甲状旁腺素对心肌细胞Ca~(2+)跨膜转运的影响

应用放射性同位素~(45)Ca示踪技术观察了牛甲状旁腺素_(1-34)活性片段(bPTH_(1-34))对培养乳鼠心肌细胞钙离子(Ca~(2+))跨膜转运的影响.并且镜检了细胞的搏动频率和采用蛋白质竞争结合法检测了胞内cAMP的含量。结果表明:bPTH_(1-34)(1×10~(-7)mol·L~(-1))显著增加静息细胞的搏动频率.明显增高细胞cAMP的含量.并且显著增加静息、高K~+去极化及NA受体兴奋状态细胞的外Ca~(2+)内流.同时抑制胞内Ca~(2+)外排。提示其强心与细胞内Ca~(2+)升高的机理之一.可能与细胞内cAMP升高有关。     

(一)蝙蝠葛苏林碱对兔淋巴细胞内钙含量的影响

采用钙荧光指示剂Fura—2/Am定量测试法检测了静息淋巴细胞胞浆内游离钙浓度,并以Ca~(2+)载体A23187作为阳性对照.观察了(一)蝙蝠葛苏林碱(8701)对兔淋巴细胞胞浆内Ca~(2+)浓度的影响。结果表明:8701的各种实验浓度均可显著地促进淋巴细胞内Ca~(2+)浓度增加,在浓度为10~(-4)mol·L~(-1)时,增加细胞内Ca~(2+)浓度的作用显著高于Ca~(2+)载体A23187的作用(P<0.01),提示该药有可能作为淋巴细胞的刺激剂或在高浓度时可能造成淋巴细胞的Ca~(2+)中毒作用。     

蛇床子素对家兔主动脉条的钙拮抗作用

蛇床子素30μmol·L~(-1)及100μmol·L~(-1)使NE、CaCl_2和高K~+除极化所致的家兔主动脉条收缩量—效曲线右移,最大反应降低.表明蛇床子素有松弛血管平滑肌作用,并与Ca~(2+)呈非竞争性拮抗作用.和阻滞α受体或激动β受体无关;选择性作用于电位依赖性Ca~(2+)通道,抑制细胞外Ca~(2+)内流;在100μmol·L~(-1)时,明显减弱NE诱导的依赖细胞内Ca~(2+)收缩。证明蛇床子素松弛血管平滑肌作用可能与其Ca~(2+)拮抗作用有关。     

赛庚啶对犬心肌线粒体膜ATP酶活性和~(45)Ca~(2+)摄取功能的影响

结果表明,本实验条件下制备的心肌线粒体基本上没有细胞膜及肌浆网的污染 赛庚啶(CyP)对正常犬心肌线粒体膜ATP酶活性有一定的抑制作用,其IC_(50)为O.839mmol·L~(-1).正常犬心肌线粒体的~(45)Ca~(2+)摄取至第10min趋于稳定,其Ca~(2+)摄取量可达141±s 22 nmol·mg~(-1)蛋自;Cyp对心肌线粒体的~(45)Ca~(2+)摄取过程有较强的抑制作用,其IC_(50)为31μmol·L~(-1)。     

盐酸小檗碱胺对乙酰胆碱引起的内皮依赖性血管舒张的影响

在无Ca~(2+)krebs液中,乙酰胆碱(Ach)诱发兔主动脉舒张受抑制.恢复ca~(2+)浓度后,抑制解除。在去甲肾上腺素(NE)04μm ol·L~(-1)组中,盐酸小檗胺(HBA)I.10μmol·L~(-1)和维拉帕米(Ver)0.1.1μmol·L~(-1)对Ach的舒张反应无抑制,且HBA还有促进舒张的趋势.而HBA100μmol·L~(-1)和Ver10μmol·L~(-1)则呈明显抑制作用。在KCI20mmol·L~(-1)组中,HBA,Ver3个浓度都对Ach舒张有促进作用。结果提示,HBA对内皮依赖性舒张的影响是复杂的,较高浓度抑制舒张.较低浓度促进舒张。可见,HBA对内皮细胞Ca~(2+)转运的影响.也即对EDRF的影响是复杂的。     

