家猪慢性冬眠心肌中C-Jun N末端蛋白激酶1/2蛋白的表达及意义

背景急性心肌缺血时c-Jun N末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal protein kinase,JNK)被激活,并使得缺血损伤加重.慢性冬眠心肌组织中JNK的亚型--JNK1/2是否被激活及其在慢性冬眠心肌发生发展机制中的作用又是什么呢?目的明确慢性冬眠心肌组织中JNK1/2的蛋白表达及其磷酸化(p-JNK1/2)的变化.设计随机对照的实验研究.单位徐州医学院附属医院心血管病研究所.材料和方法在徐州医学院附属医院导管室进行动物模型的制备、在徐州医学院生化教研室测定JNK1/2的蛋白表达及其磷酸化(p-JNK1/2)的变化.将14只小型中国家猪随机分为实验组(n=8)与对照组(n=6).实验组以右冠状动脉为靶血管,经右股动脉送入自制的缩窄器,制备成慢性冬眠心肌及心肌梗死的模型.获取对照组心肌组织、实验组中的正常心肌组织及慢性冬眠心肌组织的样本进行光镜、电镜检查并采用免疫印迹(Western blotting)分析3组心肌组织的JNK1/2的蛋白表达及其磷酸化的变化.主要观察指标慢性冬眠心肌组织中JNK1/2是否被活化.结果实验组慢性冬眠心肌组织p-JNK1/2比实验组正常心肌组织、对照组心肌组织高.对照组、实验组正常心肌组织、实验组慢性冬眠心肌组织p-JNK1/2的免疫活性分别为1,1.42±0.52,2.6±0.59.结论慢性冬眠心肌组织中JNK1/2被激活,并参与了慢性冬眠心肌的发生和发展.     

Toll样受体4在免疫相关细胞中的作用

Toll样受体(TLRs)是参与固有免疫的重要蛋白分子,也是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。TLR4是TLRs家族的重要成员之一。TLR4通过调控中性粒细胞和单核巨噬细胞的活化,可促进细胞因子的释放,启动固有免疫应答。同时TLR4能促进树突状细胞的成熟,激活初始T细胞,启动适应性免疫应答。在T细胞和B细胞的适应性免疫应答中,TLR4可促进细胞分泌细胞因子,介导全身炎症反应,并调控记忆性细胞的生成。本文就TLR4在中性粒细胞、树突状细胞、单核巨噬细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞中的作用进行综述。     

HOE642对缺血/再灌注心肌的保护作用

目前认为,尽早恢复急性缺血心肌的血供,可以减轻心肌损害、改善预后,但心肌缺血后再灌注可导致心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)。大量研究表明:心肌缺血/再灌注时,细胞膜的Na /H 交换系统(NHE)被激活是导致MIRI的主要机制之一。HOE6 4 2 (Cariporide)是高效、特异性的NHE1抑制剂,能抑制NHE1的激活,对缺血/再灌注心肌具有保护作用。1　心肌缺血及再灌注时NHE1激活并损伤心肌的机制至今发现,NHE有6种亚型(NHE1～NHE6) ,存在于哺乳动物心肌细胞的主要是NHE1,细胞内pH在生理范围时,NHE1处于失活状态。当心肌缺血及再灌注时,细胞内H…     

Toll-Like Receptor Expression in the Peripheral Nerve

Toll样受体(TLRs)是由进化上相对保守的蛋白家族构成的一组识别受体,是固有免疫系统的第一道防线。受到微生物配体刺激后,TLRs通过激活各种信号通路引发机体一系列防御反应。TLRs还能被内源性危险信号激活,因此推断神经退行性变也可能通过TLRs激活免疫反应。近来研究发现中枢神经系统表达各种类型的TLRs,但周围神经系统中TLRs的表达形式尚无定论。本研究结果显示,施万细胞上表达大量TLRs,主要为TLR3和TLR4。感觉神经元和运动神经元上几乎没有TLRs表达。对NF-κB信号通路的检测显示,施万细胞上所有的TLRs都是有功能的,可被细菌脂蛋白(TLR1/TLR2配体)激活,产生强烈反应。静息状态下,坐骨神经上TLRs的表达形式与施万细胞相似,主要为TLR3、TLR4和TLR7,可能在免疫监督中扮演重要角色。通过显微外科方式对坐骨神经造成急性神经退行性变后,诱导TLR1大量表达,其它TLRs的表达水平无变化。综上所述,本研究结果显示,施万细胞可能在周围神经中扮演类似中枢神经系统小胶质细胞的角色。急性神经退行性变诱导TLR表达变化,说明在分布于周围神经的TLRs在静息状态和激活状态下具有不同功能。     

