苓桂术甘汤对心梗后慢性心衰大鼠线粒体分裂-融合及Sirt3/AMPK信号通路的影响

目的 探讨苓桂术甘汤对心肌梗死（MI）后慢性心力衰竭（CHF）大鼠线粒体分裂-融合及沉默信息调节因子3（Sirt3）/单磷酸腺苷依赖的蛋白激酶（AMPK）信号通路的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组（生理盐水，仅穿线不结扎）、模型组（生理盐水，结扎冠状动脉左前降支近心端）、苓桂术甘汤组（4.2 g·kg^-1）、卡托普利组（0.002 57 g·kg^-1），每组10只，连续给药28 d。彩色多普勒超声成像仪检测大鼠心功能参数变化；苏木素-伊红（HE）染色观察心脏病理学改变；免疫荧光法检测活性氧（ROS）水平；JC-1法检测线粒体膜电位；比色法检测三磷酸腺苷（ATP）水平、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、线粒体呼吸链复合物活性（Ⅰ~Ⅳ）；原位末端标记法（TUNEL）染色检测心肌组织细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Sirt3、磷酸化（p）-AMPK、磷酸化动力相关蛋白1（p-Drp1）、线粒体分裂蛋白1（Fis1）、线粒体分裂因子（MFF）、视神经萎缩蛋白1（OPA1）蛋白表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）显著升高（P<0.01），左室短轴缩短率（LVFS）、左室射血分数（LVEF）显著降低（P<0.01）；心肌组织出现炎性细胞浸润，病理损伤明显，ROS、MDA水平与心肌细胞凋亡率显著升高（P<0.01），SOD水平、ATP含量、膜电位显著降低（P<0.01）；线粒体呼吸链复合物活性（Ⅰ~Ⅳ）显著降低（P<0.01）；p-Drp1、Fis1、MFF蛋白水平显著上调（P<0.01），Sirt3、p-AMPK、OPA1蛋白水平显著下调（P<0.01）。与模型组比较，苓桂术甘汤组与卡托普利组LVIDd和LVIDs显著降低（P<0.01），LVEF和LVFS显著升高（P<0.01），心肌组织炎性细胞浸润与病理损伤明显减轻，ROS、MDA水平与心肌细胞凋亡率显著降低（P<0.01），SOD水平、ATP含量、膜电位显著升高（P<0.01）；线粒体呼吸链复合物活性（Ⅰ~Ⅳ）显著升高（P<0.01）；p-Drp1、Fis1、MFF蛋白表达显著下调（P<0.01），Sirt3、p-AMPK、OPA1蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论 苓桂术甘汤可缓解心肌细胞氧化应激与细胞凋亡损伤，改善线粒体功能，其作用可能与线粒体分裂-融合、Sirt3/AMPK信号通路有关。     

乌头赤石脂丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤自噬及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响

目的 探究乌头赤石脂丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）自噬及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）信号通路的影响及其作用机制。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物组（曲美他嗪组）、乌头赤石脂丸低、中、高剂量组，每组10只。正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃，曲美他嗪组给予5.4 mg·kg^-1剂量灌胃，中药乌头赤石脂丸低、中、高剂量组分别给予1.63、4.9、14.7 g·kg^-1剂量灌胃。除正常组外，其他组均采用冠状动脉左前降支结扎法制备模型。心电图检测ST段以评价造模情况；苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织损伤情况；比色法测定天冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酸激酶（CK）含量，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肌钙蛋白T（cTnT）、肌红蛋白（MYO）含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测微管相关蛋白1轻链3（LC3）、自噬相关基因（Beclin-1）、PI3K、Akt、GSK-3β、磷酸化（p）-GSK-3β、p-Akt的蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组血清AST、CK、cTnT、MYO水平均明显升高（P<0.01），HE显示大鼠心肌细胞排列紊乱、细胞核散乱无序、心肌纤维扭曲断裂，LC3Ⅱ/Ⅰ及Beclin-1蛋白表达显著升高（P<0.01），PI3K、p-Akt及p-GSK-3β蛋白表达均显著降低（P<0.01）。与模型组比较，乌头赤石脂丸低、中、高剂量组与曲美他嗪组血清中AST、CK、cTnT、MYO活性均显著降低（P<0.01）；乌头赤石脂丸低、中、高剂量组与曲美他嗪组心肌细胞结构完整、坏死程度减轻、肌纤维排列整齐；乌头赤石脂丸低、中、高剂量组LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低（P<0.05，P<0.01），乌头赤石脂丸低、中、高剂量组及曲美他嗪组Beclin-1表达显著降低（P<0.01），乌头赤石脂丸低、中、高剂量组及曲美他嗪组PI3K、p-Akt及p-GSK-3β蛋白表达均显著增高（P<0.01）。与曲美他嗪组比较，乌头赤石脂丸低剂量组血清AST含量明显升高（P<0.05），乌头赤石脂丸高剂量组血清AST含量显著降低（P<0.01），乌头赤石脂丸中剂量组Beclin-1蛋白表达显著降低（P<0.01），乌头赤石脂丸中、高剂量组LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），乌头赤石脂丸低、中、高剂量组PI3K蛋白表达显著降低（P<0.01），乌头赤石脂丸低、中剂量组p-Akt蛋白表达显著升高（P<0.01），乌头赤石脂丸中剂量组p-GSK-3β蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 该研究表明，不同剂量的乌头赤石脂丸皆可干预MIRI，且低、中剂量效果低于高剂量组，高剂量效果最佳。乌头赤石脂丸可以降低心肌损伤标志物AST、CK、cTnT、MYO的水平，减轻心肌组织病理性损伤，下调Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达，上调PI3K、p-Akt及p-GSK-3β的表达，可能通过抑制过度自噬的发生，调控PI3K/Akt/GSK-3β信号通路，对MIRI大鼠起到保护作用。     

