SCF或(和)GM-CSF体内基因转染对"自杀基因"疗法抗肿瘤作用的增强效应及其相关机理的研究

目的通过增强体内抗原提呈功能提高“自杀基因”疗法疗效，探讨其相关免疫学机理。方法采用腺病毒介导的ＳＣＦ、ＧＭＣＳＦ基因体内转染联合ＣＤ／５ＦＣ“自杀基因”疗法治疗小鼠的ＣＴ２６结肠腺癌，观察肿瘤的生长和荷瘤小鼠的存活期、不同方法所诱导的ＣＴＬ杀伤活性及肿瘤局部的细胞因子表达。结果一次性低剂量腺病毒介导的ｍＧＭＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的体内转染，能增强“自杀基因”疗法的疗效。在肿瘤局部出现新的细胞因子表达，包括ｍＩＬ４、ｍＩＬ２、ｍＩＦＮγ和ｍＴＮＦα。脾细胞对ＣＴ２６细胞的杀伤作用增强。结论ｍＧＭＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的联合转染对“自杀基因”系统的疗效具有明显的增强作用，其与机体特异抗肿瘤免疫功能以及肿瘤局部分泌的细胞因子有关。     

体内IL—2基因转染小鼠腹腔巨噬细胞的抗肿瘤作用

目的：研究ＩＬ２基因体内转染小鼠腹腔巨噬细胞，探讨基因的表达，抗肿瘤作用及其机理。方法：采用磷酸钙ＤＮＡ共沉淀法，将ｐＲＥＰ８ＩＬ２真核表达质粒直接注射至小鼠腹腔，转染腹腔巨噬细胞。结果：ＩＬ２基因可成功地转染腹腔巨噬细胞（ＭФ），并表达基因产物，能有效地抑制肿瘤的生长，转基因ＭФ及其表达产物可使脾ＮＫ活性和内源性ＬＡＫ活性增强，能增加腹腔ＭФ细胞毒活性并使ＭФ分泌ＴＮＦ、ＩＬ１和ＮＯ的水平增加。结论：本实验能有效地激活机体的非特异性免疫功能，从而发挥抗肿瘤效应。     

瘤内／瘤周注射巨噬细胞集落刺激因子或（和）干扰素—γ基因转染的 …

目的 观察巨噬细胞集落刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）和干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）基因单独或联合转染的巨噬细胞对局部黑色素瘤的治疗效果及相关免疫机理。     

GM—CSF基因转染瘤苗预防性免疫保护作用的实验研究

为了观察低肿瘤负载时ＧＭＣＳＦ 基因转染瘤苗抗肿瘤作用及其效果。应用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）基因转染的、６０Ｃｏγ射线照射后制成的瘤苗,进行预防性免疫保护作用的研究;对荷瘤小鼠,手术切除肿瘤结节,研究该基因疗法对预防术后肿瘤复发的影响。结果表明, ＧＭＣＳＦ 基因转染瘤苗预防性免疫治疗后,能诱导小鼠产生特异性免疫反应,抵抗随后野生型亲本肿瘤细胞的攻击,并能有效地预防手术后肿瘤复发。以上结果揭示了应用该疗法进行肿瘤基因治疗的可行性。     

腹腔注射分泌粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子的重组痘苗病毒的抗肿瘤肺转移作用

通过体内途径直接注射各种载体进行细胞因子基因治疗，具有重要的临床意义。作者观察了表达小鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因的重组痘苗病毒（ＶＶＧＭ－ＣＳＦ）对肺转移荷瘤小鼠模型的治疗作用。给Ｃ５７ＢＬ／６小鼠尾静脉注射２×１０５Ｂ１６Ｆ１０细胞３天后开始腹腔内注射ＶＶＧＭ－ＣＳＦ１０６ＰＦＵ／０．１ｍｌ，２次／周，连续治疗２周。结果显示，ＶＶＧＭ－ＣＳＦ能够显著减少荷瘤小鼠肺转移结节的数目，并明显延长荷瘤小鼠的存活期。研究发现，经过ＶＶＧＭ－ＣＳＦ治疗，小鼠腹腔巨噬细胞的杀伤、吞噬及其释放一氧化氮的能力明显提高，结合其它实验结果，荷瘤小鼠持续表达ＧＭ－ＣＳＦ并导致以上巨噬细胞功能改变，可能是ＶＶＧＭ－ＣＳＦ的抗肿瘤转移作用机理之一。     

