人肝细胞癌血管内皮细胞生长因子的表达

探讨血管内皮细胞生长因子与原发性肝细胞癌侵袭,转移和预后的关系。方法采用免疫组化ＳＰ法检测８５例ＨＣＣ的ＶＥＧＦ表达。结果ＨＣＣ的ＶＥＧＦ表达与肿瘤大小,肿瘤个数,有无门静脉瘤栓形成,包膜是否完整有关,与术前甲胎蛋白水平,ＨＢｓＡｇ,分化程度无关。     

血管内皮细胞生长因子在肝细胞癌中的表达和预后的关系

目的：本研究的目的是想探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)在肝细胞癌中的表达以及这种表达和预后的关系。方法：运用免疫组化的方法对手术切除的60例肝细胞癌标本进行了实验观察,运用统计学的方法对这60例的相关临床数据及随访资料进行了分析处理。结果：60例肝细胞癌中VEGF阳性表达40例占66．67％。和肝内转移、血管漫润有着明显的关联性,P=0.004,P=0．005。VEGF的阳性表达和较短的生存时间相关联,P=0．01。结论：以上结果支持VEGF在肝细胞癌的发展和预后方面起着重要作用。     

肝细胞生长因子对冠状动脉平滑肌细胞增殖迁移的影响

为观察肝细胞生长因子(HGF)对牛冠状动脉平滑肌细胞(BCASMC)增殖、迁移的影响,分离和培养BCASMC,采用四甲基偶氮唑蓝法观察HGF对BCASMC增殖的作用,倒置显微镜观察BCASMC的迁移。结果显示,对照组、HGF组BCASMC的D值相差显著(P<0.05),HGF组的BCASMC增殖率为45.2％,且迁移明显。提示HGF能促进BCASMC的增殖和迁移。     

酸性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞增殖作用的实验研究

目的　探讨不同浓度的aFGF对体外培养的大鼠主动脉内皮细胞生长的影响。方法　通过组织块培养法获取主动脉内皮细胞。将浓度为 5ng/ml,10ng/ml,2 0ng/ml的aFGF分别加入内皮细胞的培养液中作为实验组(Ⅰ～Ⅲ组 ) ,不加aFGF的组作为对照组。分别在 2 4h、48h和 72h应用MTT法进行细胞计数。结果　从大鼠主动脉成功地获取了内皮细胞。 3天内 ,实验组和对照组的主动脉内皮细胞都有不同程度的增殖 :培养 2 4h ,实验各组与对照组比较P >0 .0 5 ,无统计学差异 ;48h和 72h时 ,Ⅱ、Ⅲ组与对照组以及与Ⅰ组两两比较 ,有非常显著的差异 (P <0 .0 0 1) ;各时间段内 ,Ⅰ组与对照组 ,Ⅲ组与Ⅱ组比较 ,细胞数改变未见差异 (P >0 .0 5 )。结论　一定浓度的aFGF有非常明显的促血管内皮细胞生长的作用 ,可能对缺血性心脏病的促血管形成治疗有较大的帮助。     

血管内皮细胞生长因子与抗肿瘤转移治疗的研究

血管内皮细胞生长因子（VEGF）是最重要的刺激血管新生的细胞因子。VEGF的生物学效应是通过其特异性的膜受体即VEGF受体介导实现的。本文就VEGF及其受体的基因和蛋白结构、生物学作用、信号转导通路及在抗肿瘤血管新生治疗方面的研究进展作一综述。     

原发性肝细胞癌中血管内皮细胞生长因子的表达及意义

为研究探讨血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）在原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）的表达及其临床病理意义,我们应用免疫组织化学对３４例ＨＣＣ中ＶＥＧＦ的表达作了研究。结果：ＨＣＣ中ＶＥＧＦ的表达较对照组织显增高。     

重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子体外抗血管内皮细胞增殖的活性

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子（VEGI）体外抗血管内皮细胞增殖的活性。方法：MTT法检测重组人可溶性VEGI对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果：在体外,重组人可溶性BEGI可强烈抑制人脐静脉内皮细胞ECV304、大鼠肺源毛细血管内皮细胞（MPCEC）及新生牛主动脉内皮细胞（BAEC）的增殖,不能报制黑色素瘤细胞B－16和小鼠成纤维细胞L－929的增殖。结论：重组人可溶性VEGI能作用于不同来源的血管内皮细胞,而对肿瘤细胞增殖无抑制作用,提示其可能通过抗肿瘤新生血管生成而发挥抗肿瘤作用。     

内皮细胞生长因子诱导大鼠血管内皮细胞增殖过程中FKBP12的表达

目的探讨内皮细胞生长因子(Endothelial cell growth factor,ECGF)诱导的血管内皮细胞(Vascular endothelial cell,VEC)增殖过程中FK506结合蛋白12(FK506 binding protein 12,FKBP12)表达的变化,为VEC的鉴定提供新的方法。方法培养大鼠VEC并传代。倒置显微镜下观察其在ECGF作用下的增殖情况,检测Ⅷ因子相关抗原、FKBP12和不同时期FKBP12 mRNA水平的表达。结果VEC表达FKBP12;VEC传代后第4天FKBP12 mRNA表达水平达到最高,6—8d下降。结论FKBP12既可作为VEC的标志物,又可反映VEC的增殖情况。     

