分泌抗破伤风类毒素人单克隆抗体的人鼠杂交瘤细胞系的建立

作者采用小鼠骨髓瘤细胞系与破伤风类毒素免疫的人外周血淋巴细胞进行融合,对影响人-鼠杂交瘤细胞制备人单抗成功的因素进行了探讨。按免疫时间(天)及体外刺激与否分为四组、其中以 PWM+TT 体外刺激 PBL(比体外不刺激)的细胞融合率高,且易建成稳定分泌抗体的细胞系。经5次克隆化后获得5株抗 TT 的人单抗杂交瘤细胞系。经双扩确定 IgG2株,IgM3株。冻存10个月后复苏,传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人 IgM 的分泌量为0.42～1.15μg/ml。经染色体鉴定确为人-鼠杂种细胞。     

抗卵巢上皮癌人单克隆抗体HMD_4的制备及其特性的研究

本文报道用人-鼠杂交技术制备出一株分泌人IgG型单克隆抗体的人-鼠杂交瘤细胞系,通过早克隆化和反复再克隆化等使该株细胞已稳定分泌15月以上。染色体核型分析符合人-鼠杂交瘤特征。免疫印迹和免疫组化等方法证实该抗体可识别分子量为55KDa的卵巢上皮癌相关抗原,命名为HMD_4。本文还对如何保持种间杂交瘤分泌功能和人单抗筛选中如何克服内源性Ig问题进行了讨论。     

鼠抗粒细胞集落刺激因子单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

建立鼠粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的杂交瘤细胞系。方法将ＳＰ２／０小鼠骨央瘤细胞和用Ｇ－ＣＳＦ免疫的Ｂａｌｂ／ｃＩＨ ＶＮＵＮＥＲＴＦＸＬＥＱＤ 宜５００ＷＴ 进行融合，用ＥＬＩＳＡ进行克隆化筛选并对杂交瘤细胞分泌的单抗滴度进行检测。     

抗人晚期糖基化终产物受体胞外段不同表位单克隆抗体的制备

目的 制备抗人晚期糖基化终产物受体(RAGE)胞外段单克隆抗体。方法 用纯化人重组RAGE胞外段(氨基酸序列23～342)免疫Balb／c小鼠，取其脾细胞与NS—1融合制备杂交瘤，经筛选和两次克隆化，从制备的腹水中纯化单克隆抗体。结果和结论 获得两株杂交瘤细胞B2．2和E10，其分泌单抗的亚型均为IgG2b。经ELISA、Westernblot和流式细胞仪鉴定，证明两株单抗均可结合重组RAGE及表达于细胞表面的RAGE，且两株抗体识别的位点为远隔表位，所建立的双夹心法可用于检测可溶性重组RAGE。这两株抗体将为研究RAGE相关疾病提供有效的工具。     

抗猪囊虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和特性鉴定

目的：培养、筛选和克隆鼠源杂交瘤细胞株，生产相应特异的针对猪囊虫的单抗并用于临床。方法：用含有弗氏不完全佐剂和1单位IFN的猪囊虫下液皮下注射免疫7周龄小鼠3次后，无菌取出脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP^2/O，在含有50％PEG（分子量4000）的HAT培养液中进行融合，在37℃，含7％CO2的培养箱中培养，随后在正常培养液中进行筛选和克隆化。染色体分析用常规的中期染色体法，单抗类型的滴度测定用ELISA法。结果：用常规的有限稀释法对杂交瘤进行3次筛选和克隆化后获得3株杂交瘤细胞株2H10、5C2和5H6，分别有97、98、和106条染色体，均能稳定地分泌各自特异的单抗。2株单抗为IgG类，另1株为IgM类，滴度分别为1：1000、1：800和1：1600。结论：用杂交瘤技术，我们获得了3株杂交瘤细胞株，均能稳定地分泌高滴度的针对猪囊虫抗原的特异单抗。     

激发型鼠抗人4-1BBL单克隆抗体的研制

目的鼠抗人4—1BBL单克隆抗体的制备及其生物学特性研究。方法以高表达人4—1BBL分子的基因N-程细胞株L929／4—1BBL为免疫原免疫BALB／c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经过选择性克隆化培养及流式细胞术分析,筛选分泌特异性抗A4—1BBL单抗的杂交瘤细胞株;采用快速定性试纸法鉴定单抗亚类、间接免疫荧光法检测单抗对肿瘤细胞株的识别谱。进而,将所获抗人4-1BBL单抗体外刺激白血病细胞株U937,通过细胞计数法分析单抗对U937生长的影响。结果获得一株持续、稳定分泌鼠抗人4—1BBL单抗的杂交瘤细胞株,并将其分泌的单抗命名为39A8。单抗39A8可有效识别不同肿瘤细胞株表达的4—1BBL,经细胞计数分析,39A8对U937细胞的生长具有明显的促增殖作用。结论单抗39A8是可激发4-1BBL逆向信号的单克隆抗体,是研究4—1BBL分子及其功能的重要工具。     

