套式聚合酶链反应结合直接荧光法检测女性生殖道沙眼衣原体

目的 建立一种敏感，特异，快速诊断女性生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）感染的方法，方法 应用套式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）技术和直接荧光（ＤＦＡ）法检测女性生殖道沙眼衣原体。对两者结果不符的标本用细胞培养验证。结果 ３００份受检标本，ＤＦＡ法阳性７１份，阴性２２９份，ＮＰＣＲ法阳性９０份，阴性２１０份，其中ＮＰＣＲ和ＤＦＡ均为阳性者６８份，另有２２份ＮＰＣＲ阳性，而ＤＦＡ为阴性，再经细胞培养证实系阳性，但另     

聚合酶链反应结合反向杂交技术快速检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染

沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis,Ct）是性传播疾病的主要病原微生物,因此敏感特异、简便快速的Ct检测方法对于该病的早期诊断和治疗尤为重要。为探索快速可靠的诊断方法,我们在原核生物16SrRNA基因保守区内设计细菌的通用引物,在16SrRNA基因可变区内设计Ct特异性探针,用聚合酶链反应（PCR）结合反向杂交技术检测尿道炎患者Ct感染,并与细胞培养法相比较,取得了较好的结果。     

聚合酶链反应结合反向杂交技术快速检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染

沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis,C t)是性传播疾病的主要病原微生物,因此敏感特异、简便快速的C t检测方法对于该病的早期诊断和治疗尤为重要。为探索快速可靠的诊断方法,我们在原核生物16S rRNA基因保守区内设计细菌的通用引物,在16S rRNA基因可变区内设计C t特异性探针,用聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交技术检测尿道炎患者C t感染,并与细胞培养法相比较,取得了较好的结果。一、材料和方法1.临床资料病例来源于青岛市中心医院,共146例,其中男96例,女50例,年龄19~50岁。患者具有不同程度的尿道瘙痒、蚁行感、尿频、尿痛等较典型的…     

荧光定量聚合酶链反应检测沙眼衣原体感染的初步应用

泌尿生殖道沙[衣原体(Chlam ydia trachom atis,Ct)感染是我国目前最常见的性传播疾病之一,并可引起宫颈炎、尿道炎、盆腔炎、异位妊娠、输卵管不孕症及早产等[1]。细胞培养分离Ct是传统的实验室诊断“金标准”,但鉴于该方法操作烦琐,约需1周才能报告结果,故未能在临床普遍应用     

聚合酶链反应检测泌尿生殖道沙眼衣原体和解脲支原体

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对７２例妇产科，泌尿科门诊患者的尿道或宫颈分泌物进行了沙眼衣原体（ＣＴ），和解脲支原体（ＵＵ）的检测。共检出ＣＴ和ＵＵ阳性者２９例，ＣＴ的阳性检出率明显高于女性，而ＵＵ阳性检出率女性高于男性，与国内外报告基本一致。妇产科，泌尿科门诊患者中均有性传播疾病中应引起高度重视。     

取材部位对PCR检测沙眼衣原体结果的影响

取材部位对ＰＣＲ检测沙眼衣原体结果的影响张清杰，唐荣祥，明文玉，梁国杰，朱云燕，何遥，曹志明，黄欣关键词聚合酶链反应，沙眼衣原体，性病目前检测沙眼衣原体主要依靠沙眼衣原体单克隆免疫荧光直接涂片法和培养法，并且以培养法作为检测沙眼衣原体的“金标准”。近...     

万倍光电显微镜检测生殖道沙眼衣原体感染的评价

目的评价万倍光电显微镜在生殖道沙眼衣原体感染诊断中的应用价值。方法性病患者113例分泌物标本分别做万倍光电显微镜检测、PCR检测、衣原体培养,比较检测结果。结果万倍光电显微镜对泌尿生殖道感染患者中沙眼衣原体感染检出率与PCR检测和培养法的检出率比较差异无显著性(P>0.05),并能快速反映治疗效果。结论应用万倍光电显微镜可直接检测沙眼衣原体,诊断快速、直观、准确,并可用于疗效判断。     