六味地黄丸对秀丽隐杆线虫AD模型线粒体损伤的保护作用

目的 探讨六味地黄丸提取物对秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）阿尔茨海默病（AD）模型线粒体损伤的保护作用。方法 使用转染人源β淀粉样蛋白（Aβ）_1-42基因的秀丽隐杆线虫为AD模型，实验设空白组、模型组、二甲双胍组（50 mmol·L^-1）及六味地黄丸低、中、高剂量组（1.04、2.08、4.16 g·kg^-1）。行为学方法观察线虫5-羟色胺（5-HT）的敏感性，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测线虫体内Aβ表达，腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）试剂盒检测线虫体内总ATP含量，线粒体膜电位检测试剂盒法（JC-1法）检测线粒体膜电位，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Aβ表达基因（Amy-1），超氧化物歧化酶-1（SOD-1）、线粒体转录因子A同源高迁移率族蛋白-5（HMG-5）、线粒体动力相关蛋白1（DRP1）、线粒体分裂蛋白1（FIS1）mRNA的表达。结果 六味地黄丸提取物能够降低AD模型线虫对外源5-HT的超敏感性（P<0.05），延缓AD模型线虫神经元中由于Aβ过度表达所引起的对外源性5-HT超敏感性的AD样病理特征；与空白组比较，模型组Aβ蛋白和Amy-1 mRNA的表达升高（P<0.01），SOD-1与HMG-5 mRNA表达下降（P<0.01），DRP1与FIS1 mRNA表达升高（P<0.01），线粒体膜电位水平下降（P<0.05），ATP含量下降（P<0.01）；与模型组比较，二甲双胍组、六味地黄丸中、高剂量组Aβ蛋白和Amy-1 mRNA的表达明显降低（P<0.05，P<0.01），SOD-1与HMG-5 mRNA表达显著升高（P<0.01），DRP1 mRNA表达降低（P<0.05，P<0.01），FIS1 mRNA表达降低（P<0.01），线粒体膜电位水平升高（P<0.01），ATP含量升高（P<0.05，P<0.01）。结论 六味地黄丸提取物可能通过增强线粒体抗氧化能力，保护线粒体DNA，减少线粒体分裂碎片化，修复受损的线粒体，回调线粒体膜电位，恢复神经元ATP水平，减轻Aβ沉积导致的神经元损伤。     

基于“方证对应”理论探讨主动脉弓缩窄致心力衰竭大鼠模型的中医证型与代谢标志物

目的 观察3种中药注射液对主动脉弓缩窄（TAC）致心力衰竭大鼠模型的疗效差异，基于“方证对应”理论探讨模型的中医证型，从代谢角度揭示方证的生物学基础。方法 对大鼠进行TAC术，造模成功将其后分为模型组、丹红注射液组（6.0 mL·kg^-1）、参麦注射液组（6.0 mL·kg^-1）、参附注射液组（6.0 mL·kg^-1）和曲美他嗪组（10 mg·kg^-1），另设立假手术组作对照。药物干预15 d后，对各组进行超声心动图、血清氨基末端脑钠肽前体（NT-proBNP）与心肌组织病理染色检测，对比疗效以遴选有效注射液；运用比色法检测有效注射液干预后的血清糖脂代谢指标，利用超高效液相色谱-质谱法观察心肌组织代谢产物与关联代谢通路。结果 与假手术组比较，模型组左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（FS）显著下降（P<0.01），左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）和NT-proBNP水平显著上升（P<0.01）。与模型组比较，丹红注射液组LVEF和FS显著上升（P<0.01），LVIDd、LVIDs、NT-proBNP水平明显下降（P<0.05，P<0.01）；参附注射液组的NT-proBNP水平明显下降（P<0.05）；参麦注射液组的LVIDd明显上升（P<0.05），NT-proBNP水平显著上升（P<0.01）；曲美他嗪组LVEF和FS显著上升（P<0.01），LVIDs和NT-proBNP水平明显下降（P<0.05，P<0.01）。丹红注射液组与曲美他嗪组的血清葡萄糖、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平明显回调（P<0.05，P<0.01）；丹红注射液组的9种心肌产物回调，涉及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢，乙醛酸和二羧酸酯代谢，甘油磷脂代谢；曲美他嗪组的10种心肌产物回调，涉及甘油磷脂代谢。结论 丹红注射液对TAC致心力衰竭模型的疗效显著且优于参附注射液与参麦注射液，推测该模型与心血瘀阻证密切关联；丹红注射液干预模型的生物学机制涉及调节糖脂代谢、氨基酸代谢、丁酸代谢紊乱。     

