APV对大鼠海马脑片铅及谷氨酸损伤保护作用

目的探讨D-2-氨基-5-膦酸基戊酸(APV)对海马脑片铅(Pb2+)及谷氨酸(Glu)损伤作用及其与脑海马细胞内钙离子浓度变化的关系。方法采用低浓度胰蛋白酶消化法分离大鼠海马细胞,实验设对照组,铅暴露、谷氨酸暴露组、APV干预组,以钙荧光探针Fura-2/AM测定海马细胞[Ca2+]i浓度;用2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)染色法观察脑片损伤程度。结果 30μmol/L铅、100μmol/L谷氨酸暴露5 min后大鼠海马[Ca2+]i浓度[分别为(234.9±11.38)和(311.9±14.57)nmol/L]明显高于对照组[(109.6±5.37)nmol/L],差异有统计学意义(P0.05);100μmol/L APV组脑海马细胞内钙离子浓度升高抑制率分别为93.4%和98.2%;30μmol/L铅、100μmol/L谷氨酸暴露30 min后大鼠海马脑片损伤率分别为(40.78±3.21)%和(44.44±3.35)%;与铅暴露组、谷氨酸暴露组比较,APV干预组海马脑片损伤率[分别为(4.05±0.67)%、(16.08±1.23)%]明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论 APV对离体海马脑片Pb2+及谷氨酸损伤具有保护作用,其机制可能与APV抑制Pb2+及谷氨酸诱发海马细胞[Ca2+]i升高、减轻钙超载的细胞毒性作用有关。     

大豆胚轴提取物的降糖作用及其机制研究

目的: 研究大豆异黄酮(soybean isoflavones,SI)和皂甙(soyasaponins,SS)的降糖作用机制。方法: 普通饲料中添加20 g/kg富含SI和SS的大豆胚轴提取物(soybean hypocotyl extracts,SHE),饲喂Wistar正常大鼠和GK/Jcl(Goto-Kakizaki)2型糖尿病大鼠20 w,观察其血糖和葡萄糖耐量变化及对-葡萄糖苷酶和-淀粉酶的抑制活性。 结果: 长期食用SHE能显著降低2型糖尿病大鼠血糖水平,明显改善其葡萄糖耐量,同时能改善正常大鼠葡萄糖耐量。在糖尿病相关酶的抑制试验中,B类、E类和DDMP(2,3-dihydro-2,5-dihydroxy-6-methyl-4H-pyran-4-one)皂甙显示很强的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其50%抑制浓度(IC50)值为10~40 mmol/L;异黄酮苷元也有很强的-葡萄糖苷酶抑制作用,其IC50值为20~150 mmol/L,异黄酮葡萄糖苷形式对α-葡萄糖苷酶的抑制活性则较弱。SI和SS还具有较弱的-淀粉酶抑制作用,浓度为1 g/L时,抑制率为10%~20%。结论: SHE具有降低糖尿病大鼠血糖水平和改善糖耐量的作用,其部分作用机制可能是通过SI和SS对 -葡萄糖苷酶和 -淀粉酶的抑制作用而实现的。     

亚硝酸钠对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白表达的影响

目的研究亚硝酸钠对睾丸支持细胞波形蛋白表达的影响。方法用冷胰蛋白酶消化法进行睾丸支持细胞的体外原代培养;四甲基偶氮唑盐比色法测定亚硝酸钠对支持细胞的细胞抑制率,用改进寇氏法计算半数抑制浓度（IC50）;用免疫细胞化学检测亚硝酸钠对睾丸支持细胞中波形蛋白表达的影响。结果亚硝酸钠浓度为0.0150g/L时对睾丸支持细胞有毒性作用,随着剂量增大,毒性作用逐渐增强,细胞抑制率与亚硝酸钠剂量之间存在着明显的剂量-反应关系,IC50为1.17g/L,标准差为1.14g/L。各剂量组的平均灰度与阴性对照组比较,差异均有显著性（P〈0.05）,且随着染毒剂量的增加,平均灰度逐渐降低。结论一定剂量的亚硝酸钠可以抑制支持细胞波形蛋白的表达。     

