修复外周神经损伤性缺损的组织工程化神经移植物实验研究取得重要进展

患者男，25岁，于2003年7月15日因左手示、中、环小指被机器压伤2h入院。检查左手示指和中指近、中段完全离断；左环指、小指中、末节完全离断；小指末节少许皮肤相连，离断指挫伤严重，急诊在臂丛麻醉下行断指再植术。     

去细胞异体神经和碱性成纤维细胞生长因子修复神经缺损

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对去细胞异体神经修复神经缺损的促进作用。　方法　根据bFGF因子用药浓度分为 10 0 0、5 0 0、2 5 0和 10 0U/ml与盐水对照组每组 5只日本大耳白兔。采用抗神经微丝免疫组化染色观察各组神经纤维再生的距离 ,抗S 10 0免疫组化染色观察许旺细胞的分布。研究不同浓度和剂量的外源性bFGF对去细胞支架移植后早期神经再生的影响。　结果　高浓度bFGF组 (10 0 0U/ml和 5 0 0U/ml)的神经再生距离在术后 10d明显大于盐水对照组 ,(P <0 0 1)。而低浓度bFGF组 (2 5 0U/ml和 10 0U/ml)与盐水对照组无明显差别 (P >0 0 5 )。　结论　去细胞异体神经移植后早期应用一定浓度和剂量的bFGF能明显提高再生轴突在支架内的生长速度。     

经诱导的骨髓基质干细胞应用于组织工程化人工神经的实验研究

目的 探讨骨髓基质干细胞应用于组织工程化人工神经修复大鼠10mm长坐骨神经缺损的效果。方法 28只体重在160～200g的雌性F344大鼠随机分成4组，每组7只。A组：种植经诱导5d后的同源骨髓基质干细胞并具有内部支架结构的中空管；B组：种植同源许旺细胞并具有内部支架结构的中空管；C组：无细胞只具有内部支架结构的中空管；D组：自体神经移植组。术后3个月，进行系列神经电生理监测、坐骨神经功能指数测定、神经组织学观察、S—100及神经微丝蛋白兔疫组化染色和轴突计数等检查。结果 术后12周内，实验组(A组)的各项检测指标均优于C组(P＜0．05或0．01)，与B和D组间差异无显著性(P＞0．05)。结论 初步结果显示经诱导的骨髓基质干细胞可作为外周神经组织工程中的种子细胞，并应用于人工神经修复外周神经缺损。     

用去细胞同种异体神经构建猕猴组织工程化神经的实验研究

目的评价用自体源骨髓间充质干细胞(MSCs)或许旺细胞(SCs)作种子细胞,与去细胞同种异体神经构建的组织工程化外周神经修复猕猴尺神经4cm缺损的实验效果,为临床研究提供资料。方法分别用4种移植物桥接猕猴4cm尺神经缺损。A组:种植自体MSCs的去细胞同种异体神经;B组:种植自体SCs的去细胞同种异体神经;C组:去细胞同种异体神经;D组:自体神经移植。通过功能学、神经电生理学及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果A、B组术后6个月能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组相比无统计学意义(P>0.05);但A、B、C、D组分别与C组相比,差异有统计学意义(P>0.05)。结论用自体源SCs或MSCs作种子细胞,与去细胞同种异体神经构建的组织工程化外周神经修复猕猴4cm尺神经缺损,均能取得与自体神经移植相近的效果。     