柴胡疏肝散对功能性消化不良大鼠胃组织线粒体功能及线粒体自噬的影响

目的 观察柴胡疏肝散对功能性消化不良（FD）模型大鼠胃动力、胃组织线粒体功能及线粒体自噬的影响,揭示柴胡疏肝散防治FD的作用机制。方法 将32只SPF级SD大鼠适应性喂养1周后随机分为正常组、模型组、柴胡疏肝散组（4.8 g·kg^-1）,多潘立酮组（4.5 mg·kg^-1）,每组8只。除正常组外,其余3组均采用改良夹尾刺激法复制FD大鼠模型。4周后,采用营养性半固体糊法观察FD大鼠胃排空率,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清柠檬酸合成酶（CS）,胃动素（MTL）,胃泌素（GAS）含量,苏木素-伊红（HE）染色观察胃组织病理变化,透射电镜观察线粒体特征,免疫荧光共定位法观察胃组织微管相关蛋白1轻链3（LC3）与电压依赖性阴离子通道蛋白1（VDAC1）表达,提取新鲜胃组织线粒体,生化试剂盒检测线粒体活性氧（ROS）,丙二醛（MDA）水平,超氧化物歧化酶（SOD）含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测线粒体LC3,自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）,p62蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠胃排空率显著降低（P<0.01）,血清CS,MTL,GAS含量显著降低（P<0.01）,HE染色可见各组大鼠胃组织未见糜烂、溃疡等病理改变,透射电镜观察胃组织线粒体肿胀、扩张,出现空泡病变,LC3和VDAC1免疫荧光共定位表达显著增加（P<0.01）,线粒体ROS,MDA含量显著升高（P<0.01）,SOD含量显著降低（P<0.01）,LC3,Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,p62蛋白表达水平明显下降（P<0.05）;与模型组比较,柴胡疏肝散组和多潘立酮组大鼠胃排空率均明显升高（P<0.05）,血清CS,MTL,GAS含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,透射电镜观察胃组织线粒体核膜完整,内部嵴形态清晰,嵴密度较高,部分存在线粒体分裂融合现象,LC3和VDAC1共定位表达显著减少（P<0.01）,线粒体ROS,MDA含量均明显降低（P<0.05,P<0.01）,SOD含量明显升高（P<0.05）,LC3,Beclin1蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,p62蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论 柴胡疏肝散防治FD的作用机制可能与改善胃组织线粒体功能、抑制线粒体自噬有关。     

抗纤益心方干预线粒体通透性转换孔抑制心肌细胞凋亡的机制

目的 探讨抗纤益心方通过调控线粒体通透性转换孔（mPTP）对心肌细胞凋亡的影响及相关作用机制。方法 H9c2心肌细胞常规培养，饥饿8 h后分为正常组，模型组，抗纤益心方（0.25 g·L^-1）组，环孢素A（10 μmol·L^-1）组，药物作用24 h用于后续实验。利用去甲肾上腺素（NE）诱导H9c2心肌细胞肥大模型，通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NE的最佳造模浓度，流式细胞仪检测mPTP的开放程度，同时检测mPTP开放后引起的凋亡相关因子Cyp-D，Cyt-C，Caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平，和线粒体膜电位的水平。结果 NE浓度在200 μmol·L^-1时心房钠尿肽（ANP），脑钠肽（BNP） mRNA的表达水平最高，此浓度作为诱导H9c2心机细胞肥大模型的最佳浓度，与正常组比较，模型组mPTP过度开放，线粒体内相对荧光强度减弱和线粒体膜电位降低（P<0.05，P<0.01）；凋亡相关因子Cyp-D，Cyt-C，Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）。与模型组比较，抗纤益心方组和环孢素A组mPTP开放受到抑制，线粒体相对荧光强度和线粒体膜电位升高（P<0.05，P<0.01）；Cyp-D，Cy-tC，Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低（P<0.05）。结论 抗纤益心方能够抑制心肌细胞凋亡，其作用机制可能是通过调控mPTP的开放，抑制相关凋亡因子Cyp-D，Cyt-C，Caspase-3的表达有关。     

酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠心肌线粒体能量代谢的影响

目的 从去乙酰化酶沉默信息调节因子3（SIRT3）/超氧化物歧化酶2（SOD2）信号通路研究酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠心肌线粒体能量代谢的作用机制。方法 将50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、舒乐安定组（0.18 mg·kg^-1·d^-1）、酸枣仁汤低、高剂量组（6.48,12.96 g·kg^-1·d^-1）,除正常组外,其余各组均皮下注射D-半乳糖,于末次给药后进行多平台水环境睡眠剥夺,造模结束后各组开始灌胃给药,连续给药7 d。采用透射电镜观察心脏线粒体形态,采用比色法检测大鼠下丘脑三磷酸腺苷（ATP）含量的变化,采用分光光度法检测大鼠心肌丙二醛（MDA）含量,SOD活性,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠心肌SIRT3,SOD2 mRNA和蛋白表达水平,采用免疫荧光染色法检测心肌SIRT3的定位表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠心肌组织肌丝排列紊乱,伴有肌丝断裂与溶解,线粒体肿胀明显,线粒体排列紊乱,多数线粒体嵴模糊甚至断裂,心肌ATP含量和SOD活性显著降低（P<0.01）,MDA含量显著升高（P<0.01）,SIRT3,SOD2 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.01）,SIRT3蛋白平均荧光强度显著降低（P<0.01）;与模型组比较,酸枣仁汤高剂量组肌丝排列较整齐,线粒体损伤减轻,仅见部分嵴断裂,肿胀程度亦相对较轻,大鼠心肌ATP含量和SOD活性显著升高（P<0.01）,MDA含量显著降低（P<0.01）,SIRT3,SOD2 mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）,SIRT3蛋白平均荧光强度明显升高（P<0.05）,舒乐安定组心肌线粒体损伤也具有一定的改善作用,大鼠心肌SOD活性显著升高（P<0.01）,MDA含量显著降低（P<0.01）,SIRT3,SOD2 mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）;酸枣仁汤低剂量组心肌线粒体损伤改善作用不明显,但大鼠心肌SOD活性显著升高（P<0.01）,SOD2蛋白表达明显升高（P<0.05）。结论 酸枣仁汤可以改善老年慢性快动眼睡眠剥夺诱导的心肌线粒体所伤以及能量代谢异常,其机制可能与上调SIRT3,SOD2表达增加有关。     

温心方对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体能量代谢的作用机制

目的 揭示温心方对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体能量代谢的改善作用及其对沉默信息调节因子1（SIRT1）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）/雌激素受体相关受体α（ERRα）能量信号通路的作用。方法 SPF级Wistar雄性大鼠90只，随机分为假手术组、模型组、温心方低、中、高剂量组；温心方低、中、高剂量组分别给予0.99、1.98、3.96 g·kg^-1的颗粒剂灌胃，假手术组和模型组均予以等体积生理盐水灌胃；预给药21 d后，模型组及温心方组采用冠状动脉左前降支结扎30 min，再灌注2 h复制大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）模型，假手术组只穿线，不结扎；TTC染色观察心肌梗死面积，苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织病理形态，试剂盒检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）活性、心肌组织ATP含量及线粒体复合体Ⅳ（CCO）、琥珀酸脱氢酶（SDH）活性，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、TFAM mRNA及蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组心肌纤维断裂，排列紊乱，细胞胞质水肿，细胞核出现固缩、偏移；CK-MB、LDH活性明显升高（P<0.05，P<0.01），ATP含量及CCO、SDH活性明显降低（P<0.05，P<0.01），心肌组织心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、mtTFA mRNA及蛋白表达均明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，温心方预处理各组心肌梗死面积显著缩小，且以高剂量组最显著（P<0.01），心肌组织病理形态有所改善，CK-MB、LDH活性明显降低（P<0.05，P<0.01），ATP含量及CCO、SDH活性均有提高，以高剂量组最显著（P<0.01），心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、TFAM mRNA及蛋白表达均有不同程度提高（P<0.05，P<0.01）。结论 温心方可通过调控SIRT1/PGC-1α/ERRα信号通路，改善心肌线粒体能量代谢，保护心肌缺血再灌注损伤。     

