脑缺血对阿尔茨海默病模型大鼠认知功能的影响及其机制探讨

目的 探讨脑缺血对阿尔茨海默病(AD)病程进展的影响及其机制.方法 采用大鼠海马注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)1-40建立AD模型,再于海马内注射ET-1建立脑缺血条件,观察脑缺血后AD样大鼠认知功能以及海马内Aβ沉积、神经元丢失和异常磷酸化tau表达的变化;采用免疫组化、原位杂交和RT-PCR法检测海马内星形胶质细胞数量和IL-1、TNF-α表达的变化.结果 脑缺血后AD样大鼠的认知功能明显下降,海马内Aβ沉积增加,神经元丢失增加,异常磷酸化tau表达增加.星形胶质细胞的数量以及IL-1和TNF-α的表达显著增加(均P＜0.01).结论 脑缺血加重了AD样大鼠的认知功能障碍和海马病理损伤,显著增加的星形胶质细胞及IL-1和TNF-α的表达参与了这一过程.防治脑缺血和抗炎治疗可能成为减缓AD进展的新途径.     

Aβ25-35注射诱导大鼠海马神经元tau蛋白异常磷酸化

目的　观察大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ2 5 3 5后 ,神经元ser199/ser2 0 2、ser396、thr2 31等位点tau蛋白磷酸化的水平以及糖原合成激酶 3β(GSK 3β)的活性变化 ,探讨Aβ2 5 3 5与tau蛋白异常磷酸化的关系及机制。方法　应用脑立体定向技术给成年大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ2 5 3 55nmol,术后 14d ,采用镀银染色方法观察海马组织神经元病理改变 ,免疫组织化学染色方法和免疫蛋白印迹技术观察大鼠海马tau [pS3 96]、tau [pSpS199/ 2 0 2 ]、tau [pT2 3 1]的表达水平 ,免疫蛋白印迹技术检测海马GSK 3β和磷酸化GSK 3β的水平变化。 结果　凝聚态Aβ2 5 3 5组神经元纤维走行紊乱、增粗、肿胀 ,密集成宽带状 ,轴突深染。海马神经元tau [pS3 96]、tau [pSpS199/ 2 0 2 ]、tau [pT2 3 1]的阳性表达数 (分别为 38 2± 5 9,10 7 6± 8 4 ,78 4± 3 7)明显高于正常组和生理盐水组 (P <0 0 1) ,GSK 3β和磷酸化GSK 3β的水平亦明显高于正常组和生理盐水组。 结论　海马背侧注射Aβ2 5 3 5可通过激活GSK 3β诱导tau蛋白发生异常磷酸化。     

褪黑素对Alzheimer病模型大鼠认知功能和海马tau蛋白过度磷酸化的影响

目的 研究褪黑素(MT)对Alzheimer病(AD)模型大鼠认知功能和海马tau蛋白过度磷酸化的影响.方法 给大鼠海马内注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)25-35制作AD模型;MT组大鼠从制模前7 d至制模后19 d每日腹腔注射MT,AD组大鼠制模后腹腔注射生理盐水;用Morris水迷宫试验检测大鼠的认知功能,银染法观察海马神经元形态,免疫组化法观察过度磷酸化tau蛋白的表达,并与正常对照组比较.结果 MT组大鼠Morris水迷宫试验结果明显好于AD组(均P＜0.001);海马CA1区磷酸化tau蛋白阳性细胞数(60.0±2.3)明显少于AD组(98.4±3.0)(P＜0.001),与正常对照组比较差异无统计学意义;海马CA1区神经元纤维形态较AD组规则.结论 MT可明显改善AD大鼠的认知功能,并且抑制海马tau蛋白的过度磷酸化.     

Aβ25-35杏仁核注射对大鼠海马tau蛋白磷酸化和AchE的影响

目的 探讨杏仁核注射Aβ25-35对大鼠脑内异常磷酸化tau蛋白(Pser404-tau)及乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。方法 右侧杏仁核注射β-淀粉样肽(Aβ25-35)制备阿尔茨海默病(AD)大鼠模型；用Y-迷宫检测大鼠学习记忆能力；应用免疫组化方法测定Aβ对大鼠海马Pser404-tau的影响；应用分光光度计测定大鼠海马区AchE活性变化。结果 Aβ25-35杏仁核注射可导致大鼠学习记忆功能障碍；AD模型组的Pser404-tau阳性细胞数较假手术组显著增高，而海马AchE活性较假手术组明显降低。结论杏仁核注射Aβ25-35可导致Ser404位点的tau蛋白过度磷酸化和海马胆碱能系统功能损害。     

