新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡时程

为确定新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡时程、采用HE染色及TUNEL研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡情况.结果显示,新生大鼠缺氧缺血后3周时,左脑仍有少量凋亡细胞存在,与对照组比较有显著性差异,P＜0.05;于4周时左脑凋亡细胞数与对照组比较无显著性差异,P＞0.05.结果提示新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡持续至损伤后4周.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤Caspase-1mRNA的表达变化

目的　研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后Caspase 1mRNA的表达变化。方法　制备新生大鼠左脑HIBD模型 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定HIBD 12、2 4、72 ,96h不同时点脑皮质Caspase 1mRNA的表达 ,同时观察光镜下神经元坏死情况。结果　假手术对照组有少量Caspase 1mRNA表达 ,HIBD 12hCaspase 1mRNA的表达仍较少 ,与对照组相比无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,HIBD 2 4～ 96hCaspase 1mRNA的表达逐渐增多 ,达高峰 ,同其他各组相比均有显著性差异 (P <0 0 5 )。光镜下HIBD 2 4～ 96h神经元坏死明显加重。结论　新生大鼠HIBD可诱导Caspase 1mRNA的表达 ,可能参与了新生儿HIBD的形成。     

高压氧对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

为研究高压氧(HBO)对新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用,应用新生Wistar大鼠制备HIBD模型,将HBO及HBO+胞二磷胆碱(CDPC)应用于这些模型中,观察它们对HIBD模型鼠的体重增长、病死率、脑病变的影响,并用原位缺口末端标记法(TUMEL)检测HBO对HI后脑细胞凋亡的影响.结果表明CDPC及HBO+CDPC治疗后减轻了病死率及脑病变率;并使HIBD模型鼠体重增长快于未治疗组,但两治疗组间差异不显著;HBO治疗组未明显减轻死亡率及脑病变率,也未明显减轻脑细胞凋亡;CDPC及HBO+CDPC却明显减轻了脑细胞的凋亡(P＜0.001),但两组间差异不显著.因此提示,HBO对HIBD的保护作用尚待定论.     

缺氧缺血性脑损伤大鼠脑内bcl-2基因表达与细胞凋亡的关系

目的 观察bcl-2基因在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后细胞凋亡中的表达，探讨新生大鼠HmD后神经细胞凋亡的分子机制。方法 54只7日龄新生SD大鼠随机分为1个对照组和8个实验组。给动物吸入含有92％氮气和8％氧气混合气体建立新生大鼠HIBD动物模型，分另q在脑损伤后不同时间点(0．5、1、3、6、12、24、48、72h等)断头处死动物，取海马组织，用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及bcl-2基因表达情况。结果 HIBD1h内未见凋亡细胞出现，3h开始出现，并在48h达高峰，之后逐渐下降。bcl-2蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现，6h达到高峰，之后渐下降。结论 HIBD后bd-2基因表达在脑神经细胞凋亡过程中起一定作用。在一定时间范围内,bcl-2基因表达与脑神经细胞凋亡呈负相美。     

Bid基因在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的动态变化

目的　探讨Bid基因在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)中的动态变化。方法　通过建立新生大鼠HIBD动物模型 ,采用RT PCR技术检测缺氧缺血后不同时间点缺血侧脑组织中Bid基因表达的变化。结果　正常组中无Bid基因表达 ,缺氧缺血组Bid基因表达明显上调 ,且随着缺氧缺血后时间的延长 ,Bid基因表达呈动态变化缺氧缺血后 6h其表达开始增加 ,2 4h达高峰 ,48～ 72h有所回落。结论　脑缺氧缺血引起的神经细胞凋亡可能与Bid基因表达上调有关。     

高压氧对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

为研究高压氧（HBO）对新生儿缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的保护作用,应用新生Wistar大鼠制备HIBD模型,将HBO及HBO＋胞二磷胆碱（CDPC）应用于这些模型中,观察它们对HIBD模型鼠的体重增长、病死率、脑病变的影响,并用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测HBO对HI后脑细胞凋亡的影响。结果表明：CDPC及HBO＋CDPC治疗后减轻了病死率及脑病变率;并使HIBD模型鼠体重增长快于未治疗组,但两治疗组间差异不显著;HBO治疗组未明显减轻死亡率及脑病变率,也未明显减轻脑细胞凋亡;CDPC及HBO＋CDPC却明显减轻了脑细胞的凋亡（P＜0．001）,但两组间差异不显著。因此提示,HBO对HIBD的保护作用尚待定论。     