新型组织工程化神经导管修复大鼠周围神经缺损

目的观察丝素/胶原蛋白支架联合许旺细胞(SCs)/脂肪源性干细胞(ADSCs)共培养所构建的新型组织工程化神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验效果。方法2015年2月至2016年8月,分别体外分离、培养及纯化SD大鼠SCs和ADSCs,并将SCs与ADSCs按照2∶1的比例和丝素/胶原蛋白支架共培养,来构建新型组织工程化神经导管,用于修复大鼠坐骨神经10mm缺损。实验随机分为4组:单纯丝素/胶原支架移植组(Scaffold组)、组织工程化神经导管移植组(TENC组)、自体神经移植组(Autograft组)、未手术对照组(Normal组),每组10只大鼠。采用Instron5865力学试验机测试导管的力学性能,扫描电镜(SEM)观察导管内部空间结构及细胞的生长增殖情况,术后12周分别行电生理学及形态分析学等一系列检查评估神经再生情况,并采用单因素方差分析(one-wayANOVA)进行数据分析,如果组间差异有统计学意义,则进一步采用Turkey法进行两两比较,P<0.05为差异有统计学意义。结果扫描电镜观察可见导管内部相通性良好,在三维的孔隙中及表面上有许多神经元样细胞生长并伸出长突起,细胞生长状况佳。力学试验机测试显示导管最大和平均弹性模量分别为(10.80±0.30)MPa、(8.14±0.20)MPa。根据再生神经大体观察、电生理学检查及形态学结果统计分析可得,各组实验动物都不同程度上实现缺损神经的修复再通。但从实验动物神经修复效果来讲,TENC组和Autograft组都较为相似,差异无统计学意义(P>0.05),但都优于Scaffold组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丝素/胶原蛋白支架联合SCs/ADSCs共培养所构建的新型组织工程化神经导管具备初步生物神经样结构,且对大鼠坐骨神经缺损的再生修复具有良好的桥接及促进神经生长作用。     

碱性成纤维细胞生长因子促进外周神经端侧吻合后功能恢复的实验研究

国内外学者通过动物实验已证实 :外周神经端侧吻合后可侧枝发芽使变性的神经再神经化并获得部分生理功能[1,2 ] 。近年来 ,已有人将端侧吻合试用于临床 ,并取得了一定的结果 ,但手术的效果是有限的[3,4] 。为了更好地发挥端侧吻合的效果 ,最大程度恢复神经功能 ,我们设计了本实验。材　料　与　方　法一、动物与分组Ｗｉｓｔａｒ雌性大白鼠 2 6只 ,体重 15 0～ 180ｇ。于右股后外侧手术 ,显露坐骨神经及腓总神经 ,在腓总神经分支以下 5ｍｍ处切断 ,近端结扎并反转缝于邻近肌肉上。然后 ,在胫神经干外膜上开一直径约 1ｍｍ的小窗 ,将腓总神经…     

基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原对培养许旺细胞贴壁及增殖的作用

目的：了解基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶对体外培养条件下许旺细胞的贴壁及增殖作用的影响。方法：用基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原包被培养板，以结合了相应抗体的培养板及包被Ⅰ型胶原和多聚赖氨酸的培养板为对照，将培养的许旺细胞以相同浓度加入各组培养板内。测定2、6、24h细胞贴壁率，培养72h进行^3H-TdR掺入试验，双道液体闪烁计数器测定各组的放射性计数。结果：基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原组早期贴壁率较Ⅰ型胶原和多聚赖氨酸组高，抗基膜黏连蛋白和抗Ⅳ型胶原且贴壁率较低。基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原组^3H-TdR掺入量高于其它组。结论：基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原对体外培养条件下的许旺细胞贴壁及增殖有促进作用。     

脂质体转染碱性成纤维细胞生长因子-mRNA的反义寡核苷酸对大鼠前列腺组织的影响

目的探讨脂质体介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的反义寡核苷酸(ASODN)对大鼠前列腺组织的影响。方法将45只SD大鼠随机分为反义组、正义组和对照组,向大鼠前列腺组织中分别注入人工合成的bFGFmRNA的反义寡核苷酸脂质体,正义寡核苷酸脂质体和无药脂质体,分别在术后第4、7、14天取出大鼠前列腺,测大鼠前列腺重量及前列腺指数,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测大鼠前列腺组织中bFGFmRNA的表达,免疫组织化学染色结合计算机图像分析对大鼠前列腺组织中bFGF和增殖细胞核抗原(PCNA)表达进行定量分析。结果将拟给药物注入大鼠前列腺内后7d,正义组大鼠前列腺指数(2.03±0.17)和对照组大鼠前列腺指数(2.02±0.18)相比差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于反义组大鼠前列腺指数(1.62±0.05,P<0.01),正义组bFGFmRNA表达水平(0.5894±0.0245)和对照组bFGFmRNA表达水平(0.6442±0.0569)相比差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于反义组bFGFmRNA表达水平(0.2658±0.0337,P<0.01)。正义组和对照组大鼠前列腺组织中bFGF表达和PCNA指数相比差异无统计学意义(P>0.05),而反义组大鼠前列腺组织中bFGF表达和PCNA指数则显著低于正义组和对照组(P<0.01),且有随时间推移而逐渐下降的趋势。结论脂质体转染bFGFmRNAASODN对     

