快速起搏对家兔心房肌钙通道表达的影响及螺内酯干预的研究

目的观察螺内酯对快速心房起搏对家兔心房肌细胞L型钙离子通道亚基表达的影响。方法家兔18只随机分为3组,对照组、起搏组及螺内酯组各6只。起搏组和螺内酯组经颈内静脉将电极植入右心房,以600次/min行快速心房起搏8 h,起搏后应用半定量反转录-聚合酶链反应检测心房肌钙离子通道α1C亚基及β1亚基mRNA的表达。结果与对照组比较,起搏组钙离子通道α1C亚基及β1亚基mRNA表达明显减少,分别下降22%和26%,差异有统计学意义(P<0.01);螺内酯组钙离子通道α1C亚基及β1亚基mRNA表达降低明显减少,分别下降13%和17%,与起搏组相比,有统计学意义(P<0.05)。结论螺内酯可预防快速起搏后钙离子通道表达亚基的降低。     

快速起搏对家兔心房肌钙通道表达的影响及辛伐他汀的干预研究

目的通过建立快速起搏家兔模型,探讨辛伐他汀对快速起搏早期心房肌细胞L型钙离子通道α1C亚基信使RNA(mRNA)表达的影响。方法 30只家兔按随机数字表法分为对照组(n=10),心房快速起搏组(n=10)和辛伐他汀干预组(n=10)三组。辛伐他汀干预组予以辛伐他汀5 mg/(kg·d)灌胃2周,其余组以等量生理盐水灌胃2周,对照组不行起搏,心房快速起搏组和辛伐他汀干预组行快速心房起搏(800次/min)建立家兔快速心房起搏模型,急性起搏8 h后取右心房组织,应用半定量反转录-聚合酶链反应检测心房肌L型钙离子通道α1C亚基mRNA的表达。结果对照组L型钙离子通道α1C亚基mRNA的相对拷贝数为1.00±0.04,辛伐他汀干预组为0.89±0.04,心房快速起搏组为0.78±0.03。心房快速起搏组和辛伐他汀干预组L型钙离子通道α1C亚基mRNA的相对拷贝数均显著低于对照组(P<0.05),心房快速起搏组L型钙离子通道α1C亚基mRNA的表达水平低于辛伐他汀干预组(P<0.05)。结论辛伐他汀可以改善家兔快速起搏心房引起的心房肌L型钙离子通道α1C亚基mRNA表达的下降。     

缬沙坦对快速心房起搏家兔心房电重构的影响

该研究以快频率起搏右房，观察心房有效不应期的变化和心房肌细胞超微结构的改变，研究心房肌的电重构与结构重塑，并观察缬沙坦和贝那普利在防治电重构与结构重塑中的作用，为临床应用ARB和ACEI防治房性心律失常提供有力的实验证据。如可能，分析调查对象中房颤亚人群的服用ACEI或ARB情况，作进一步的临床研究分析，对临床治疗会有指导意义。     

螺内酯对快速起搏家兔心房电重构的影响

目的观察醛固酮受体拮抗剂——螺内酯对快速心房起搏家兔心房电重构的影响。方法将30只家兔随机分为3组,对照组、快速起搏组及螺内酯组各10只。经颈内静脉将心房电极置入右心房。分别测量起搏开始前、起搏开始后1h、2h、4h、6h、8h分别记为（P0、P0、P2、P4、P6、P8）时的心房有效不应期（AERP200和AERP150）。结果快速起搏组在不同基础刺激作用下AERP缩短,AERP200-AERP150频率适应性不良,P。与起搏前P。比较差异有统计学意义（P〈0．05）,螺内酯组AERP缩短较快速起搏组减轻,频率适应性得以维持（P〉0．05）。结论螺内酯可以抑制快速心房起搏所致电重构。     

普伐他汀对快速起搏心房肌离子通道的作用

目的:通过普伐他汀干预快速起搏心房肌,观察普伐他汀对快速起搏心房肌离子通道的作用,从而探讨他汀药治疗心房颤动的可能机制.方法:将17条犬分为对照组、起搏组及干预组.起搏组植入420～500次/分的固定频率起搏器,起搏时间为4周.干预组以同样的方法植入起搏器并同时服用普伐他汀4周.用膜片钳技术观察三组APD90,Ica-l,Ito的变化情况.结果:1.APD90起搏组及干预组比对照组有明显缩短[分别是(95.75±13.63),(107.04±29.71)vs(186.69±10.60)].2.Ica-l起搏组及干预组比对照组明显减小[(3.36±0.87),(3.58±0.5)vs(9.05±1.65)].3.Ito起搏组比对照组显著减少[(3.39±0.97)vs(12.58±3.22)],干预组比对照组显著减小,但比起搏组显著增加[(6.13±3.14)vs(3.39±0.97)].结论:普伐他汀对快速起搏心房肌Ica-l无显著作用,可使APD有所延长但不具显著性.可以显著增加瞬时外向电流Ito.     

