspase 3酶活性,减少细胞凋亡,对HK-2缺血再灌注损伤有一定的保护作用.     

替米沙坦通过上调PPAR-γ促进结肠癌SW480细胞TIMP-1表达的实验研究

目的 探讨替米沙坦能否通过上调PPAR-γ促进结肠癌SW480细胞TIMP-1表达.方法 使用替米沙坦对SW480细胞进行干预.在不同时间点（0、24和72h）使用MTT法对SW480细胞活性进行测定;使用PT-PCR对在不同时间点（0、24和72h）细胞表达的TIMP-1和PPAR-γ mRNA进行测定;使用western blotting对在不同时间点（0、24和72h）细胞表达的TIMP-1和PPAR-γ蛋白进行测定.结果 替米沙坦干预后SW480细胞活性逐渐降低,明显低于对照组（均P＜0.05）,且各时间点间的细胞活性存在显著统计学差异（均P＜0.05）;不同时间点（0、24和72h） TIMP-1、PPAR-γ mRNA和蛋白的表达呈时间依赖性递增（均P＜0.05）.结论 本实验表明,替米沙坦可能是通过上调PPAR-γ的表达促进TIMP-1的合成和分泌,导致SW480细胞生长和侵袭能力的降低.     

LncRNA H19对大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA(LncRNA) H19对雨蛙素刺激的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响.方法 在体外通过用雨蛙素刺激AR42J细胞建立AP模型,采用qRT-PCR和Western blot检测沉默以及过表达H19后凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果 H19沉默后,凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白水平下降,细胞凋亡率也相对减少(P＜0.05);而过表达H19后,Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白水平增加,细胞凋亡率也是升高的(P＜0.05).结论 沉默LncRNA H19可减少雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,提示其可能成为治疗急性胰腺炎的潜在有效靶点.     

IP_6对人结肠癌细胞HT-29凋亡Caspase3基因作用

目的 研究肌醇六磷酸(IP6)对人结肠癌细胞HT-29的诱导凋亡作用,检测Caspase3基因在IP6处理细胞前后表达的变化,并对IP6诱导人结肠癌细胞HT-29的凋亡机制进行初步探讨.方法 不同浓度的IP6以不同时间作用于体外培养的HT-29细胞,用MTT法检测IP6持续作用对癌细胞增殖的影响;透射电镜观察癌细胞超微结构的变化;用RT-PCR方法对IP6作用前后以及作用不同浓度和时间的癌细胞内Caspase3活性进行检测.结果 IP6能显著抑制人结肠癌细胞HT-29生长,呈剂量与时间依赖性;IP6作用后,HT-29细胞出现凋亡的形态学改变;与对照组相比,不同浓度的IP6作用不同时间后,Caspase3 mRNA表达均升高(F=8.173～91.755,q=3.960～17.095,P<0.05), IP6作用6个月组Caspase3 mRNA表达升高较其他时间组显著(q=12.858～14.890,P<0.01).结论 IP6具有抑制人结肠癌细胞HT-29增殖和诱导凋亡的作用;IP6长期作用诱导细胞凋亡更加显著;Caspase3基因参与细胞的凋亡调节机制,发挥重要作用.     

β-榄香烯对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及Survivin表达和Caspase酶活性的影响

目的 观察伊榄香烯对人胃癌细胞系SGC-7901凋亡抑制蛋白survivin及caspase酶活性的影响，探讨β-榄香烯诱导SGC-7901凋亡的作用机制。方法 用不同浓度β-榄香烯作用胃癌SGC-7901细胞后，分别采用Northern blot、Western blot检测Survivin mRNA和蛋白水平，用酶标仪比色法检测Caspase酶活性，分别采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果 β-榄香烯能下调Survivin mRNA和蛋白水平，增强Caspase酶活性，并诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡，效果呈浓度和作用时间依赖性。结论 β-榄香烯能诱导人胃癌细胞系SGC-7901凋亡，可能与下调Survivin表达与增强Caspase酶活性有关。     

Egr-1基因在人宫颈癌Hela细胞中的表达及其对细胞凋亡的作用

目的　研究不同剂量60 Co射线照射后Egr 1基因在人宫颈癌Hela细胞中的表达及与细胞凋亡的关系。方法　将人宫颈癌Hela细胞株进行体外培养 ,用不同剂量的60 Co射线照射 ,流式细胞仪记录细胞周期的分布和凋亡率 ,电子显微镜观察细胞形态 ,半定量RT PCR法检测Hela细胞Egr 1基因的表达。结果　放射线可抑制人宫颈癌Hela细胞的生长 ,诱导其凋亡。照射后细胞凋亡率随照射剂量增加而增加 ,至 12 0 0cGy时达高峰值 ,与对照组相比均有极显著性差异 (P <0 .0 1) ;照射后Hela细胞出现G0 /G1期阻滞 ,S期明显减少 ,且呈剂量依赖性 ,与对照组相比均有极显著性差异 (P <0 .0 1) ;照射后Egr 1基因表达随照射剂量增加而增加 ,至 12 0 0cGy时达峰值 ,与对照组比均有极显著性差异 (P <0 .0 1) ,Egr 1基因表达与凋亡率相关 (r=0 .96 9,P <0 .0 1)。结论　60 Co射线可引起人宫颈癌Hela细胞周期阻滞并诱导细胞凋亡 ,Egr 1基因为促凋亡基因 ,可能与宫颈癌的发生、发展及预后有关     