ZNF580过表达对内皮细胞血管内皮生长因子的表达及增殖能力的影响

【目的】研究人锌指蛋白新基因ZNF580过表达对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及增殖能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】重组质粒pEGFP-ZNF580经LipofectamineTM2000脂质体转染法转染EA.hy926细胞,48h后荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在内皮细胞中的表达情况;应用半定量RT-PCR、Western blotting及ELISE法检测转染前后内皮细胞ZNF580和VEGFmRNA、蛋白表达的变化;运用MTT实验检测转染前后内皮细胞增殖能力的改变。【结果】荧光显微镜下示融合蛋白ZNF580-EGFP在EA.hy926细胞核中表达;ZNF580基因过表达后,内皮细胞VEGFmRNA及蛋白的表达均上调(P<0.05),且其增殖能力显著升高(P<0.01)。【结论】ZNF580可以调控EA.hy926细胞VEGF的表达,且ZNF580在内皮细胞增殖过程中具有重要的调节作用。     

肝细胞生长因子在子宫内膜异位症的表达及其与血管内皮生长因子的关系

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)在子宫内膜异位症(内异症)发生发展过程中的作用及HGF与血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法应用免疫组织化学技术检测33例异位子宫内膜组织和10例正常子宫内膜组织中的HGF和VEGF的表达及微血管密度(MVD)。结果异位内膜HGF表达的平均光度值为0.264±0.026,正常内膜HGF表达为0.219±0.017,两者比较有显著性差异(P<0.05);异位内膜中HGF的表达与VEGF表达呈正相关(r=0.408,P<0.05)。结论HGF在异位内膜的血管生成中具有重要作用;HGF和VEGF在子宫内膜异位症的发生发展中发挥协同作用。     

重组肝细胞生长因子质粒的构建及对内皮祖细胞增殖的影响

目的构建一种携带人肝细胞生长因子（HGF）基因的表达质粒（pUDKH）,探讨重组质粒对体外培养的成人外周血中内皮祖细胞（endothelial progenitor cell,EPC）增殖的影响。方法用PCR方法从人胎盘cDNA文库扩增HGF基因,并将其克隆至病毒表达载体pLenti6/V5-Dest,获得表达质粒pLenti-HGF。制备病毒,感染原代培养的内皮祖细胞,免疫组化分析其感染效率及上清中HGF的表达水平。MTT法检测感染病毒后对细胞增殖的影响。结果 pLenti-HGF病毒可有效感染体外培养的内皮祖细胞,表达HGF,并能促进内皮祖细胞的增殖。结论内皮祖细胞经病毒感染后可以表达hHGF,外源性hHGF基因能够刺激内皮祖细胞增殖。     

白杨素抑制血小板源性生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的机制研究

目的研究白杨素对血小板源性生长因子(PDGF)-BB诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及细胞周期调控机制。方法WST-1法测定VSMCs增殖,5-溴-2'-脱氧尿苷掺入法测定DNA合成,流式细胞术分析VSMCs细胞周期,Western blot法测定细胞周期关键调控因子周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6和CDK抑制物p27^kip1的表达。结果20ng/ml PDGF-BB显著增强VSMCs增殖及DNA合成,而白杨素呈剂量依赖性抑制PDGF-BB刺激的VSMCs增殖及DNA合成。12.5μmol/L白杨素预处理使PDGF-BB刺激的VSMCs阻滞于G₀/G₁期,并能显著降低VSMCs中CDK4和CDK6的蛋白表达水平,同时升高p27^kip1蛋白水平。结论白杨素抑制PDGF-BB刺激的VSMCs增殖,其机制可能与CDK4和CDK6表达下调而p27^kip1表达上调导致的细胞周期阻滞有关。     

三氧化二砷对血管内皮细胞增殖和周期的影响

目的:观察As2O3对血管内皮细胞增殖、凋亡和细胞周期的干扰,探讨As2O3对血管内皮细胞生长的直接影响。方法:血管内皮细胞EVC-304体外培养,As2O3干预。采用MTT测定细胞活性,流式细胞仪测定细胞周期、细胞凋亡。结果:ECV-304细胞经过As2O3干预,其存活率明显降低,并且呈剂量依赖性。As2O3干预后,进入S期的细胞减少,细胞周期被阻在G1期,细胞可能在G1期进入凋亡。As2O3诱导早期凋亡是对照组的2.88～5.1倍,并且呈剂量依赖性;其晚期凋亡是对照组的1.17～1.67倍。结论:As2O3可直接干扰血管内皮细胞的细胞周期,阻滞细胞在G1期,并诱导细胞凋亡,进而抑制血管内皮细胞的增殖。     