补阳还五汤防治2型糖尿病小鼠骨骼肌病变的作用

目的 基于线粒体转运、糖代谢、氧化应激及炎性介质探讨补阳还五汤防治2型糖尿病骨骼肌病变的作用。方法 选用60只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,高脂饲料联合链脲佐菌素腹腔注射构建2型糖尿病小鼠模型,按随机数字表法随机分组,其中正常组、补阳还五汤高、中、低剂量组、二甲双胍组、模型组各10只。补阳还五汤各剂量组及二甲双胍组灌喂剂量分别为86.5、43.2、21.6 g·kg^-1、150 mg·kg^-1;实验期间定期检测小鼠血糖等指标,实验结束后取骨骼肌,分别置于4%多聚甲醛-80 ℃冰箱冻存。进行血液样本送检,骨骼肌采用苏木素-伊红（HE）染色,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎症指标及活性氧（ROS）,蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫组化检测线粒体蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖、饮水量、进食量显著升高（P<0.01）,体质量显著降低（P<0.01）,与模型组比较,补阳还五汤组及二甲双胍组小鼠空腹血糖、进水量、进食量明显降低（P<0.05,P<0.01）,体质量上升（P<0.01）;与正常组比较,模型组TNF-α、IL-6、ROS显著增加（P<0.01）,与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各组TNF-α、IL-6、ROS均明显下降（P<0.05,P<0.01）。模型组骨骼肌肌纤维普遍萎缩性变细,提示骨骼肌萎缩,形态结构改变,而二甲双胍组及补阳还五汤各组小鼠骨骼肌病理状态有所减轻,纤维束形态部分恢复正常;与正常组比较,模型组线粒体融合蛋2（Mfn2）显著减少（P<0.01）,与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组Mfn2明显增多（P<0.05,P<0.01）;与正常组比较,模型组分裂蛋白Drp1显著增多（P<0.01）,与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组分裂蛋白1（Drp1）显著减少（P<0.01）。结论 补阳还五汤可以改善2型糖尿病骨骼肌病变小鼠的体质量及骨骼肌病理形态,降低空腹血糖、进食量、进水量、TNF-α、IL-6、ROS值及分裂蛋白Drp1,升高体质量及线粒体融合蛋白Mfn2。     

脑心安胶囊激活CREB/PGC-1α改善慢性脑缺血致VCI大鼠线粒体及氧化损伤的作用机制

目的 以慢性脑缺血致血管性认知障碍（VCI）大鼠为模型，探究脑心安胶囊对VCI大鼠脑组织线粒体功能障碍及其导致的氧化损伤的保护作用。方法 150只大鼠采用随机数字法分为造模组（130只）和假手术组（20只），以双侧颈动脉结扎法（2-VO）造模，制成慢性脑缺血大鼠模型。经筛选，将造模组中VCI造模成功的87只大鼠，随机分为模型组、阳性药组（安理申，0.5 mg·kg^-1），脑心安胶囊低、中、高剂量组（0.18、0.36、0.72 g·kg^-1），每组17~18只大鼠。经灌胃给予脑心安胶囊8周后，采用大鼠新物体识别和Y迷宫实验测定脑心安胶囊对VCI大鼠学习记忆和工作记忆的影响。以免疫荧光染色法测定大鼠脑组织8-氧鸟嘌呤（8-OxoG）含量，分光光度法测定大鼠脑组织线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的活性、线粒体的肿胀度、线粒体膜电位、丙酮酸脱氢酶（PDH）和α-酮戊二酸脱氢酶（KGDH）活性，电镜观察大鼠脑组织线粒体亚显微结构，蛋白免疫印迹法（Western blot）测定脑组织环磷腺苷酸反应元件结合蛋白（CREB）磷酸化水平和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α（PGC-1α）、核呼吸因子-1（NRF-1）和线粒体转录因子A（mt-TFA）蛋白表达水平，光化学法测定大鼠线粒体状态Ⅳ H₂O₂生成和脑内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠新物体辨别指数和Y迷宫自发交替反应率显著下降（P<0.01），脑组织ROS生成量明显增加（P<0.01），线粒体膜电位和肿胀度A值显著下降（P<0.01），线粒体明显肿胀，电镜观察显示脑组织线粒体出现显著的空泡、嵴断裂等亚显微结构结构损伤，CREB磷酸化水平和PGC-1α、NRF-1和mt-TFA蛋白表达水平均显著降低（P<0.01），脑组织中PDH、KGDH活性和线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性均明显下降（P<0.01），线粒体状态Ⅳ H₂O₂生成显著增加（P<0.01），MDA含量明显升高（P<0.01），SOD及GSH-Px活性均显著降低（P<0.01）。与模型组比较，脑心安胶囊各剂量均能够明显提高VCI大鼠新物体辨别指数（P<0.05，P<0.01）和自发交替反应率（P<0.05，P<0.01），减少脑组织ROS生成量（P<0.01），提高线粒体膜电位和肿胀度A值（P<0.05，P<0.01），减少线粒体肿胀程度和线粒体亚显微结构损伤，提高CREB磷酸化水平和上调PGC-1α、NRF-1和mt-TFA蛋白表达（P<0.05，P<0.01），提高PDH、KGDH和线粒体呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ的活性（P<0.01），降低线粒体状态Ⅳ H₂O₂生成量（P<0.01），降低MDA含量（P<0.05，P<0.01），提高SOD及GSH-Px活性（P<0.01）。结论 脑心安胶囊通过激活CREB/PGC-1α通路，保护线粒体结构、功能，提高机体抗氧化能力，抑制慢性脑缺血诱导的线粒体功能障碍及其氧化损伤，改善慢性脑缺血导致的大鼠血管性认知障碍。     

哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列分析

[目的]获取哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列。[方法]应用差速离心以及滚环扩增的方法得到纯度较高的线粒体DNA,采用Illumina HiSeq X Ten技术对扩增得到的哈氏蜈蚣线粒体DNA进行测序,采用从头组装和mapping近缘种的方法拼接组装线粒体基因组,应用MITOS在线注释及与近缘种进行本地注释等方法注释线粒体基因组。[结果]获得14 538 bp哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列。其共有20个tRNA及13个蛋白基因,2个rRNA(16S rRNA、12S rRNA)。[结论]获取哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列,并可用于药用蜈蚣的资源调查与保护研究。     

羟基红花黄色素A缓解大鼠心肌线粒体损伤的作用研究

 目的研究红花成分羟基红花黄色素A(HSYA)对大鼠心肌线粒体损伤的作用。方法采用低温离心法制备大鼠心肌线粒体;比浊法检测线粒体肿胀;荧光偏振法测量线粒体膜流动性;硫代巴比妥酸比色法观察线粒体脂质过氧化水平。结果HSYA可明显减轻离体大鼠心肌线粒体肿胀(P<0.05)、缓解线粒体膜流动性的下降(P<0.001)、抑制羟自由基诱导的线粒体脂质过氧化(P<0.001)。结论HSYA可减轻大鼠心肌线粒体的损伤。     

基于线粒体靶向机制的石蒜碱抗肝癌作用研究

目的研究石蒜碱诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及其机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测石蒜碱对HepG-2细胞的生长抑制作用;倒置显微镜、荧光显微镜观察HepG-2细胞凋亡形态;透射电镜观察HepG-2细胞超微结构;流式细胞术检测HepG-2细胞凋亡率;激光共聚焦扫描显微镜检测线粒体膜电位;激光共聚焦显微镜检测HepG-2细胞线粒体膜通透性转换孔(MPTP);酶标仪检测Caspase-3蛋白活性;Western blotting法检测细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cyt-C、Caspase-9的表达。结果石蒜碱对HepG-2细胞具有生长抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为5.73μmol/L;形态学观察发现石蒜碱作用48 h后,细胞生长密度变疏、皱缩,且细胞生长呈现不规则形状,出现凋亡小体,随着给药浓度升高,凋亡小体也逐渐增多;透射电镜下可见细胞出现典型的凋亡特征;与对照组比较,随着石蒜碱给药浓度的增加,细胞凋亡率随之升高,线粒体膜电位下降,MPTP开放;石蒜碱作用48 h后,HepG-2细胞内Caspase-3蛋白相对活性升高,细胞内Cyt-C蛋白、Caspase-9蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达量降低,Bax蛋白表达量升高,且呈浓度依赖性关系,与对照组比较,具有统计学意义;结论石蒜碱对HepG-2细胞具有生长抑制作用,并可通过启动线粒体途径诱导HepG-2细胞发生凋亡。     

Mild Mitochondrial Depolarization is Involved in a Neuroprotective Mechanism of Citrus sunki Peel Extract

Mitochondrial membrane potential (?Ψ_m) contributes to determining a driving force for calcium to enter the mitochondria. It has been demonstrated that even a small mitochondrial depolarization is sufficient to prevent mitochondrial calcium overload and the subsequent apoptosis. Therefore, mild mitochondrial depolarization has been recently evaluated as a novel mechanism of neuroprotection via inhibiting neurotoxic mitochondrial calcium overload during neuronal insults. In the present study, using both real‐time recording and flow cytometric analyses of ?Ψ_m, we demonstrated that ethanolic peel extract of Citrus sunki Hort. ex Tanaka (CPE) and its active compounds are capable of inducing a mild mitochondrial depolarization. Polymethoxylated flavones such as nobiletin and tangeretin were found as the active compounds responsible for CPE effects on ?Ψ_m. Neuronal viability was significantly increased in a dose‐dependent manner by CPE treatment in H₂O₂‐stimulated HT‐22 cells as an in vitro neuronal insult model. CPE treatment significantly inhibited H₂O₂‐induced apoptotic processes such as chromatin condensation, caspase 3 activation and anti‐poly (ADP‐ribose) polymerase (PARP) cleavage. CPE treatment significantly blocked mitochondrial calcium overload in H₂O₂‐stimulated HT‐22 neurons as indicated by rhod‐2 acetoxymethyl ester. Taken together, our findings suggest that CPE and its active compounds may be considered as promising neuroprotective agents via inducing a mild mitochondrial depolarization. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

