DNA体外扩增技术诊断关节结核的临床研究

目的：为探讨ＤＮＡ体外扩增（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术对关节结核诊断的临床价值。材料与方法：对３０例关节结核和２０例非关节结核标本分别应用ＰＣＲ技术、抗酸染色镜检及分离培养法检测结核杆菌。结果：３０例关节结核中三种方法的阳性检出率分别为：ＰＣＲ法８７％，镜检法０，培养法１３％，ＰＣＲ法与镜检及培养法对于结核杆菌的阳性检出率比较，差异具有显著性意义（Ｐ值＜０．００５），ＰＣＲ法明显优于镜检及培养法。２０例非关节结核标本镜检及培养法均阴性，ＰＣＲ法阳性率１０％。盲法结核杆菌和对照菌ＰＣＲ检测结果表明，ＰＣＲ的特异性为１００％。ＰＣＲ扩增整个过程自动化控制，可在数小时内完成。结论：此表明ＰＣＲ技术检测关节结核标本结核杆菌具有快速、简便、特异与敏感等优点，对关节结核的早期快速诊断与鉴别诊断具有重要价值。     

差示PCR快速检测膀胱癌c-erb B-2原癌基因扩增

采用差示ＰＣＲ技术检测５８例膀胱移行细胞癌标本中ｃ－ｅｒｂＢ－２原癌基因扩增。靶基因ｃ－ｅｒｂＢ－２和对照基因Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ在同一ＰＣＲ反应体系中扩增出两个大小不同的特异性片段，然后通过２％琼脂糖凝胶电泳将两片段分开，再用密度测定仪测定靶基因与对照基因的密度比值，大于１时，表明存在ｃ－ｅｒｂＢ－２原癌基因扩增。结果发现健康者和非膀胱癌患者的膀胱粘膜组织均无ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增     

反转录——多聚酶链反应扩增小鼠睾丸17a——羟化酶mRNA

１７ａ－羟化酶催化雄激素合成的中间步骤，它对了解睾丸间质细胞内雄激素的合成具有重要的意义，本研究首先提取小鼠睾丸组织ＲＮＡ，然后以１７ａ－羟化酶ＤＮＡ两端的特定序列为引物，反转录合成ｃＤＮＡ，再以ｃＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增ｃＤＮＡ。结果显示，反转录ＰＣＲ后获得一条３６０ｂｐ的电泳带，为１７ａ－羟化酶ｃＤＮＡ结果表明，用反转录ＰＣＲ方法扩增睾丸１７ａ－羟化酶ｍＲＮＡ是切实可行的。     

反转录－多聚酶链反应扩增小鼠睾丸17α－羟化酶mRNA

１７α－羟化酶催化雄激素合成的中间步骤，它对了解睾丸间质细胞内雄激素的合成具有重要的意义。本研究首先提取小鼠睾丸组织ＲＮＡ，然后以１７α－轻化酶ＤＮＡ两端的特定序列为引物，反转录合成ｃＤＮＡ，再以ｃＤＮＡ为模板行ＰＣＲ扩增ｃＤＮＡ。结果显示，反转录ＰＣＲ后获得一条３６０ｂｐ的电泳带，为１７α－羟化酶ｃＤＮＡ。结果表明，用反转录ＰＣＲ方法扩增睾丸１７α－羟化酶ｍＲＮＡ是切实可行的。     

聚合酶链反应检测结核杆菌DNA对骨结核病诊断的临床价值

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ），分别对２０例骨结核患者标本用两种方法检查的阳性率分别为：培养法２０％，ＰＣＲ６５％，经统计学处理二种方法有显著性差别，ＰＣＲ阳性率显著高于培养法，而且２天即可报告，显著缩短了报告时间。３０例非骨结核中患者标本两种方法均为阴性。盲法结核杆菌和对照菌ＰＣＲ结果表明具有较高的特异性。只要标本中有结核杆菌ＤＮＡ即可扩增其特异的ＤＮＡ片断，即使经福尔马林固定２－４周的酝酿也可检测     

反转录－多聚酶链反应扩增小鼠睾丸17α－羟化酶mRNA

１７α－羟化酶催化雄激素合成的中间步骤，其研究对于了解睾丸间质细胞内雄激素的合成具有重要的意义。本研究经二次沉淀提取小鼠睾丸组织ＲＮＡ，经反转录合成ｃＤＮＡ，以１７α－羟化酶ｃＤＮＡ特异序列引物进行ＰＣＲ扩增（ＲＴ－ＰＣＲ）。结果显示，二次沉淀后用ＲＴ－ＰＣＲ方法能获得单一的１７α－羟化酶特异中段（３６０ｂｐ）。     