全甲注参胶囊对环磷酰胺致畸和抑瘤作用

目的 观察全甲洋参胶囊（ＱＪＹＳ）对环磷酰胺（ＣＰ）引起的荷瘤小鼠骨髓嗜多工细胞微核形成（ＭＮＦ）和对ＣＰ抑瘤作用的影响，探讨其临床应用的合理性。方法 以荷瘤（Ｓ１８０）小鼠为动物模型，分别观察单纯给予不同剂量的ＱＪＹＳ，单纯给予ＣＰ，同时给予ＱＪＹＳ和ＣＰ对小鼠肿瘤生长和骨髓嗜多工细胞ＭＮＦ的影响，并与对照组进行比较。结果 单纯给予ＱＪＹＳ各剂量组小鼠肿瘤平均重量及ＮＭＦ均略低于对照组，但无显著     

TNF基因转染的巨噬细胞细胞毒活性变化的研究

将携带ＴＮＦ基因的逆转录病毒上清与小鼠ＭΦ共同孵育，使ＴＮＦ基因导入ＭΦ中，结果发现，ＴＮＦ基因转染的巨噬细胞（ＭΦ─ＴＮＦ＋）分泌ＴＮＦ的水平明显高于正常ＭΦ和转染对照基因的ＭΦ。研究中还发现，ＭΦ─ＴＮＦ＋对Ｐ８１５肿瘤细胞的杀伤率和吞噬力明显高于对照组，用抗ＴＮＦ单抗可明显抑制ＭΦ─ＴＮＦ＋的体外杀伤活性。由此表明，ＭΦ杀伤活性的升高系细胞经基因导入后表达的ＴＮＦ介导的。     

小鼠肺癌移植瘤肿瘤相关巨噬细胞的表型鉴定

目的　鉴定小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）移植瘤肿瘤相关巨噬细胞（ＴＡＭ）的表型。方法　将ＬＬＣ细胞接种于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠颈部背侧皮下,４周后处死小鼠,取移植瘤。ＥＬＩＳＡ法检测局部微环境中Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞因子水平,双标免疫荧光染色观察ＴＡＭ共表达ＣＤ６８和巨噬细胞甘露糖受体（ＭＭＲ）或一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的情况,酵母菌吞噬试验评估ＴＡＭ的吞噬功能。结果　小鼠ＬＬＣ移植瘤局部细胞因子向Ｔｈ２方向漂移。与正常小鼠肺组织ＩＦＮ-γ（５.４９±１.０４）ｎｇ／ｍｌ和ＩＬ-１２（６１６１.４８±４９８.４９）ｎｇ／ｍｌ相比,移植瘤组织均降低,分别为（２.１９±０.３４）ｎｇ／ｍｌ和（１６３５.９２±７５４.８６）ｎｇ／ｍｌ（Ｐ＜０.０５）;移植瘤ＩＬ-４、ＩＬ-１０浓度分别为（２９.３１±１４.４７）ｎｇ／ｍｌ、（２１.５４±１０.７２）ｎｇ／ｍｌ,均高于正常肺组织的（１６.４３±６.３１）ｎｇ／ｍｌ和（１０.７１±２.０２）ｎｇ／ｍｌ（Ｐ＜０.０５）;ＣＤ６８／ＭＭＲ（＋）ＴＡＭ占全部ＴＡＭ的６９.７％ ～８３.２％,ＣＤ６８／ｉＮＯＳ（＋）占１６.８％ ～３０.３％;移植瘤对酵母菌的吞噬率和吞噬指数分别为（５.４２±１.７４）％和０.０８±０.０２,均低于于正常脾脏组织的（２３.６３±５.８１）％和０.３９±０.１４,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０１）。结论　小鼠ＬＬＣ移植瘤ＴＡＭ可能呈替代性活化的表型特征。     