1-磷酸鞘氨醇促进胰岛素分泌及可能机制研究

目的研究1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌效应及其分子机制,探索糖尿病治疗药物的作用靶点。方法使用胶原酶P消化SD大鼠胰腺,Histopaque 1077梯度离心获得胰岛,Dispase II消化得到胰岛细胞。不同浓度S1P(0~20μmol·L~(-1))干预,观察低糖(2.8 mmol·L~(-1))和高糖(16.7 mmol·L~(-1))条件下胰岛素分泌的变化。膜片钳技术记录β细胞电压依赖性钾通道电流(Kv电流),观察S1P干预后Kv电流的变化。钙成像技术记录β细胞内Ca~(2+)浓度,观察不同浓度S1P(0~20μmol·L~(-1))干预后细胞内的Ca2+浓度变化。结果与低糖组相比,高糖组明显刺激了胰岛素的分泌(P<0.01)。低糖条件下,S1P没有改变胰岛素分泌量(P>0.05)。高糖条件下,S1P浓度依赖性增加了胰岛素分泌量(P<0.01)。与对照组相比,S1P明显抑制了β细胞Kv电流(P<0.01)。高糖条件下,S1P浓度依赖性升高了胰岛细胞内Ca~(2+)浓度(P<0.01)。结论 S1P可能通过抑制β细胞Kv电流、升高细胞内Ca2+浓度,最终促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌。     

D-聚甘酯对血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 用 H_2O_2(200μmol·L~(-1))诱导人脐静脉内皮细胞株ECV304氧化损伤,研究D-聚甘酯(DPS)对血管内皮细胞损伤的保护作用。方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,采用试剂盒测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。同时采用流式细胞仪检测损伤后细胞内Ca~(2+)含量,并观察DPS对H_2O_2导致的内皮细胞内钙离子浓度的影响和细胞凋亡的作用。结果DPS 0.1,1,10μg·L~(-1)对损伤后ECV304具有促进增殖作用。DPS 0.1,1μg·L~(-1)使细胞培养液中SOD水平升高并降低细胞内MDA含量,4个剂量的DPS均能使细胞培养液中LDH释放减少。流式细胞术检测结果显示DPS能降低H_2O_2导致的细胞内Ca~(2+)含量的升高,并抑制细胞凋亡。结论 DPS具有保护H_2O_2致血管内皮细胞损伤的作用,其机理可能与其抗脂质过氧化作用,降低损伤后细胞内Ca~(2+)含量并抑制细胞凋亡有关。     

牛磺酸对大鼠心肌Ca~(2+)调节作用的研究

研究了牛磺酸对大鼠离体左心室肌~(45)Ca内流的影响。对照组~(45)Ca内流与KH液中Ca_-~(2+)浓度有关。当Ca~(2+)浓度分别为0.62(低Ca~(2+)),1.25(正常Ca_-~(2+))和1.87(高Ca_-~(2+))mmol/L时,~(45)Ca内流相应为1.02±0.25,1.37±0.14,和1.45±0.14μmol/g。加入牛磺酸后,上述情况显著改变。低Ca_-~(2+),Tau 10、20、40mmol/L能分别使~(45)Ca内流增加为1.11±0.11,1.45±0.12和1.48±0.09μmol/g:正常Ca~(2+)时,Tau 10、20、40mmol/L能分别使~(45)Ca内流减少为1.19±0.07,1.14±0.23和0.97±0.24μmol/g:高Ca~(2+)时、Tau 10、20、40mmol/L能使~(45)Ca内流显著降低为1.12±0.05,0.58±0.18和0.53±0.10μmol/g。结果表明不同Ca~(2+)浓度能影响心肌~(45)Ca内流,牛磺酸对心肌~(45)Ca内流有双向调节作用,这可能在其抗心律失常机制中起重要作用。     

牛磺酸对氟致神经细胞内钙离子浓度和细胞凋亡改变的干预研究

目的通过观察牛磺酸对氟化钠(Na F)致神经细胞内钙离子(Ca~(2+))浓度和细胞凋亡改变的干预作用,为探讨氟中毒的机制及其预防提供实验依据。方法出生7 d昆明种小鼠乳鼠腹腔注射不同剂量的牛磺酸溶液,于注射后2 h在腹腔注射氟溶液。实验共分4组,即空白对照(生理盐水);氟组(Na F 2.8 mg/kg·bw);低剂量牛磺酸加氟组(牛磺酸7.5 mg/kg·bw+Na F 2.8 mg/kg·bw);高剂量牛磺酸加氟组(牛磺酸15.0 mg/kg·bw+Na F 2.8 mg/kg·bw)。激光扫描共聚焦显微镜记录细胞内Ca~(2+)荧光图像,流式细胞术检测细胞凋亡。结果牛磺酸可以降低Na F引起的神经细胞内Ca~(2+)的升高,高剂量牛磺酸组Ca~(2+)荧光值明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01)且牛磺酸组与氟组之间差异亦有统计学意义(P0.01);同时牛磺酸还可明显抑制由于Na F影响所导致的神经细胞凋亡,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)且牛磺酸组与氟组比较亦有统计学意义(P0.01)。结论在本实验条件下,适当剂量的牛磺酸可在一定程度上改善氟所致神经细胞钙超载及神经细胞凋亡等损害。     