Toll样受体与疾病

天然免疫反应是机体抵御外界微生物感染的第一道防线。固有免疫系统通过模式识别受体(PRRs)识别病原微生物的病原相关分子模式(PAMPs)。PAMPs在结构上相对保守,主要存在于微生物。Toll样受体家族是最重要的PRRs,通过识别相应的PAMPs介导天然免疫反应,同时通过DCs启动适应性免疫应答。另外,TLRs能够识别某些内源性的TLR配体,这些配体称之为损伤相关分子模式(DAMPs)。研究发现TLRs在抗感染、变态反应、自身免疫性疾病、肿瘤等疾病的发生发展过程中起着重要的作用。在深入研究Toll样受体及其信号通路的基础上,以其作为药物干预靶点,对治疗相关感染性疾病、自身免疫性疾病、变态反应性疾病等具有重要的科学意义和应用价值。     

家猪慢性冬眠心肌中C-Jun N末端蛋白激酶1／2蛋白的表达及意义

背景：急性心肌缺血时c-Jun N末端蛋白激酶(c-Jun N—terminal protem kinase，JNK)被激活，并使得缺血损伤加重。慢性冬眠心肌组织中JNK的亚型——JNK1／2是否被激活及其在慢性冬眠心肌发生发展机制中的作用又是什么呢?目的：明确慢性冬眠心肌组织中JNK1／2的蛋白表达及其磷酸化(p-JNK1／2)的变化。设计：随机对照的实验研究。单位：徐州医学院附属医院心血管病研究所。材料和方法：在徐州医学院附属医院导管室进行动物模型的制备、在徐州医学院生化教研室测定JNK1／2的蛋白表达及其磷酸化(p—JNK1／2)的变化。将14只小型中国家猪随机分为实验组(n=8)与对照组(n=6)。实验组以右冠状动脉为靶血管，经右股动脉送入自制的缩窄器，制备成慢性冬眠心肌及心肌梗死的模型。获取对照组心肌组织、实验组中的正常心肌组织及慢性冬眠心肌组织的样本进行光镜、电镜检查并采用免疫印迹(Western blotting)分析3组心肌组织的JNK1／2的蛋白表达及其磷酸化的变化。主要观察指标：慢性冬眠心肌组织中JNK1／2是否被活化。结果：实验组慢性冬眠心肌组织p-JNK1／2比实验组正常心肌组织、对照组心肌组织高。对照组、实验组正常心肌组织、实验组慢性冬眠心肌组织p—JNK1／2的免疫活性分别为1，1．42&;#177;0．52，2．6&;#177;0．59。结论：慢性冬眠心肌组织中JNK1／2被激活，并参与了慢性冬眠心肌的发生和发展。     

HIF-1α通过TLR4/NF-κB信号通路对 心肌缺血-再灌注大鼠心肌损伤的保护机制分析

目的分析缺氧诱导因子1α(HIF-1α)通过TLR4/NF-κB信号通路保护心肌缺血-再灌注(MIRI)大鼠心肌损伤的作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、MIRI组和HIF-MIRI组各10只,HIF-MIRI组于造模前24 h腹腔注射二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG,20μg/g),MIRI组和HIF-MIRI组大鼠采用手术结扎法制备MIRI模型,对照组只打开心包,不结扎。造模成功后,HE染色检测各组大鼠心肌组织损伤;试剂盒检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平; ELISA法测定心肌组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β和IL-6水平;实时荧光定量(RT)-PCR测定HIF-1αmRNA的表达; Western Blot检测HIF-1α、Toll-样受体4(TLR4)、核转录因子(NF-κB)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的表达。结果与对照组相比,MIRI组和HIF-MIRI组大鼠血清CK-MB和LDH、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P 0. 01),心肌组织HIF-1αmRNA的表达显著上调(P 0. 01),HIF-1α、TLR4、NF-κB和Caspase-3蛋白的表达显著上调(P 0. 01);与MIRI组相比,HIF-MIRI组大鼠血清CK-MB和LDH水平、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6显著下降(P 0. 01),心肌组织HIF-1αmRNA和蛋白的表达显著上调(P 0. 01),TLR4、NF-κB和Caspase-3蛋白的表达显著下调(P 0. 01),HE染色显示心肌组织的病理变化明显减轻。结论 HIF-1α可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路抑制炎症因子的释放,降低机体炎症因子水平,改善MIRI心肌损伤。     