bFGF对新生大鼠缺氧缺血后海马CA 1 区神经细胞凋亡的影响

为研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对新生大鼠缺氧缺血(HI)后海马CA 1区神经细胞凋亡的影响,应用新生Wistar大鼠制备缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,用HE染色、电镜及原位缺口末端标记(TUNEL)法检测bFGF对HI后海马CA 1区神经细胞凋亡的影响.结果显示HE染色、电镜及TUNEL法均证实HI后海马存在选择性神经细胞凋亡,尤以CA 1区为重,CA 2和CA 3区病变较轻.TUNEL检测结果,bFGF治疗组阳性细胞数(15.23±14.2)低于未治疗组(25.12±20.25),差异显著(P＜0.05).因此,bFGF对HI后海马CA 1区神经细胞确有保护作用.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤血红素氧化酶-1表达与脑细胞凋亡的关系

目的　探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后海马区血红素氧化酶 1(HO 1)的表达 ,以及与细胞凋亡的关系。方法　 7日龄SD仔鼠 72只 ,随机分为HIBD组和假手术对照组。用原位杂交和免疫组化观测两组在不同时间点海马区HO 1mRNA及蛋白阳性细胞数量变化 ;用原位缺口末端标记 (TUNEL)法检测凋亡的脑细胞。结果　 1.HIBD组右侧海马HO 1mRNA表达 4h开始升高 (P <0 .0 5 ) ,12h达高峰 ,4 8h开始略有下降 ,72h后仍高于对照组 (P <0 .0 1)。 2 .HO 1蛋白表达与HO 1mRNA表达变化规律相一致。 3.凋亡检测发现 ,HIBD组右侧海马 12h凋亡细胞数增加 ,2 4h已有明显细胞凋亡 (P <0 .0 1) ,72h凋亡细胞减少 ,仍高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　新生大鼠HIBD后HO 1mRNA及其蛋白表达增加 ,可能参与神经细胞凋亡     

神经生长因子减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的 观察神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用。方法 对５４只７日龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为ＮＧＦ治疗组和对照组,缺氧缺血后即刻腹腔内注射ＮＧＦ或生理盐水。４４小时后测定各组脑含水量,２８天后测量各组脑重量并观察脑大体改变和组织学改变。     

ICAM-1单克隆抗体对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤作用的研究

目的探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)单克隆抗体对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用。方法48只7 d龄SD大鼠随机分为缺血缺氧组(A组)、ICAM-1单抗治疗组(B组)、生理盐水组(C组)和正常对照组(D组)。其中A组观察到再给氧后2 h,24 h,48 h,72 h和168 h处死,B,C,D组观察到再给氧后48 h处死。应用免疫组织化学法和HE染色观察1CAM-1在不同时间脑组织的表达和脑组织中性粒细胞浸润情况。结果A组再给氧2 h,脑微血管内皮细胞ICAM-1微弱表达,24 h后表达开始增加,48 h达到高峰,同时受损脑组织中性粒细胞浸润也随之增加。B组再给氧48 h后,ICAM-1表达强度及中性粒细胞浸润比同时间点缺氧缺血组明显降低。结论HIBD时ICAM-1的表达与中性粒细胞浸润密切相关,ICAM-1单抗对新生大鼠HIBD具有一定保护作用。     

新生大鼠脑缺氧缺血模型心肌细胞凋亡的研究

目的　研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)发生后不同时段心肌细胞凋亡情况。方法　结扎新生 7日龄大鼠右颈总动脉后放入 8%低氧舱 2h制成HIBD模型 ,应用AnnexinV/PI双染流式细胞技术检测缺氧缺血 (HI)后 1、4、18、2 4、4 8、72h及 7d心肌细胞凋亡情况。结果　HI后各HI组心肌细胞的凋亡率均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,72hHI组凋亡率又显著高于其他组 (P <0 .0 5 ) ,表明HI后 7d内各组大鼠心肌均存在超出正常凋亡 ,尤以 72hHI组凋亡率最高。结论　新生大鼠HIBD后 1h～ 7d内心肌细胞均存在明显凋亡 ,以HI后 72h更明显 ,提示对缺氧缺血性脑病新生儿保护心肌减少心肌凋亡的治疗应至少用至生后 7d     