腺病毒介导的人GM-CSF基因转染瘤苗增强机体免疫功能的实验研究

目的 研究腺病毒介导的人ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗体内抗肿瘤免疫作用极其机理。方法 应用ＧＭ－ＣＳＦ基因转染、的瘤苗对小鼠肝癌模型进行免疫基因治疗,观察该疗法对荷瘤小鼠脾细胞ＮＫ、ＬＡＫ、ＣＴＬ活性的影响、脾淋巴细胞围化反应的影响以及荷瘤习的生存期。结果 经ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗治疗后,插细胞ＣＴＬ活性显著升高,而ＮＫ、ＬＡＫ细胞活性未见明显增强、脾淋巴细胞转化反应显著增强、生存期显著延长。结论     

新城鸡瘟病毒诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子的细胞毒活性研究

目的观察新城鸡瘟病毒Ｌ系（ＮＤＶ－Ｌ）诱导小鼠腹腔巨噬细胞（ＰＥＭΦ）产生的肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）对肿瘤细胞的细胞毒性作用。方法采用噻唑蓝（ＭＴＴ）和３Ｈ－脱氧胸苷（３Ｈ－ＴｄＲ）标记肿瘤细胞的方法。结果ＮＤＶ－Ｌ可诱导小鼠ＰＥＭΦ产生ＴＮＦ－α，其产生的量随ＮＤＶ－Ｌ感染量的增加而活性增强。当ＮＤＶ－Ｌ感染剂量一定时，ＴＮＦ－α释放量在ＮＤＶ－Ｌ作用ＰＥＭΦ２４ｈ时为最强（１００Ｕ／ｍｌ）。用３Ｈ－ＴｄＲ标记肿瘤细胞（小鼠乳腺癌细胞系Ｃａ７６１－８６和小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５）做ＴＮＦ－α的细胞毒试验，表明其具有明显的杀伤活性。结论ＮＤＶ－Ｌ诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生的ＴＮＦ－α具有明显的细胞毒活性。     

SCF或（和）GM—CSF体内基因转染对“自杀基因”疗法抗肿瘤作用的增？…

目的 通过增强体内抗原提呈功能提高“自杀基因”疗法疗效,探讨其相关免疫学机理。方法 采用腺病毒介导的ＳＣＦ,ＧＭ－ＣＳＦ基因体内转染联合ＣＤ／５ＦＣ“自杀基因”疗法治疗小鼠的ＣＴ２６结肠腺癌,观察肿瘤的生长和荷瘤小鼠的存活期,不同方法所诱导的ＣＴＬ杀伤活性及肿瘤局部的细胞因子表达。结果 一次性低剂量腺病毒介导的ｍＧＭ－ＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的体内转染,能增强“自杀基因”疗法的疗效,在肿瘤局部出     

成纤维细胞介导的人α型干扰素基因疗法与过继免疫化疗联合治疗人肝癌的实验研究

作者以皮下接种人肝细胞癌细胞ＳＭＭＣ７７２１的裸鼠为荷瘤模型，由人外周血单个核细胞经体外ＩＬ－２和丝裂霉素Ｃ灭活的人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１共同刺激培养后激活的杀伤细胞（ＡＫ），研究了将成纤维细胞介导的人ＩＦＮ－α基因疗法与ＩＬ－２／ＡＫ／阿霉素过继免疫化疗联合应用后对肝癌的治疗作用。结果表明：（１）给肝癌裸鼠单独腹腔埋植人ＩＦＮ－α基因转移的ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞（ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α￣＋）就能显著抑制肝癌（皮下）体内生长，使荷瘤裸鼠存活期明显延长；（２）在腹腔埋植ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α￣＋之后再静脉注射ＡＫ细胞、腹腔内注射ＩＬ－２，发现荷瘤裸鼠的皮下肿瘤结节生长抑制作用更明显；（３）将ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α￣＋与ＩＬ－２／ＡＫ／阿霉素联合应用后，对肝癌裸鼠的治疗效果更佳。     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因联合IL-2基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理分析