雌激素受体激动剂对人脐血内皮祖细胞增殖和迁移的影响

目的:观察选择性雌激素受体(ER)激动剂PPT(α亚型激动剂)和DPN(β亚型激动剂)对人脐带血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells EPCs)增殖和迁移的影响,并与17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)的作用进行比较。方法:采用密度梯度离心法分离获得脐带血单个核细胞,硫氰酸荧光素标记荆豆凝集素I(FITC-UEA-I)、DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-ac-LDL)双染及CD133免疫荧光鉴定EPCs。培养的EPCs分别加入不同浓度的E2、PPT和DPN(分别为1×10-10mol/L、1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L)进行细胞增殖实验分析(WST)、显微镜下EPCs计数及Transwell技术测定对EPCs迁移的影响。结果:E2及PPT呈浓度依赖性促进EPCs的增殖和迁移,PPT刺激作用等同于E2,DPN无刺激作用。结论:雌激素α亚型激动剂PPT明显刺激内皮祖细胞的增殖和迁移,其作用与17β-雌二醇相同。     

兔外周血内皮祖细胞的培养与鉴定

目的研究兔外周血内皮祖细胞(EPCs)的分离和定向培养的方法,并对其功能进行鉴定。方法从兔股静脉插管抽取静脉血20 mL,采用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心法分离单个核细胞,接种于人纤连蛋白包被的培养板上,分别予含血管内皮生长因子(VEGF)20 ng／mL或内皮细胞生长添加剂(ECGS)30μg／mL的M199培养基培养。培养2周后进行免疫荧光染色鉴定内皮祖细胞。结果每毫升外周血可分离1×106～2×106个单个核细胞,两组均于接种后第2～3天细胞胞体增大,有的呈多边形或梭形;第4天出现条带或栅栏状分布;第7～8天梭形细胞增多;第14天左右出现细胞集落,其特点是中央为圆形细胞,外周是梭形细胞;添加VEGF的培养基组每接种5×105个单个核细胞出现5～10个细胞集落,而添加ECGS者出现8～15个。第4周,添加VEGF的培养基组的细胞开始脱落而死亡,而添加ECGS的细胞仍持续稳定生长,呈铺路石样分布。两组在荧光显微镜下均可见双阳性的EPCs,血管性假性血友病因子(vWF)染色阳性。结论采用VEGF和ECGS均可体外培养兔外周血内皮祖细胞,且均能使其诱导分化为内皮样细胞,而ECGS较VEGF诱导效果更佳。     

ZNF580基因对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响

[目的]研究人C2H2型锌指蛋白基因ZNF580在人脐静脉内皮细胞增殖和迁移中的作用.[方法]利用细胞转染技术获得瞬时过表达ZNF580的EA.hy926内皮细胞,并用半定量RT-PCR、Western blotting法检测ZNF580的表达情况;采用MTT比色法和细胞迁移实验检测ZNF580对内皮细胞功能的影响.[结果]获得瞬时过表达ZNF580的内皮细胞(转染效率为60％),且ZNF580基因过表达内皮细胞增殖和迁移能力分别增强3倍和2.5倍.[结论]ZNF580能够促进内皮细胞增殖和迁移.     

桑叶对肿瘤血管生成的影响

目的研究桑叶对肿瘤血管生成中血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成的影响。方法用CCK-8试剂盒测定HUVEC-2C细胞数量的变化;用Transwell转移小室研究HUVEC-2C细胞迁移情况;用包被Matrigel的24孔板来培养HUVEC-2C细胞观察其管腔形成情况。实验分为实验组和对照组,每组分别设置3个复孔,在实验组中加入桑叶浸出液。观察桑叶对肿瘤血管生成的影响。结果桑叶液可抑制HUVEC-2C细胞的增殖能力,抑制作用随着浓度的增长而增强。在浓度为100、50、25 mg/mL时,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。当浓度为100 mg/mL的桑叶液时细胞增殖抑制率可达到37.6%。通过观察Transwell小室,与对照组比较,添加了桑叶液的HUVEC-2C细胞,其迁移能力受到一定的制约作用。Matrigel实验中,与未加入桑叶液的HUVEC-2C细胞所形成的较完整的环状结构比较,加入桑叶液的HUVEC-2C细胞在管腔形成方面受到明显的抑制作用。结论桑叶液通过抑制血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成,对肿瘤血管的生成具有抑制作用。     

磷脂酰肌醇-3-羟基激酶抑制剂LY294002对肝细胞生长因子促人结肠癌细胞SW620增殖和迁移行为的影响

目的探讨磷脂酰肌醇-3-羟基激酶(PI3K)抑制剂LYZ94002在肝细胞生长因子(HGF)促进结肠癌细胞SW620增殖、侵袭中所起的作用。方法分别用噻唑蓝比色法(MTT)、流式细胞术及划痕实验检测结肠癌细胞增殖、细胞周期、凋亡及移行情况。结果 (1)MTT法结果显示,LY294002≥20μmol/L实验组与对照组吸光度(OD)值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)流式细胞术结果显示,LY294002≥20μmol/L实验组与对照组凋亡率及增殖指数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)划痕实验结果显示,LY294002≥40μmol/L实验组与对照组移行距离比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PI3K信号通路抑制剂能够阻断HGF对人结肠癌细胞增殖、凋亡、移行的促进作用。