端粒重复序列结合因子1和2及端粒保护蛋白1基因在食管癌中的表达研究

目的检测端粒保护蛋白TRF1、TRF2和POT1基因mRNA在食管癌组织中的表达。方法收集33例明确诊断的食管癌中心组织及其相应癌旁组织,提取总RNA并逆转录成cDNA,采用SBYRGreen适时荧光定量PCR方法检测TRF1、TRF2和POT1基因在食管癌中心组织和癌旁组织mRNA水平的表达。结果 TRF1mRNA在食管癌中心和癌旁表达所得CT值与β-actinmRNA所得CT值之差（即ΔCT值）分别为1.42±2.31和1.02±1.04,差异有统计学意义（P〈0.05,n=33）;POT1在两者中的表达分别为4.72±1.47和3.80±1.06,两者差异有统计学意义（P=0.001,n=33）;TRF2为8.53±2.57和8.38±1.50,两者差异无统计学意义（P〉0.05,n=33）。结论虽然TRF2mRNA在食管癌组织中和肿瘤旁表达没有差异,但TRF1和POT1mRNA在食管癌组织中表达异常降低,提示TRF1和POT1可能与食管癌的发生、发展有密切关系。     

人端粒重复序列结合因子(hTRF1)蛋白质在急性白血病中的表达水平与端粒酶活性关系的研究

为了研究人端粒重复序列结合因子（TRF1）蛋白质在急性白血病（AL）及正常骨髓组织中的表达水平，AL和正常骨髓组织中端粒酶活性及TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系，定量分析了AL患者及正常人骨髓组织中TRF1蛋白质的表达水平，并应用经倍比稀释的TRF1^33-277纯化蛋白质作为定量标准，建立以抗TRF1^33-277单克隆抗体的定量Western blot的方法，而且以该方法检测TRF1蛋白质在组织中的表达水平；另外，应用TRAP-PCR-ELISA法检测AL患者及正常人骨髓组织端粒酶活性，以研究TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系。结果表明：20例AL患者骨髓组织中TRF1表达水平较正常人骨髓组织显著降低，差异具有显著性（P〈0．01）；急性淋巴细胞性白血病患者的TRF1表达水平较急性非淋巴细胞性白血病患者略减低，但差异无统计学意义（P〉0．05）；化疗缓解的患者TRF1表达水平较前增高，但仍低于正常（P〈0．01）；化疗后完全缓解患者的TRF1表达水平较未缓解的患者显著增高，差异具有显著性（P〈0．01）；AL患者初发未治时骨髓细胞端粒酶的活性明显高于正常人（P〈0．05）和首次缓解者（P〈0．01）；初发未治时，ALL患者骨髓细胞端粒酶活性略高于ANLL患者，但差异无统计学意义（P〉0．05）。TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性呈明显负相关（P〈0．001）。结论：TRF1蛋白质在AL患者骨髓细胞中的表达明显减低．且与疗效及端粒酶活性相关。     

COX-2和Survivin蛋白在食管鳞癌中的表达和临床意义

目的探讨COX-2和Survivin蛋白在食管鳞癌恶变过程中表达的意义。方法采用免疫组织化学方法检测57例食管鳞癌组织和其癌旁正常食管黏膜的COX-2和Survivin蛋白的表达,探讨其与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。结果COX-2和Survivin蛋白阳性表达主要定位于肿瘤细胞胞质内。COX-2和Survivin在57例食管鳞癌组织中呈明显高表达,在正常食管黏膜呈低表达,差异有统计学意义（P〈0.05）;COX-2和Survivin表达与食管鳞癌的分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有明显相关性（均P〈0.05）;食管鳞癌癌组织中COX-2和Survivin蛋白的表达呈正相关（r=0.387,P〈0.05）。结论COX-2和Survivin的高表达可能共同参与食管鳞癌的发生、发展,对判断食管鳞癌预后可能具有重要价值。     

Smad4基因mRNA的表达与食管鳞癌临床病理以及预后的关系探讨

目的采用实时定量PCR方法检测食管癌样本中Smad4基因mRNA的表达量,分析其与临床资料之间的关系。方法设计Smad4基因特异性探针和引物,建立Smad4基因实时定量检测方法;检测40例食管癌患者(男28例,女12例,38~82岁,中位年龄60岁)肿瘤切除石蜡标本中Smad4基因mRNA的模板拷贝数,以beta-actin为内参得出校正过的基因表达相对值。统计学分析这些值与临床病理及预后的关系。结果 Smad4的mRNA表达水平与性别、年龄、淋巴结转移、病理亚型无关(P>0.05);与细胞分化和病理分期有关(P<0.05)。Smad4低表达的患者预后较高表达者差(P=0.009)。结论食管癌中Smad4mRNA表达的可作为预测淋巴结转移、评价预后的一个重要指标。Smad4可能是食管癌变过程中的重要分子。     

