自体骨髓单个核细胞移植治疗下肢慢性静脉溃疡的初步研究

目的探讨自体骨髓单个核细胞移植治疗下肢慢性静脉溃疡的疗效。方法 2009年5月-2010年9月,在采用大隐静脉剥脱术基础上,对17例下肢慢性静脉溃疡患者采用自体骨髓单个核细胞移植治疗(移植组),并与同期未采用细胞移植治疗的10例患者(对照组)比较疗效。移植组:男9例,女8例;年龄(33.3±6.1)岁。单纯大隐静脉曲张慢性溃疡11例,单纯深静脉瓣膜功能不全慢性溃疡6例。溃疡面积(4.39±2.46)cm2。病程3个月～6年。对照组:男4例,女6例;年龄(39.2±10.3)岁。单纯大隐静脉曲张慢性溃疡7例,单纯深静脉瓣膜功能不全慢性溃疡3例。溃疡面积(5.51±2.63)cm2。病程3个月～2年。两组按照临床病因解剖病理学分级(CEAP)均为C6级。两组患者一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05),有可比性。观察术后溃疡愈合情况;移植组于术前及术后3 d分别切取溃疡面肉芽组织行常规HE染色,免疫组织化学染色观察VEGF表达和微血管密度(microvessel density,MVD)。结果移植组患者溃疡愈合较快,其中15例愈合,1例好转,1例未愈合,中位愈合时间为22 d,四分位数间距为15 d;对照组溃疡愈合缓慢,其中7例愈合,3例未愈合,中位愈合时间57.5 d,四分位数间距为40 d。两组溃疡愈合时间比较差异有统计学意义(Z=0.001 4,P=0.002 7)。移植组HE染色显示,细胞移植后溃疡肉芽组织有丰富毛细血管结构;免疫组织化学染色示移植后MVD为(32.1±12.8)个,较移植前(22.1±6.7)个显著增加,差异有统计学意义(t=3.120,P=0.008);移植后VEGF表达阳性细胞百分比为8.05%±5.10%,较移植前(6.13%±4.20%)升高,但差异无统计学意义(t=1.150,P=0.268)。结论自体骨髓单个核细胞移植可以促进下肢慢性静脉溃疡肉芽组织增生,加速溃疡愈合。     

自体骨髓单个核细胞移植治疗下肢缺血的中期疗效

目的 总结自体骨髓单个核细胞移植治疗下肢缺血的中期疗效.方法 2003年3月-2005年6月,采用自体骨髓单个核细胞移植治疗65例下肢缺血患者.男50例,女15例;年龄36～89岁,平均66.5岁.病变类型:单纯动脉硬化闭塞症4例,血栓闭塞性脉管炎5例,糖尿病下肢缺血56例.于患者骼后上棘抽取骨髓血400 mL,分离骨髓单个核细胞.12例移植治疗2～4次,其余均为单次移植治疗.每次移植细胞数为(0.60～1.80)×109个,平均1.05×109个.根据下肢缺血临床症状改善程度行疗效评价.结果 患者均获随访,随访时间8～56个月,平均21.5个月.随访期内5例死于心肌梗死和心衰,3例死于脑梗死.患者治疗有效率为70.8%(46/65),无效率为18.5%(12/65),复发率为10.7%(7/65).疗效维持时间>12个月者42例,占总有效患者的91.3%(42/46);疗效维持>24个月者24例,占52.2%(24/46);疗效维持>37个月者12例,占26.1%(12/46).12例多次治疗者有效率为100%,53例单次治疗者有效率为64.2%,差异有统计学意义(P<0.001).结论 中期随访结果表明,自体骨髓单个核细胞移植是一种临床可行和简便有效治疗下肢缺血的方法.     