沙眼衣原体聚合酶链反应检测研究进展

沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis, CT）是重要的性传播疾病的病原体之一，它不仅会导致阴道、尿道感染；上行的生殖道感染还可能累及子宫内膜、输卵管和邻近的盆腔结构，也能导致盆腔炎、输卵管损伤直至不孕。此外，此种病原体还与人乳头瘤病毒（HPV）和人类免疫缺陷病毒（HIV）的感染有关。由于相当一部分感染者为无症状携带者，因此需要建立高度敏感的实验室诊断方法控制该疾病的传播。作为CT检测“金标准”的细胞培养方法操作复杂、技术要求高，且所用时间较长无法进行快速检测，某种程度上限制了其在临床诊断实验室的应用。聚合酶链反应（PCR）技术具有耗时少、扩增效率高、特异性强的特点，显示出了其在CT感染临床诊断中的优越性。但是由于受核酸突变、扩增抑制物的影响，以及核酸提取效率等方面的差异尚存在检测效率降低甚至漏检的问题，而且由于其仍能检测出已经死亡的病原体，所以尚不能作为临床治疗效果的评价方法。     

泌尿生殖道沙眼衣原体慢性复发性感染探讨

沙眼衣原体（CT）是一种细胞内寄生菌，它的感染形态是原体（EB）。沙眼衣原体在泌尿生殖道可通过性传播途径引起人类感染，在男性主要表现为非淋菌性尿道炎、前列腺炎、附睾炎、直肠炎等；在女性主要表现为子宫颈炎、输卵管炎、异位妊娠、不孕症等疾病。1对象和方法1．1对象2004—01～2005—09来我院妇科及性病科就诊疑似性病患者656例，男358例，女298例，年龄17～56岁。初诊阳性者嘱其用药1个月后第1次复诊检测沙眼衣原体DNA，3个月后第2次复诊检测沙眼衣原体DNA。正常人对照组116例，男45例，女71例，年龄20～48岁，来自健康体检人员。     

用尿液标本连接酶链反应诊断泌尿生殖道沙眼衣原体感染研究进展

连接酶链反应（LCR）是一种新的基因扩增技术,应用两对引物对靶基因进行扩增,可用于淋球菌、沙眼衣原体、人类乳头瘤病毒等多种病原体检测,也适用于尿道拭子和尿液等多种标本。本文综述了LCR的原理,及其以尿液作为检测标本时的标本收集和处理,在沙眼衣原体诊断中的应用和影响因素。     

半巢式聚合酶链反应-微孔板杂交法检测沙眼衣原体

目的 建立半巢式聚合酶链反应－微孔板杂交法（半巢式ＰＣＲ－ＭＰＨ）检测泌尿生殖道沙眼衣原体（Ｃｔ）,方法 分别用质粒和主要外膜蛋白基因引物进行扩增。将下游引物用生物素标记,经半巢式ＰＣＲ扩增Ｃｔ主要外膜蛋白基因后,扩增产物被包被有链霉亲和素的微孔板捕获,经碱变性后与标有荧光素的特异性探针进行杂交。然后通过辣根酶标记的抗荧光素抗体与杂交分子反应,经过酶底物显色,通过测定吸光度来判断结果。结果 主要外     

沙眼衣原体聚合酶链反应测定质控物的构建及其应用研究

目的 研制能够模拟真实临床样本且无生物传染危险性的沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)PCR检测质摔物,并进行稳定性研究.方法 在充分查阅文献的基础上,明确国内外已有文献报道的CT:PCR检测的靶序列,选择最普遍应用的CT质粒序列,采用重叠(overlap)PCR、分子克隆等技术构建含有所选择的常用检测目的 CT质粒序列的重组真核表达载体,即pTARGETTM-CT 质粒.然后,将载体以脂质体转染的方式转染入宫颈上皮细胞(HTB-SiHa细胞)中,收集细胞,经含20%小牛血清的细胞培养液稀释,即成为能模拟CT检测临床样本的细胞质控物.最后观察得到的质控物对目前国内常用商品试剂盒的适用性及在4℃、37℃及室温条件下的稳定性.结果 成功构建了含CT质粒(178-610)、(1219-1993)、(2471-3260)、(5239-5864)、(6722-7499)等5个片段的重组真核表达载体,并转入HTB-SiHa细胞中,得到了可模拟临床样本的CT PCR检测的质控物.采用深圳匹基生物工程有限公司、中山大学达安基因股份有限公司商品CT PCR检测试剂盒对转染后样本进行检测,得到阳性结果;定量为3.21×108拷贝/ml;倍比稀释后较高浓度样本检测结果呈梯度下降、10倍稀释循环阈值相差约3.3;对不同浓度稀释后在4℃、37℃及室温条件下保存1个月的样本的检测结果进行随机区组的两因素方差分析后发现,在各温度下保存的样本经检测后的结果问差异无统计学意义,所构建的质控样本至少可以稳定保存1个月.结论 利用重叠PCR与双酶切的方法,建立了一种将多间隔片段连接并构建入同一载体的简便有效的方法.成功地得到了可模拟临床标本的CT PCR检测质控物.     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体和解脲脲原体