蟾蜍灵对EAhy926细胞增殖、凋亡及Caspase3,Bcl-2表达的影响

[目的]探讨蟾蜍灵对血管内皮细胞EAhy926的增殖抑制作用及其机制.[方法]体外培养血管内皮细胞EAhy926,用不同浓度蟾蜍灵进行干预.通过四甲基偶氮唑盐(MTI)法检测细胞增殖抑制率;用倒置光显微镜观察细胞形态变化;用Hoechst33342/PI双荧光染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化;以流式细胞术检测细胞凋亡的比率;应用半定量逆转录PCR检测EAhy926细胞中Caspase3和Bcl-2的mRNA表达.[结果]蟾蜍灵对EAhy926细胞生长具有抑制作用;且在0.0625-1μmol/L范围内呈时间、剂量依赖性;荧光显微镜下可见0.1μmol/L的蟾蜍灵作用24 h可诱导EAhy926细胞凋亡,作用48h可引起细胞部分坏死;流式细胞术检测出典型的“凋亡峰”,凋亡率8.2％～36.5％,且呈时间依赖性.半定量RT-PCR显示Caspase3 mRNA表达较对照组明显增强,Bcl-2 mRNA表达较对照组明显减弱,且二者均呈剂量依赖性.[结论]蟾蜍灵抑制EAhy926细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase3和下调Bcl-2基因表达有关.     

柚皮素对K562细胞的抑制作用与Caspase酶活性、PCNA蛋白表达的关系

目的本研究旨在探讨柚皮素对K562细胞的生长抑制作用与Caspase酶的活性及细胞增殖核抗原（PCNA）蛋白表达的关系。方法用50μmol／L，200μmol／L的柚皮素分别作用K562细胞后，Caspase分光光度计法检测细胞内Caspase-3和Csapase-9酶活性的改变：用细胞免疫化学的方法检测PCNA蛋白的表达。结果在柚皮素作用下，K562细胞内Caspase-3和Caspase-9活性增强（P〈0．05），PCNA的表达显著降低（P〈0．05）。结论柚皮素对K562细胞的抑制作用可能是通过细胞增值抑制和上调Caspase-9和Csapase-3活性诱导细胞凋亡而实现。     

Effect of Mcl-1 on osteosarcoma cells under doxorubicin-induced apoptosis

目的 研究阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡过程中Mcl-1含量的变化以及Mcl-1对骨肉瘤细胞凋亡的调控作用.方法 采用半定量PCR法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin的mRNA水平变化;Western blot法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin蛋白变化;转染pcDNA3-Mcl-1质粒使细胞高表达Mcl-1、Bcl-2;采用Caspase3/7活性试剂盒检测Caspase3/7活性.结果 骨肉瘤细胞在阿霉素作用下,Mcl-1和Bcl-2的mRNA水平无变化,而蛋白水平下调;过表达Mcl-1可以明显抑制凋亡标志物PARP的剪切,而Bcl-2不具有抑制效应;同样,过表达Mcl-1可以抑制阿霉素作用下Caspase3/7的活化.结论 阿霉素作用下,Mcl-1蛋白水平下降是骨肉瘤细胞发生凋亡的重要原因,并且该凋亡过程与Caspase的活化有关.     

过表达α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ通过增强p38MAPK信号通路抑制UVC照射诱导的人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡

 目的 初步探讨α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ（简称FUT7）在UVC照射诱导的人肝癌SMMC-7721(简称7721)细胞凋亡过程中的作用及机制。方法 用RT-PCR检测转染pcDNA3-FUT7质粒的7721细胞及转染空质粒pcDNA3的7721细胞中FUT7基因的转录水平；用流式细胞仪检测细胞表面FUT7产物SLex的表达水平；利用DAPI染核计算UVC照射后细胞的凋亡比率；用结晶紫染色法测定细胞的存活率；利用Western blot检测Caspase3的剪切情况及p38MAPK、JNK1/2和ERK1/2的磷酸化水平。结果 过表达FUT7能抑制UVC照射诱导的7721细胞凋亡，同时还增强了细胞中p38MAPK信号通路的活性，而用p38MAPK的特异性抑制剂处理则可削弱FUT7的抗凋亡作用。结论 在UVC照射诱导的7721细胞凋亡过程中FUT7具有抗凋亡的作用，这种作用可能部分通过增强p38MAPK信号通路活性而实现。