自体骨髓单个核细胞移植治疗血栓闭塞性脉管炎

血栓闭塞性脉管炎（thromboangiitis obliterans,TAO）是血管外科中比较难治的一种疾病,可导致患者发生重度下肢缺血,如果同时伴有较差的远端动脉流出道,最终可导致截肢甚至威胁患者生命[1]。有研究证明自体骨髓单个核细胞移植术可促进局部血管形成,     

骨髓动员刺激后自体骨髓源单个核细胞移植治疗下肢缺血的初步临床研究

目的观察骨髓动员刺激后自体骨髓单个核细胞移植治疗下肢缺血的初步疗效。方法2005年5月～2005年12月收治下肢缺血35例43侧患肢,男23例,女12例。年龄34～90岁,平均71．3岁。病因：糖尿病下肢缺血30例38侧患肢,单纯动脉硬化闭塞症2例2侧患肢,血栓闭塞性脉管炎3例3侧患肢。其中间歇性跛行期5例5侧患肢;静息痛期15例19侧患肢;组织缺损期15例19侧患肢,其中组织溃疡期9例12侧患肢;组织坏疽期6例7侧患肢。在抽取骨髓前使用粒细胞集落刺激因子刺激骨髓2～3d,每天300μg;抽取骨髓血130-200ml,经分离纯化后再行移植。采用下肢肌肉局部注射13例19侧患肢,下肢动脉腔内注射16例16侧患肢,下肢肌肉局部注射与动脉腔内同时注射6例8侧患肢进行移植。结果术后2个月肢体疼痛改善率为94．7％,冷感改善率为97．1％,肢体麻木改善率为93．3％。5例5侧患肢间歇性跛行距离均有不同程度增加。44．2％患者的踝肱比值（ankle／brachial index ABI）有不同程度增加。39侧患肢行经皮氧分压（transeutaneous oxygen pressure,TeP02）测定,92．3％有不同程度增高。患肢溃疡：在9例11侧患肢中,愈合1侧,明显缩小或缩小3侧,无变化7侧,其中3侧患肢被截肢。术后行血管造影评估25例34侧患肢,91．2％患肢的侧支循环有不同程度增加。并发症：骨髓动员刺激出现发热和轻微乏力各1例,均自行缓解;单个核细胞移植后1周出现轻度心肌梗死1例,药物治疗1周后恢复出院,1个月后因患肢疼痛加重行膝下截肢。32例40侧患肢获随访3412个月,症状消失13侧,明显改善15侧,改善8侧,复发2侧,无效2侧。客观评价标准与术前比较ABI增加25侧;TcPOz测定增加36侧;21侧患肢的血管造影显示90．5％患肢有新生侧支形成;10侧患肢足部溃疡7侧愈合,3侧明显缩小;3侧患肢截除坏疽足趾者于术后2～3个月愈合出院。结论经骨髓动员刺激后的骨髓单个核细胞移植下肢缺血,具有抽取骨髓血少、细胞量多、近期效果好且安全性高的优点,是除自体骨髓单个核细胞移植和外周血干细胞移植外的又一种治疗下肢缺血的新方法。远期效果尚需进一步随访。     

骨髓单个核细胞自体移植促进心脏血管再生

目的探讨骨髓单个核细胞自体移植于梗死心肌后实现血管再生的能力。方法结扎45只5月龄日本大耳白兔的冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型，随机分为骨髓单个核细胞自体移植组(5-溴-2’-脱氧尿嘧啶核苷标记的自体骨髓单个核细胞直接心肌注射至梗死周边区域)，心肌梗死未治疗组及假手术组，分别在细胞移植后2、4、8周时处死，应用免疫组织化学方法检测骨髓单个核细胞在梗死心肌组织中的分化、毛细血管密度以及细胞因子的表达。结果骨髓单个核细胞在梗死心肌组织中分化为血管内皮细胞和血管平滑肌细胞。在骨髓单个核细胞移植早期，心肌白细胞介素-1β(IL-1β)、碱性纤维母细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平显著增高。细胞移植后4、8周骨髓单个核细胞移植组毛细血管密度明显高于心肌梗死未治疗组及假手术组。结论骨髓单个核细胞自体移植于梗死心肌区能促进血管再生，改善侧支循环。     