海马内注射纤丝状Aβ42诱导tau异常磷酸化的研究

目的　观察海马内注射纤丝状Aβ42 后神经元Ser 2 0 2位点磷酸化的tau蛋白 (PS2 0 2 tau)的表达 ,探讨Aβ42 与tau蛋白超磷酸化的关系。方法　应用立体定向技术对老年大鼠进行海马内注射纤丝状Aβ42 ,采用免疫组织化学染色方法 ,显示PS2 0 2 tau的表达情况 ,并进行图像分析。结果　纤丝状Aβ42 注射组双侧海马PS2 0 2 tau的表达明显高于正常组和双蒸水注射组 ,两侧海马PS2 0 2 tau的表达没有明显差异。结论　纤丝状Aβ42 能使PS2 0 2 tau的表达增加 ,提示它具有诱导tau蛋白超磷酸化的效应。     

Aβ25-35杏仁核注射对大鼠海马tau蛋白磷酸化和AchE的影响

目的探讨杏仁核注射Aβ25-35对大鼠脑内异常磷酸化tau蛋白(Pser404-tau)及乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。方法右侧杏仁核注射β-淀粉样肽(Aβ25-35)制备阿尔茨海默病(AD)大鼠模型;用Y-迷宫检测大鼠学习记忆能力;应用免疫组化方法测定Aβ对大鼠海马Pser404-tau的影响;应用分光光度计测定大鼠海马区AchE活性变化。结果Aβ25-35杏仁核注射可导致大鼠学习记忆功能障碍;AD模型组的Pser404-tau阳性细胞数较假手术组显著增高,而海马AchE活性较假手术组明显降低。结论杏仁核注射Aβ25-35可导致Ser404位点的tau蛋白过度磷酸化和海马胆碱能系统功能损害。     

硫胺素缺乏引起脑内β淀粉样蛋白沉积和tau蛋白磷酸化的增加

目的：探讨硫胺素缺乏（TD）对脑内β淀粉样蛋白（Aβ）沉积、tau蛋白磷酸化的影响。方法：硫胺素剥夺饮食结合腹腔注射吡啶硫胺制作TD小鼠模型,正常对照组给予正常饮食及腹腔注射生理盐水。造模13d后取脑,行苏木精-伊红染色观察两组小鼠脑内易损区域病理改变,免疫组织化学染色检测脑内Aβ沉积、tau蛋白磷酸化及β-分泌酶（BACE）的表达情况。结果：苏木精-伊红染色显示TD模型组小鼠内侧丘脑出现典型的对称性针尖样出血;免疫组化显示TD模型组小鼠皮质、海马及丘脑均出现Aβ沉积,且丘脑Aβ沉积较皮质及海马更为明显,tau蛋白磷酸化及BACE的阳性细胞数显著增加。正常对照组小鼠苏木精-伊红染色脑内未见病理损伤,皮质、海马及丘脑均未发现Aβ沉积,tau蛋白磷酸化及表达BACE的阳性细胞数均明显低于TD模型组,两组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：TD可引起Aβ沉积、tau蛋白磷酸化增加等阿尔茨海默病的特征性病理改变,且Aβ沉积可能与上调BACE的表达有关。     

海马内注射纤丝状Aβ42诱导tau异常磷酸化的研究

目的观察海马内注射纤丝状Aβ42后神经元Ser 202位点磷酸化的tau蛋白(PS202-tau)的表达,探讨Aβ42与tau蛋白超磷酸化的关系.方法应用立体定向技术对老年大鼠进行海马内注射纤丝状Aβ42,采用免疫组织化学染色方法,显示PS202-tau的表达情况,并进行图像分析.结果纤丝状Aβ42注射组双侧海马PS202-tau的表达明显高于正常组和双蒸水注射组,两侧海马PS202-tau的表达没有明显差异.结论纤丝状Aβ42能使PS202-tau的表达增加,提示它具有诱导tau蛋白超磷酸化的效应.     

