地龙（参环毛蚓）配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的 为保障临床用药的安全性和有效性，建立地龙（参环毛蚓）药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴定方法。方法 根据地龙氧化酶亚基1（COⅠ）基因序列筛选出地龙配方颗粒的稳定引物区间，并根据区间内筛选获得地龙的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点，根据SNP位点设计地龙特异性鉴别引物dlshmy-F及dlshmy-R，分别采集地龙及其混伪品，建立地龙配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR反应体系，对该方法进行耐受性和适用性考察。结果 退火温度为62 ℃，循环次数为36次，地龙及其配方颗粒经PCR反应及凝胶电泳后，可在约170 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带，其他近源伪品如通俗环毛蚓、保宁腔蚓、栉盲环毛蚓等20种伪品及阴性对照均无条带。结论 该研究建立的特异性PCR鉴别方法可快速准确的鉴别出地龙药材、配方颗粒、冻干粉中的参环毛蚓源性成分，准确鉴定出全国广地龙中药材及饮片以及地龙的基原，也可为其他的中药配方颗粒质量标准研究提供了参考。     

烫水蛭（蚂蟥）配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的 为保障临床用药的安全性和有效性，建立烫水蛭（蚂蟥）及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴定方法。方法 根据烫水蛭（蚂蟥）细胞色素C氧化酶Ⅰ（COⅠ）基因序列设计引物，筛选出烫水蛭（蚂蟥）的稳定引物区间；在区间内筛选获得烫水蛭（蚂蟥）的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点，并设计烫水蛭（蚂蟥）特异性鉴别引物TSZ-F、TSZ-R；分别收集烫水蛭（蚂蟥）及其阴性样品，建立烫水蛭（蚂蟥）配方颗粒特异性PCR鉴别方法，并对PCR体系进行优化，对该方法的耐受性和适用性进行考察。结果 当退火温度为54 ℃、循环数为34次，烫水蛭（蚂蟥）及其配方颗粒经PCR和凝胶电泳后，可在约133 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带，伪品无条带。结论 建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别烫水蛭（蚂蟥）饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒，也为可其中药配方颗粒的质量标准研究提供参考。     

基于DSS标记特异性PCR鉴别冷背药材木槿皮基原植物及其混伪品

目的 冷背药材作为宝贵的药材资源，但因其本身的特殊性和复杂性，导致其鉴别成为中药鉴定中的难题，因此亟需建立冷背药材的鉴别方法。该研究利用DNA特征序列（DSS）标记，建立一种冷背药材木槿皮基原植物木槿及其混伪品的特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴别方法。方法 基于叶绿体基因组序列分析获得木槿皮的候选DSS标记，使用DNA测序手段对DSS标记进行验证，基于得到的可靠DSS标记设计木槿皮基原植物特异性鉴别引物，对PCR反应条件进行优化，并进行耐受性和适用性的考察。结果 将扩增产物的测序结果与DSS比对后得到了1个可用于鉴定木槿的DSS标记，揭示了木槿正混伪品的区别特征，根据DSS标记设计出一对木槿正品特异性鉴别引物，使用该引物进行PCR扩增和凝胶电泳后木槿均出现约270 bp的单一明亮条带，而其4种混伪品均无此条带。结论 该研究得到的1个DSS标记可用于木槿的真伪鉴定，基于此DSS标记设计的特异性鉴别引物可准确、简便的鉴别木槿皮的基原植物及其混伪品，为木槿正伪品的分子鉴定提供了新的方法与思路。     

紫河车饮片 干浸膏粉及配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的 紫河车在我国有悠久的药用历史,《中华人民共和国药典》自2015年版起不再收录紫河车及其中药成方制剂,但市场上仍有紫河车饮片及含紫河车的产品,并存在使用猪、牛、羊等动物胎盘伪充紫河车入药的现象。建立一种适用于紫河车饮片、干浸膏粉及配方颗粒的特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴定方法。方法 根据紫河车COⅠ基因序列筛选适用于紫河车饮片、干浸膏粉及配方颗粒的稳定引物区间,并在区间内筛选获得紫河车及其混伪品的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点,设计特异性鉴别引物,优化反应体系,并对此方法进行耐受性及适用性考察。结果 当退火温度为60 ℃,循环数为33次时,紫河车正品饮片、干浸膏粉及配方颗粒均能扩增出约110 bp片段,其他3种伪品及阴性对照均无条带。结论 建立的特异性PCR鉴别方法可准确地鉴别紫河车及相关产品真伪。     

五倍子配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立五倍子药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法。方法:根据五倍子细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计引物,筛选出五倍子的稳定引物区间,并在区间内筛选获得五倍子的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,根据SNP位点设计五倍子特异性鉴别引物WBZ-F、WBZ-R,分别收集五倍子及其混伪品,建立五倍子配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR体系,对该方法进行耐受性和适用性考察。结果:退火温度为53℃,循环36次,五倍子及其配方颗粒经PCR及凝胶电泳后,可在约138 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品倍蛋蚜虫虫瘿无条带。结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别五倍子药材、标准汤剂冻干粉、配方颗粒中的五倍子蚜虫源性成分,也可为其他中药配方颗粒的质量标准研究提供参考。     