抗人成骨肉瘤杂交瘤细胞系的建立及单克隆抗体特性

目的：建立抗人成骨肉瘤单克隆抗体杂交瘤并对杂交瘤细胞及抗体特性进行研究。方法 利用我室自建成骨肉瘤细胞系（ＯＳ－９６０７）免疫ＢＡＬＢ／c小鼠，取其脾细胞与骨髓 瘤细胞Ｓp２／０两便，经筛选和克隆化，制备杂交瘤细胞系，用免疫组化ＡＢＣ方法研究交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性。结果：制得２株能持续、稳定分汔抗体的杂交瘤细胞系。其中６Ｅ７和５Ｄ３株杂交瘤细胞经过１００d连续培养，背地里克隆抗体６Ｅ７mＡb和５     

人骨髓间充质干细胞表面抗原单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备人骨髓间充质干细胞(MSCs)的特异性细胞表面抗原的单克隆抗体.方法以人骨髓MSCs为抗原,常规方法免疫Balb/c小鼠,细胞融合制备杂交瘤细胞,并用免疫荧光法在流式细胞仪上对杂交瘤产生的抗体进行初测和复测.结果通过分泌的抗体与人MSCs表面抗原特异性结合的鉴定,进行杂交瘤筛选,将复测为阳性的克隆连续克隆化培养,获得两株持续分泌抗人MSCs的杂交瘤细胞株:8g8、8f9.两株单抗经体外连续传代培养,生长良好,稳定分泌抗体.结论人骨髓MSCs的特异性细胞表面抗原单克隆抗体可望在MSCs的提纯和体外富集、特异性骨病的诊断等方面有广阔的应用前景.     

人肝癌培养细胞粗提膜相关抗原的单克隆抗体

用人肝癌培养细胞粗提膜免疫Balb/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤(SP_2/o)细胞在PEG作用下融合。以LLISA筛选抗体。通过免疫荧光和免疫酶标进行组织定位。初步获得一株抗人肝癌细胞膜相关抗原的单克隆抗体杂交瘤—命名FP—5。用此抗体在涂片上对人肝癌细胞膜呈阳性反应,在3例手术切除的人肝癌活检冰冻切片中,肝癌组织细胞亦呈阳性反应。FP—5细胞株染色体为83—108条,含1—2条中着丝点标记染色体。经6次克隆化体外培养6个多月,仍持续分泌特异性抗体,此抗体鉴定属鼠的IgM型。     

抗恶性疟单抗独特型决定簇之第二单克隆抗体的制备和鉴定

以分泌抗恶性疟红内期抗体的小鼠杂交瘤细胞系94D1诱生的腹水,通过Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化IgG,并以此作为免疫原皮下多点免疫Wistar大鼠。加强免疫后3天取脾与小鼠SP~2/0瘤细胞进行异种间的细胞融合,经间接ELISA法检测筛选和5次克隆化,最终得到一株生长稳定、连续分泌特异抗体的异种杂交瘤细胞系41RF5。经过多次冷冻和复苏以及体外连续传代培养16个月,其稳定性与小鼠×小鼠杂交瘤细胞相近。选择8株单抗和SP2/0IgG作为包被抗原,用间接ELISA法对41RF5特异性进行鉴定.结果显示,41RF5单抗只与94D1呈阳性反应,与其余各种包被抗原均呈阴性反应,表明41RF5具有良好的抗94D1单抗独特型决定簇的特异性。41RF5培养上清中特异的抗体效价为1:1280。     

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备及初步应用

将人绒毛膜促性腺激素(hCG)免疫的BALB/C小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,阳性孔经2～3次克隆化、液氮冻存后多次再克隆化和动物接种,获得了12株分泌抗hCG单克隆抗体(McAbs)的稳定杂交瘤株。12种McAbs除1种为IgM外,均为IgG_1;RIA滴度及亲和常数分别在0.2～7.0×10~4和0.4～5.1×10~8M~(-1)之间。有些McAbs已成功地用于血清和尿中hCG一步双位快速ELISA及滋养叶肿瘤组织切片的免疫细胞化学染色等。     