脑缺血对阿尔茨海默病大鼠认知功能的影响及炎性机制探讨

目的：探讨脑缺血对阿尔茨海默病（AD）大鼠认知功能的影响及可能机制。方法：大鼠海马注射Aβ1-40成功建立AD大鼠模型后，于AD大鼠右侧纹状体注射内皮素-1建立脑缺血模型，Morris水迷宫检测脑缺血后AD大鼠认知功能的变化，免疫组化、原位杂交和RT-PCR检测海马内星形胶质细胞和IL-1、TNF—α的变化。结果；脑缺血后AD大鼠认知功能明显下降（P〈0．01），海马内星形胶质细胞和炎性细胞因子IL-1、TNF—α的表达都较单纯AD显著增加（P〈0．01）。结论：脑缺血加重了AD大鼠的认知功能障碍，炎性机制参与了脑缺血促进AD进展的过程。     

CuSO_4对阿尔茨海默病模型行为学和病理学的影响

目的研究CuSO4对阿尔茨海默病模型大鼠行为学和病理学的影响。方法 SD大鼠经水迷宫淘汰后随机分为6组,正常组、PBS组、AD模型组、低剂量CuSO4组(1 mg/kg)、中剂量CuSO4组(3 mg/kg)、高剂量CuSO4组(5 mg/kg)。处理:PBS组海马CA1区注射无菌PBS溶液;AD模型组为右侧海马注射凝聚态Aβ1⁴2;低中高剂量CuSO4组分别在AD造模成功后取右侧侧脑室注射无菌CuSO4溶液。用Morris水迷宫检测大鼠的行为学变化,冰冻切片HE染色和尼氏染色观察神经元形态学变化情况。Western blot检测总tau蛋白和糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的表达变化。结果与正常组和PBS组相比较,AD模型组大鼠的学习记忆能力下降,神经元凋亡严重,GSK-3β和tau蛋白的表达增加;3组CuSO4处理组与AD组比较,大鼠认知功能下降明显,神经元凋亡严重,GSK-3β和tau表达增加。随着CuSO4注射剂量的增加,大鼠认知功能下降越严重,细胞凋亡越明显,GSK-3β和tau的表达增加。结论 CuSO4侧脑室注射能够损害AD模型大鼠的学习记忆功能,能够促进海马神经元凋亡,能够增加糖原合成酶激酶3β和tau蛋白的表达。     

有氧训练对阿尔茨海默病模型大鼠海马齿状回神经发生的影响

目的：观察有氧训练对β淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠齿状回（DG）神经发生的影响。方法：SD大鼠48只,随机分为假手术组（侧脑室注射生理盐水）,有氧训练组（侧脑室注射Aβ25-35＋4周有氧训练）和实验组（侧脑室注射Aβ25-35）。3组大鼠行Morris水迷宫行为学检测,免疫组织化学方法检测海马DGBrdU阳性细胞数,以确定有氧训练对细胞存活的影响;微管相关蛋白免疫组化染色观察新生神经元的突起生长。结果：①与假手术组比,实验组逃避潜伏期显著延长（P〈0.05）;有氧训练组与实验组比,逃避潜伏期明显缩短（P〈0.05）;有氧训练组逃避潜伏期与假手术组比,差异无统计学意义。②与假手术组比,实验组DGBrdU阳性细胞数显著减少（P〈0.05）。③与假手术组比,实验组DG新生神经元突起的数量明显减少（P〈0.05）。④与实验组比,有氧训练可改善DGBrdU阳性细胞的显著减少（P〈0.05）、保护神经元突起的生长（P〈0.05）。结论：Aβ25-35能诱导AD大鼠模型的建立,损害新生神经元突起生长和新生神经元的存活;有氧训练可改善Aβ25-35损害的大鼠新生神经元突起生长和新生神经元的存活。     

雷公藤氯内酯醇对大鼠海马注射β淀粉样蛋白后诱导型一氧化氮合酶的影响

目的：研究雷公藤氯内酯醇（T4）对阿尔茨海默病（AD）大鼠脑内诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达及NO产生的影响。方法：通过大鼠海马注射Aβ1-40建立AD大鼠模型,以腹膜腔注射T4作为干预措施,免疫组化方法检测iNOS,硝酸还原酶法检测硝酸盐／亚硝酸盐水平。结果：AD组大鼠海马iNOS表达和NO产生较假手术组明显增加,Aβ＋T4组大鼠海马iNOS表达和NO产生较Ap组减少。结论：T4可以抑制Aβ1-40诱导的iNOS表达和NO产生。     

海马注射Aβ25-35对大鼠CA1区tau蛋白和MAP2影响的研究

目的采用β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）25—35注射法建立Alzheimer病（Alzheimer disease,AD）大鼠模型,观察该AD模型中tau蛋白和微管相关蛋白2（microtubule-associated protein-2,MAP2）表达情况。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分成健康对照组、假手术组及AD模型组,以凝聚状态的Ap25—35经大鼠右侧海马注射制作AD模型,造模2周后应用HE染色和免疫组化方法,观察AD模型鼠脑中海马CA1区病理形态以及tau蛋白和MAP2的表达。结果AD模型组大鼠海马CA1区锥体细胞层紊乱、变稀、中断、数量减少,同时可见许多细胞体积缩小,胞核固缩且染色加深。AD模型鼠海马CA1区AD模型组tau蛋白阳性细胞（62．13&#177;4．12）个／HP,较健康对照组[（26．78&#177;3．46）个／HP3与假手术组[（26．36&#177;3．13）个／HP]明显增高（均P〈0．01）;MAP2阳性细胞吸光度值AD模型组为5．13&#177;4．12,较健康对照组（28．78&#177;3．46）与假手术组（29．36&#177;3．13）明显减少,差异有统计学意义（均P〈0．01）。结论在AB诱导的AD模型中tau蛋白表达增高,MAP2表达减低。     