蒙古黄芪、膜荚黄芪及混伪品种子的位点特异性PCR鉴别

目的 基于特异性聚合酶链式反应（PCR）建立一种可以准确、快速鉴别蒙古黄芪、膜荚黄芪种子的方法。方法 利用叶绿体基因组综合数据库（CGIR）及IdenDSS软件分别获取蒙古黄芪、膜荚黄芪的DNA特征片段，在此基础上筛选获得蒙古黄芪与膜荚黄芪的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点，根据该位点设计蒙古黄芪特异性鉴别引物对MG-F/MG-R和膜荚黄芪特异性鉴别引物对MJ-F/MJ-R。分别建立蒙古黄芪和膜荚黄芪特异性PCR鉴别方法，优化PCR反应体系，并对该方法的专属性和适用性进行考察。结果 蒙古黄芪特异性PCR鉴别方法，采用引物对MG-F/MG-R、退火温度62 ℃、循环次数28次，经PCR扩增和凝胶电泳后蒙古黄芪在约220 bp处得到特异性条带，而膜荚黄芪和其他混伪品种子无条带；膜荚黄芪特异性PCR鉴别方法，采用引物对MJ-F/MJ-R、退火温度58 ℃、循环次数28次，经PCR扩增和凝胶电泳后膜荚黄芪扩增得到约150 bp的条带，而蒙古黄芪及混伪品无扩增产物。结论 该研究建立的特异性PCR鉴别方法，可以准确、快速对蒙古黄芪、膜荚黄芪进行种源鉴别，为黄芪种子的分类与准确鉴定提供了一定的科学依据。     

蒿属外来药用资源中亚苦蒿的特异性PCR鉴别

目的 基于特异性聚合酶链式反应（PCR）建立了一种中亚苦蒿药材的鉴别方法，可以准确、便捷地鉴别中亚苦蒿及其近缘种。方法 利用Chloroplast Genome Information Resource（CGIR）数据库查找中亚苦蒿及其近源种叶绿体基因组序列，并筛选获得中亚苦蒿特异性单核苷酸多态性（SNP）位点，根据SNP位点设计一对中亚苦蒿特异性鉴别引物zykh1-F和zykh1-R。采集中亚苦蒿及其常见近缘种的原植物样本，建立中亚苦蒿特异性PCR鉴别方法并优化反应体系，对该方法进行耐受性和适用性考察。利用该方法对从新疆药材市场购买中亚苦蒿药材样本进行鉴别。结果 中亚苦蒿特异性PCR鉴别方法采用鉴别引物zykh1-F和zykh1-R，退火温度为54 ℃、循环次数为33次。经PCR扩增和凝胶电泳后中亚苦蒿在210 bp处可观察到单一明亮条带，其余近缘种如艾、黄花蒿、白叶蒿、野艾蒿均无条带。结论 该研究所建立的中亚苦蒿特异性PCR鉴别方法可准确鉴别中亚苦蒿及其常见近缘种，具有高度特异性，且该方法节约时间和成本，为中亚苦蒿资源引种和利用提供一种方便快捷的物种鉴别方法。     

基于可视化环介导等温扩增技术快速检测中药材蜈蚣真伪＊

目的 建立少棘巨蜈蚣的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）的方法，以实现对市场蜈蚣药材真伪的快速检测。方法 针对少棘巨蜈蚣COI序列设计专属性LAMP引物；考察恒温条件下最佳反应时间；通过对DNA模板的梯度稀释，确定LAMP反应对蜈蚣药材的最低检测浓度；对少棘巨蜈蚣及其伪品进行LAMP扩增反应，以考察LAMP引物对少棘巨蜈蚣的特异性。结果 筛选得到了一套特异性较好可用于检测少棘巨蜈蚣的LAMP引物，LAMP反应最佳反应时间为30 min，皮克级别的DNA就能被显著检出。结论 LAMP反应对于少棘巨蜈蚣的检测显示了良好的特异性，使用简便，有用于指导市场流通过程中蜈蚣药材的快速检测的潜力。     

多基原九里香药材的多重位点特异性PCR鉴别

目的 建立一种同时鉴别九里香药材两基原九里香Murraya exotica和千里香M. paniculata的DNA分子鉴别方法。方法 通过比较九里香、千里香的叶绿体基因组序列差异，根据叶绿体基因组上的单核苷酸多态性（SNP）变异位点分别设计九里香和千里香的特异性鉴别引物P03和P04，对影响聚合酶链式反应（PCR）结果的退火温度、循环次数、引物浓度比进行优化，建立了九里香和千里香的多重位点特异性PCR鉴别方法，并对影响该方法重复性的Taq酶种类、PCR仪型号进行耐受性考察和适用性考察。结果 在该多重位点特异性PCR鉴别方法中，当PCR反应循环数为31次，退火温度为60 ℃，九里香P03和千里香P04引物比为1∶2时，九里香可获得约330 bp的特异性条带，千里香可得到约230 bp的特异性条带，不同来源的九里香和千里香样品使用建立的多重位点特异性PCR鉴别方法均可获得一致结果。结论 该文建立一种快速、准确鉴别九里香药材基原的多重位点特异性PCR鉴别方法，可在单次鉴定操作中根据条带位置同时鉴别九里香和千里香。     

宽体金线蛭的特异性PCR分子鉴定

[目的] 实验旨在通过寻找宽体金线蛭单核苷酸多态性（SNP）位点,设计宽体金线蛭的特异性鉴别引物,建立宽体金线蛭特异性聚合酶链式反应（PCR）检测方法,实现对宽体金线蛭及其常见混伪品的快速鉴别。[方法] 通过比对宽体金线蛭与其常见混伪品的细胞色素C氧化酶亚基I（COI）序列,寻找宽体金线蛭COI基因序列内SNP位点,设计特异性鉴别引物。[结果] 进行PCR后仅宽体金线蛭能够扩增得到149 bp的条带,混伪品不能扩增出明显目的条带。向扩增产物中加入SYBR Green I核酸染料染色,宽体金线蛭样品在紫外灯下显黄绿色荧光,混伪品不显荧光。[结论] 该方法能够准确快速鉴别宽体金线蛭与其常见混伪品,为中药材市场上宽体金线蛭的快速鉴别提供技术支持。