脑中的钙离子调节蛋白

第二信使1,4,5-三磷酸肌醇(IP_3)与细胞内膜(据信是内质网的特化部位)上的受体结合。结合后 Ca~(2+)即从这些膜部位中释放出来,以调节 Ca~(2+)依赖性细胞过程。对于钙库来说,有三种组分是必需的,即 IP_3受体、将Ca~(2+)泵入上述膜部位的 Ca~(2+)-ATP 酶和一种螯合 Ca~(2+)的 Ca~(2+)-结合蛋白。已鉴别出两类Ca~(2+)-螯合蛋白,分别为隐钙素(calse-questrins)和钙网合素(calreticulins)。已证明 IP_3受体和 Ca~(2+)-ATP 酶存在于脑,特别是小脑的微粒体膜上。最近 Volpe等报道了隐钙素存在于鸡小脑的免疫学和生化证据。小脑的隐钙素在肽指纹图谱和氨基酸序     

牛磺酸抗脂质过氧化作用与调节Ca~（2＋）作用

在培养心肌细胞缺氧－再给氧模型上，发现牛磺酸（２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，终浓度）能显著降低细胞内脂质过氧化物（ＬＰＯ）荧光强度；剂量依赖性地提高心肌细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性；以荧光比率法（荧光探针为Ｉｎｄｏ－１－ＡＭ）在粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）上测定细胞内游离Ｃａ２＋荧光比率，结果显示缺氧及再给氧后细胞内Ｃａ２＋荧光比率明显升高，２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１牛磺酸能显著减少Ｃａ２＋荧光比率；分别以２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１、０．４ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｃａ２＋及０．１ｍｍｏｌ·Ｌ－１维拉帕米处理细胞，牛磺酸能降低高Ｃａ２＋引起的细胞搏动加快；而提高低Ｃａ２＋及维拉帕米处理后的细胞搏动。提示牛磺酸对培养心肌细胞再给氧损伤有保护作用，其机理与其提高心肌细胞ＳＯＤ活性、降低细胞内游离Ｃａ２＋浓度及对细胞Ｃａ２＋双向调节作用有关。     

牛磺酸对翻转小鼠离体小肠葡萄糖──钠转运电位的影响

利用翻转小鼠离体小肠囊的方法，观察牛磺酸对葡萄糖－钠转运电位（简称ＰＤ）的影响，借以了解牛磺酸对与糖－钠转运电位密切相关的Ｎａ＋·Ｋ＋－ＡＴＰ酶的影响。结果２．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１和５ｍｍｏｌ·Ｌ－１的牛磺酸均可提高ＰＤ（Ｐ＜０．０１），而１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１和２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１的牛磺酸则对ＰＤ产生相反的作用（Ｐ＜０．０１），推测不同浓度范围的牛磺酸可对Ｎａ＋·Ｋ＋－ＡＴＰ酶产生双向调节作用。     

蛋白激酶C与血管平滑肌α_1肾上腺素受体触发Ca~（2＋）内流的关系

在酶新鲜分离的犬肠系膜上动脉平滑肌细胞，蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的激活剂佛波二丁酯（ＰＤＢ）引起的胞内Ｃａ２＋增高作用可被ＰＫＣ抑制剂１－（５－异喹啉磺酰）－２－甲基哌嗪（Ｈ７）所阻断，而哌唑嗪和普萘洛尔则不能阻断ＰＤＢ的这一作用；１０μｍｏｌ·Ｌ－１苯福林引起的胞内Ｃａ２＋增高作用可被１０和２０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ７部分阻断；在无Ｃａ２＋液，Ｈ７可部分抑制苯福林引起的内Ｃａ２＋释放和外Ｃａ２＋内流，两者分别被抑制了３３±３％和５８±６％；ＫＣｌ（２０－１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１）可浓度依赖性地引起胞内钙升高，这一作用可被１０和２０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ７不同程度地阻断；ＰＤＢ引起的胞内Ｃａ２＋增高也可分别被１．２５和２．５μｍｏｌ·Ｌ－１维拉帕米部分和全部阻断。上述结果提示ＰＫＣ参与苯福林引起的部分内Ｃａ２＋释放和外Ｃａ２＋内流，但以参与外Ｃａ２＋内流为主；这一作用可能与ＰＫＣ激活，引起电压依赖性Ｃａ２＋通道开放有关。     

钙流拮抗药对眼镜蛇心脏毒升高大鼠心肌胞浆Ca~（2＋）作用的影响

Ｆｕｒａ－２荧光测定实验显示，眼镜蛇心脏毒（ＣＴＸ）能明显升高新鲜分离的大鼠心肌细胞的胞浆Ｃａ２＋浓度。维拉帕米在完全阻断高Ｋ＋引起胞浆Ｃａ２＋升高的浓度下（１μｍｏｌ·Ｌ－１）．能明显抑制ＣＴＸ作用，但不能阻断之。１．５μｍｏｌ·Ｌ－１ＣＴＸ使离体大鼠Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ心脏收缩幅度逐渐减少，最后心脏停搏于收缩期。维拉帕米及硝苯吡啶均能明显延长心脏的搏动时间，但不能阻止ＣＴＸ引起的心脏停搏。结果提示，ＣＴＸ引起膜去极化使电位依赖性Ｃａ２＋通道开放不是ＣＴＸ触发Ｃａ２＋内流的唯一机理。     