阿尔茨海默病的神经再生研究进展

阿尔茨海默病（AD）是一种神经退行性疾病，其病理特征表现为β 淀粉样蛋白（Aβ）的异 常沉积，tau 蛋白异常磷酸化，以及由这些引发的神经元变性、坏死。已有研究表明海马神经再生与AD 息息相关，采用海马神经再生治疗AD已成为具有意义和前景的研究。现对AD 及海马神经再生之间的 关系进行综述。     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞移植痴呆大鼠大脑皮质及海马tau蛋白、β-淀粉样蛋白及神经元超微结构的变化

目的：观察脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞（MSCs）移植对阿尔茨海默病鼠大脑皮层及海马tau蛋白磷酸化、Aβ及海马CA1区神经元超微结构的影响。 方法：采用侧脑室立体定向注射β-淀粉样肽建立阿尔茨海默病动物模型,取单纯或经脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞移植,1月后采用Western bloting 方法检测大脑皮层及海马组织总tau蛋白及磷酸化的tau蛋白,以ELISA方法检测Aβ0,42含量,同时观察海马CA1区神经元超微结构的变化。 结果：①损伤模型组大脑皮层及海马总tau蛋白及磷酸化的tau蛋白明显升高,脑源性神经营养因子修饰的骨髓间质干细胞能够降低其表达,与损伤模型组相比有显著性差异(P<0.01),与正常对照组、骨髓间质干细胞未修饰组相比无显著性差异（ P>0.05）。②损伤模型组大脑皮层及海马Aβ40,42明显升高,脑源性神经营养因子修饰的骨髓间质干细胞能够降低其表达,与损伤模型组及骨髓间质干细胞组相比有显著性差异（P<0.01或P<0.05）,与正常对照组相比无显著性差异（ P>0.05）。③损伤模型组大鼠海马CA1区神经元出现粗面内质网扩张、膜断裂,线粒体数目减少、线粒体肿胀、核膜不清等改变,脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞对上述改变有减轻作用,较骨髓间质干细胞未修饰组明显。 结论：脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞可以降低阿尔茨海默病模型鼠大脑皮层及海马组织tau蛋白磷酸化,减轻Aβ的含量,对海马CA1区神经元具有保护作用。     

经颅电刺激对阿尔兹海默病大鼠学习记忆能力和海马CA_1区磷酸化tau蛋白表达情况的影响

目的探讨经颅电刺激对阿尔兹海默病(Alzeheimer’s disease,AD)大鼠学习记忆能力和海马CA_1区磷酸化tau蛋白表达的影响。方法健康SD大鼠,随机分为:正常组、假手术组、模型组及经颅电刺激2 w、4 w、6 w组。采用大鼠侧脑室注射Aβ25-35凝聚态β-淀粉样肽,同时腹腔注射D-半乳糖的方法,建立AD动物模型。Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习、记忆能力,HE染色,观察海马CA_1区形态学结构,免疫组化测定海马CA_1区磷酸化tau蛋白表达情况。结果 (1)Morris水迷宫实验大鼠测试学习和记忆能力,经颅电刺激2 w组与模型组比较差异无统计学意义(P0.05),经颅电刺激4 w组、6 w组与模型组比较,逃避潜伏期成绩均好于模型组,差异有统计学意义(P0.05);(2)随电刺激时间延长,经颅电刺激各组磷酸化tau蛋白量逐渐降低,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论经颅电刺激能够改善阿尔兹海默病大鼠的学习记忆能力,机制可能与下调海马CA_1区磷酸化tau蛋白表达有关,对细胞的重塑有积极影响,远期效果有待进一步研究。     