缺血性心肌病自体骨髓单个核细胞冠脉输注患者的护理

对53例缺血性心肌病患者采用自体骨髓单个核细胞冠状动脉(冠脉)内输注治疗。结果治疗后病情明显好转,无1例发生并发症。提出手术前后给予心理护理．做好自体骨髓采集术的护理、自体骨髓单个核细胞混悬液冠脉内回输的护理、术后观察及健康指导等．是该治疗有效的护理措施。     

自体骨髓单个核细胞治疗椎体压缩性骨折患者的围术期护理

目的总结自体骨髓单个核细胞联合椎体成形治疗椎体压缩性骨折的围术期护理经验。方法对10例椎体压缩性骨折患者行骨髓单个核细胞生物治疗联合椎体成形术,并配合有效的围术期护理。结果 10例患者顺利完成手术,疼痛症状较术前明显减轻,恢复日常活动功能。结论良好的术前心理沟通,充分的手术用物准备,舒适安全的手术体位摆放,骨髓采集及细胞分离的准确配合及术后康复锻炼是手术成功、促进患者康复的基础。     

自体骨髓单个核细胞移植配合中药治疗下肢慢性缺血

目的:研究自体骨髓单个核细胞移植与中药合用对各种原因所致下肢缺血的治疗作用.方法:用集落细胞刺激因子使患者骨髓处于增生活跃状态,抽取骨髓血分离单个核细胞.移植采用缺血肢体远端动脉腔内及肌肉多点注射.观察患者手术前后肢体疼痛、冷感、间歇性跛行、溃疡创面情况评分以及踝肱比(ABl)变化.结果:治疗后患肢疼痛及冷感明显改善,跛行距离延长,创面愈合加快,ABI在术后短期内无明显升高.结论:自体骨髓单个核细胞移植结合中药治疗可以迅速改善下肢缺血患者的疼痛及冷感,促进伤口愈合,中远期有效改善局部的血液循环.     

骨髓单个核细胞移植治疗缺血性心脏病的进展

骨髓单个核细胞包括间充质干细胞、造血干细胞和内皮祖细胞,这些细胞移植到缺血心肌后可分化为心肌细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞;并且可通过旁分泌和自分泌一些细胞因子促进血管新生,防止宿主细胞和移植细胞凋亡,并使内源性修复细胞归巢,修复受损的心肌。目前国内外已进行了大量应用于缺血性心脏病的试验,这些研究采用多种途径将骨髓单个核细胞植入到冠状动脉或心肌内,包括冠状动脉内注射、静脉输入、直接室壁注射、心外膜或心内膜下输入,并通过将细胞制成碎片而提高其滞留率,或应用一些细胞因子提高治疗效果。虽然目前这些临床试验结果尚存在争议,但这些方法在治疗缺血性心脏病方面仍有前景。现对骨髓单个核细胞移植治疗缺血性心脏病的机制、移植途径、骨髓单个核细胞的滞留、归巢、存活和展望等进行综述。     

5-氮胞苷诱导自体骨髓单个核细胞移植对心功能的影响

目的　观察骨髓单个核细胞 (BM MNC)经化学诱导剂 5 氮胞苷诱导后 ,移植到梗死心肌边缘 ,能否进一步改善心功能。方法　 2 6只雄性家兔 ,随机选取 2 1只结扎冠状动脉左前降支 ,建立急性心肌梗死 (AMI)模型 ,随机分为BM MNC 5 氮胞苷组、BM MNC组和AMI未治疗组 3组 ,每组 7只 ;其余 5只为假手术对照组。AMI后第 3d抽取自体股骨骨髓 1 5ml,分离单个核细胞培养 ;AMI后 14d将培养的单个核细胞移植至梗死心肌边缘 ;移植 2 8d后 ,采用超声心动图 ,并结合左心导管、血流动力学等参数评价心功能情况。结果　AMI后兔心功能明显受损 ,与假手术对照组相比 ,AMI后各组左室舒张末期压明显升高 (P <0 0 5 ) ,左室短轴缩短率、左室壁厚度、射血分数、左室收缩压、压力变化率最大值显著降低(P <0 0 5 )。细胞移植后 ,与AMI未治疗组相比 ,细胞移植组左室舒张末期压显著降低 ,左室短轴缩短率、左室壁厚度、射血分数 ,以及左室收缩压、压力变化率最大值明显升高。但 5 氮胞苷诱导的骨髓单个核细胞移植组与未经诱导组间各项指标差异无显著性。结论　 5 氮胞苷诱导的骨髓单个核细胞移植能明显改善心功能 ,并防止AMI后左室重构发生 ;但与单纯骨髓单个核细胞移植相比差异无显著性。     