新生大鼠缺氧缺血损伤后行为变化和海马结构突触素的表达

目的 探讨缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后学习记忆行为功能与突触可塑性之间的关系。方法 7日龄Wistar大鼠36只随机分为缺氧缺血(HI)组21只和正常对照组15只。HI组大鼠通过结扎左侧颈总动脉后吸入8％的氮氧混合气体2h,制成缺氧缺血性脑病(HIE)模型。饲养至80d左右时,采用Y-迷宫实验检测分辨学习和记忆能力,免疫组织化学方法对海马结构突触素的表达进行分析。结果 HI组大鼠分辨学习能力和记忆保持百分数分别为33±8和(59±21)％,显著低于正常对照组27±7和(80±19)％(P<0.01,P<0.05);海马、齿状回突触素免疫染色出现明显的免疫板层分布,HIE组海马CAI区始层、辐射层、腔隙分子层及齿状回分子层突触素免疫产物校正光密度(COD)值均较对照组明显降低(P<0.01),分别降至41.2％,27.2％,10.5％和38.9％。结论 HIBD后大鼠学习和记忆能力明显下降,可能与海马结构突触素减少有密切关系。     

缺氧缺血性脑损伤新生猪海马皮层细胞色素C氧化酶活性变化

目的　研究缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)新生猪海马皮层细胞色素C氧化酶 (COX)活性变化。方法　50只 3d新生猪随机分为实验组和对照组 (假手术组 )。实验组制成HIBD模型后置空气中 ,根据在空气中放置时间分 4组 (0h组 ,2 4h组 ,48h组 ,72h组 ) ,每组 10只。每只新生猪分离左侧海马皮层线粒体 ,用分光光度计测定其COX活性 ;采用SDS -PAGE分析线粒体蛋白改变。结果　 1.0h组COX活性与对照组无显著性差异(P >0 .0 5) ,再灌注时开始下降 ,2 4h组活性最低 (P <0 .0 5) ,然后逐渐回升 ,但 72h组仍未恢复至对照水平(P <0 .0 5)。 2 .SDS -PAGE示 2 4h组、48h组和 72h组线粒体蛋白成分和结构与对照组比较有明显差异。结论　HIBD后再灌注线粒体COX活性下降 ,线粒体蛋白成分和结构发生明显变化 ,此为线粒体能量代谢障碍的直接原因 ,也是HIBD中线粒体对神经元凋亡起关键作用的理论基础。     

血糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1合成的影响

目的　探讨血糖水平对缺氧缺血 (HI)新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白 1(GLUT1)合成的影响。方法　在成功建立HI并高、低血糖新生大鼠模型的基础上 ,应用免疫组织化学方法定量检测新生大鼠脑内海马和皮质部位GLUT1的合成情况。结果　正常情况下GLUT1随日龄增加而合成增加 ,HI可引起GLUT1合成在短期内明显增加 ,以HI前重症高血糖对GLUT1合成的影响较明显 ,其合成量在HI后 2、2 4、48h显著高于其他各组。结论　在HI前预先补充足量葡萄糖 ,可改善脑内葡萄糖供应。此与HI时增加的无氧酵解代谢方式相适应。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠松果体钟基因表达的变化

目的：观察缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage, HIBD）新生大鼠松果体中CLOCK、BMAL1蛋白表达的变化,探讨钟基因表达异常在HIBD导致的昼夜节律紊乱中的作用。方法：72只7 日龄新生Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组与HIBD模型组,每组36只。采用改良Levine法建立HIBD模型,用Western blot方法测定两组新生大鼠术后0、2、12、24、36、48 h松果体中CLOCK、BMAL1蛋白水平。结果：HIBD模型组松果体的CLOCK及BMAL1蛋白表达水平在HIBD后48 h高于假手术组（P0.05）。结论：HIBD新生大鼠松果体中CLOCK和BMAL1蛋白在损伤48 h后有显著升高,提示两者可能共同参与缺氧缺血时昼夜节律紊乱的发生。     