24小时快速起搏右心房对兔心房单向动作电位的影响

目的 应用心内电生理技术研究心房快速起搏(RAP)对兔心房单向动作电位(MAP)的影响.方法 成年新西兰兔20只随机分为二组:假手术组、模型组各10只.经颈内静脉将电极置入右心房.以600次/分行RAP,同时分析在0、4、8、12和24 h的单向动作电位时程(MAPD).结果 假手术组在实验的时间段内右房游离壁MAP复极90%时程(MAPD90)无明显差别.RAP 8 h,起搏组右房游离壁MAPD90较P0有明显缩短,从起搏前(112.50±9.57)ms至起搏8 h分别缩短到(51.25±4.79)ms,分别缩短了61.25 ms.结论 房颤(AF)时心房MAPD90缩短.MAP技术可安全地用于研究AF时的电重构(ER),能提供准确的电生理改变的信息.     

不同剂量辛伐他汀对慢性心房重构犬心房肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨不同剂量辛伐他汀剂量对慢性心房心动过速所致心房重构犬心房肌细胞内游离钙离子(Ca2+)浓度的影响。方法将28只健康杂种犬随机分为对照组、起搏组、干预1组及干预2组,每组各7只。起搏组、干预组利用快速心房起搏(ATP)建立慢性心房重构模型,干预组ATP前5 d始分别给予口服辛伐他汀10 mg/d(干预1组)和60 mg/d(干预2组)。用激光共聚焦显微镜技术,以Flou-3/AM作为钙指示剂,测定四组犬心房肌细胞内游离Ca2+浓度。结果起搏组犬心房肌细胞内游离Ca2+浓度(162)较干预1组(140)、对照组(109)及干预2组(118)均有显著增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);干预2组犬心房肌细胞内游离Ca2+浓度明显低于干预1组(P<0.05),与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大剂量辛伐他汀能更有效抑制慢性心房重构犬心房肌细胞内钙超载。     

24h快速起搏右心房致心房肌电重构和结构重构的研究

目的探讨兔24h快速心房起搏(rapid atrial pacing,RAP)对心房肌电重构(electrical remodeling,ER)和结构重构的影响。方法由新疆医科大学动物实验中心提供一级质量标准的成年新西兰大白兔24只,体质量2.5～3kg,雌雄不拘。随机分为两组:假手术组和模型组,每组各12只。假手术组兔仅植入起搏电极,不行高位右心房快速起搏刺激。模型组兔经颈内静脉将电极置入右心房。以600次/min行RAP,同时分析模型组在0、8、12、24h4个时间点的心房有效不应期(atrial effective refractory period,AERP),24hRAP后,迅速开胸取心脏,剪下右心房和左上肺静脉,经HE染色和Masson染色行组织学观察。结果假手术组在不同基础刺激周长作用下和时间点AERP无显著改变(P>0.05)。模型组在起搏P8、P12和P24后,与P0相比,AERP200明显缩短(P<0.05);与P0相比,AERP150在起搏P8、P12和P24后明显缩短(P<0.05)。假手术组心房肌的HE染色肌纤维呈纵行排列,横纹清楚;模型组肌纤维走行方向各异,间隙较大,横纹不清,胞浆空泡化,细胞肿胀。Masson染色结果显示,假手术组胶原纤维为蓝绿色,少量分布于肌纤维之间;模型组大量胶原纤维相互连接成网状,排列紊乱。结论心房颤动(AF)时心房电重构(ER)以AERP缩短为特点。AF后的右心房出现细胞肥大、纤维结缔组织增生等病理改变。     

