一种可能替代超排的牛胚生产新方法

虽然多年来都是利用非手术方法从超排供体牛回收胚胎,但是,这些方法费用高,并且不能总是生产出满意数量的可移植胚胎。 未成熟的牛卵母细胞可以在体外成熟和受精,并且可在保姆母羊的输卵管内或者在体外与输卵管细胞混合培养时发育成桑椹胚或胚囊(Goto等,1988;Lu等,1988)。如果能从不管发情周期天数的同一母牛反复收     

牛体外受精方法的研究进展

一、引言 本世纪70年代发展起来的牛胚胎移植技术在近年来得到了完善;冷冻胚胎、胚胎分割等技术也逐步规范化。但优秀母牛生产的胚胎不能象公牛精液可连续采集,多倍稀释。 近年来牛体外受精技术的进展给胚胎移植开辟了一个重要的胚胎源。另一方面,胚胎的核移植、基因注射及胚胎的性别鉴定等     

牛胚胎的玻璃态冷冻保存

在我们的实验室,玻璃态作为一种常规的技术,已被用于冷冻保存转基因的鼠胚和克隆化的兔胚。本研究的目的在于建立直接可靠的冷冻保存技术,以便在缺少冰冻的条件下保存牛胚胎。首先从超排卵的供体母牛采集第6天的胚胎,此时的胚胎处于晚期桑椹胚和早期囊胚的发育阶段。用杜氏磷酸盐缓冲液(DPBS)冲洗胚胎,按形态学特征     

供体牛的超排效果与其原激素水平的关系

本项研究的目的是确定胚胎供体母牛的选择标准。为此选用了具有自然和同步发情周期表现的母牛。 试验选用了泌乳期产奶量为4000—4500公斤的母牛75头。供体牛分两组。一组母牛为自然发情母牛,并从发情周期的第8天开始用FSH处理(连续5天,每间隔12小时注射一次,每次5毫克,总剂量为50毫克),     

西门塔尔牛体外胚胎生产效率分析

【目的】文章旨在分析西门塔尔牛活体采卵-体外受精（OPU-IVF）体外胚胎生产效率的影响因素,为提高西门塔尔牛体外胚胎生产效率、优化西门塔尔牛体外胚胎生产流程提供生产依据。【方法】本实验以未经激素处理的西门塔尔牛卵丘卵母细胞复合体（COCs）、进口肉牛冻精为实验材料,通过卵母细胞活体采集（OPU）、体外成熟（IVM）、体外受精（IVF）、早期胚胎体外培养（IVC）等技术手段,对体外受精后第7 d囊胚率进行统计分析。【结果】不同公牛精液对囊胚发育有影响,不同供体母牛对囊胚发育率影响显著。【结论】相同卵母细胞利用率水平的供体母牛,回收COCs体外受精后,囊胚率与冻精有关（P<0.05）;不同卵母细胞利用率水平的供体母牛,回收COCs体外受精后,囊胚率随卵母细胞利用率升高而升高（P<0.05）。     

应用体细胞克隆技术生产转基因动物的前景

自从 1 985年首次报道利用显微注射技术生产转基因动物以来[1] ,动物转基因技术没有发生实质性的改进 ,显微注射ＤＮＡ仍然是首选的转基因方法。向原核期胚胎注射ＤＮＡ是一种可靠的方法 ,全世界许多实验室都已成功地生产出转基因动物。但是 ,这种方法存在重大缺点 ,主要是基因整合效率低 ,嵌合体多 ,基因表达受其插入位点的影响。因此 ,若想生产出一头有用的转基因动物 ,必须注射和移植几千个原核期胚胎 ,使用大量供体和受体动物 ,涉及很高的研究费用。对于经济不发达的国家 ,由于不能集中人力和财力进行大规模实验 ,转基因动物产业化受到…     

生产牛嵌合体的研究

本研究的目的是：（１）用日本黑牛精子与荷斯坦母牛卵母细胞受精和利木赞牛精子与日本红牛卵母细胞受精，通过体外胚胎聚合的方法，生产四品种嵌合体牛；（２）研究四品种嵌合公牛精子的繁殖力；（３）孤雌生殖牛胚胎的生产和体内与体外发育胚胎的成活率；（４）通过聚合从日本红牛获取的卵母细胞的孤雌生殖二倍体胚胎和用荷斯坦牛精子与荷斯坦母牛卵母细胞进行体外受精的胚胎，生产三亲本嵌合体牛。在第一组试验中，当采用显微手术     