环境刺激对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑功能的影响

目的探讨环境刺激对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD)新生大鼠脑功能的影响.方法选用7日龄雄性SD大鼠51只,其中36只通过结扎右侧颈总动脉,吸入氧体积浓度为(8.0±0.5)%的氮氧混合气体,制作新生大鼠HIBD模型,制模后的大鼠分为干预组和非干预组;正常对照组大鼠15只(假手术动物).采用早期触摸(neonatalhandling)和丰富环境(enrichedenvironment)刺激进行干预,干预时间为30d,干预结束后进行感觉运动功能(悬吊试验、行走试验)和行为检测(三等分迷宫试验)以判断干预效果.结果非干预组大鼠分辨学习能力较干预组和正常对照组差(P<0.01),达到学会标准所需的训练次数分别为非干预组(45±9)次、干预组(27±5)次、正常对照组(24±8)次;非干预组大鼠感觉运动功能低于干预组和正常对照组(P<0.01),悬吊试验时间分别为非干预组(15±3)s、干预组(22±4)s、正常对照组(36±6)s;行走试验时间分别为(7.0±1.1)s、(4.0±0.8)s、(4.0±0.5)s;干预组和非干预组大鼠大脑皮层死亡细胞百分数分别为(35.7±8.9)%和(39.1±10.9)%,海马部位分别为(38.5±6.3)%和(39.3±10.4)%,干预组与非干预组脑损伤程度差异无显著意义(P>0.05);所有损伤大鼠行为检测结果与海马损伤程度呈正相关(r=0.915,P<0.01);悬吊试验和行走试验结果与皮层损伤程度相关(r分别为-0.75、0.606,P<0.01、<0.05).结论环境刺激可改善HIBD大鼠的感觉运动功能和分辨学习能力.     

实验性新生儿缺氧缺血脑损伤模型鼠脑细胞凋亡动态变化

目的 探讨新生儿缺氧缺血脑损伤（ＨＩＥ）后皮质、海马细胞凋亡现象和动态过程。方法 制作标准化ＨＩＥ实验模型,应用ＤＮＡ原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）、ＨＥ染色、电镜方法,对凋亡出现时间和强度进行观察和比较。结果 缺氧缺血后新生鼠脑细胞死亡具有典型凋亡特征,光镜、电镜观察到核膜皱缩、染色质凝聚,阳性ＴＵＮＥＬ着色细胞核。随着缺血时间的增加,细胞凋亡数逐渐增加,皮质约在１８小时点、海马４０小时点达高峰。结     

新生儿缺氧缺血性脑病血浆神经肽Y与催乳素水平变化的研究

目的 探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)血浆神经肽Y(NPY)与催乳素(PRL)水平的变化。方法应用放射免疫分析法测定32例新生儿HIE及12例对照组血浆NPY与PRL水平变化。结果 HIE组急性期血浆NPY与PRL水平均显著高于对照组(P均<0.01),中、重度HIE急性期血浆NPY与PRL水平均显著高于恢复期(P均<0.01);HIE惊厥组急性期血浆NPY与PRL水平显著高于非惊厥组(P均<0.01)。病程中NPY与PRL水平变化呈正相关。结论 血浆NPY和PRL水平与HIE脑损伤及其程度密切相关,并与HIE惊厥发作有关,可作为判断新生儿脑损伤程度及惊厥是否发作的指标之一。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡及脑组织中Rho GDP解离抑制因子和Bcl-2表达的变化

目的 研究Rho GDP解离抑制因子(Rho GDP dissociation inhibitor 2,RhoGDI2)mRNA 及Bcl-2 mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的作用和机制.方法 30只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为假手术组及HIBD 6 h和48 h组,每组10只.采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况,并用Real-time RT-PCR方法测定脑组织中RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平.结果 (1)新生大鼠HIBD后48h结扎侧大脑半球脑水肿明显.(2) HIBD6 h出现典型的凋亡细胞峰,细胞凋亡率为(1.40±0.12)％.HIBD 48 h凋亡峰更为明显,细胞凋亡率达到( 15.86±0.98)％.缺氧缺血后与假手术组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)假手术组大鼠RhoGDI2和Bcl-2 mRNA表达水平较高(4.12±0.74、2.55±0.65),在HIBD 6 h后二者表达开始下降(3.19±0.77、1.96±0.36),48 h降低更加明显(1.04±0.18、1.06±0.17),与假手术组比较,HIBD各时间点RhoGDI2和Bcl-2 mRNA的表达均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).(4)缺氧缺m后各时间点RhoGDI2 mRNA的表达和Bcl-2 mRNA的表达呈正相关(r=0.831,P＜0.05).结论 脑缺氧缺血后,随着凋亡的出现,RhoGDI2和Bcl-2 mRNA表达水平降低,提示Rh0GDI2表达失衡可能通过Bcl-2参与新生大鼠HIBD中凋亡的发生.