中医药靶向调节线粒体动力学及相关蛋白SUMO化修饰防治脑缺血/再灌注损伤的研究进展

线粒体稳态失衡在脑缺血/再灌注损伤（cerebral ischemia/reperfusion injury,CI/RI）病理过程中扮演重要角色。线粒体分裂/融合的动态调节（线粒体动力学）作为线粒体质量控制（mitochondrial quality control,MQC）的关键环节，在CI/RI中维持线粒体稳态发挥重要作用。小泛素相关修饰物（small ubiquitin-related modifier,SUMO）修饰是一类存在于细胞内动态可逆的蛋白质翻译后修饰形式，通过对底物蛋白进行多步酶促反应以完成对靶蛋白的SUMO修饰和去SUMO修饰过程，进而影响底物蛋白的亚细胞定位、蛋白互作和稳定性，其普遍参与了蛋白转运、信号传导、DNA修复、炎症反应及氧化应激等病理生理过程。线粒体动力学及相关蛋白通过SUMO化修饰调控线粒体融合和分裂，进而调节线粒体稳态，在CI/RI进展与转归中发挥着关键作用。中药在防治缺血性脑病方面具有明显优势，综述了线粒体分裂/融合过程中相关蛋白的SUMO化修饰的调节机制，以及靶向调节线粒体动力学及相关蛋白SUMO化修饰防治CI/RI的中医药研究进展，以期为缺血性...     

不同脏腑虚损对慢性阻塞性肺疾病患者病情及线粒体功能的影响

目的：探讨不同脏腑虚损对慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者病情及线粒体功能的影响。方法：纳入161例COPD稳定期患者,记录病史按脏腑虚损标准对纳入病例进行中医辨证分型,检测患者肺通气功能,采用COPD评估测试量表（CAT）、呼吸困难量表（m MRC）对患者进行评分、进行6 min步行试验（6MWT）;采集患者外周血分离有核细胞用流式细胞术进行线粒体膜电位、细胞内活性氧（ROS）检测;采用SPASS21.0对数据进行统计分析。结果：161例COPD患者中辨证为肺气虚者36例,肺脾气虚者31例,肺肾气虚者50例,肺脾肾虚44例,其中104例完成了线粒体实验。COPD患者的病程在肺脾气虚组最长,肺气虚组最短,4组间差异不具显著性（P=0.503）;肺通气功能FVC%在4组间差异不具有显著性（P=0.265）;FEV1%在各组间差异具有显著性（P=0.025）;CAT 在各组间差异具有显著性（P=0.001）,6MWD 在4 组间差异不具显著性（P=0.057）,FEV1%、FVC%、6MWT均值在肺脾肾虚组最低,CAT均值在肺脾肾虚组最高。线粒体膜电位（MTP）在肺脾气虚组与肺气虚组、肺肾气虚组比较差异有显著性（P<0.05）;细胞内活性氧（ROS）在肺脾气虚组与肺气虚组、肺肾气虚组比较差异有显著性（P<0.01）;线粒体膜电位（MTP）在肺脾气虚组明显降低,细胞内活性氧（ROS）在肺脾气虚组明显升高。结论：COPD的防治应重视脏腑虚损在发病中的作用;COPD患者线粒体功能障碍与脾虚有关,推测补脾疗法可能改善线粒体功能障碍。     

单四氢呋喃型番荔枝内酯类化合物对大鼠线粒体复合酶I活性的影响

目的 探讨单四氢呋喃型番荔枝内酯类（单THF型ACGs）化合物对大鼠肝线粒体复合酶I活性的影响。方法 选用6个结构不同的单THF型ACGs,通过测定其对大鼠肝线粒体复合酶I的抑制活性,明确这些化合物结构中四氢呋喃环与内酯环之间碳数、取代羟基个数以及四氢呋喃环的核心构型对大鼠肝线粒体复合酶I活性的影响。 结果 6个单THF型ACGs对大鼠肝线粒体复合酶I均有一定的抑制活性,构效关系分析可见,在单THF型ACGs中,四氢呋喃环与内酯环间碳链越短,化合物活性越强,取代羟基个数并非是影响活性的决定性因素。结论 四氢呋喃环的核心构型为苏式/反式/赤式时比苏式/反式/苏式构型的抑制线粒体复合酶I的活性强。     