三七皂甙单体Rb_1对心肌细胞Ca~（2＋）内流作用的研究

应用Ｆｕｒａ－２荧光技术及放射配基结合实验探讨三七皂甙单体Ｒｂ１对心肌细胞胞外Ｃａ２＋内流的作用。０．０４ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｒｂ１可以抑制高钾引起的大鼠心肌细胞胞浆Ｃａ２＋浓度的升高，且呈浓度依赖性；可以完全阻断高钾基础上的异丙肾上腺素的作用。其作用与钙通道拮抗剂维拉帕米类似。Ｒｂ１对大鼠心肌细胞膜上β受体亲和力和受体数均无明显影响。结果提示：Ｒｂ１对心肌细胞电压依赖性钙通道开放引起的胞内钙升高有抑制作用；对β受体相关联的钙通道开放引起的胞浆Ｃａ２＋升高也有抑制作用。而不影响β受体本身。     

3,4′,5-三羟基芪-3-β-单-D-葡萄糖甙抑制凝血酶非依赖花生四烯酸途径诱导兔血小板聚集作用及机理

3,4’,5-三羟基芪-3-β-单-D-葡萄糖甙(PD)0.33,0.56,0.95,1.63,2.79mmol·L~1能显著抑制2.3mmol·L~1·s~1凝血酶诱导的家兔洗涤血小板聚集,呈良好的量效关系,PD对1 min和最大血小板聚集抑制率IC_(50)分别为0.57和1.16 mmol·L~1,并能使血小板聚集延迟相延长,血小板聚集速度减慢,PD0.33～1.63mmol·L~1对血小板聚集时TXA_2释放无明显影响,仅在浓度为2.79mmol·L~1时,才明显减少TXA_2释放,PD的作用与阿司匹林不完全相同.这可能与它们的作用机理不同有关,本文还观察了PD0.33 mmol·L~1有抑制凝血酶诱导兔血小板胞浆游离钙离子浓度升高的作用。     

脂质体和牛磺酸对阿霉素心肌毒性的影响

在大鼠阿霉素急性心肌损伤的模型上，观察了脂质体联合携载阿霉素和牛磺酸对阿霉素所致心肌损伤作用的影响。结果表明：阿霉素可引起血浆ＬＤＨ、ＣＰＫ、ＭＤＡ及心肌组织ＭＤＡ和Ｃａ２＋水平明显升高，心肌组织细胞出现广泛的变性和水肿。用牛磺酸或脂质体包裹阿霉素均可降低阿霉素对心肌毒性的作用，血浆ＬＤＨ、ＣＰＫ、ＭＤＡ及心肌ＭＤＡ和Ｃａ２＋水平比损伤组织降低５％～４６．９％（Ｐ＜０．０５）。脂质体联合携载阿霉素和牛磺酸，上述生化指标进一步降低，与正常组无明显差异，病理检查结果与上述生化指标变化一致。结果提示：脂质体联合携载阿霉素和牛磺酸具有显著减轻阿霉素心肌毒性作用。     

前胡丙素对培养心肌细胞~（45）Ca~（2＋）摄入及细胞内游离钙的影响

利用培养的乳鼠心肌细胞测定细胞４５Ｃａ２＋的摄入及细胞内游离钙的浓度。结果表明，前胡丙素（Ｐｒａ－Ｃ）１０－１００μｍｏｌ·Ｌ－１依浓度抑制４５Ｃａ２＿的摄入，并抑制由３０μｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ所引起的４５Ｃｓ２＋摄入的增加，同时Ｐｒａ－Ｃ１００μｍｏｌ·Ｌ－１对去甲肾上腺素所诱发的４５Ｃａ２＿摄入的增加也有抑制作用。Ｐｒａ－Ｃ１０μｍｏｌ·Ｌ－１和维拉帕米１０μｍｏｌ·Ｌ－１能抑制细胞外高钾（３０，５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高，同时Ｐｒａ－Ｃ３０ｍｏｌ·Ｌ－１和维拉帕米１０μｍｏｌ·Ｌ－１对去甲肾上腺素１０μｍｏｌ·Ｌ－１在无钙及含ＣａＣｌ２１．３ｍｍｏｌ·Ｌ－１的溶液中所引起的［Ｃａ２＋］，的增加也有抑制作用。提示前胡丙素对心肌细胞的作用与其阻滞钙通道有关。