肝细胞癌中Bcl—2和Bax蛋白表达研究

目的：研究细胞凋亡抑制基因Bcl-2和细胞凋亡促进基因Bax在肝细胞癌（HCC）中的表达情况。方法：应用免疫组织化学SABC法对35例HCC标本切片后进行Bcl-2和Bax蛋白染色,根据阳性率高低分析其表达与临床机理的关系。结果：HCC中Bcl02和Bax阳性细胞均为胞浆染色,35例HCC中Bcl-2和Bax蛋白各7例和13例阳性,Bcl-2和Bax蛋白在小肝癌更多见,全部7例Bcl-2蛋白阳性HCC中6例为组织分组II级,Bax蛋白在组织学分级I级的表达率明显低于Ⅱ＋Ⅲ级,Bcl-2蛋白表达有随临床分期升高而降低的趋势。Bcl-2,Bax蛋白联合表达仅见于4例HCC。结论：Bcl-2和Bax蛋白表达与HCC的组织学分级在关。Bcl-2和Bax蛋白在预后相对较好的HCC中较高表达,提示Bcl-2和Bax可能具有评估预后的价值。     

骨桥蛋白、甲胎蛋白表达与原发性肝癌的关系

为探讨骨桥蛋白(OPN)及甲胎蛋白（AFP）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与病理特性和预后的关系。笔者采用免疫组化S P法检测40例HCC，10例正常肝组织及10例肝硬化组织中OPN及AFP的表达情况。 结果示：（1）OPN在HCC中存在过表达，与HCC预后有显著关系（P<0.05）。（2）AFP在HCC中有过表达的趋势，与HCC的TNM分期、血清AFP水平和预后有显著关系（P<0.05）。（3）40例HCC标本中，OPN和AFP表达均为阳性者16例，生存1年半以上仅5例;两者均为阴性者10例，生存1年半以上达8例;OPN阳性而AFP阴性者13例，OPN阴性而AFP阳性者1例。OPN与AFP表达率显著相关(P＝0.023)。OPN和AFP联合表达与HCC的TNM分期、HBV感染、血清AFP水平和生存期有显著关系（分别为 P＝0.014，0.032，0.001，0.001）。提示：OPN和AFP的表达与HCC侵袭转移的发生有密切关系;两者均阳性表达时对预测HCC已发生转移具有指导意义，可作为判断HCC预后的指标。     

核因子κB表达与胰腺癌转移及与MMP-2表达的关系

目的： 探讨核因子κB (NF-κB,p65)在胰腺癌（PC）中的表达与淋巴结转移及MMP-2表达的关系。方法：免疫印迹法检测45例PC(淋巴结转移30例，非转移15例)和9例正常胰腺组织(NP)中p65蛋白的表达；RT-PCR检测MMP-2mRNA的表达。 结果：p65，MMP-2在45例 PC组织中的阳性表达率分别为66.7%（30/45）和57.8%（26/45），在30例转移组织中的阳性表达率分别为83.3%（25/30）和73.3%(22/30)，在非转移组织中的阳性表达率分别为33.3%（5/15）和26.7%（4/15）， p65与MMP-2表达呈明显正相关（r=0.743,P<0.05）。结论：NF-κB异常表达与胰腺癌淋巴结转移有关，并与MMP-2正相关，NF-κB 可能通过对下游基因表达的调控，参与了胰腺癌的转移过程。     

NF-кB与P-gp在肝细胞肝癌组织中的表达

目的探讨核转录因子（NF-κB）与P糖蛋白（P-gp）在肝细胞肝癌（HCC）及癌旁肝组织的表达及其相互关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测30例HCC中NF-κB、P-gp的表达情况，以30例相应癌旁肝组织作为对照组，所得结果用统计学卡方检验及列联表等相关分析进行比较。结果NF-κB蛋白在HCC、癌旁肝组织中阳性表达率分别为63．3％（19／30）、16．7％（5／30），HCC与癌旁肝组织中NF-κB蛋白表达差异有显著性（P〈0.05）；P-gp蛋白在HCC、癌旁肝组织中阳性表达率分别为83．3oA（25／30）、30％（9／30），HCC与癌旁肝组织表达差异有显著性（P〈0.05）。NF-κB蛋白的表达与P-gp蛋白的表达呈正相关（r=0.89，P〈0.05）。结论NF-κB和P-gp在HCC中的表达提示其可能参加了HCC和多药耐药的发生。NF-κB与P-gp在HCC表达中呈正相关，提示NF-κB与P-gp可能介导的多药耐药，共同参与了HCC多药耐药机制。     

姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。     

肝细胞癌中TRAILR2、AFP、NF-κBp65的表达及其相互关系

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体TRAILR2、甲胎蛋白AFP和核因子NFκBp65在肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)凋亡中的作用及相互关系。方法采用免疫组织化学方法检测TRAILR2、AFP、NFκBp65在40例HCC及12例正常肝组织中的表达变化。结果TRAILR2和NFκBp65在40例HCC和12例正常肝组织中均表达,但是HCC组的表达明显增强,两组间表达具有显著性差异(P<0.01);40例HCC中有7例不表达AFP,其余33例可见明显表达,正常肝组织组不表达AFP,两组间表达差异有显著性(P<0.01);HCC中TRAILR2的表达与AFP的表达呈负相关(r=0.464,P<0.01),与NFκBp65的表达也呈负相关(r=0.648,P<0.01)。结论TRAILR2、AFP、NFκBp65与HCC的凋亡有关,AFP抑制BCC凋亡与TRAILR2表达下调有关,AFP下调TRAILR2表达可能是通过NFκBp65的间接作用。     

NF-κB 活化与细胞凋亡在大鼠重症急性胰腺炎肺损伤中的关系

目的：探讨大鼠重症急性胰腺炎（SAP）肺损伤中NF-κB活化与细胞凋亡的关系。 方法：选择Wistar大鼠共72只,随机分为假手术组、SAP模型组（模型组）、NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）预处理+SAP模型组（PDTC组）,各组分别在造模后2、6、8、12 h取6只大鼠,收集肺组织光镜下观察病理变化,利用免疫组织化学法检测NF-κB的表达,检测细胞凋亡。 结果：除假手术组外,其余两组大鼠造模后均出现明显的肺损伤,且随时间推移逐渐加重,但PDTC组在各时间点肺损伤程度低于模型组;假手术组大鼠肺组织有极少量的NF-κB表达与凋亡细胞,而其余两组造模后肺组织均有明显的NF-κB表达与细胞凋亡,且均在造模后6 h达高峰,但PDTC组NF-κB表达量及凋亡细胞数均明显少于模型组,差异均有统计学意义（均P<0.05）;相关性分析显示,SAP大鼠肺组织NF-κB活性与细胞凋亡率呈明显正相关（3 h时,r=0.93,P=0.02;6 h时,r=0.95,P=0.021;8 h时,r=0.82,P=0.038;12 h时,r=0.98,P=0.02）。 结论：大鼠SAP肺损伤中的细胞凋亡增加可能与NF-κB活性升高有关。     

GPC-3 mRNA与GGT联合检测诊断AFP阴性原发性肝细胞肝癌

目的：探讨外周血单核细胞磷酸肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）mRNA联合血浆γ-谷氨酰转肽酶（GGT）检测诊断甲胎蛋白（AFP）阴性原发性肝细胞肝癌（HCC）的价值。方法：采用RT-PCR方法分别检测39例AFP阴性HCC患者、39例非HCC肝病患者及40例健康自愿者外周血单核细胞GPC-3 mRNA的表达;用全自动生化分析仪检测39例AFP阴性HCC患者血浆GGT水平（>58 U/L为阳性）,分析两者单独和联合检测阳性率的差异。结果：39例HCC患者外周血单核细胞GPC-3 mRNA表达检出率为62%（24/39）,而在非HCC的肝病患者及健康对照者外周血单核细胞中GPC-3 mRNA表达均为阴性,特异度达100%;39例HCC患者血浆GGT升高阳性率80%（31/39）。GPC-3 mRNA联合GGT检测的阳性率95%,明显高于两者单独检测的阳性率（均P<0.05）。结论：AFP阴性HCC患者外周血单核细胞中GPC-3 mRNA有较高的特异性表达,GPC-3 mRNA联合GGT检测有助于AFP阴性的HCC早期发现。     