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１５６例非淋病性尿道炎（ＮＧＵ）和１２８例淋病性尿道炎（ＧＵ）患者进行沙眼衣原体（Ｃｔ）和解脲脲原体（Ｕｎ）检测，其中ＮＧＵ中Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为２６．３％、１７．９％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率为７．７％；ＧＵ患者Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为４３．８％、３３．６％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率的为１６．４％。     

多重聚合酶链反应检测生殖支原体感染

目的建立一种敏感快速的多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）用于检测生殖支原体（Ｍｇ）。方法性病门诊患者５１１例，正常对照５６人。分泌物（女性为宫颈、男性为尿道拭子）标本用ＮＰ－４０裂解液一步法制备模板ＤＮＡ。设计Ｍｇ种属特异性引物及功能性结蛋白基因引物，先进行标准株的特异性与敏感性试验，然后进行临床标本的ＰＣＲ扩增反应。结果两对引物有良好的特异性，对Ｍｇ标准株模板敏感性可达１０－６μｇ。临床标本检测，广东地区２６１例性病门诊患者的Ｍｇ－ＤＮＡ阳性率（５４／２６１，２０．７％）高于上海（９／８４，１０．７％）、常州（８／７０，１１．４％）及南京地区（１１／９６，１１．５％；χ２＝１６．１，Ｐ＜０．０１），后三者的感染率互相间比较，差异无显著性（χ２＝０．０５６，Ｐ＞０．０５）。性病门诊患者５１１例的Ｍｇ－ＤＮＡ总阳性率（８２／５１１，１６．１％）与５６例正常对照者（１／５６，１．８％）比较，差异有非常显著性（χ２＝７．８８２，Ｐ＜０．０１）。结论建立的ＰＣＲ技术检测Ｍｇ具有敏感、快速、特异的特点，是一种可靠的实验诊断手段。     

套式PCR法检测外周血肺炎衣原体DNA

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)中肺炎衣原体(Cpn)DNA的检测方法.方法用淋巴细胞分层法和低渗溶血法提取PBMC.设计2对引物用套式PCR(nPCR)法测定150例冠心病患者(冠心病组)外周血PBMC中Cpn-DNA.同期临床55例非冠心病患者作对照组.结果冠心病患者肺炎衣原体DNA阳性率32.7%,对照组阳性率为1.8%,两组差异显著(P＜0.001),OR 26.2,95%CI 3.52～194.98.冠心病组中无症状组阳性率为29.1%,不稳定型心绞痛组阳性率为39.6%,急性心肌梗死组阳性率为29.9%,各亚组间差异不显著(P＞0.05).结论用nPCR法检测PBMC中Cpn-DNA,可为临床Cpn感染的诊断提供依据.     

套式聚合酶链反应检测巨细胞病毒的初步研究

目的建立套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）加限制性酶切分析方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）。方法在ＨＣＭＶ直接早期蛋白ＥｃｏＲＩＪＤＮＡ片段内，自行设计两对引物，建立套式ＰＣＲ检测ＨＣＭＶＤＮＡ，同时结合病毒分离检测临床标本。结果２３例新生儿肝炎综合征患儿中，１０例病毒分离及套式ＰＣＲ均阳性；１例病毒分离阴性，但套式ＰＣＲ阳性。对５８例妊娠早期孕妇血标本进行检测，套式ＰＣＲ阳性率为９％，病毒分离阳性率则为７％。结论套式ＰＣＲ加限制性酶切分析是一种临床检测ＨＣＭＶ的快速有效手段，值得临床推广。     

连接酶链反应与培养法检测沙眼衣原体的比较

目的 比较连接酶链反应（ＬＣＲ）与培养法检测沙眼衣原体（ＣＴ）在泌尿生殖道感染中的临床意义。方法 应用ＬＣＲ对４０２份门诊患者的尿标本进行ＣＴ检测,其中２２６份取尿道拭子（男）或宫颈拭子（女）同时用培养法和ＬＣＲ检测ＣＴ,对两种方法的检测结果进行了比较分析。结果 ＬＣＲ法检测４０２份尿标本,ＣＴ阳性率为２８．３％（１１４／４０２）,２２６份拭子标本用ＬＣＲ法检测,阳性率为２７．０％（６１／２２６）     