组织工程化人工神经研究

利用各种神经导管可成功桥接修复短段周围神经缺损已为许多学者公认。但是,这些神经导管由于缺乏许旺细胞或内部支架来支持、促进神经再生轴突长距离生长,因此不能有效修复长段周围神经缺损。应用组织工程技术构建神经导管,为修复长段周围神经缺损提供了新的方法和思路。这项研究的核心是模拟周围神经天然结构,将许旺细胞与生物支     

早期应用神经营养因子对周围神经损伤修复的研究观察

[目的]研究探索神经生长因子(nervegrowth factor NGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor bFGF)联用对大鼠坐骨神经钳夹损伤后神经纤维再生修复的促进作用和对失神经支配的小腿三头肌的保护作用。[方法]手术钳夹损伤坐骨神经后，损伤处神经内注射NGF和bFGF，对照组注射等量生理盐水，术后每日在术侧腓肠肌内注射药物，术后4、8、12周，进行足印分析及坐骨神经功能指数测定，取小腿三头肌称湿重，取脊髓及神经肌肉行组织病理观察。[结果]联用NGF bFGF，能显著改善神经损伤后引起的神经功能指数，有效地减轻由于失神经支配后肌肉的萎缩，促进神经纤维的修复与再生。[结论]联用NGF、bFGF对大鼠坐骨神经钳夹损伤后神经纤维再生修复具有显著的促进作用，可减轻失神经支配的小腿三头肌的萎缩。     

Effect of topically applied basic fibroblast growth factor on injured cochlear nerve

OBJECTIVE: Trauma-induced hearing loss after cerebellopontine angle manipulation has been regarded as having a hopeless natural course once it occurs. To challenge such a pessimistic view, we investigated whether pharmacological interventions with basic fibroblast growth factor (bFGF) could ameliorate trauma-induced cochlear nerve degeneration. METHODS: The cerebellopontine angle portion of the cochlear nerve of rats was quantitatively compressed, and bFGF was topically administered for 2 weeks with a bFGF-soaked absorbable sponge and an osmotic minipump. The animals were killed 2 weeks after the compression procedure. The effect of bFGF in ameliorating cochlear neuronal death was evaluated from the residual number of spiral ganglion cells. RESULTS: Cerebellopontine angle cisternal application of bFGF ameliorated cochlear nerve degeneration after the compression. Immunocytochemical studies of FGF receptors indicated that topically administered bFGF was internalized by a receptor-mediated mechanism through FGF receptor-1 and/or FGF receptor-2. CONCLUSION: This report demonstrated that therapeutic application of bFGF was feasible to ameliorate trauma-induced cochlear nerve degeneration. Recent technological advances for deafened ears, such as cochlear implants and auditory brainstem implants, in combination with neurotrophic and/or growth factor therapeutic intervention, would be of great potential benefit for patients with hearing loss.     