异体大鼠骨髓单个核细胞胰岛细胞移植治疗糖尿病

目的 观察异体骨髓单个核细胞和胰岛细胞通过肝脏和静脉途径移植后对糖尿病大鼠的治疗作用.方法 密度梯度离心法分离胰岛细胞,淋巴细胞分离液分离骨髓单个核细胞,28只糖尿病大鼠模型随机分为A、B、C、D组,A组在肝脏被膜下多点注射1000个胰岛细胞,B组在体外将1000个胰岛细胞和1×107个骨髓单个核细胞混合后在肝脏被膜下多点注射,C组通过尾静脉注射1000个胰岛细胞,D组在体外将1000个胰岛细胞和1×107个骨髓单个核细胞混合后通过尾静脉注射,移植后于不同时间点尾静脉测定随机血糖,比较不同细胞组合和移植途径之间对糖尿病的治疗作用.结果 A、B组血糖于术后3 d内开始下降,A组血糖可降至正常水平(7.98±2.28)mmol/L,血糖维持正常水平(3.71±0.95)d,B组降至(7.72±1. 75)mmol/L可维持(4.86±1.06)d,静脉移植组血糖于术后4 d内降至正常(7.35±1.40)mmol/L,可维持(7.85±1.46)d,D组静脉注射胰岛于4 d起效(7.00±0.83)mmol/L,血糖可降至正常水平可维持(14.10±1.21)d,各组间血糖随时间变化的趋势及维持正常水平的时间具有统计学意义(P＜0.05).结论 骨髓单个核细胞和胰岛混合细胞通过尾静脉移植对大鼠血糖维持正常时间最长,血糖控制水平最理想.     

骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死

目的探讨自体骨髓单个核细胞(BMMNCs)移植对急性心肌梗死后心脏功能及结构的影响。方法中国小型猪16头,随机分为对照组(n=6)及移植组(n=10)。建立急性心肌梗死模型后,分别注入BMMNCs/生理盐水。两组动物于术中监测血流动力学指标,术后进行影像学检查。移植组分别于2、4周后获取心脏标本,检测移植细胞标记物Hoechst33342。结果心梗4周后,移植组心梗范围较对照组显著缩小(P<0.01);血流动力学指标较对照组明显改善;局部室壁运动评分优于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。在术后2周获得的心肌标本内,可见多量Hoechst33342和MHC双阳性细胞。结论成体BMMNCs移植后,有可能抑止心室重构的发展,提高心室运动功能。     

骨髓单个核细胞与骨髓间充质干细胞促进大鼠皮瓣存活率的比较

目的比较来源于等量骨髓的单个核细胞与经扩增的间充质干细胞,促进大鼠随意皮瓣成活率的效果。方法取等质等量的大鼠骨髓,一半直接离心获得骨髓单个核细胞,一半经体外培养获得骨髓间充质干细胞,注射相等数量(n=6)的大鼠随意皮瓣。术后测量并计算皮瓣成活面积,取材,行组织学检测,计数CD31阳性血管数量。结果未经培养的骨髓单个核细胞组皮瓣的平均存活率为(71.6±8.4)%,培养的骨髓间充质干细胞组平均存活率为(66.2±3.1)%,这两组存活率均显著高于注射平衡液的对照组(55.9±3.4)%;注射细胞组之间平均存活率没有统计学差异。组织学血管密度计数显示,骨髓单个核细胞组和骨髓间充质干细胞组的微血管数量分别是(58.2±6.8)和(42.7±5.1),都显著高于PBS对照组(22.8±3.1),而骨髓单个核细胞组也显著高于骨髓间充质干细胞组。结论与不经培养的骨髓单个核细胞相比,通过体外扩增的骨髓间充质细胞,未能显著提高大鼠随意皮瓣的成活率。     