过敏性哮喘中的树突状细胞和TOLL样受体信号转导

TLRs是哺乳动物中最具特点的能传递信号的模式识别受体（PRRs），能识别病原相关分子模式（PAMPs）。TLRs是一个序列高度保守而古老的天然免疫受体家族，广泛存在于植物、昆虫、哺乳动物和人类，它不仅依赖胚系基因编码的保守序列识别病原微生物和激活天然免疫，而且调节获得性免疫和诱导免疫耐受，与哮喘密切相关。过敏性哮喘是一种多基因参与的具有遗传易感性的慢性气道炎症性疾病，树突状细胞（DC）在这一过程中发挥着关键作用，它成为PAMPs的优先目标。衔接在DC上的TLRs导致T细胞应答的极化，TLR2和TLR4分别使辅助性T细胞1（Th1）和辅助性T细胞2（Th2）发生应答。     

TLRs及其传导通路在慢性鼻窦炎鼻息肉组织中的表达及意义

目的观察和评价分析Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR 4)蛋白在慢性鼻窦炎鼻息肉黏膜组织中的表达,并探讨其在鼻窦炎鼻息肉发病机制中的作用。方法采用免疫组织化学技术检测60例鼻窦炎鼻息肉黏膜组织中TLR2和TLR4蛋白的表达和分布,同期选取20例正常筛窦黏膜组织进行对照。按照临床分型分期标准将其分组,比较各组间TLR2和TLR4表达程度的差异。结果(1)TLR2、TLR4主要表达在鼻腔黏膜上皮细胞、固有层炎性细胞及黏膜下层腺体的胞浆和胞膜上。(2)慢性鼻窦炎鼻息肉各型各期均较对照组高;并且随着分型的升高,TLR2、TLR4的表达量也随之增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 TLR2和TLR4在鼻窦炎鼻息肉中的表达可能与鼻窦炎鼻息肉的发病机制存在着一定的相互关联,Toll样受体(TLRs)在该机制中可能扮演重要角色。     

Toll样受体4信号传导途径与肝脏疾病

Toll样受体(Toll like receptor,TLR)是天然免疫系统中识别病原微生物的主要受体,属模式识别受体家族,最早在果蝇体内发现[1]。1997年,Medzhitov等[2]发现在哺乳动物体内存在与果蝇Toll受体结构同源的受体蛋白即TLR。现已发现在人类共有10种TLR,其中Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)是最早发现的哺乳动物TLR蛋白,在人体的先天性免疫和适应性免疫中发挥着重要的作用。     

NOD1,NOD2和NLRP3炎症小体与牙髓炎

模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)识别病原相关分子模式(pathogen associated molecule patterns,PAMP)激活固有免疫系统,是抵抗病原微生物入侵的第一道防线。核苷酸结合寡聚化结构域蛋白(nucleotide-binding oligomerization domains,NODs)和NOD样受体蛋白3(NOD like protein 3,NLRP3)属胞质内PRR s家族。NOD1和NOD2激活NF-κB,MAPK,JNK,p38和ERK信号通路,促进TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8和IL-12等多种炎性因子的转录表达。NLRP3炎症小体激活caspase-1,并促进IL-18和IL-1β表达。牙髓位于低顺应性根管系统中,牙髓环境环境与机体其他组织不同。目前的研究表明NOD1,NOD2和NLRP3炎症小体与牙髓固有免疫及牙髓炎的发生、发展有关。     

Toll样受体对调节性T细胞的调节作用

调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）是对免疫应答具有负性调节功能的一类T细胞,在机体自身免疫、移植器官排斥反应、宿主抵御感染以及癌症的发生发展过程中发挥重要作用。调节Treg的免疫抑制作用对于机体产生适度的免疫应答具有重要意义,也是近年来研究热点。 Toll 样受体（ Toll-like receptor , TLR）能够识别病原体的特定结构,介导宿主对入侵病原体产生固有免疫应答并激发适应性免疫应答。最新研究表明, TLR能够通过直接和间接的方式调节Treg抑制免疫应答的功能。本文主要介绍近年来TLR对Treg调节作用的研究进展。     