肌浆网钙ATP酶过表达对心房颤动兔心房及L型钙通道a1c蛋白表达的影响

目的 探讨心肌肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)基因过表达,对兔急性心房颤动(AF)的心房肌L型电压依赖钙通道蛋白alc亚单位(LVDCCalc)表达的影响。方法 48只成年健康新西兰大白兔,随机分成为房颤组(AF组,n=12)、9-型腺相关病毒 增强型绿色荧光蛋白组 房颤组(rAAV9 EGFP AF组,n=12)、9-型腺相关病毒 肌浆网钙ATP酶2a 增强型绿色荧光蛋白组 房颤组(rAAV9 SERCA2a EGFP AF组,n=12),并设假手术组作为对照(Control组,n=12)。rAAV9 EGFP AF组和rAAV9 SERCA2a EGFP AF组起搏前30d开胸心包腔内注射包含报告基因的rAAV9-EGFP和包含靶基因的rAAV9-SERCA2a-EGFP各500祃L(1?012v.g/礚)。转染30 d后,AF组、rAAV9 EGFP AF组和rAAV9 SERCA2a EGFP AF组,以600BPM刺激频率,持续起搏兔右心房24小时制作AF模型。处死各组动物,倒置荧光显微镜下观察右心房肌组织EGFP表达情况,行HE染色对右心房组织形态检查,应用免疫组化技述检测SERCA2a蛋白及LVDCCalc蛋白在心房肌中的表达情况。结果rAAV9 EGFP SERCA2a AF组SERCA2a蛋白及LVDCCalc蛋白表达量显著高于AF组和rAAV9 EGFP AF组(P<0.05),但与对照组比较无显著差异。结论 心房肌转SERCA2a基因,显著减少了急性房颤心房肌的LVDCCa1c蛋白表达的降低,有逆转急性AF电重构的作用。国家国际科技合作专项的编号2011DFA32860     

辛伐他汀对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞L-型钙通道mRNA表达的影响

目的:研究辛伐他汀对柯萨奇B3病毒（CVB3）感染BALB/c小鼠后心肌细胞 L-型钙通道(LCCs)mRNA表达的影响,探讨辛伐他汀对病毒性心肌炎的治疗作用。方法：应用 CVB3 感染BALB/c小鼠制作病毒性心肌炎模型,辛伐他汀混悬液灌胃,按辛伐他汀剂量分为10 mg•kg^-1 组、30 mg•kg^-1 组及90 mg•kg^-1 组,并设正常对照组及病毒感染对照组,行心肌病理观察,采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测正常对照组、病毒感染组及辛伐他汀组心肌细胞LCCs　α₁亚单位mRNA 表达量。结果:病毒感染组小鼠心肌组织有局灶性或弥漫性以单核细胞为主的炎性细胞浸润,重者可见大片状心肌细胞坏死;辛伐他汀组心肌组织炎症细胞浸润及坏死灶明显减轻;正常对照组和病毒模型组心肌LCCs α₁亚单位的mRNA表达量分别为0.06±0.01和1.37±0.32,二者比较差异有显著性（P<0.05）;辛伐他汀10 mg•kg^-1、30 mg•kg^-1 及90 mg•kg^-1 组LCCs α₁ 亚单位的mRNA表达量分别为1.14±0.22、0.17±0.04和0.11±0.02,与病毒模型组比较差异有显著性（P<0.05）,其中以中、高剂量组下降最明显。结论:辛伐他汀可减轻病毒性心肌炎的病理损害,并以剂量依赖的方式抑制心肌细胞LCCs α₁ 亚单位的mRNA表达,发挥心肌保护功能,对病毒性心肌炎有一定的治疗作用。     

乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流的影响

【目的】观察乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流（ICa,L）的影响。【方法】采用蛋白酶消化的成年兔单个心室肌细胞及膜片钳全细胞技术，记录不同浓度乙醇对ICa,L的作用。【结果】（1）乙醇抑制ICa,L峰值，24mmol／L和240mmol／L乙醇抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）24、80、240mmol／L乙醇使ICa,L的电流一电压（I—V）曲线上移，在各测试电压下，电流均减小，但不影响曲线形状，用乙醇后最大激活电压仍在0mV左右。【结论】致毒浓度（24mmol／L）的乙醇对ICa,L具有明显抑制作用。可导致心肌产生负性肌力作用，动作电位时程缩短，诱发心律失常。     