肝细胞癌中Bcl-2|Fas|Fas-L的表达及相关性研究

目的：探讨肝细胞癌中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达及意义。
方法：采用免疫组化方法检测40例肝癌组织和10例良性肿瘤组织中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达,分析它们之间的关系及与肝癌临床病理参数的关系。
结果：40例肝细胞癌中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达率分别为45%,75%,70%,10例肝良性病变中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达率分别为0%,30%,30%。Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白在肝细胞癌中的表达率高于肝良性病变,差异有统计学意义（P＜0.05）。其中Bcl-2蛋白的表达与Fas蛋白的表达呈正相关（r=0.390,P＜0.05）。
结论：HCC的Bcl-2表达上调可能通过阻断Fas/Fas-L凋亡通路和其直接抗凋亡作用导致HCC细胞得以免疫逃逸。Fas,Fas-L表达的肿瘤细胞具有更强的浸润转移能力,其极有可能作为判断肿瘤转移能力的参考指标。

     

NF-κB、MMP-9与肝细胞肝癌浸润转移的实验研究

目的观察高转移性肝癌细胞系HCC9204细胞转染抑制性κB基因（IκB-α）后核因子κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的改变以及细胞浸润转移能力的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞，应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达；电泳迁移率分析（EMSA）测定NF-κB活性；免疫组化法检NF-κBp65、MMP-9的表达；激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察MMP-9细胞定位以及细胞形态；基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移。结果HCC9204细胞转染PCDNA3-IκB-α后，细胞内NF-κB和MMP-9 mRNA表达以及NF-κB活性下降；NF-κB、MMP-9表达具有明显的正相关；MMP-9蛋白表达位置和细胞形态改变；细胞侵袭转移能力明显下降。结论NF-κB表达水平与HCC9204的浸润转移能力有关；NF-κB活性抑制后细胞浸润转移能力下降，MMP-9表达下降可能起主要作用。     

人甲胎蛋白增强子驱动自杀基因靶向杀伤肝癌细胞的实验研究

目的 探讨人AFP增强子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷自杀基因系统体内外靶向杀伤肝癌细胞的效应.方法 构建人AFP增强子驱动的pAFP-cDNA3.1-TK自杀基因真核表达质粒;利用脂质体将质粒转染入AFP阳性肝癌细胞株HcpG2和AFP阴性肝癌细胞株SMMC7721;采用RT-PCR和Western blot检测TK mRNA和蛋白表达;MTT检测细胞的存活率;观察丙氧鸟苷对肝癌细胞体外增殖、生长曲线和细胞凋亡的作用,以及丙氧鸟苷体内抑制肿瘤生长的效应.采用t检验分析相关数据.结果 成功构建pAFP-cDNA3.1-TK自杀基因真核表达质粒并转染入肝癌细胞;AFP阳性肝癌细胞株HepG2中能检测到TKmRNA和蛋白表达;丙氧鸟苷呈剂量和时间依赖性抑制转染后肝癌细胞株HepG2的生长并诱导其凋亡;AFP阴性肝癌细胞株SMMC7721中没有TKmRNA和蛋白表达,细胞增殖、生长曲线和凋亡均不受影响,两者比较,差异有统计学意义(t=2.58,2.73,3.12,P＜0.05).丙氧鸟苷可以特异性地抑制转染后肝癌细胞株HepG2治疗组中肿瘤的生长,肿瘤抑制率为46%,而在转染后肝癌细胞株SMMC7721治疗组中,对肿瘤生长无明显抑制作用,两者比较,差异有统计学意义(t=3.36,P＜0.05).结论 人AFP增强子驱动的HSV-TK/丙氧鸟苷自杀基因系统可以靶向杀伤AFP阳性肝癌细胞,抑制肿瘤生长.     