Toll样受体4在具核梭杆菌相关结直肠癌中作用的研究进展

Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)4是TLR家族成员之一,在结直肠癌中明显高表达。TLR4已被证实是多种细菌脂多糖的配体,识别脂多糖后激活下游靶分子,介导多种信号转导通路,在结直肠癌的生长、侵袭、转移及免疫逃逸过程中发挥重要作用。目前,病原微生物感染相关结直肠癌的发生、发展机制成为研究的热点。具核梭杆菌是一种革兰阴性厌氧菌,与结直肠癌的发生、发展关系密切。本文就TLR4在具核梭杆菌相关结直肠癌中作用的研究进展作一综述。     

高迁移率蛋白B1介导Toll样受体信号通路的研究进展

高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)是核内一类非组蛋白DNA结合蛋白,属于损伤相关分子模式(damage-associated molecular patterns,DAMPs),参与DNA复制、重组、修复和基因转录调控等。HMGB1能通过Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)等激活固有免疫以及诱导T细胞分化成熟启动适应性免疫应答,与多种自身免疫性疾病、炎症性疾病和肿瘤等关系密切。目前关于HMGB1介导TLR信号通路在某些疾病中的作用的研究较多,HMGB1介导Toll样受体信号通路参与多种病理过程具有广阔的临床前景。     

环氧化酶-2抑制剂及阿司匹林对急性缺血心肌细胞凋亡的影响

目的：观察选择性环氧化酶-2抑制剂罗非昔布及环氧化酶非特异性抑制剂阿司匹林对心肌急性缺血兔血浆内血栓素B2/6-酮-前列腺素F1.比值与心肌细胞凋亡率的影响.方法：[1]实验于2001-08/2002-05在解放军总医院急诊科完成.选用雄性成年清洁级新西兰兔28只.随机分为4组：正常对照组、心肌缺血对照组、心肌缺血＋罗非昔布组、心肌缺血＋阿司匹林组,每组各7只.[2]正常对照组未造成心肌缺血模型,其余3组均造成心肌缺血模型.心肌缺血＋罗非昔布组和心肌缺血＋阿司匹林组于心肌缺血模型制作前7 d开始灌胃罗非昔布1 mg/（kg&;#183;d）、阿司匹林5 mg/（kg&;#183;d）,共干预7 d;正常对照组和心肌缺血对照组每日给予等量生理盐水灌胃,干预7 d.[3]于兔冠状动脉左前降支第一穿支与第二穿支之间7-0号丝线缝扎前降支动脉造成急性心肌缺血模型.左前降支结扎6 h后,留取心肌缺血区与正常心室标本.[4]心肌环氧化酶-2表达检测采用免疫组织化学法;心肌细胞凋亡阳性率检测采用原位末端标记法检测;血浆6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2水平检测采用放射免疫法检测.[5]计量资料差异性比较采用t检验.结果：兔28只均进入结果分析.[1]血浆血栓素B2水平：各心肌缺血组明显高于正常对照组（t=2.69～11.42,P＜0.05）;心肌缺血＋罗非昔布组明显低于心肌缺血对照组（t=7.74,P＜0.05）,明显高于心肌缺血＋阿司匹林组（t=9.45,P＜0.05）.[2]血浆6-酮-前列腺素F1α水平：各心肌缺血组明显高于正常对照组（t=5.69～12.46,P＜0.05）;心肌缺血＋罗非昔布组明显低于心肌缺血对照组和心肌缺血＋阿司匹林组（t=10.39,4.24,P＜0.05）.[3]血栓素B2/6-酮-前列腺素F 1α：心肌缺血对照组、心肌缺血＋罗非昔布组明显高于正常对照组（t=3.54,7.07,P＜0.05）,心肌缺血＋阿司匹林组明显低于正常对照组（t=7.25,P＜0.05）;心肌缺血＋罗非昔布组明显高于心肌缺血对照组和心肌缺血＋阿司匹林组（t=3.56,14.85,P＜0.05）.[4]心肌环氧化酶-2蛋白表达阳性率：缺血区明显高于非缺血区（t=7.93～8.85,P＜0.05）.[5]心肌细胞凋亡阳性率：各缺血组均明显高于正常对照组（t=7.84～10.58,P＜0.05）,心肌缺血＋罗非昔布组明显高于心肌缺血对照组和心肌缺血＋阿司匹林组（t=2.67,2.02,P＜0.05）.结论：[1]环氧化酶-2抑制剂罗非昔布可明显提高血浆内血栓素B2/6-酮-前列腺素F1α比值,该比值失调是对于血小板、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的功能有着重要影响,该值升高可以使冠状动脉痉挛和血小板激活,血栓形成,加重缺血心肌损伤.而阿司匹林降低急性心肌缺血后血浆血栓素B2/6-酮-前列腺素F1α,对缺血心肌有保护作用.[2]环氧化酶-2抑制剂罗非昔布可以增加心肌细胞凋亡率,加重缺氧损伤.而阿司匹林无此心肌损伤作用.     