柠檬酸镱诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用及蛋白质表达变化研究

目的 研究稀土配合物柠檬酸镱([YbCit2]3-)诱导人肝癌HepG2细胞株凋亡的作用及其机制.方法 用DMEM培养基培养人肝癌细胞株HepG2细胞,以DMEM无血清培养细胞为对照组,以0.01～5.00 mmol/L[YbCit2]3-无血清培养基培养组为处理组,应用四噻唑蓝(MTT)法检测[YbCit2]3-对HepG2细胞生长的影响;以2.00 mmoL/L[YbCit2]3-无血清培养基培养组为处理组,Hoechst 33258染色法考察[YbCit2]3-对细胞的作用,采用差异蛋白质组学及H2O2、线粒体膜电位检测的方法研究[YbCit2]3-对HepG2细胞作用的可能机制.结果 2.00～5.00 mmol/L浓度范围内处理72 h,[YbCit2]3-能抑制HepG2细胞的生长,半数抑制浓度(IC50)值为(2.46 ±0.23)mmol/L.2.00 mmol/L[YbCit2]3-处理HepG2细胞48、72 h,Hoechst 33258染色检测表明其作用是诱导HepG2细胞凋亡.HepG2细胞经2.00 mmol/L[YbCit2]3-处理72 h后,通过双向电泳分离和质谱鉴定,鉴定出14个差异表达蛋白质点,包括丝切蛋白1、过氧化物氧化还原酶6、S100钙结合蛋白A6、蛋白酶26s非ATP酶亚基13亚型3等在细胞中分别参与抗凋亡、氧化还原、细胞增殖、蛋白降解等过程的蛋白质.2.00 mmol/L[YbCit2]3-分别作用HepG2细胞24、48 h后,细胞线粒体膜电位检测红绿荧光比值对照组为2.45 ±0.28,24 h组为1.56 ±0.23,48 h组为1.16 ±0.18,与对照组比,差异具有统计学意义(F=23.97,P=0.001);胞内H2O2检测荧光强度对照组为20.00 ±2.08,24 h组为40.00 ±5.50,48 h组为48.00±2.03,与对照组相比,差异具有统计学意义(F=48.40,P=0.000),表明[YbCit2]3-作用后线粒体膜电位下降,H2O2产生增加.结论 [YbCit2]3-可通过调节胞内氧化应激水平和线粒体凋亡途径诱导HepG2癌细胞凋亡.     

暴露于低浓度乙醇下体外淋巴细胞氧化损伤模型的建立

[目的]探讨人体外淋巴细胞氧化损伤模型的建立.[方法]抽取10例健康志愿者的外周血,分离淋巴细胞.建立暴露于低浓度乙醇下淋巴细胞氧化损伤模型,并检测暴露于不同浓度乙醇下淋巴细胞的氧化损伤标记物-8-羟基鸟嘌呤(8-OH-dG)进行验证.[结果]分离的10例志愿者外周血淋巴细胞活性大于90%,暴露于乙醇的浓度与淋巴细胞生长抑制成显著正相关(r=0.993,P<0.001).不同浓度乙醇(200 mmol/L、100 mmol/L和50 mmol/L)对淋巴细胞染毒2 h后.8-Oh-dG水平显著高于对照组(P<0.001),随着乙醇浓度的增加,8-OhdG水平越高.[结论]50 mmol/L乙醇作用淋巴细胞2 h可以建立体外淋巴细胞氧化损伤模型.     

锌、钙、镁、钡对大鼠肝脏过氧化氢酶的影响

[目的]探讨锌、钙、钡、镁对过氧化氢酶活性的影响。[方法]模拟人体内锌、钙、钡、镁的浓度,运用铬酸醋酸钾比色法检测过氧化氢酶（CAT）的活性。[结果]ZnCl2、CaCl2的浓度在15.00～0.05mmol/L,BaCl2的浓度在10.00～0.05mmol/L（P﹤0.01）,MgCl2的浓度在10.00～0.10mmol/L之间,能提高大鼠肝脏CAT的活性。[结论]锌、钙、钡、镁在一定浓度范围内可以加速CAT分解细胞内的过氧化氢,减少自由基的产生。     