碱性成纤维细胞生长因子在周围神经损伤局部的基因表达与细胞 …

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ在周围神经损伤后的局部表达规律及细胞定位。方法 ６０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为正常组（４只）、对照组和实验组（各２８只）。用改良持针器钳夹大鼠坐骨神经制成神经挤压伤模型,分别于术后４ｈ、１、３、７、１４、２１、２８ｄ处死大鼠,切取包括挤压伤及其上下各２ｍｍ的神经段,应用引物原位标记技术（ｐｒｉｍｅｄ     

重组牛碱性成纤维细胞生长因子对手术创口愈合的影响

目的 研究重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rbFGF）对促进手术创口愈合的影响。方法 对72例术中应用rbFGF及空白对照组的创口愈合情况进行观察，计算创口愈合所需时间，并经统计处理。结果 实验组创口甲级愈合率明显高于对照组，且愈合时间明显较对照组缩短。结论 术中使用rbFGF可以提高创口甲级愈合率，缩短手术切口愈合时间。     

Effect of FK506 and basic fibroblast growth factor on nerve regeneration using a polytetrafluoroethylene chamber for nerve repair

Peripheral nerve repair can be accomplished by using a polytetrafluoroethylene tubular chamber to guide nerve healing and regeneration. In this study, we delivered basic fibroblast growth factor (bFGF) into the chamber for sciatic nerve repair in rats. In addition, the animals were given systemically 1 mg/kg/day FK506 (tacrolimus), a potent immunosuppressant with neurotrophic properties. Nerve regeneration was evaluated by means of a nociceptive test and a grasping test starting 2 weeks postoperatively. Animals that received bFGF and FK506 showed a significantly faster recovery from injury than did the control group. Morphometric analysis at 3 months showed no difference between the two groups in total number of axonal fibers, fiber diameter, fiber density, and myelin:axon ratio. We conclude that the combination of bFGF and low dose FK506 enhances nerve healing in this animal model by accelerating early regrowth but has no effect on the final outcome.     

The usefulness of basic fibroblast growth factor for radiation‐exposed tissue

A high dose of ionizing external radiation damage to the skin and soft tissue results in changes in function as well as in the general body condition. Once radiation surpasses the tissue safety or survival level, progressive alteration in the damaged tissue results in tissue loss and then flap loss. Local expression and action of stem cells or local growth factors in the irradiated tissue is mitigated, and external administration is sought to investigate the possibility of skin and soft tissue survival after an elevating flap. Basic fibroblast growth factor (bFGF) is primarily considered as a potent angiogenic growth factor. In burns, resurfacing with a dermal component is required, and bFGF stimulates wound healing and enhances human skin‐derived mesenchymal stem cells under serum‐free conditions in a dose‐dependent manner. Thirty‐five male, 4‐ to 8‐week‐old CLAWN miniature pigs received radiation exposure to assess the effectiveness of bFGF in terms of the progressive clinical course relevant to human skin and soft tissue. At 2 weeks following 10‐Gy irradiation, tissue was preserved in the group receiving subcutaneous placement of a round‐type tissue expander and bFGF. The expander plus bFGF group demonstrated significantly greater dermo‐epidermal proliferation than the radiation alone, radiation plus bFGF, or expander plus radiation plus vehicle‐solution groups, and new blood vessel formation was significantly increased in the expander tissue with bFGF after irradiation (p < 0.01). Electron microscopy revealed that tissue with expander and bFGF maintained more stable skin adnexae with preserved intact epidermis and dermis. Thus, bFGF improved and maintained the tissue viability after immediate irradiation in the skin and soft tissue.     

碱性成纤维细胞生长因子结合静脉套接修复正中神经缺损

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）结合静脉套接修复周围神经缺损的效果.方法 8例4cm以内正中神经缺损,取自体静脉套接并对断面进行处理,静脉内注入碱性成纤维细胞生长因子0.5ml,术后检查Tinel征、神经肌电图,受损靶肌肉注射0.2mlbFGF.结果 随访10月～2年,3例神经缺损1～1.9cm,神经功能评定为优.2例神经缺损2～2.9cm,神经功能评定为优.2例神经缺损3.0～3.5cm,神经功能评定为优1良1.1例神经缺损3.6～4.0cm,神经功能评定为良.所有病例神经再生速度大于2mm/天.结论 碱性成纤维细胞生长因子（BFGF）结合静脉套接是修复神经缺损的有效方法,能明显促进神经再生.     