组蛋白去甲基化酶含十字形结构域蛋白-3和核因子-κB高表达与肝细胞癌不良进展和预后的关系

目的观察肝细胞癌中组蛋白去甲基化酶含十字形结构域蛋白-3(JMJD3)和核因子-κB(NF-κB)蛋白水平的表达,探讨两者的相关性及其蛋白表达水平与多个临床病理因素的关系。方法采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测25例新鲜肝细胞癌组织及相对应的癌旁组织中JMJD3和NF-κB信使RNA(mRNA)表达,采用免疫组织化学法检测102例肝细胞癌及相对应的癌旁组织中JMJD3和NF-κB蛋白的表达,分析其与肝细胞癌临床病理特征的关系及上述蛋白的相关性,采用生存分析法(Kaplan-Meier)法来评估JMJD3和NF-κB蛋白的异常表达与肝细胞癌患者生存期之间的关系,Cox回归模型分析JMJD3和NF-κB蛋白的表达和临床病理参数与肝细胞癌预后的关系。结果JMJD3和NF-κB mRNA在肝细胞癌组织中的表达水平均高于癌旁组织(t=-15.130、-15.030,P<0.05),差异有统计学意义,肝细胞癌组织中JMJD3阳性率[87.25%(89/102)]显著高于相应癌旁组织[57.84%(59/102),χ²=22.153,P<0.05],差异有统计学意义,肝细胞癌组织中NF-κB阳性率[83.33%(85/102)]显著高于相应癌旁组织[29.41%(30/102),χ²=55.664,P<0.05],差异有统计学意义。JMJD3和NF-κB表达与甲胎蛋白水平、分化程度、有无脉管癌栓、淋巴结转移及TNM分期明显相关(P<0.05),NF-κB与结节数目明显相关(χ²=5.133,P<0.05),差异有统计学意义。JMJD3蛋白高表达者的生存期高于低表达者(χ²=40.568,P<0.05),差异有统计学意义,NF-κB蛋白高表达者的生存期低于低表达者(χ²=48.803,P<0.05),差异有统计学意义。Spearman相关分析结果显示JMJD3与NF-κB呈正相关(r=0.627,P<0.05)。结论JMJD3和NF-κB在肝细胞癌中的异常表达与肿瘤的浸润、转移及无病生存期明显相关。     

AIBP在肝癌细胞中的表达及意义与含AIBP基因及AFP启动子驱动的双自杀基因表达载体构建

目的：探讨载脂蛋白A-I结合蛋白（AIBP）在肝癌细胞中的表达及意义。方法：用RT-PCR与Western blot法分别检测正常肝细胞株L02,AFP阳性人肝癌细胞株HepG2和Hep3B,及AFP阴性人肝癌细胞株SMMC7721中AIBP基因与蛋白的表达;构建AFP启动子驱动的双自杀基因（CD,TK）+AIBP基因过表达载体pcDNA3.1-AFP-AIBP-yCD/TK,并转染Hep3B和SMMC7721细胞,用MTT法检测转染后细胞的增殖能力,用RT-PCR和Western blot法检测细胞AIBP,血管内皮生长因子（VEGF）,VEGF受体2（VEGFR-2）,基质金属蛋白酶9（MMP-9）基因和蛋白的表达。结果：AIBP mRNA和蛋白在正常肝细胞中高表达,而在各肝癌细胞系中均表达下调,且Hep3B和SMMC7721细胞中下调明显。成功构建pcDNA3.1-AFP-AIBP-yCD/TK真核表达质粒并转染入Hep3B和SMMC7721细胞。转染后AFP阳性Hep3B细胞生长到明显抑制,但AFP阴性SMMC7721细胞增殖不受影响;两种细胞的AIBP基因与蛋白表达均明显上调,而VEGFR-2,VEGF和MMP-9基因与蛋白表达明显表达下调。定量指标间的差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：AIBP在肝癌细胞中表达下调,AIBP与肝癌细胞的侵袭转移能力有关,而与细胞增殖能力无关;成功构建了联合基因载体pcDNA3.1-AFP-AIBP-yCD/TK。

     

α-干扰素联合TACE治疗晚期肝细胞性肝癌

目的：探讨α-干扰素（IFN-α）联合经导管肝动脉化疗栓塞（TACE）治疗晚期肝癌的疗效及预后价值。方法：前瞻性分析聊城市人民医院普通外科2006年8月—2009年8月收治的138例晚期肝细胞性肝癌患者的临床资料。其中TACE组72例,联合治疗组66例,分组方式为随机分组。结果：治疗后第2周2组间血清AFP水平差异无统计学意义（P〉0.05）,但治疗后第4周及第8周联合治疗组血清AFP下降程度较TACE组明显,差异有统计学意义（P〈0.05）。TACE组疾病控制率62.5%,联合治疗组疾病控制率78.8%,两者相比较差异有统计学意义（χ2=4.38,P〈0.05）。完成治疗后1、2、3、4个月和〉4个月TACE组新发肿瘤率分别为6.9%、26.4%、33.3%、18.1%和11.1%;联合治疗组新发肿瘤率分别为3.0%、7.6%、19.7%、37.9%和21.2%。2组总体比较差异有统计学意义（χ2=17.47,P〈0.01）;2组治疗后3个月内新发肿瘤率比较,差异有统计学意义（χ2=16.25,P〈0.01）;2组治疗后〉3个月新发肿瘤率比较,差异无统计学意义（χ2=3.29,P〉0.05）。138例患者均获得随访,TACE组治疗后平均生存时间（238.48±15.65）d,联合治疗组治疗后平均生存时间（350.19±22.37）d,两者相比较差异有统计学意义（χ2=14.20,P〈0.01）。结论：TACE联合IFN-α治疗晚期肝细胞性肝癌有助于延缓患者治疗早期新发肿瘤的发生,延长患者生存时间,改善患者的预后。     