溶血卵磷脂对牛视网膜微血管内皮细胞凋亡及细胞内钙离子浓度的影响

目的: 探讨溶血卵磷脂(LPC)对牛视网膜微血管内皮细胞(BRECs)凋亡及细胞内钙离子浓度的影响.方法: 原代分离培养牛视网膜微血管内皮细胞,加入不同浓度的LPC,分别培养6 h、12 h、24 h,通过吖啶橙染色在荧光显微镜下观察细胞凋亡,流式细胞检测细胞凋亡率,F2000荧光光度计测细胞内钙离子浓度,并计算游离钙浓度.结果:(1)60 μmol/L LPC作用牛视网膜微血管内皮细胞24 h后, 细胞凋亡率明显高于LPC浓度为20 μmol/L及40 μmol/L时;(2) LPC浓度从20 μmol/L增加到60 μmol/L过程中,细胞内游离钙离子浓度明显增加,而且细胞内游离钙离子浓度的增加与LPC的作用时间有关,作用时间越长,钙离子浓度越高.结论: LPC能增加细胞内游离钙离子浓度,促使BRECs的凋亡,而且LPC的这种作用具有时间和剂量依赖性.因此,脂代谢紊乱可能是通过诱导BRECs的凋亡而发挥作用的.     

房颤心房肌L型钙通道α1c亚单位mRNA的差异表达改变及意义

目的 研究房颤心房肌L型钙通道结构重塑的分子基础。方法心脏手术中采集慢性房颤及宴性心律患者右心房肌，提取总RNA行逆转录，应用PCR技术检测L型钙通道α1c亚单位不同位置的mRNA片段表达。结果 α1c亚单位Ⅰ、Ⅱ跨膜区连接对应的mRNA丰度。慢性房颤心房肌较窦性心律心房肌差异无显著性；α1c亚单位Ⅳ跨膜区对应的mRNA丰度，慢性房颤心房肌较窭性心律心房肌明显降低。结论 房颤心房肌L型钙通道结构重塑与α1c亚单位的亚型表达改变有关。     

野生型PTEN 过表达对体外活化肝星状细胞内钙离子浓度的影响

目的 探讨野生型第10 号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（PTEN）过表达对体外活化肝星状细胞（HSC）内钙离子浓度的影响。方法 体外培养活化大鼠肝星状细胞系（HSC-T6）,利用腺病毒载体,将野生型PTEN 基因转染活化HSC ;Western blot 及实时荧光定量聚合酶链反应（qrt-PCR）检测HSC 的PTEN 蛋白及mRNA 表达;采用钙离子荧光探针Rhod-2/AM,于激光扫描共聚焦显微镜下检测HSC 内钙离子浓度变化。实验分组：① Control 组：腺病毒转染时以DMEM 代替病毒液;② Ad-GFP 组：转染表达绿色荧光蛋白（GFP）的对照空病毒Ad-GFP ;③ Ad-PTEN 组：转染携带野生型PTEN 基因并表达GFP 的重组腺病毒Ad-PTEN。结果 野生型PTEN 在活化大鼠HSC 大量表达,3 组HSC 内钙离子浓度比较,差异有统计学意义（P <0.05）,Ad-PTEN 组HSC 内钙离子浓度（251.60±90.88）低于Control 组（1 953.95±132.99）及Ad-GFP 组（1 937.57±115.17）,而Control 组与Ad-GFP 组之间HSC 内钙离子浓度比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 野生型PTEN 过表达可降低体外活化大鼠HSC 内钙离子浓度。     

替米沙坦对“两肾一夹”大鼠心房肌瞬时外向钾通道和L型钙通道表达的影响

目的:本实验研究替米沙坦对“两肾一夹”(Two kidney one clip,2K1C)SD大鼠心房肌细胞瞬时外向钾通道Ito和L型钙通道Ica-Lα亚基编码基因(Kcnd2和Cacnalc)的mRNA和蛋白(Kv4.2和Cav1.2)变化的影响.方法:雄性SD大鼠39只,分成4组:对照组、2K1C+替米沙坦低剂量组[5mg/(kg·d)]、2K1C+替米沙坦高剂量组[10 mg/(kg·d)]和2K1C组.用药4周后采用反转录聚合酶链反应及免疫印记反应(Western blot)方法分别测定Kcnd2、Cacnalc的mRNA及蛋白水平并对结果进行半定量分析.结果:2K1C组Kcnd2的m     