端粒重复序列结合蛋白质1与2在原发性干燥综合征患者外周血单个核细胞中的表达及其临床意义

目的：端粒重复序列结合蛋白质1（telomeric-repeat binding factor-1,TRF1）和端粒重复序列结合蛋白质2（telomeric-repeat binding factor-2,TRF2）基因表达异常在原发性干燥综合征（primary Sjogren＇s,pSS）发病中可能的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测55例pSS患者和41例健康对照者（healthy control,HC）外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）中TRF1和TRF2转录水平,并与临床指标进行相关性分析。结果（1）PBMCs TRF2转录水平在SS组显著高于HC组（0.0047±0.0107vs.0.0026±0.0049,P＝0.001）,而TRF1转录水平在两组表达差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）Spearman相关性分析发现在SS组中TRF2与白细胞计数（WBC）（r＝0.309,P＜0.05）、中性粒细胞计数（GR）（r＝0.312,P＜0.05）、补体3（C3）（r＝0.470,P＜0.05）、抗核抗体（ANA）（r＝0.339,P＜0.05）呈显著正相关,TRF1转录水平与TRF2（r＝1,P＜0.01）、WBC（r＝0.316,P＜0.05）、GR（r＝0.313,P＜0.05）、ANA（r＝0.421, P＜0.05）呈显著正相关。结论 TRF2转录水平在SS患者的增高提示其可能参与了SS患者端粒酶激活和端粒缩短的调节;TRF2、TRF1表达水平与 WBC、GR、C3、ANA 呈显著正相关,提示 TRF2、TRF1可能参与了SS炎症免疫调节,且与SS的发病机制有关。加强端粒保护蛋白在SS等自身免疫性疾病的研究有利于进一步阐明这类疾病的发病机制。     

端粒结合蛋白TRF1和TANK1在急性白血病细胞中的表达及与端粒酶活性关系的研究

多种研究显示，白血病与端粒酶活性密切相关。在白血病细胞中发现有端粒长度不同程度的缩短伴有端粒酶活性增高。但是端粒酶活性增高的机制尚不清楚。已知端粒酶活性受多种途径调控，其中端粒结合蛋白是近年来发现的一个新的调控途径。TRF1（Telomere repeat binding factor 1）和TANK1（TRF1 interacting ankyrin-related ADP—ribose polymerase 1）是两个重要的端粒结合蛋白，它们是一对正向和负向的端粒酶活性调控因子。TRF1通过负反馈调控端粒酶活性而保持端粒长度。TANK1通过其多ADP核糖聚合酶（PARP）活性使TRF1聚ADP核糖化，减弱TRF1与端粒的结合，从而发挥正向调控作用。     

食管鳞癌神经浸润的临床病理学意义及其与COX-2蛋白关系

目的研究食管鳞状细胞癌发生神经组织浸润的临床病理意义及其与环氧合酶-2（COX-2）蛋白表达的关系。方法复习91例食管鳞状细胞癌的组织常规切片,并通过免疫组织化学染色检测肿瘤组织中COX-2蛋白的表达,研究食管鳞状细胞癌的神经组织浸润与性别、组织学分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和临床分期等生物学行为以及COX-2蛋白表达的关系。结果食管鳞状细胞癌神经组织浸润的发生率为45%。神经组织的浸润与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和临床分期均呈正相关（P分别为0.013、0.000和0.004,r分别为0.29、0.41和0.30）,与性别、组织学分化程度和COX-2蛋白的表达均无关（P分别为0.119、0.097和0.861）。结论食管鳞状细胞癌的神经组织浸润与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和临床分期等生物学行为密切关系,可能与COX-2蛋白的表达无关。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓中端粒保护蛋白TIN2和POT1的mRNA表达

本研究旨在探讨端粒保护蛋白TIN2、POT1的mRNA表达与骨髓增生异常综合征（MDS）发病的关系。采用实时荧光定量PCR方法检测51例初发MDS患者和10例正常人端粒保护蛋白TIN2和POT1的mRNA表达情况。结果表明,WHO分组中RA／RARs／RCMD／MDS-U、RAEB-1及RAEB-2组TIN2mRNA的表达量均高于正常对照组,差异有显著性（P〈0．05）;RA／RARS／RCMD／MDS-U、RAEB-1及RAEB-2组POT1mRNA的表达量均低于正常对照组,差异有显著性（P〈0．05）。IPSS分组中,TIN2mRNA的表达量在高危组、中危-2及中危-1均高于对照组,差异有显著性（P〈0．05）,低危组与对照组间差异没有显著性;POT1mRNA的表达量在高危组、中危-2及中危-1均低于对照组,差异有显著性（P〈0．05）,低危组与对照组间差异没有显著性。MDS中正常染色体核型患者TIN2mRAN的表达量低于异常染色体核型的患者,与对照组相比差异没有显著性;MDS中正常染色体核型患者POT1mRAN的表达量高于异常染色体核型的患者,与对照组相比差异没有显著性。结论：TIN2、POTI mRNA的表达异常可能参与MDS患者端粒动力学的调节,引起MDS患者端粒长度的改变,进而导致疾病的发生。     