血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子对大鼠外周血内皮祖细胞培养的影响

目的 探讨不同培养条件对大鼠外周血来源内皮祖细胞（EPC）生长情况的影响。 方法 密度梯度离心法获得大鼠外周血单个核细胞,根据培养基中是否添加血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及培养板是否预铺纤连蛋白（FN）分组培养。观察记录细胞生长情况并进行统计分析,以免疫组化和免疫荧光法进行鉴定。 结果 大鼠外周血来源的单个核细胞在体外呈现贴壁生长,培养第7天各组细胞数及细胞集落数提示,在相同培养条件下,预铺FN可以促进EPC的贴壁增殖（t = 4.43,P < 0.05;t = 3.70,P < 0.05）。在同样预铺或未铺FN的情况下,在培养液中加入生长因子可促使单个核细胞更好地向EPC分化（t = －10.96,P < 0.01;t = －13.22,P < 0.01）。免疫组化及免疫荧光结果显示,细胞培养第4、7、10天,细胞表面CD34、CD133表达不断增强[（35.7±4.2）%、（60.1±3.8）%、（81.8±6.4）%;（3.2±0.9）%、（18.4±7.3）%、（32±3.8）%],第14天下降[（32.1±5.4）%,（1.9±2.7）%];而Flk-1表达在第4、7、10、14天均不断增强[（31.2±3.5）%、（40.6±5.3）%、（71.2±8.4）%、（81.5±4.1）%]。 结论 FN有利于内皮祖细胞的贴壁生长和增殖。VEGF及bFGF促进其增殖分化。内皮祖细胞的体外成功培养将为其应用于血管组织工程提供足够数量的种子细胞来源,并为外周血干细胞移植治疗多种疾病提供新的思路。     

探讨碱性成纤维细胞生长因子对肌瓣营养作用的机制

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）对失神经肌瓣营养的作用。方法将30只Wistar大白鼠，随机分为bFGF实验组，生理盐水对照组（对照组1）、bFGF全身用药对照组（对照组2）。建立腓肠肌瓣模型、保留动静脉带，离断支配神经然后行端端吻合，bFGF实验组术后从肌瓣基底留置硅管注射bFGF20 U（稀释于0．1ml生理盐水中），同时对照组1从硅管内注入0．1ml生理盐水，对照组2从健侧肌肉内注入等量bFGF20 U（稀释于0．1ml生理盐水中），每天1次，连续2周，分别于12周后行腓肠肌湿重、超微病理结构、肌瓣肌肉内神经组织化学染色检查。结果bFGF实验组各项指标明显优于生理盐水及bFGF全身用药对照组，差异有统计学意义，而生理盐水组与bFGF全身用药组比较，差异无统计学意义。结论持续增加局部bFGF浓度促进损伤神经的恢复，而加强肌肉营养防止肌萎缩。     

Expression of basic fibroblast growth factor in thyroid disorders

Morphologic and biologic studies were undertaken to clarify the biologic significance of basic fibroblast growth factor (bFGF) in human thyroid neoplasms. A total of 71 malignant tumors (50 papillary carcinomas, 14 follicular carcinomas, 7 anaplastic carcinomas), 11 follicular adenomas, 6 adenomatous goiters, and 6 Graves' disease tissues were examined employing immunohistochemical methods (avidin-biotin-peroxidase complex technique). An affinity-purified polyclonal rabbit antiserum to human bFGF was used as a primary antibody. The eluate of malignant thyroid tumor tissues from the heparin-Sepharose column was examined by Western blot analysis to elucidate the molecular weight form. With immunohistochemical staining, bFGF was frequently detected in the cytoplasm of malignant thyroid tumors compared to tissues of the benign diseases and normal controls. With anaplastic carcinoma, immunoreactivity of the tumor cells was particularly strong. In the correlative analyses between UICC TNM classification and bFGF staining in papillary carcinoma, there were significant differences when relating positive staining to the grade of nodal metastases. By Western blot analysis, the bFGF immunoreactivity was specifically detected in the two forms, with molecular weights of 18 and 33 kDa. The high-molecular-weight form was detected in only anaplastic carcinoma. The present investigations demonstrated a close correlation between the expression of bFGF and the degree of malignancy. bFGF might play an important role in promoting lymph node metastases. Moreover, the high-molecular-weight form of bFGF might have an intense influence on tumor growth.