右美托咪定对快速心房起搏后兔心房电生理学特性及Cx43 Cx40表达的影响

目的 探讨右美托咪定对快速心房起搏后兔心房电生理学特性及Cx43、Cx40表达的影响。方法 选择成年雄兔24只,随机分为对照组（C组）、快速心房起搏组（RAP组）与快速心房起搏+右美托咪定灌流组（RAP+DEX组）,每组8只。制备Langendorff离体心脏灌注模型,通过快速心房起搏构建房颤模型。分别检测3组心房90%单相动作电位复极时程（MAPD₉₀）、心房有效不应期（ERP）、ERP与MAPD₉₀比值（ERP/MAPD₉₀）、房颤诱发率及持续时间,取心房组织,采用Western-bolt法和免疫荧光法检测Cx43、Cx40的蛋白含量和分布。结果 T₁~T₃时,3组MAPD₉₀比较,差异有统计学意义（P<0.05）。RAP组MAPD₉₀随时间的推移有逐渐下降趋势（P<0.05）,不同的处理方式和时间对MAPD₉₀有交互作用（P<0.05）。T₃时,RAP组ERP、ERP/MAPD₉₀、Cx43和Cx40蛋白含量均低于C组和RAP+DEX组,房颤诱发率高于C组和RAP+DEX组,差异有统计学意义（P<0.05）。3组房颤持续时间比较,差异无统计学意义（P>0.05）。电镜下,RAP组Cx43和Cx40分布不规律且侧面分布增多,而C组和RAP+DEX组Cx43和Cx40分布较规律且主要集中在两端。结论 右美托咪定可抑制房颤时的心房电重构,降低房颤的易感性,其机制可能与其抑制Cx43、Cx40的表达下调和再分布有关。     

冬虫夏草对豚鼠心室肌细胞胞浆钙离子浓度及L-型钙电流的影响

目的　研究冬虫夏草 (Codycepssinensis,CS)水提液对豚鼠单个心室肌细胞胞浆内钙离子浓度 ([Ca2 ]i)及L 型钙电流 (ICa L)的影响。方法　酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞 ,应用激光扫描共聚焦显微镜联合全细胞膜片钳技术测定豚鼠心室肌细胞 [Ca2 ]i以及ICa L的变化。结果　应用 0 1mg/mL (生药浓度 )冬虫夏草水提液 ,在静息状态下对 [Ca2 ]i 无影响 ;对 6 0mmol/LKCl诱导的胞浆 [Ca2 ]i升高有促进作用 ,峰值荧光强度在 12 0s时由12 0 4 3± 2 38 4增加至 185 5 2± 32 1 0 (n =6 ,P <0 0 5 )。膜片钳研究结果表明 ,冬虫夏草水提液可明显促进ICa L,使ICa L从 (- 15 1± 2 3)pA/ pF增加到 (- 19 7± 3 2 ) pA/pF (刺激电压为 10mV ,n =8,P <0 0 1)。 结论　冬虫夏草水提液促进心肌细胞钙内流 ,是该药治疗缓慢型心律失常的机制之一。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肾入球小动脉细胞内钙离子浓度的影响及Losartan的拮抗作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肾小球入球小动脉细胞内钙离子浓度([Ca²⁺]i)的影响与高血压肾小动脉重建的关系及Losartan的治疗作用。方法 细胞培养：大鼠肾小球入球小动脉细胞随机分为4组。对照组：不加AngⅡ处理;AngⅡ组：加入终浓度为0.1 μmol·L^-1的AngⅡ;Losartan组：加入终浓度为50 μmol·L^-1的Losartan;AngⅡ+Losartan组：同时加入Losartan 50 μmol·L^-1和AngⅡ0.1 μmol·L^-1。负载后上机检测[Ca²⁺]i。结果 细胞培养显示AngⅡ引起了细胞收缩变化,表现为胞突变细变短,胞突回缩,胞体变圆,细胞长度与直径均明显缩小。Losartan处理组较AngⅡ组细胞形态变化减轻且Losartan对AngⅡ增高RASMCs内[Ca²⁺]i有明显抑制作用。结论 AngⅡ可引起肾小球入球小动脉细胞内[Ca²⁺]i的上升,导致细胞收缩,因此Ca²⁺超载可能是肾素-血管紧张素系统起作用的重要环节。Losartan可抑制细胞内Ca²⁺超载。