食管鳞癌组织中talin mRNA的表达及其与浸润转移的关系

目的:检测食管鳞癌组织中talin mRNA的表达,并探讨其与食管鳞癌发生及浸润转移的关系.方法:应用原位杂交方法检测60例食管鳞癌组织及其相应的30例癌旁不典型增生组织和20例正常食管黏膜组织中talin mRNA的表达.结果:食管鳞癌组织中talin mRNA阳性表达率低于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织(P<0.05).食管鳞癌组织中talin mRNA 阳性表达与临床分期、浸润深度及淋巴结转移有关(均P<0.05).而与患者年龄、性别及分化程度无关(均P>0.05).结论:人食管癌组织中talin mRNA表达明显降低,talin的低表达有望成为食管癌恶性转化及与其浸润转移有关的一种新的标志物.     

食管癌中C-erbB-2,bc1-2,mdr-1的表达与同步放化疗疗效及预后关系的研究

目的：研究食管癌中C-erbB-2，be1-2，mdr-1表达与其同步放化疗疗效及预后的相关性。方法：应用免疫组化技术（S-P法）对187例食管鳞癌进行初治前、治疗后复发或转移不同阶段胃镜活检标本中C-erbB-2，be1-2，mdr-1三种基因蛋白表达的检测。初治均按拟定的统一放化疗方案进行：DF方案化疗同步超分割放疗。结果：187例食管鳞癌细胞中，C-erbB-2，be1-2，mdr-1阳性表达分别为48．7％，55．1％和42．2％，治疗后完全缓解68例（36．4％），部分缓解81例（43、3％），稳定31例（16．6％），进展7例（3、7％）。C-erbB-2阴性者疾病进展时间在24～36个月者38例（39．6％），〈12个月者占19、7％；C-erbB-2阳性者，疾病进展时间〈12个月者比例较高；强阳性者所占比例最高达18／42（42．9％）。C-erbB-2与mdr-1同时阳性表达疾病进展时间〈12个月者比例较高（45．7％）；二者均阴性疾病进展时间在24～36个月所占比例较高（46．2％）。bcl-2强阳性完全缓解占21、3％，阴性完全缓解达50．0％。结论：本实验有希望为食管癌不同阶段制定个体化治疗方案，为观察疗效和预后提供更科学合理的依据。     

选择性环氧合酶2抑制剂对食管不典型增生的干预治疗研究

目的探讨选择性环氧合酶2（COX-2）抑制剂塞来昔布（celecoxib）预防食管上皮不典型增生的有效性，并探索其可能机制。方法将54例食管上皮轻、中、重度不典型增生患者随机分为塞来昔布组（28例）及安慰剂组（26例）。12个月后再行胃镜及病理复查。终点指标定义为食管上皮不典型增生的组织学分级有严重程度的改变，记录其逆转、稳定、进展变化，比较其疗效。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血管内皮生长因子（VEGF）含量，并进行组间及治疗前后比较。结果塞来昔布组不典型增生的好转率为46．4％，和对照组23．1％相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。治疗组中VEGF表达显著降低，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。在缓解临床症状方面，塞来昔布治疗组的症状与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论塞来昔布可消除临床症状并可降低VEGF表达，使食管上皮不典型增生比例降低，可能降低食管癌发病的危险，尚需进一步扩大样本量的研究。     

Expression of the eukaryotic translation initiation factor 4E (eIF4E) and 4E-BP1 in esophageal cancer

OBJECTIVES: The eukaryotic initiation factor 4E (eIF4E) has been shown to play a key role in cell growth, and several studies have documented an increased expression of eIF4E in a number of solid tumors, including breast, bladder, cervical and head and neck cancers. The aim of this study was to determine the level of expression of eIF4E and eIF4E-binding protein 1 (4E-BP1) in esophageal cancer. DESIGN AND METHODS: Tumor and normal adjacent tissue samples (as controls) were obtained from 99 patients with esophageal cancer. eIF4E and 4E-BP1 levels were determined by using Western blot analysis. eIF4E was purified by affinity chromatography using m(7)GTP-sepharose, and the levels of 4E-BP1 bound to eIF4E were determined. RESULTS:: In cancerous esophageal tissues, eIF4E level was elevated by a mean of 12.59 +/- 1.66-fold, and 4E-BP1 was elevated by a mean of 15.76 +/- 2.45-fold when compared to normal adjacent tissues. Both eIF4E and 4E-BP1 expressions were higher in cancerous compared to noncancerous esophageal tissues. CONCLUSIONS: A higher expression of eIF4E was correlated with advanced stages. The inverse relationship found between the increases in 4E-BP1 levels observed in esophagus tumors and lymph node involvement would support the hypothesis that the overexpression of eIF4E can be involved in tumorigenesis and a possible role of 4E-BP1 as a prognostic factor in esophageal cancer.     