maspin和bax联合检测对乳腺癌复发的研究

目的：研究乳腺癌组织中mas pin和bax的表达,探讨二者预测乳腺癌复发的价值。方法：采用SP免疫组织化学方法检测30例复发乳腺癌、24例无复发乳腺癌及14例乳腺纤维腺瘤组织中maspin和bax的表达情况。结果：复发乳腺癌（23.3%,20.0%）和无复发乳腺癌组织（54.2%,45.8%）maspin、bax阳性表达率均较乳腺纤维腺瘤组织（85.7%,78.6%）低（P均〈0.05）,复发乳腺癌maspin和bax阳性表达明显低于无复发乳腺癌（P〈0.01）。复发乳腺癌组织maspin表达与组织学分级呈负相关（r=-0.481,P〈0.05）,与激素受体呈正相关（r=0.497,P〈0.05）;bax表达与组织学分级呈负相关（r=-0.522,P〈0.05）;maspin表达与bax表达呈正相关﹙r=0.454,P〈0.05﹚。结论：maspin、bax的异常表达可能在乳腺癌的发生、发展过程中起重要作用,联合检测能更好地判断乳腺癌的复发。     

Prognostic Significance of Alpha-fetoprotein Status in the Outcome of Hepatocellular Carcinoma after Treatment of Transarterial Chemoembolization

Background

Alpha-fetoprotein (AFP) has been used as a diagnostic biomarker for hepatocellular carcinoma (HCC), but its prognostic significance is not well defined. This study was performed to classify the prognostic significance of AFP status in HCC patients after transarterial chemoembolization (TACE).

Methods

Four hundred forty-one HCC patients from a prospective maintained database with pathologic confirmation including 139 with normal AFP levels and 302 with elevated AFP levels were retrospectively studied for prognostic significance of AFP in treatment response and survival after TACE. Univariate and multivariate analyses were used to identify the prognostic factors.

Results

There were significant differences in overall survival (OS) after TACE between AFP-negative and AFP-positive HCC patients when the AFP cutoff value was defined as 20?ng/ml (P?P?=?0.093). Multivariate analysis revealed that AFP status for AFP-negative or positive was an independent prognostic factor for HCC patients after TACE (P?=?0.001), along with ??-glutamyltransferase (GGT) level (P?=?0.004) and tumor diameter (P?Conclusions Compared with AFP-positive HCC patients, patients with AFP-negative status have a better treatment response and prognosis after TACE.     

乌司他丁对肝脏移植早期外周血NF-κB和TNF-α及酶学活性的影响

目的：通过观察乌司他丁对肝脏移植早期外周血NF-κB、TNF-α和酶学活性的影响,研究乌司他丁对肝脏移植术后早期再灌注损伤的保护作用。方法：收集36例肝硬化晚期患者,随机分为实验组和对照组（各18例）,实验组在肝移植时给予乌司他丁30万U＋生理盐水10mL静脉滴注,对照组给生理盐水10mL静脉滴注,在供肝恢复血供后1、2、4及6h抽取患者外周血进行肝酶学检查,用Westernblot技术检测外周血中核转录因子κB（NF-κB）P65表达,用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定外周血中TNF-α表达水平。结果：和对照组相比,实验组肝移植术后早期各时相点外周血肝酶学指标、NF-κBP65和TNF-α的表达水平明显下降,且差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：乌司他丁能抑制肝移植后早期肝脏炎症通路,对肝脏移植后再灌注损伤具有保护作用。