髓系细胞触发受体-1在脓毒症心肌功能障碍中作用的研究进展

髓系细胞触发受体-1(triggering receptor expressed on myeloid cell-1, TREM-1)在实质细胞表达较少,主要表达于大多数天然免疫细胞,其激活后可通过Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)通路直接或间接放大炎性反应,参与多种急、慢性炎症疾病的病理过程。TLR4通路在脓毒症心肌功能障碍发病中发挥重要作用。TREM-1可加重脓毒症模型动物心功能障碍,可溶性TREM-1水平与脓毒症心肌功能障碍密切相关。本文就TREM-1的表达形式、可能配体及在脓毒症、脓毒症心肌功能障碍中作用的研究进展作一综述。     

n-3多不饱和脂肪酸对慢性心力衰竭大鼠心肌组织TLR2／4表达的影响及机制初探

目的 观察n-3多不饱和脂肪酸（n-3 PUFA）对心力衰竭大鼠心肌组织中Toll样受体2/4（TLR2/4）表达的影响,并初步探讨作用机制.方法 采用腹主动脉缩窄法复制慢性心力衰竭大鼠模型,分为正常对照组10只、假手术组10只、心力衰竭组10只和n-3 PUFA组10只.进行超声心动图心功能检测和心肌病理组织学检查;ELISA法检测各组大鼠血清中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的表达,real-time PCR法检测假手术组、心力衰竭组及n-3 PUFA治疗组心肌组织TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β、TNF-α mRNA 表达;Western blot检测心肌组织TLR2、TLR4蛋白表达.结果 n-3 PUFA组大鼠与心力衰竭模型组相比各项心功能指标均明显改善,左心室舒张末期内径（LVEDD）和左心室收缩末期内径（LVESD）明显降低,左心室射血分数（LVEF）及左心室短轴缩短率（LVFS）明显升高（P均〈0.05）;而且心肌损害明显减轻.心力衰竭组与假手术组相比,血清炎性细胞因子水平均明显升高（P均〈0.01）;经过n-3 PUFA喂养后的心力衰竭大鼠血清IL-1β、TNF-α与心力衰竭组相比明显降低（P均〈0.05）,但仍高于假手术组（P均〈0.05）.n-3 PUFA治疗组与心力衰竭组相比,心肌组织中TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β、TNF-α mRNA 的表达水平明显下降（P均〈0.05）;心力衰竭组心肌组织TLR2/4蛋白表达均高于假手术组（P均〈0.05）,而n-3 PUFA治疗组与心力衰竭模型组相比,TLR2、TLR4表达则是下调的（P均〈0.05）.结论 n-3 PUFA可能通过下调心力衰竭模型心肌组织中TLR2/4表达,抑制NF-κB激活和前炎性细胞因子如IL-1β、TNF-α的表达来减轻心力衰竭大鼠的症状.     

抑制COX-2表达对心肌缺血再灌注损伤过程中心肌细胞保护作用的研究

目的研究心肌缺血再灌注损伤过程中,环氧化酶-2(COX-2)表达水平与心肌细胞损伤之间的分子机制。方法通过缺氧/复氧(H/R)实验,模拟心肌缺血再灌注过程,在H9C2心肌细胞系中检测COX-2及其相关蛋白的表达水平,并通过COX-2特异性抑制剂NS398抑制其活性,观察细胞变化情况,并研究其作用机制。结果NFκB的激活诱导COX-2表达上调,COX-2促进H/R介导的促炎症因子转录,以及ROS活性增强。结论心肌细胞受到H/R刺激时,NFκB的激活诱导COX-2表达上调,抑制COX-2活性能够降低H/R诱导的促炎症因子转录以及ROS活性增强,从而发挥对心肌细胞的保护作用。