目的以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠ＩＬ－２基因联合转移，研究其体内抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞后３天，肿瘤局部注射表达ＩＬ－２的重组腺病毒ＡｄＩＬ－２和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胞嘧啶（５－Ｆｃ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗。结果联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制，小鼠存活期明显长于ＡｄＩＬ－２、ＡｄＣＤ／５－Ｆｃ、ＡｄｌａｃＺ／５－Ｆｃ或ＰＢＳ组。经联合治疗后，小鼠脾细胞的ＮＫ活性和ＣＴＬ杀伤活性明显增强；肿瘤瘤体内ＣＤ４、ＣＤ８细胞浸润增加；肿瘤细胞表达Ｈ－２Ｋｂ和Ｂ７－１分子明显增加。结论联合应用自杀基因和ＩＬ－２基因治疗，一方面可以明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，另一方面可以提高机体对肿瘤细胞免疫应答，增加机体的抗肿瘤作用，是肿瘤基因治疗中一条行之有效的途径。     

同种异体LAK/IL-2经超声雾化吸入及胸腔内注射治疗晚期肺癌

将ＩＬ－２或ＩＦＮ－γ基因体内转染腹腔巨噬细胞（ＭΦ），其表达的基因产物能提高ＭΦ的细胞毒活性，并诱导ＭΦ分泌ＴＮＦ、ＩＬ－１和ＮＯ等抗肿瘤免疫介质，激发机体的非特异性免疫功能而产生抗肿瘤效应。特别是ＩＬ－２和ＩＦＮ－γ基因联合转染ＭΦ，其表达的产物既能使ＭΦ产生更强的细胞毒活性并发分泌高水平的ＴＮＦ、ＩＬ－１和ＮＯ，又能激活脾ＣＴＬ细胞，从而激发机体的非特异性和特异性免疫功能，产生更强的协同抗肿     

多次小剂量pEgr-IFN-γ基因 放射治疗的抑瘤效应及其机制的研究

目的: 探讨多次小剂量pEgrIFNγ基因放射治疗对接种B16黑色素瘤小鼠的抑瘤效应及其免疫学机理。方法: 肿瘤局部注射脂质体包裹的重组质粒pEgrIFNγ后36 h，接受不同剂量X射线照射，观察各组小鼠照后不同时间肿瘤生长速率和平均存活时间。照后第3天用RTPCR法检测瘤内IFNγ转录水平，ELISA法检测小鼠血清中IFNγ含量，并于照后第15天检测小鼠部分免疫学指标。 结果：照后第9~15天，4次（质粒+5Gy）组小鼠肿瘤生长速率明显低于质粒+20 Gy组，且平均生存时间明显延长；照后第3天质粒+20 Gy组瘤内IFNγ转录水平明显高于质粒组，照后第1，3天血清中IFNγ含量明显高于质粒组和对照组，照后第15天脾脏NK细胞毒活性、IL2和IFNγ分泌活性均明显高于20 Gy照射组。结论: 多次小剂量基因放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量基因放射治疗。基因放射治疗组可能通过诱导瘤内IFNγ表达增强，使血液中IFNγ浓度升高，从而提高荷瘤机体免疫功能和抗肿瘤能力。     

成纤维细胞介导的人α型干扰素基因疗法与过继免疫化疗联合治…

作者以皮下接种人肝细胞癌细胞ＳＭＭＣ７７２１的裸鼠为荷瘤模型，由人外周血单个核细胞经体外ＩＬ－２和丝裂霉素Ｃ灭活的人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１共同刺激培养后激活的杀伤细胞（ＡＫ），研究了将成纤维细胞介导的人ＩＦＮ－α基因疗法与ＩＬ－２／ＡＫ／阿霉素过继免疫化疗联合应用后对肝癌的治疗作用。结果表明：（１）给肝癌鼠单独腹腔埋植人ＩＦＮ－α基因转移的ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞（ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α＾＋）就     