葛根素对Alzheimer病大鼠海马tau蛋白过度磷酸化及胆碱乙酰转移酶活性的影响

目的探讨葛根素(Pue)对Alzheimer病(AD)大鼠海马色氨酸404位点tau蛋白过度磷酸化(Pser404tau)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、AD组和Pue组;右侧杏仁核注射β淀粉样肽(Aβ2535)制备AD大鼠模型,假手术组同样部位注射三氟乙酸;用Y型迷宫检测各组大鼠学习记忆能力;应用免疫组化方法检测各组大鼠海马Pser404tau阳性细胞及ChAT阳性细胞的表达。结果(1)与假手术组相比,AD组大鼠迷宫试验成绩下降,海马Pser404tau阳性细胞数明显增加,ChAT阳性细胞数明显减少(均P<0.01);(2)与AD组相比,Pue组学习记忆成绩明显提高(P<0.05),Pser404tau阳性细胞数明显降低,ChAT阳性细胞数明显增加(均P<0.01)。结论Pue明显改善AD大鼠学习记忆能力,可能与其抑制tau蛋白过磷酸化反应、减轻胆碱能神经元损伤、增加ChAT活性和功能、催化Ach合成有关。     

葛根素对AD大鼠脑内Aβ1-40和Bax表达的影响

目的研究杏仁核注射β-淀粉样肽(Aβ25-35)所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑内Aβ1-40、Bax的表达变化,以及葛根素(Pue)的影响。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、AD模型组和Pue治疗组,以Aβ25-35右侧杏仁核注射制备大鼠AD模型,用Y-型迷宫检测大鼠学习记忆能力,用免疫组织化学方法检测大脑皮层与海马组织Aβ1-40和Bax的表达。结果假手术组脑内有Aβ1-40、Bax的少量表达,两者均以皮层内为多,海马组织内少;AD模型组大鼠皮层和海马组织Aβ1-40与Bax的表达增加,较假手术组大鼠有显著性差异,P<0.01;Pue能改善AD模型组大鼠的学习记忆能力,Pue治疗组大鼠皮层和海马组织Aβ1-40、Bax表达减少,与AD模型组比较有显著性差异,P<0.05。结论Pue可能通过下调脑组织Aβ1-40和Bax表达,抑制β-淀粉样肽的神经毒性,减轻脑皮层和海马神经元凋亡,具有神经保护及抗痴呆作用。     

熟地黄抑制阿尔茨海默病样大鼠海马神经元凋亡的作用

目的探讨凋亡机制在β-淀粉样肽致阿尔茨海默病(AD)作用中的意义及熟地黄对Aβ神经毒的干预效果。方法用β-淀粉样肽1￣40片段(Aβ1-40)行大鼠侧脑室注射以建立AD样病变动物模型;用Morris水迷宫测试系统检测大鼠学习记忆功能;蛋白印记法及激酶活性测定法检测海马内半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达和活性,琼脂糖凝胶电泳观察海马神经元凋亡;以熟地黄(大、小剂量)对Aβ1-40处理的大鼠连续灌胃21d,观察其干预效果。结果大鼠脑内注射Aβ1-40后,经行为学检测发现其学习记忆功能明显减退;海马内caspase-3含量和活性明显增高,细胞核DNA降解;经熟地黄灌胃处理后,对上述变化有不同程度的改善作用。结论Aβ1-40能诱导海马神经元凋亡,熟地黄对Aβ1-40诱导的大鼠海马神经元凋亡有保护作用,这可能是其改善AD样大鼠学习记忆功能作用机制之一。     

Alzheimer病患者脑tau、β-tubulin的表达

目的 观察Alzheimer病（AD）患者脑tau、β-tubulin的表达、分布与神经元骨架改变的关系。方法 采用免疫组织化学方法观察tau、β-tubulin,在8例AD、5例非痴呆老人（ND）脑海马、嗅球、脑室周围皮质等部位的表达并进行半定量分析。结果 （1）AD组tau蛋白与ND组相比表达明显增加（P＜0．001）,主要在额叶、颞叶、海马、脑室周及嗅球的表达增高（P＜0．05）;顶叶、枕叶无明显差异。大脑新皮层、海马神经元树突、胞膜均有表达,细胞核膜部分着色,部分神经元呈典型NET样结构;星形胶质细胞也有表达。此外,神经毡细丝、老年斑亦有广泛表达。ND组tau散在表达,无NFT样神经元。（2）AD组的β-tubulin明显减少（P＜0．001）,额叶、颞叶、顶叶、海马及脑室周表达明显下降（P＜0．05）;而枕叶与嗅球无差异。β-tubulin在ND组,主要是海马及皮质神经元树突上广泛表达,白质区轴索结构也有阳性表达。结论 AD患者脑内tau表达增高且存在区域分布差异;而tau的过度产生与β-tubulin的表达减少和晚期AD脑内广泛的神经元丢失、结构破坏相一致,提示AD脑内神经原纤维缠结形成与二者改变的机制值得进一步探讨。