骨髓动员与非动员自体骨髓源单个核细胞移植治疗血栓闭塞性脉管炎的疗效比较

目的观察骨髓动员与非动员自体骨髓干细胞移植治疗血栓闭塞性脉管炎（TAO）的疗效并进行对比分析。方法25例严重缺血的TAO患者分为A、B两组,A组12例为骨髓动员组,B组13例为非动员组。两组患者抽取骨髓血150～200ml,分离纯化后行下肢肌肉注射法移植术,观察丰观及客观指标进行疗效评价。结果移植2个月后两组多数患者疼痛和冷感有缓解,但缓解率两组无差异,两组溃疡愈合率无差异;经平均10个月随访,两组主观症状缓解率及溃疡愈合率差异无统计学意义（P〉0．05）。移植2个月后踝肱指数（ABI）和经皮氧分压（TcPO2）较术前有显著提高,A、B两组间差异有统计学意义;经平均10个月随访,两组间ABI和TcPO,差异有统计学意义（P〈0．05）。两组各有2例2条患肢溃疡无改善,无步匕亡及高位截肢者,全部患者无严重并发症发乍。结论骨髓动员和非动员两种方式自体骨髓干细胞移植均是安全、有效的治疗TAO手段．尤其对改善患肢症状及促讲溃疡的愈合效果明显,而骨髓动员组的疗效优于非动员组．     

犬骨髓单个核细胞构建组织工程骨的体外实验研究

目的 探索组织工程骨(Tissue Engineered Bone,TEB)的即刻构建方案,以符合临床骨缺损即刻修复的要求。方法 分离获取Beagle犬骨髓单个核细胞(Canine bone marrow mononuclear cells,cBMNCs)。将密度为30×10~6 cells/mL的cBMNCs复合部分脱钙骨(Partially demineralized bone matrix,pDBM)即刻构建TEB。对即刻构建的TEB进行体外培养和成骨检测。结果 在成骨诱导的体外培养环境下,即刻构建的TEB具有一定的细胞活性和成骨能力。结论 即刻构建的TEB可直接回植,以满足体内即刻骨缺损修复的要求。     

心肌梗死病人冠状动脉旁路移植同期自体骨髓单个核细胞移植初步临床应用

我们在行冠状动脉旁路移植（CABG）手术时，提取自体骨髓单个核细胞（MBMCs），于手术同期植入心肌梗死区及其边缘，术后短期随访，注意观察术后病人缺血区血流灌注和心脏功能的改变及是否出现近期和远期并发症。     

骨髓单个核细胞和骨髓源内皮祖细胞移植促进血流重建的比较研究

目的 比较骨髓单个核细胞(MNCs)和骨髓源内皮祖细胞(EPCs)移植促进血流重建的效果,探讨非内皮祖细胞在血流重建中的作用.方法 获取Lewis大鼠骨髓MNCs,部分MNCs在体外诱导分化为EPCs.采用Lewis大鼠建立单侧后肢缺血模型.建模后3 d,将模型鼠随机分为3组:(1)对照组(n=6),将0.8 mL D-Hank's液注入对照组大鼠缺血侧后肢;(2)MNC组(n=6),将8×10~6个骨髓MNC植入MNC组大鼠缺血侧后肢;(3)EPC组(n=6),将体外培养的8 × 10~6个EPC植入EPC组大鼠缺血侧后肢.细胞移植后3周行大鼠后肢动脉造影,检测缺血侧后肢侧支血管数;切取缺血侧后肢腓肠肌,分别行CD31和α-SMA免疫组化染色,计算毛细血管密度和小动脉密度.结果 MNC组毛细血管密度与EPC组差异无统计学意义[(31.67 ± 7.87)个/HP vs.(32.83±5.38)个/HP,P＞0.05].而均高于对照组(19.67 ± 4.80个/HP)(P＜0.05);MNC组侧支血管数与EPC组差异无统计学意义[(4.17±0.75)个vs.(4.50 4±1.38)个,P＞0.05],但均高于对照组[(2.50 ± 1.5)个](P＜0.05);MNC组小动脉密度与EPC组差异无统计学意义[(4.83 ± 1.47)个vs.(5.50 ± 2.35)个,P＞0.05],亦均高于对照组[(2.17±0.98)个](P＜0.05).结论 在骨髓干细胞移植治疗肢体缺血性疾病中,非内皮祖细胞在血流重建中所起的作用与EPC相似.     