茶多糖降糖作用机制

目的研究茶多糖的降糖作用机制。方法用比色法测定茶多糖对。一葡萄糖苷酶（EC3．2．1．20）和α-淀粉酶（EC3．2．1．1）的抑制活性，用快速过滤法观察茶多糖对兔小肠刷状缘囊泡葡萄糖转运活性的影响。结果茶多糖显示较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度（IC50）值为3．2g／L；茶多糖对。淀粉酶的抑制活性则较弱，浓度为为1g／L时，其对α-淀粉酶的抑制率为10％；茶多糖同时明显降低兔小肠刷状缘囊泡葡萄糖转运能力，其半抑制浓度（IC50）值为15g/L。结论茶多糖可抑制α-葡萄糖苷酶及α-淀粉酶活力和小肠刷状缘囊泡葡萄糖转运能力，从而可延缓小肠对糖的消化吸收。     

铅对三叉神经细胞胞内游离钙[Ca^2＋]i及电压依赖性钙通道ICa的影响

目的 观察铅对SD大鼠三叉神经细胞内游离钙的影响及其对电压依赖性钙通道作用,以探讨铅对三叉神经细胞毒性作用的机制.方法 用全细胞膜片钳方法检测铅对三叉神经细胞电压依赖性钙通道的作用,并用激光共聚焦和FLUO-3/AM荧光探针标记技术,从单个细胞水平检测铅对胞内游离Ca2 瞬间动态变化的影响.结果 铅可致三叉神经细胞内游离钙[Ca2 ]i升高,铅又可抑制三叉神经细胞电压依赖性钙通道电流ICa.结论 铅致三叉神经细胞内游离钙[Ca2 ]i升高作用与胞内钙库释放有关;铅抑制三叉神经细胞电压依赖性钙通道ICa作用与其抑制高电压激活(HVA)钙通道有关.     

双酚A对大鼠背根神经节神经元钙离子通道电流影响

目的探讨双酚A对大鼠背根神经节(DRG)神经元钙离子通道影响。方法 SD大鼠,周龄4～6周,采用酶消化法急性分离大鼠背根神经节神经元,分别采用全细胞膜片钳技术和激光共聚焦技术记录钙电流和KCl激发钙瞬变的变化。结果双酚A(0.1、1、10、100μmol/L)呈浓度依赖性抑制大鼠背根神经节神经元钙电流,对钙通道的半数最大抑制浓度(IC50)为11.41μmol/L;10μmol/L双酚A显著改变Ca2+通道的激活特性,电流激活曲线去极化方向移动(P<0.05),该浓度双酚A同样可以抑制50 mmol/L KCL激发瞬时胞内钙浓度增加。结论双酚A对大鼠背根神经节神经元钙离子通道具有抑制作用。     

有机磷杀虫剂对M2受体磷酸化的影响

目的研究有机磷类杀虫剂对G蛋白结合受体激酶2介导的毒[曹十]碱乙酰胆碱m2受体磷酸化的影响和可能存在的其他作用途径。方法将纯化的毒[曹十]碱乙酰胆碱m2受体，G蛋白结合受体激酶-2，[y-p^32]ATP与对氧磷（PO）、氧毒死蜱（CPO）共同保温，聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，放射性自显影检测m2受体磷酸化结果。结果氧毒死蜱完全抑制m2受体的磷酸化，其半数抑制浓度为（IC50）70μmol／L；毒死蜱也抑制m2受体的磷酸化，而对氧磷与对硫磷不抑制m2受体的磷酸化。结论不同的有机磷杀虫剂对m2受体的磷酸化有完全不同的作用；毒死蜱阻断m2受体的磷酸化，提示有机磷杀虫剂的毒性作用存在其他途径。     