重组人肿瘤坏死因子抗肿瘤作用的初步研究

目的： 了解ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 体内体外抗肿瘤活性。方法： 体外采用 Ｍ Ｔ Ｔ 法测ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对 Ｍ Ｋ Ｎ４５ 细胞的 Ｉ Ｃ５０ , 体内采用动物移植性肿瘤检测其抗肿瘤活性。结果： Ｍ Ｔ Ｔ法测定结果表明ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对一定浓度的人胃癌细胞株 Ｍ Ｋ Ｎ４５ 有较强的抑制增殖作用, 其 Ｉ Ｃ５０ 为４ ．４６１ ×１０ － ２μｇ／ ｍｌ（ 相关系数γ＝ ０ ．９５４６） 。体内研究表明ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对小鼠 Ｓ１８０ 实体瘤和小鼠 Ｅｈｒｌｉｃｈ 氏实体瘤有较强的抑制作用,其抑制率分别为２９ ．３ ％ （ｉｖ） 和４０ ．０７ ％ （ｉｖ） 。ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对小鼠黑色素瘤 Ｂ１６ 的肺转移有很强的抑制作用, 其抑制率为６０ ．４１ ％ （ｉｖ） 。结论： 人重组肿瘤坏死因子ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 在体内体外均有一定的抗肿瘤作用。     

腺病毒介导IL-2基因转染的瘤苗体内抗肿瘤作用

目的 :探讨重组腺病毒介导的 IL- 2基因转染的瘤苗的体内抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法 :应用腺病毒介导的鼠 IL- 2基因转染 CT2 6小鼠结肠癌细胞 ,灭活后用作瘤苗治疗荷瘤小鼠 ,观察皮下肿瘤生长及其存活期。采用乳酸脱氢酶释放法检测荷瘤小鼠脾细胞 CTL、L AK、NK细胞的杀伤活性。结果 :鼠 IL- 2基因转染瘤苗治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤生长并明显延长其存活期 (P<0 .0 1)。体内免疫功能检测表明 ,鼠 IL- 2基因转染疫苗治疗组小鼠脾细胞 CTL 活性、L AK活性和 NK活性显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腺病毒介导鼠 IL- 2基因转染的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,其机制可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应     

卵巢上皮癌患者血清巨噬细胞集落刺激因子水平的测定〔英〕

巨噬细胞集落刺激因子（ＭＣＳＦ）为一种７０ｋＤ的二聚体糖蛋白，通常由成纤维、内皮、上皮和胎盘等几种细胞所产生。其主要作用为刺激单核细胞释放白介素１、白介素６及肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）等多种细胞活性物质。ＭＣＳＦ在正常人血清中较低，半衰期小于１５...     

B7基因转导非免疫原性肿瘤B16并联合应用IFN-γ的抗肿瘤研究

目的探索非免疫原性肿瘤的免疫基因治疗。方法将Ｂ７１基因导入非免疫原性肿瘤细胞Ｂ１６,在体外经ＩＦＮγ处理后,观察细胞表面分子的表达变化,以及肿瘤细胞在小鼠体内的成瘤性。结果单独Ｂ７基因转导的Ｂ７＋Ｂ１６在小鼠体内持续生长。体外用ＩＦＮγ处理肿瘤细胞,可明显增加细胞表面ＭＨＣＩ类分子的表达,与Ｂ７－Ｂ１６比较,Ｂ７＋Ｂ１６在小鼠体内的成瘤性明显降低。结论单独Ｂ７基因导入并表达,不能改变Ｂ１６在体内恶性增殖的特性。同时提高细胞表面Ｂ７与ＭＨＣＩ分子的表达,两者可协同发挥作用,诱发肿瘤排斥。