Percoll法分离犬骨髓单个核细胞与体外成骨诱导培养的实验研究

目的建立犬骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cells,BMNCs)的分离培养、体外扩增和成骨诱导方法,为骨缺损的修复提供理想的骨组织工程种子细胞。方法用1.063g/ml percoll液分离2.5ml Beagle犬骨髓,利用细胞贴壁筛选法进行分离、培养、扩增和成骨诱导。结果采用1.063g/ml percoll液可获得纯度较高的BMNCs,接种细胞生长良好,平均倍增周期为1d,经成骨诱导培养后可定向分化为成骨细胞。结论采用1.063g/ml percoll液能够较好的进行Beagle犬BMNCs的分离培养和体外扩增,分离得到的细胞具备骨髓基质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的特性。     

滋阴利水法治疗高血压肾病慢性肾衰竭肾功能不全失代偿期临床研究

高血压肾病包括良性肾硬化（benign nephrosclerosis）及恶性肾硬化（malignant nephrosclerosis）。临床通常指前者而言,本病是原发性高血压最常见的并发症之一,又是慢性肾衰竭的最常见的原因之一。     

骨髓单个核细胞局部移植预防缺血性胆道狭窄的实验研究

目的 探讨骨髓单个核细胞局部移植对缺血胆管组织血管再生的促进作用机制,观察对胆道缺血性病变的预防和治疗效果.方法 将30只清洁级昆明小白鼠随机分为3组:①缺血胆管骨髓单个核细胞移植组(A组),②缺血胆管PBS注射组(B组),③对照组(C组),每组10只.3组均于胆囊管汇入肝总管处向下解剖一段长约0.5 cm完全游离的胆总管.A组和B组用2枚显微血管夹钳夹游离胆总管的两端,90 min后取出血管夹(C组不钳夹胆管).3组均游离大网膜一束约0.3 cm×0.3 cm×0.5 cm,将其环绕并固定于游离的胆总管.A组将BrdU示踪剂标记的同种系小鼠骨髓单个核细胞悬液均匀注射于环绕的大网膜上,B组和C组仅注射等量磷酸盐缓冲液.术后21d再开腹行胆道造影.取包绕胆管的大网膜和胆管组织制作石蜡切片.用兔抗BrdU单克隆抗体(NeoMarkers,USA)和标有异硫氰酸荧光素(FITC)的山羊抗兔IgG进行免疫组织化学染色和免疫荧光染色(SABC法),观察缺血胆管局部骨髓单个核细胞的分布与分化.分别用第Ⅷ因子相关抗原的抗体和VEGF抗体进行免疫组织化学染色,检测毛细血管密度.结果 术后第21天,A组狭窄率为40%,明显低于B组(100%),C组无胆管狭窄发生;A组骨髓单个核细胞集中分布于缺血胆管周围,其中一些已分化成血管内皮细胞,毛细血管密度明显高于B组和C组(P＜0.01).结论 移植到缺血胆管局部的骨髓单个核细胞,在缺血微环境的诱导下,可分化成血管内皮细胞,并通过促进新生毛细血管的形成,改善缺血胆管血供,明显降低胆管狭窄和梗阻的发生率.