氰戊菊酯对卵巢细胞、组织钙稳态和激素水平的影响

目的　观察氰戊菊酯对卵巢颗粒细胞钙稳态、卵巢组织钙稳态相关酶及血清类固醇激素水平的影响。方法　用激光共聚焦显微镜、放射免疫法和定磷比色法、酶免疫法等技术测定氰戊菊酯对人卵巢颗粒黄体细胞钙稳态和 30d染毒大鼠卵巢组织Ca2 ATP酶、磷酸化酶a(P a)活性、钙调素含量和血清雌二醇、孕酮水平。结果　氰戊菊酯浓度为 2 0 0和 2 0 μmol/L时 ,可见人卵巢颗粒黄体细胞内游离Ca2 浓度缓慢上升 ,外钙内流为胞内钙升高的主要来源。染毒大鼠Ca2 ATP酶活性总体趋势下降 ,对照组为 (10 3 9± 10 5 7) μmol磷·g蛋白 -1·h-1,1/ 2 5 0LD50 为 (80 6± 5 11) μmol磷·g蛋白 -1·h-1;P a活性增高 ,均显著高于对照组 ;钙调素含量升高 ,动情期显著升高 ,对照组为 (35 7± 2 32 ) μg/L ,1/ 2 5 0LD50 为 (90 5± 30 8) μg/L ,1/ 15LD50 为 (110 6± 36 7) μg/L ;血清雌二醇水平上升 ,对照组为 (0 2 6± 0 13)nmol/L ,1/ 2 5 0LD50 为 (0 4 1± 0 19)nmol/L ;孕酮水平下降 ,对照组为 (7 0 5± 5 6 7)nmol/L ,1/ 15LD50 为 (3 35± 1 14 )nmol/L。结论　氰戊菊酯干扰卵巢颗粒细胞内钙稳态 ,影响体内激素水平 ,钙信号通路可能为其影响机制之一。     

雌二醇对溴氰菊酯染毒大鼠皮层突触体神经毒性的影响

目的观察雌激素对溴氰菊酯染毒动物皮层突触体膜兴奋性氨基酸递质释放和ATPase活力的影响.方法用高效液相色谱(HPLC)检测不同水平17β-雌二醇(10-5、10-8、10-111mol/L)对2×10-5mol/L溴氰菊酯染毒的去卵巢大鼠皮层突触体氨基酸释放的影响;用化学比色法检测17β-雌二醇(10-5、10-8、10-11mol/L)对2×10-4mol/L溴氰菊酯染毒的去卵巢大鼠皮层突触体Na+-K+ATPase、Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPage活力的影响,并观察雌激素受体拮抗剂Tamoxifen对雌二醇作用的影响.结果2×10-5mol/L氰菊酯处理可增加高钾去极化状态下大鼠皮层突触体天冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)的释放;10-8、10-11mol/L的17β-雌二醇可抑制溴氰菊酯所致高钾去极化状态下突触体Asp和Glu的释放,对Asp释放抑制率为28.42%、24.36%,对Glu释放抑制率为21.52%、14.57%;Tamoxifen对17β-雌二醇的抑制作用未见拮抗.2×10-4mol/L溴氰菊酯可抑制突触体4种ATPage活力;10-5mol/L雌二醇可拮抗溴氰菊酯对4种ATPase活力的抑制;l0-8、10-11mol/L雌二醇可增加Ca2+-ATPase活力;Tamoxifen对雌二醇的拮抗作用仍未见明显影响.结论 17β-雌二醇对溴氰菊酯染毒所致皮层突触体兴奋性氨基酸递质释放增加和ATPase活力抑制有一定的保护作用,该作用可能是雌二醇非基因学机制的表现.     

Serum Calmodulin Activity in Male Lead-exposed Workers

Abstract

Serum calmodulin (CaM) activity was studied in 75 lead exposed and 21 non-exposed male workers. The lead-exposed workers were divided into groups with low blood lead (BPb < 50 μg/dL) and high blood lead (BPb ≥ 50 μg/dL). The concentrations of lead, calcium, magnesium, copper, zinc, and free erythrocytic protoporphyrin (FEP) in blood were determined. Serum samples were heated in a water bath (100° C) for 3 minutes arid centrifuged for 15 minutes at 4° C (18,000 × g). The supernatants obtained were used to measure CaM activity. The results showed that: 1) Average blood lead concentrations in workers with both low and high levels of exposure were significantly higher than those in controls (p < 0.05). 2) Serum CaM activity in the high-exposure group (31.09 ± 7.84 μg/dL) was significantly lower than that in controls (78.11 ± 15.13 μg/dL,p < 0.05). The biological threshold of BPb inhibition of CaM activity was less than 50 μg/dL. 3) Multiple correlation analysis showed a negative dose-response relationship between BPb and CaM activity. The step wise regression procedure indicated that lead had negative, and calcium and magnesium positive, effects on serum CaM activity. The regression equation was Y = 66.1383 – 1.0857 X_l + 2.9676 X₂ + 5.2222 X₃ (Y:CaM; X_l:Pb; X₂: Ca; X₃:Mg). These results of the first such study carried out in male lead-exposed workers suggest that lead can inhibit CaM activity in humans.     