异丙酚预处理对Ca^2＋诱导大鼠心肌线粒体损伤的保护作用

目的探讨异丙酚预处理对Ca^2＋诱导大鼠心肌线粒体损伤的保护作用。方法健康Wistar大鼠35只，体重220g～235g，雌雄各半，断头处死迅速取出心脏制备线粒体悬液后，随机均分为5组，空白时照组（C组），CaCl2组加入CaCl2 100nmol／（mg·prot），不同浓度异丙酚组（P25组、P50组、P100组）分别加入不同终浓度异丙酚25μmol／L、50μmol／L、100μmol／L，5min后加入CaCl2 100nmol／（mg·prot）。分光光度法测540nm处吸光度的改变反映线粒体膜通透性转换（mitoehondrial permeability transition，MPT）的程度，以罗丹明123为荧光探针测定线粒体跨膜电位（mitochondrial transmembrane potential，△ψm）。结果与C组比较，其余各组线粒体膜MPT程度升高（P〈0．01），线粒体△ψm下降（P〈0．05或P〈0．01）。与CaCl2组比较，P25组、P50组和P100组线粒体膜MPT程度降低（P〈0．01），线粒体△ψm上升（P〈0．05或P〈0．01）。与P25组比较，P50组和P100组线粒体膜MPT程度降低（P〈0．01），线粒体△ψm上升（P〈0．05）。与P50组比较，P100组线粒体膜MPT程度降低（P〈0．01），而线粒体△ψm差异无统计学意义。结论异丙酚预处理可减轻Ca^2＋造成的线粒体膜MPT和△ψm的降低，对Ca^2＋诱导的大鼠心肌线粒体损伤产生保护作用。     

1,6-二磷酸果糖镁盐对大鼠实验性心肌线粒体损伤的治疗作用

 目的观察1,6-二磷酸果糖镁盐(FDP-Mg)对由异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌线粒体缺血性损伤的治疗作用。方法采用皮下多点注射Iso致大鼠心肌缺血损伤模型,静脉分别予FDP-Mg100mg·kg^-1及FDP-Na120mg·kg^-1和MgSO₄30mg·kg^-1进行治疗,观察心肌细胞及线粒体超微结构的变化,测定药物对缺血损伤的心肌细胞内的线粒体膜电位的影响及对线粒体肿胀的抑制率。同时利用黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶氧自由基发生系统和CuSO₄/细胞色素C羟自由基发生系统分别检测药物对超氧阴离子(O₂^-)和羟自由基(·OH)的清除率。结果FDP-Mg可以显著改善由Iso所诱导的线粒体膜电位异常改变,抑制线粒体肿胀。且对·OH和O₂^-有较高的清除率,与对照组相比有显著差异。电镜显示FDP-Mg对维持线粒体的正常形态有明显作用。结论FDP-Mg可有效保护由Iso所致的心肌细胞的线粒体实验性缺血损伤。     

芍药苷对糖尿病周围神经病变状态下线粒体输入途径蛋白TOM20的作用

目的 探究芍药苷对糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy,DPN）大鼠坐骨神经和高糖环境下雪旺细胞（Schwann cells,SCs）线粒体输入途径蛋白线粒体外膜转位酶20（translocase of outer mitochondrial membrane 20,TOM20）的影响。方法 以25、100、150 mmol/L葡萄糖分别干预RSC96雪旺细胞株12、24、48 h,用高内涵分析法检测TOM20和线粒体硫氧还蛋白2（mitochondrial thioredoxin 2,Trx2）的表达;设置对照组（给予25 mmol/L葡萄糖）、TOM20 siRNA组、TOM20 siRNA＋芍药苷24 h组和TOM20 siRNA＋芍药苷48 h组,转染TOM20 siRNA后给予10 mmol/L芍药苷分别干预24、48 h,利用Western blotting检测TOM20和Trx2蛋白表达;设置对照组（给予25 mmol/L葡萄糖）、高糖组（给予150 mmol/L葡萄糖）和芍药苷组（给予150 mmol/L葡萄糖和10 mmol/L芍药苷）,利用高内涵分析法检测TOM20和Trx2蛋白表达。制备DPN大鼠模型,给予白芍总苷后,利用免疫荧光法检测大鼠坐骨神经中TOM20和Trx2蛋白表达。结果 高内涵分析结果显示,150 mmol/L葡萄糖干预12、24 h后,TOM20和Trx2蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05、0.01）,且2种蛋白的表达变化存在相关性。与对照组比较,高糖组TOM20和Trx2蛋白表达均显著降低（P＜0.01）;与高糖组比较,芍药苷组TOM20和Trx2蛋白表达均显著升高（P＜0.01）。Western blotting结果显示,与对照组比较,TOM20 siRNA组TOM20和Trx2蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05、0.01）;与TOM20 siRNA组比较,芍药苷干预24、48 h后TOM20和Trx2蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05、0.01）。与对照组比较,模型组大鼠坐骨神经中TOM20和Trx2蛋白表达均显著降低（P＜0.01）;与模型组比较,白芍总苷组TOM20和Trx2蛋白表达均显著升高（P＜0.01）。结论 芍药苷能够通过上调SCs以及大鼠坐骨神经中TOM20蛋白的表达,促进Trx2蛋白的线粒体输入,从而有效对抗线粒体氧化应激干预DPN。