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Resumen Se emprendió un estudio morfológico y biológico, con el propósito de clarificar la significación biológica del factor básico de crecimiento de fibroblastos (FBCF) en los neoplasmas de la glándula tiroides humana.Setenta y un tumores malignos (50 carcinomas papilares, 14 carcinomas foliculares y 7 carcinomas anaplásico), 11 adenomas foliculares, 6 bocios adenomatosos y 6 tejidos de glándula con enfermedad de Graves fueron examinados mediante métodos inmunohistoquímicos (técnica del complejo avidina-biotinaperoxidasa); se utilizó un antisuero policlonal purificado contra el FBCF humano, como anticuerpo primario. Además, se utilizó el análisis de Western blot para elucidar la forma de peso molecular.Con la coloración inmunohistoquímica, el FBCF fue detectado con frecuencia en el citoplasma de los tumores malignos de la tiroides, en comparación con lo observado en la enfermedad benigna y en los controles normales. La inmunorreactividad tumoral fue particulamente fuerte en el carcinoma anaplásico. En el análisis correlativo entre la clasificiación TNM UICC y la coloración del FBCF en el carcinoma papilar, se hallaron diferencias significativas relativas a la coloración positiva y al grado de la metástasis ganglionares.En el análisis Western blot, la inmunorreactividad FBCF fue específicamente detectada en las dos formas diferentes con pesos moleculares de 18 K y 33 K. La forma de alto peso molecular fue detectada sólamante en el carcinoma anaplásico.La presente investigación demuestra una estrecha correlación entre la expresión de FBCF y el grado de malignidad. El FBCF puede jugar un papel importante en promover las metástasis ganglionares. Además, la forma de alto peso molecular del FBCF puede tener una influencia más intensa sobre el crecimiento del tumor.

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Résumé Une étude morphologique et biologique a été effectuée pour clarifier la signification du facteur de croissance des fibroblastes de base (bFGF) dans les tumeurs de la thyroïde chez l'homme. On a étudié 71 tumeurs de la thyroïde (50 cancers papillaires, 14 cancers folliculaires, 6 adénomes solitaires, et 7 cancers anaplasiques, 11 adénomes folliculaires, 6 goitres adénomateux et 6 Maladies de Basedow) en utilisant des méthodes immunohistochimiques et notamment la technique du complexe avidinebiotine-peroxydase. On a employé un anticorps primaire fabriqué à partir d'un antisérum polyclonal de lapin purifié dirigé contre le bFGF humain. L'éluat des tissus thyroïdiens malins provenant de la colonne héparine-sepharose a été examiné selon la technique Western Blot pour déterminer son poids moléculaire. Le bFGF a été détecté plus fréquemment dans le cytoplasme des tumeurs thyroïdiennes malignes que dans les maladies bénignes et les contrôles. Dans le cancer anaplasique, l'immunoréactivité des cellules cancéreuses a été particulièrement forte. En ce qui concerne la corrélation entre la classification TNM de l'Union Internationale contre le Cancer et la coloration bFGF des cancers papillaires, il y avait des différences significatives correspondant au degré d'envahissement des ganglions lymphatiques. Dans l'analyse selon la technique du Western blot, l'immunoréactivité bFGF a été détectée spécifiquement sous les deux formes de bFGF ayant des poids moléculaires de 18 et de 33 K, respectivement. Le poids moléculaire de 33K n'a été détecté que dans le cancer anaplasique. Cette étude démontre la corrélation étroite entre l'expression bFGF et le degré de malignité. Le bFGF peut probablement jouer un rôle important dans la survenue de métastase lymphatique. Le type à poids moléculaire élevé de bFGF pourrait influencer d'advantage la croissance tumorale.