镍致小鼠中枢神经毒性机制的研究

对小鼠脑内微量注射硫酸镍0．2mg／kg,0．4mg／kg,0．8mg／kg一次性染毒,制备脑突触小体。检测脑组织Ca^2 -ATP ase活性、钙调素(CaM)以及丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果显示,硫酸镍明显抑制脑突触小体膜Ca^2 -ATP ase活性,使CaM含量降低;脑组织中MDA含量井高的同时SOD活性受抑制,并引起GSH含量减少。说明硫酸镍可导致钙稳态失衡,同时引起神经细胞脂质过氧化作用增强而致脑损伤。     

锌对红细胞膜ATP酶活性影响的研究

从体内和体外 2方面研究锌对红细胞膜 Na+ ,K+ - ATP酶和 Ca2 + ,Mg2 + - ATP酶活性的影响。健康雄性 Wistar大鼠分别喂饲低锌、常量锌和高锌饲料 (饲料锌含量分别为 2 .2、2 8、12 8mg/kg) ,2 5天后各组随机取 8只动物腹主动脉取血后处死 ,测定血清锌含量和红细胞膜 Na+ ,K+ - ATP酶和 Ca2 + ,Mg2 + - ATP酶活性 ;各组剩余 6只动物改变其锌摄入量后继续喂饲 7天后 ,观察锌对红细胞膜 2种 ATP酶活性影响的敏感性。体外实验用新鲜制备的人红细胞膜 ,在不同浓度锌 (0、5、10、5 0、10 0和 5 0 0 μmol/L)溶液中温浴 ,观察 2种 ATP酶活性的变化趋势。结果表明 ,锌对红细胞膜的 2种 ATP酶活性均有影响 ,锌浓度过低或过高可抑制酶活性。与 Na+ ,K+ - ATP酶相比 ,Ca2 + ,Mg2 + - ATP酶对缺锌更敏感且补锌后不易恢复 ,但其对高锌有较强的耐受性。本次研究结果提示锌对于维持红细胞膜 ATP酶的正常活性有重要意义。     

2～6岁儿童全血微量元素和铅含量调查

目的调查石家庄市2~6岁儿童全血微量元素(Cu、Fe、Ca、Mg、Zn)和铅状况,以便制定合理的膳食结构,纠正儿童不良的饮食习惯和行为,保障儿童的生长、发育。方法采用随机整群抽样的方式从8所幼儿园中抽取儿童1581名,其中男835名;女746名。按年龄分成4组,2岁~组360名;3岁~组408名;4岁~组420名;5岁~组393名。采用原子吸收分光光度仪和阳极溶出电解仪分别对儿童全血微量元素和铅进行测定。利用SPSS11.0统计软件包进行数据处理,对不同年龄、不同性别间进行F、t检验作统计分析。结果以平均值±1倍标准差的形式来表示所有儿童全血微量和铅的测定结果如下(x±s)Fe,(5.14±1.17)μmol/L;Ca,(1.15±0.27)mmol/L;Zn,(107±20.9)μmol/L;Cu,(20.43±7.48)μmol/L;Mg,(1.70±0.45)mmol/L;Pb,0.357±0.13μmol/L。除Mg、Cu缺乏较少外,Ca、Zn、Fe的缺乏和铅中毒都占相当的比例,各元素间除血铅性别间差异有显著性外,其它元素性别、年龄间差别均无显著性。结论石家庄市2~6岁儿童全血Fe、Ca、Zn缺乏和铅中毒有相当高的比率,Mg和Cu缺乏的比率较低。     