激素处理与超数排卵

在牛的胚胎移植中,关于从超数排卵的供体母牛得到足够数量有价值的胚胎的问题,到现在还没有得到解决。在供体母牛授精后8—9日,将冲洗出的胚胎约50％移植给受体母牛是不能成活的。     

抗PMSG的注射时间对超排母牛排卵率和胚胎质量的影响

当注射PMSG诱发牛超排和回收胚胎时,常发现卵巢上有大卵泡,而且用大剂量PMSG处理时,这种卵泡更多。这种卵泡的存在降低了回收胚胎的质量。这样,可移植胚胎数就不能依靠使用大剂量PMSG增加排卵     

转基因动物在家畜改良中的应用

过去10年间,科学家把分子生物学手段与配子和繁殖生物学方面的知识相结合,成功地将外来基因导入多种动物的基因组中。1985年,有两个实验室首先证明了生产转基因家畜的可行性。接着,几个研究中心成功地将外来基因分别导入鸡、绵羊和猪。除鸡外,生产转基因动物的方法都与Gordon(1980)提出的生产转基因小鼠的方法一样。微注射前,猪和牛的卵必须经过离心以取除其细胞质中的不透明物质,否则,就容易混淆原核和核。微注射后,再将猪和绵羊卵手术移植到合适受体的输卵管,对牛则将注射过的卵移植到中间宿主如绵羊或兔子的输卵管直至胚胎发育到桑椹期或囊胚期。然后再非手术移植到受体母牛。     

荷斯坦青年母牛用前列腺素PGF_(2α)两次同期处理后发情和移植冻胚受胎效果观察

169头荷斯坦青年母牛，选择113头有功能性黄体的健康牛间隔11天，用两次PGF2a注射控制同期发情，第二次注射后发情时间分布集中，发情率提高了15％（P＜0．05，94．60％，79．65％），而且平均比第一次发情缩短了0．33天（2．54：2．87）。但有诱发母牛异常发情的趋势（4．43％，5／113）。另有45头观察到发情的牛，在黄体期注射后有30头发情。选择了136头受体移植，分三步脱甘油的引进优质牛胚胎，受胎74头受胎率为54．41％。结果分析表明，胚胎解冻后的级别，受体牛的同期差和黄体级别是影响受胎的主要因素。     

从冷冻胚胎获得的犊牛

1980年3月12日,作者在全苏畜牧科研所牛胚胎移植实验室里首次在苏联从冷冻胚胎获得了犊牛。 1979年6月12日,从3636号黑白花品种母牛获得了两个胚胎,立即把一个移入3687号受体小母牛,于1980年3月5日该小母牛产了一头体重37公斤的62号小母犊。另一个胚胎是在乌克兰科学院哈尔科夫生物医学冷冻研究所的(?)(?).00.00.00.型装置上用Kem-     

培养液成分对胚胎体外发育的影响

牛体外受精、棱移植或转基因的早期胚胎需体外培养到桑椹胚或囊胚后才能非手术移植到受体母牛受孕。本文综述了体外培养液中能量培养基,血清、牛血清白蛋白（BSA）和聚乙烯醇（PVA）,生长因子、胞浆因子和细胞外基质分子,pH值,EDTA、NaN3和2,4-二硝基苯酚等对胚胎体外培养的影响。     