食管癌患者多个染色体区域的杂合性缺失及其临床意义

目的 选择食管癌中遍布10个染色体区域的17个微卫星位标,进行食管癌手术切除标本的微卫星杂合缺失(LOH)分析,并探讨这些位点的LOH与患者临床病理参数之间的关系.方法 68份食管癌患者手术切除的鳞癌组织标本中,高分化鳞癌20份,中分化鳞癌30份,低分化鳞癌18份.采用PCR荧光测序法和凝胶电泳分别检测68例患者的鳞癌组织及匹配的外周血样本中17个微卫星位点的杂合性缺失状况;并比较分析LOH与肿瘤临床病理参数之间的关系.结果 68份标本中检出位点D8S261 LOH频率最低(33.3%),检出位点D9S125 LOH频率最高(85.2%),其中,12个位标LOH频率高于50.0%,3个(D3S1597、D3S1285、D9S125)高于75.0%;分化程度不一的肿瘤标本在位点D9S111与D13S153处的LOH频率差异有统计学意义(χ2=15.5、10.8,P均<0.05),位点D9S111处高分化的12份标本中发生缺失2份,中分化20份标本中发生缺失14份,低分化16份标本中发生缺失14份,位点D13S153处8份高分化标本中2份发生缺失,中分化的28份标本中12份发生缺失,低分化的12份标本中11份发生缺失;发生淋巴结转移的肿瘤标本与未转移标本在位点D8S261处的LOH频率差异有统计学意义(χ2=6.4,P<0.05),位点D8S261处发生转移的14份标本中1份出现缺失,未转移的22份标本中12份出现缺失.结论 食管鳞癌中存在广泛、高频的LOH,位于高频缺失位点附近的基因可能参与了食管癌的发生发展;位点D9S111和D13S153处的缺失与食管癌的病理分级有显著的相关性,分化越差的标本在2位点处缺失频率倾向越高;位点D8S261处的缺失与食管癌淋巴结转移呈反向相关,在该处发生缺失的标本淋巴结转移的可能性往往较低.     

TERT及TIN2在获得性再生障碍性贫血患者中的表达及其与发病相关性研究

目的:检测获得性再生障碍性贫血(acquired aplastic anemia,AAA)患者外周血单个核细胞的端粒酶逆转录酶TERT和端粒保护蛋白TIN2基因表达水平,探讨它们与AAA发病的关系。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测40例AAA中非重型再生障碍性贫血(NSAA)患者33例,重型再生障碍性贫血(SAA)患者7例和20例正常对照者外周血单个核细胞中TERT、TIN2 mRNA表达情况,并与外周血细胞分类之间进行了相关性比较。结果:AAA患者TERT、TIN2 mRNA表达水平均较正常对照组明显降低(P0.05);SAA患者TERT、TIN2mRNA表达水平较正常对照组明显降低(P0.01);SAA患者TERT、TIN2 mRNA表达水平较NSAA明显降低(P0.05);NSAA患者TIN2 mRNA表达水平较正常对照组明显降低(P0.01);NSAA患者TERT mRNA表达水平和正常对照组比较没有显著性差异(P=0.082)。TERT mRNA表达水平与红细胞(RBC)(r=0.437,P=0.029)及血红蛋白(Hb)(r=0.522,P=0.007)有显著相关性;TIN2 mRNA表达水平与淋巴细胞百分比(lymphocyte%)(r=-0.404,P=0.045)有显著相关性。结论:端粒酶逆转录酶TERT mRNA表达水平与RBC、Hb水平有关;端粒保护蛋白TIN2 mRNA表达水平与淋巴细胞比例有关。     

老年人食管癌和肺癌术前术后免疫状态的检测

目的了解老年肿瘤患者术前、术后体液免疫和细胞免疫功能状态。方法对26例食管癌和肺癌患者采集术前1天术后第1天、第8天外周血标本,测定体液免疫和细胞免疫功能状态。结果患者外周血体液免疫指标值术前、术后与正常值比较无明显变化,而外周血细胞免疫CD3+、CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+值术后明显回升,CD3+、CD8+明显下降,与术前比较均有显著意义(P<0.05)。结论老年肿瘤患者手术前后体液免疫无明显变化,手术后细胞免疫明显恢复。手术切除恶性肿瘤对患者细胞免疫恢复起积极作用。