6932例患者泌尿生殖道沙眼衣原体与淋病奈瑟菌感染调查分析

目的了解泉州地区人群泌尿生殖道沙眼衣原体(CT)和淋病奈瑟菌(NG)临床感染现状,为临床诊断治疗提供参考。方法选取2019年9月至2020年3月在该院泌尿科、妇产科、皮肤性病科就诊的患者6932例,其中男性患者1320例,女性患者5612例。采用荧光定量聚合酶链反应检测患者泌尿生殖道的CT和NG。结果6932例患者CT和NG阳性率分别为8.98%和6.85%,二者同时检出患者达1.60%。男性患者CT和NG阳性率分别为3.48%和4.95%,二者同时检出患者占1.11%;女性患者CT和NG阳性率分别为5.50%和1.90%,二者同时检出患者占0.49%。男性NG感染率(4.95%)显著高于女性(1.90%),差异有统计学意义(P<0.05);而男性CT感染率(3.48%)低于女性(5.50%),差异有统计学意义(P<0.05)。从年龄分布来看,以20~30岁年龄段2种病原体感染率最高。结论泉州地区泌尿生殖道CT、NG感染率不尽相同,该地区男性患者NG感染率高于女性,而女性患者CT感染率高于男性,CT、NG同时感染在男性患者中较为常见,20~30岁年龄段感染率最高,应该加强监测。     

巢式甲基化特异性聚合酶链反应在p16基因启动子过甲基化检测中的应用

目的　介绍巢式甲基化特异性聚合酶链反应 (nMSP)法 ,探讨了最佳PCR扩增条件 ,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态。方法　将基因组DNA变性成为单链 ,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA ,将所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶 ,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因特异引物 ,进行巢式聚合酶链反应扩增 ,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果　在 3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子甲基化。用甲基化特异性聚合酶链反应法 (MSP)和nMSP法分别检测 34例非小细胞肺癌 (NSCLC)患者血清 ,p16基因启动子甲基化阳性率分别为 5 3% (18/34)和 74 % (2 5 /34) ,nMSP法具有更高的灵敏度。结论　筑巢式甲基化特异性聚合酶链反应是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法 ,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析。     

产志贺样毒素大肠埃希菌的分子生物学鉴定

目的　探讨产志贺样毒素大肠埃希菌（ Ｓ Ｌ Ｔ Ｅ Ｃ） 在小儿腹泻中的病原学地位。方法　根据肠出血性大肠埃希菌（ Ｅ Ｈ Ｅ Ｃ） Ｏ１５７ ： Ｈ７ 的 Ｓ Ｌ Ｔ１ 、 Ｓ Ｌ Ｔ２ 、ｅａｅ Ａ 基因片段设计了３ 对引物,采用聚合酶链反应检测大肠埃希菌中 Ｓ Ｌ Ｔ１ 、 Ｓ Ｌ Ｔ２ 和ｅａｅ Ａ 毒力基因。结果　２９ 株标准致泻大肠埃希菌（ Ｅ Ｈ Ｅ Ｃ、 Ｅ Ｐ Ｅ Ｃ、 Ｅ Ｔ Ｅ Ｃ） 和１０ 株其他肠道病原菌中,只有１ 株 Ｅ Ｈ Ｅ Ｃ检出 Ｓ Ｌ Ｔ１ 、 Ｓ Ｌ Ｔ２ 、ｅａｅ Ａ 毒力基因,其他均为阴性。从１ ０３２ 例腹泻患儿粪便中分离的４７４ 株未定型大肠埃希菌中,检出 Ｓ Ｌ Ｔ１ ２０ 株（４２ ％ ） , Ｓ Ｌ Ｔ２ ７ 株（１５ ％ ） ;７４ 株肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希菌（ Ｅ Ｓ Ｉ Ｅ Ｃ） 中检出 Ｓ Ｌ Ｔ１ １５ 株（２０３ ％ ） , Ｓ Ｌ Ｔ２ ５株（６８ ％ ） 。结论　 Ｓ Ｌ Ｔ Ｅ Ｃ 是太原地区引起小儿腹泻的一种重要的致泻病原菌。