应用PCR扩增牛SRY序列进行奶牛胚胎性别的鉴定及移植

本研究是用直接测序技术测定了奶牛SRY的DNA序列,在此基础上设计和合成了牛类SRY特异引物并通过聚合酶链反应(PCR)直接扩增牛胚胎的SRY特异DNA序列,对胚胎进行性别鉴定并移植成功。 研究方法是:由牛静脉血中的白细胞提取DNA,经扩增后直接测定DNA的序列,在此基础上,设计并合成了两对特异于牛SRY序列的PCR扩增引物A、B和C、D。对32头奶牛的白细胞DNA及17枚胚胎(全胚、二分胚、三分胚)的SRY序列进行PCR扩增。实验结果表明,32头奶牛的白细胞DNA 样品,其中有12头公牛样品均显示清晰的特异扩增带,20头母牛样品和空白对照样品均无特异扩增带。17枚奶牛胚胎用引物A、B“一次扩增”结果,有10枚胚胎出现清晰的特异扩增带,另7枚胚胎无特异扩增带,其中2枚三分胚共6个样品,其结果完全一致。用引物C、D进行“二次扩增”的10枚显示特异扩增带的胚胎均显示出另一条清晰的特异扩增带,而另外7枚未显带的样品亦均无特异的扩增带。为验证扩增的SRY序列,特设计了特异于牛SRY的ASO探针(寡核苷酸探针)进行点杂交。结果表明,凡有特异扩增带的均出现阳性杂交结果;相反,无特异扩增带的PCR产物均为阴性杂交结果,证明 扩增的为SRY特异DNA片段。经过性别鉴定的牛二分胚,已有4枚胚胎移植成功。其结果均与胚胎性别鉴定结果相符合。     

应激反应与饲养方式对新疆褐牛青年母牛超排效果的影响

在拴养和散养新疆褐牛青年母牛的超排中,两组的平均回收卵数差异显著(P=0.02),有效胚胎率,差异不显著(P=0.12).拴养供体有效胚胎率为58.48％,自由采食供体为54.88％.结果表明,应激反应与饲养方式对超排反应影响较大,但对平均有效胚胎率影响不大.     

肉牛胚胎移植的遗传影响

牛胚胎非手术采集和移植的应用已经改变了种牛的经营方式,迫使许多纯种繁育者重新制定选种和育种计划。很明显,多数育种者应用胚胎移植的主要原因是在短期内可获得经济效益。从购买不久的高价母牛很快获得经济效益,就能完全改变每一个品种内特级母牛的价格结构。 最近应用重组DNA技术和把无亲缘关系动物的特殊基因移入哺乳动物的胚胎,已经获得了科学性的突破。尽管出现了这些新的进展,但在可预见的将来,家畜遗传进展的主要部分很可能还是采用现在使用的选种     

奶牛胚胎移植中抗白细胞抗体与胚胎死亡率的关系

胚胎移植(ET)在牛的繁殖中是一项较新的技术。这一新技术提出了一些至今还未搞清楚的免疫遗传学问题。一般说来,一个新移植到受体母牛的胚胎对受体母牛来说是一个完全的异种抗原,是来源于一个不相关的母牛和公牛。本研究的目标是(1)研究受体牛的抗白细胞抗体效价和频率,并与正常怀孕母牛比较。(2)确定一次或多次作为受体母牛的免疫状态及与胚胎死亡率的相关程度。 材料与方法 供体的超排和胚胎移植 所使用的供体为发情后9—11天的第一至第四个泌乳期     

用豆腐渣育肥肉牛

调查对象是长野县经营肥育牛的农户。以豆腐渣为主育肥的牛是日本黑牛,其中去势牛62头,母牛16头;对照组去势牛16头,母牛52头,用配合饲料育肥。两组的育肥期从1984年3月到1986年12月,育肥期间的饲喂量和饲料费用平均数表示。     

兔和牛早期胚胎的显微外科分割方法

本文介绍了用于兔和牛胚胎分割常用方法的主要步骤,并讨论胚胎分割后在体外的发育潜能。 材料和方法 采卵母兔为日本白兔(6—15月龄,重3.6—3.8公斤),按Fowler等的方法,用PMSG和HCG超排母兔。注射HCG后立即用同品种公兔交配,60—65小时后从输卵管回收桑椹胚。     

用雄性DNA探针鉴定奶牛胚胎性别

用特定的Y-染色体DNA探针对进入子宫的胚胎进行鉴定,已鉴定的冷冻胚胎,随后解冻并进行移植,移植后60天解剖取出胎儿确定鉴定结果。特定的雄性DNA探针是从基因库中分离的三种不同雄性基因克隆提取的。它们的识别是通过与过量的母牛基因组DNA预先杂交,以有效地去掉常染色体和X染色体序列的DNA进行的。选择这三种