Blood lead, calcium, and phosphorus in women with preeclampsia in Edo State, Nigeria

The authors investigated the effect of blood lead (BPb) and its relationship with calcium and phosphorus in the development of preeclampsia in Nigeria. Blood samples were collected from 59 preclamptics, 150 normal pregnant, and 122 nonpregnant women. Blood lead and serum Ca and P were determined. Blood lead was significantly higher (p < .001), whereas serum Ca and P were significantly lower (p < .001) in preclamptics than in normal pregnant women (60.2 ± 12.8 vs 26.3 ± 8.0 μg/dL for Pb, 1.39 ± 0.33 vs 2.03 ± 0.22 mmol/L for Ca, and 0.76 ± 0.10 vs 0.99 ± 0.13 mmol/L for P, respectively). There was significant increase (p < .05) in BPb and decreases (p < .01) in serum Ca and P in pregnant women than in nonpregnant women (35.7 ± 18.0 vs 13.1 ± 6.4 μg/dL for Pb, 1.85 ± 0.33 vs 2.33 ± 0.20 mmol/L for Ca, and 0.93 ± 0.38 vs 1.24 ± 0.26 mmol/L for P). Also, BPb was negatively correlated with serum Ca and, P, and positively correlated with systolic and diastolic blood pressures in pregnancy (r = -.804 for Ca, r = -.728 for P, r = .908 for SBP, and r = .842 for DBP) and preeclampsia (p < .01). It appears that increase in blood lead, which parallels decreases in serum calcium and phosphorus, may be related to the development and progression of preeclampsia in this environment.     

The effects of some divalent metals on cardiac and branchial Ca2+-ATPase in a freshwater fish Saccobranchus fossilis

The heart and gill of a freshwater fish Saccobranchus fossilis have been shown to contain a Ca2+-activated ATPase involved in Ca2+ transport. Enzyme showed optimal activity at 3 mM Ca2+ and 3 mM ATP for gills and at 3 mM Ca2+ and 1 mM ATP for heart. Mg2+ was equally effective in stimulating enzyme activity but was not essential for hydrolysis. Maximum activity was found in heart ventricular muscles as compared to gills. Among all the metals tested Hg2+ was the most toxic (IC50, 0.75 and 0.85 microM for heart and gill, respectively) followed by Pb2+, Mn2+, and Cd2+. The inhibition was concentration dependent and reached almost 100% with each metal at the highest concentration. Stimulation of enzyme activity was observed at lower concentrations of Mn2+ and Cd2+ but not with Pb2+ and Hg2+. Stimulation was more pronounced with Mn2+ than with Cd2+ in both heart and gills. The results indicated that the inhibitory effect of these metals might be through the Ca2+-ATPase which is a manifestation of the calcium pump in various tissues.     

Oxidative Stress Parameters,Induction of Lipid Peroxidation,and ATPase Activity in the Liver and Kidney of <Emphasis Type="Italic">Oreochromis niloticus</Emphasis> Exposed to Lead and Mixtures of Lead and Zinc

The purpose of this investigation was to evaluate the effects of lead (Pb) and lead?+?zinc (Zn) combination on the oxidative stress, total ATPase and Pb accumulation in the tissues of Oreochromis niloticus (Linnaeus, 1758). The fish were exposed to 0.1 mg/L Pb (T1), 1.0 mg/L Pb (T2) and mixtures of 0.1 mg/L Pb and 0.5 mg/L Zn (M1); 1.0 mg/L Pb and 5.0 mg/L Zn (M2) for 7 and 21 days. Pb accumulation, total ATPase activity, several antioxidant enzyme activities such as catalase, glutathione peroxidase (GPX), glutathione S-transferase, glutathione reductase, and thiobarbituric acid reactive substances concentrations were measured in the liver and kidney tissues. Metal accumulation in the tissues was higher in Pb exposure compare with mixtures of Pb and Zn exposures. Beside the inhibition of liver GPX activity, general increases of antioxidant enzyme activities in the tissues were recorded after metal exposures. This investigation emphasizes the oxidative stress in O. niloticus caused by Pb, and adaptation of the organisms to the changes in enzyme activities.