应用PCR-SSCP法检测胆管癌组织DPC4基因突变

肿瘤抑制基因ＤＰＣ4(ｄｅｌｅｔｅｄｉｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｌｏｃｕｓ4,ＤＰＣ4)参与细胞生长、分化的调节,其突变常导致肿瘤形成和转移。我们应用ＰＣＲＳＳＣＰ法检测ＤＰＣ4基因突变情况。1.材料与方法:(1)ＤＰＣ4ＤＮＡ提取:41例病理证实胆管癌的手术切除石腊标本,癌旁组织作对照。每例5μｍ的石腊病理切片,提取基因组ＤＮＡ。(2)ＰＣＲＳＳＣＰ分析:选择包括突变“热点”在内的第1、8、11外显子保守区的序列各合成一对引物。ＰＣＲ反应体系50μｌ,含05μｃｉα32ＰｄＡＴＰ1μｌ。取5μｌ扩增产物,与变性液混匀变性,骤…     

外周血甲胎球蛋白mRNA扩增在肝癌诊断和鉴别诊断中的价值

目的 探讨外周血甲胎球蛋白（ａｌｐｈａ－ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＦＰ）基因分析对肝癌诊断的临床价值。方法 从人肝癌组织和外周轿单核细胞制备总ＲＮＡ，经随机引物和逆转录配酶合成ｃＤＮＡ后，以巢式聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）扩增ＡＦＰ基因片段，分析其在肝癌诊断中的临床应用价值。结果 所设计反转录巢式ＰＣＲ扩增ＡＦＰ基因片段为１５９ｂｐ，方法的灵敏２度为５     

前列腺癌患者外周血中前列腺特异性膜抗原mRNA的表达

采用巢式ＲＴ ＰＣＲ方法检测 33例前列腺癌 (ＰＣａ)患者外周血中前列腺特异性膜抗原 (ＰＳＭ)ｍＲＮＡ的表达 ,报告如下。材料与方法　 4 3例患者分 2组 :(1)ＰＣａ组 :33例 ,其中Ｂ期 9例 ,Ｃ期 2 0例 ,Ｄ期 4例 ,均经前列腺穿刺病理证实。2 1例接受过黄体生成素释放激素类似物 (ＬＨＲＨ)治疗。 (2 )良性前列腺增生(ＢＰＨ)组 :10例 ,经ＴＵＲＰ术后病理证实。取患者静脉血 5ｍｌ,Ｆｉｃｏｌｌ分离白细胞 ,提取ＲＮＡ ,逆转录ｃＤＮＡ ,巢式ＰＣＲ扩增 ,扩增产物用凝胶电泳观察 ,测序鉴定ＰＣＲ结果。统计学方法采用 χ2 检验 ,χ2 =35 …     

反转录—多聚酶链反应扩增小鼠睾丸17α—羟化酶mRNA

１７α－羟化酶催化雄激素合成的中间步骤，其研究于了解睾丸间质细胞内雄激素的合成具有重要的意义。本研究经二次沉淀提取小鼠睾丸组织ＲＮＡ，经反转录合成ｃＤＮＡ，以１７α－羟化酶ｃＤＮＡ特异序列引物进行ＰＣＲ扩增。结果显示，二次沉淀后用ＲＴ－ＰＣＲ方法能获得一的１７α－羟化酶特异中段。     

聚合酶链反应为基础的差异表达基因分析技术及其在肾脏疾病研究中的应用

随着人类基因组计划的完成，探讨基因的功能及其在人类疾病中的作用是未来基因研究工作的重点。其中，基因表达的差异分析对阐明各种疾病的分子基础具有重要意义。自９０年代以来，以聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｃａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）为基础的差异表达基因分析技术，即：差异显示逆转录ＰＣＲ（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰＣＲ，ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）、ｃＤＮＡ代表性差异分析（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ…     

p16基因突变在人脑胶质瘤癌变中的作用

评估ｐ１６基因在胶质瘤发病机制中的作用。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ，差别ＰＣＲ等方法检测了２７例胶质瘤标本及对照正常脑组织，瘤旁组织及其它病变标本ｐ１６基因。结果 胶质瘤组中有４例存在ＳＳＣＰ泳动变位，提示存在点突变或微小突变．差别ＰＣＲ显示１例纯合缺失，１８例杂合缺失，正常组无任何形式的突变，胶质瘤组与正常组的总突变差异有显著意义。     

骨组织恶性肿瘤癌基因mdm2,c—myc和抗癌基因p53关系的研究

作者采用分子分杂交技术分析了１８例骨组织恶性肿瘤及瘤旁组织中癌基因ｍｄｍ２、ｃ－ｍｙｃ和抗癌基因ｐ５３的变化，使用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术分析了ｐ５３基因第７外显子点突变，结果显示，骨组织恶性肿瘤中ｍｄｍ２、ｃ－ｍｙｃ癌基因有扩增与过表达，抗癌基因ｐ５３有突变、重排、缺失。     

凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-Xl和BaX Mrna在大鼠缺血预处理脑组织中的表达

目的 检测脑缺血预处理大鼠脑组织中凋亡调控基因Ｂｃ１－２、Ｂｃ１－ｘ１和Ｂａｘ的表达。方法 假手术对照组、预处理对照组、预处理缺血组和缺血组Ｗｉｓｔａｒ大鼠分别再灌２４ｈ，４８ｈ和７２ｈ，采用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和原位分子杂交（ＩＳＨ）方法对脑组织Ｂｃ１－２、Ｂｃ１－ｘ１和Ｂａｘ ｍＲＮＡ的表达进行检测。结果 半定量ＲＴ－ＰＣＲ显示：与假手术对照组相比，预处理对照组大鼠再灌２４     

CyclinD1基因扩增及其蛋白表达在乳腺癌中的意义

目的 探讨乳腺癌中ＣｙｃｌｉｎＤ１基因扩增和其蛋白表达的相关性及其临床意义。方法应用半定量ＰＣＲ和免疫组化技术,检测和分析了乳腺癌及其癌旁组织、乳腺良性组织及正常朱标本中ＣｙｃｌｉｎＤ１基因扩增占２２．６％（１４／６２）,蛋白过度表达占４８．４％（３０／６２）,二者有一定相关性,而其它各种乳腺组织的ＣｙｃｌｉｎＤ１基因扩增及蛋白过度表达与之相比差异有显著性意义（Ｐ〈０．０５）。ＣｙｃｌｉｎＤ１基因     

大肠癌组织中HPV和C—erbB—2基因的检测及其关系研究

检测大肠癌组织中ＨＶＰ和Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因，探讨大肠癌组织中ＨＰＶ的存在与Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因的扩增之间的关系。方法 应用ＰＣＲ技术检测２１例大肠癌标本中ＨＰＶ及Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因。检测Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因同时进行差异ＰＣＲ，以确定Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因拷贝数的变化。     

两种新型IFNα的克隆、表达及其抗骨肉瘤活性

目的 构建两种新型ＩＦＮ突变株及其母体的原核表达系统,表达后对比检测其抗骨肉瘤活性。方法 以重组噬噬菌体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ－ＩＦＮｓ为模板,ＰＣＲ扩增出两种ＩＦＮα１ｃ／８６Ｄ突变株及其母体的ＤＮＡ序列,插入原核表达载体ｐＢＶ３２０３。表达、纯化后进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测其免疫活性、ＭＴＴ比色法对比检测其抗骨肉瘤细胞（ＯＳ７３２）增殖的活性。结果 酶切及ＰＣＲ鉴定     

nm23-H1 cDNA克隆的构建及其mRNA表达与肝癌转移的关系

目的 构建转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１ｃＤＮＡ克隆，初步分析其ｍＲＮＡ表达与肝内转移，门静脉形成癌栓，ＴＮＭ分期等临床病理特征的关系。方法 利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增ｎｍ２３－Ｈｄ１ｃＤＮＡ片段，并亚克隆入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ（－）质粒，借助Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，检测１０例肝细胞癌及癌旁肝组织ｎｍ２３－Ｈ１基因ｍＲＮＡ表达水平。结果 ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ低表达，诱发肝细胞癌伴肝内转移     

骨组织恶性肿瘤与癌基因mdm2、c-myc和抗癌基因p53关系的研究

作者采用分子分杂交技术分析了１８例骨组织恶性肿瘤及瘤旁组织中癌基因ｍｄｍ２、ｃｍｙｃ和抗癌基因ｐ５３的变化，使用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术分析了ｐ５３基因第７外显子点突变，结果显示，骨组织恶性肿瘤中ｍｄｍ２、ｃｍｙｃ癌基因有扩增与过表达，抗癌基因ｐ５３有突变、重排、缺失。在１０例骨肉瘤标本中发现ｍｄｍ２扩增仅存在于转移的病例中。这些结果表明：癌基因ｍｄｍ２、ｃｍｙｃ与抗癌基因ｐ５３参与骨组织恶性肿瘤的发生和发展，其中ｍｄｍ２扩增与骨肉瘤转移密切相关。     

套式序列特异引物聚合酶链反应技术的建立及其在HLA配型中的应用

磁式序列特异引物聚合酶链反应方法，用于ＨＬＡ－ＤＲ基因分型。利用一对外引物扩增ＨＬＡ－ＤＲＢ１第２外显子部分片段，作为第２次扩增的模板，ＰＣＲ循环参数；