抗人肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

用国人肝癌细胞免疫BALB/c鼠,经三次细胞融合、反复筛选及克隆化,得到了15株杂交瘤;又经正常肝组织及肝癌细胞吸收试验,进一步选出两株杂交瘤。它们分别能持续稳定地分泌特异性抗人肝癌单克隆抗体A-QGY_1和A-QGY_2。此两株单克隆抗体只与体外培养或患者组织中的肝癌细胞产生反应,而不与正常成人和胎儿肝组织及其他多种正常或肿瘤组织发生反应,与乙肝病毒抗原及甲胎蛋白、癌胚抗原等也无免疫交叉反应。     

抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备

目的：制备抗人甲状腺球蛋白（Ｔｇ）单克隆抗体，为建立高灵敏度的Ｔｇ检测方法做准备。方法：从人的甲状腺组织中提取Ｔｇ做抗原，经腹腔免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＳＰ２／ｏ融合，筛选及克隆化。结果：获得２株分泌抗人Ｔｇ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。鼠腹水抗体效价达１．０２×１０６。经免疫球蛋白类别及亚类的鉴定，２株单克隆抗体均为ＩｇＧ１亚类，轻链为Ｋ型。结论：我们制备的抗Ｔｇ单克隆抗体具有良好的免疫反应特性，符合Ｔｇ酶联免疫分析法（ＥＬＩＳＡ）的要求     

抗人晚期糖基化终产物受体胞外段不同表位单克隆抗体的制备

目的 制备抗人晚期糖基化终产物受体(RAGE)胞外段单克隆抗体。方法 用纯化人重组RAGE胞外段(氨基酸序列23~342)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与NS-1融合制备杂交瘤,经筛选和两次克隆化,从制备的腹水中纯化单克隆抗体。结果和结论 获得两株杂交瘤细胞B2.2和E10,其分泌单抗的亚型均为IgG2b。经ELISA、Western blot和流式细胞仪鉴定,证明两株单抗均可结合重组RAGE及表达于细胞表面的RAGE,且两株抗体识别的位点为远隔表位,所建立的双夹心法可用于检测可溶性重组RAGE。这两株抗体将为研究RAGE相关疾病提供有效的工具。     

10株分泌HSV—Ⅱ型单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立

用HSV-ⅡUW268株免疫BALB/c鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选、克隆化后获得10株分泌抗HSV-ⅡUW268株单克隆抗体的细胞系。其中1株仅与HSV-ⅡUW268株发生特异免疫反应,9株与HSV-Ⅱ和HSV-IF_(17)均发生免疫反应。用免疫沉淀试验检测单克隆抗体的Ig类型为IgG_1。保存的杂交瘤细胞仍能稳定地分泌抗HSV-ⅡUW268株的单克隆抗体。     

抗人IgM单克隆抗体的制备及其特征研究

以人IgM作为抗原免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤技术获得5株分泌抗人IgM单抗的杂交瘤细胞株.通过酶联免疫吸附试验、免疫双向扩散试验证明:该组单抗仅与人IgM起反应,而不与其他各类免疫球蛋白反应。间接免疫荧光试验证明:该组单抗测得不同人群外周血淋巴细胞阳性数与用抗B细胞单抗和直接免疫荧光法测得的结果接近.免疫转印试验证明抗体作用的分子量为50～70kd(dalten法定单位为u,换算系数0.9921,下同).提示为IgM.本文还对单抗应用价值进行了讨论。     

抗人胰腺癌单克隆抗体杂交瘤的建立

用小鼠骨髓瘤细胞系SP 2/0与新鲜癌组织匀浆免疫的Balb/C小鼠脾细胞融合制备抗人胰腺癌单克隆抗体。经间接荧光抗体法和免疫组织化学法筛选及有限稀释法克隆化后,获得一株产生与正常人体组织不反应,与人胰腺癌反应率高的抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。     

抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系的建立及其单克隆抗体鉴定

目的：制备分泌抗乙型肝炎病毒末端蛋白mAb杂交瘤并研究杂交瘤细胞及所产生抗体的特性．方法：用经原核表达的乙型肝炎病毒末端蛋白(HBV-TP)免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／O融合，经筛选和克隆化建立杂交瘤细胞系，然后用ELISA法筛选出阳性克隆，以免疫组化ABC方法研究杂交瘤细胞分泌的mAb特性．结果：共筛选出3株能持续、稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系，其杂交瘤细胞经过100d连续培养，mAb分泌稳定，特异性强，腹水抗体效价免疫组化ABC法1：1000。免疫组化检测显示其相应抗原在肝炎及肝硬变组织中呈高表达(80％)，正常肝组织中未见阳性反应；其抗原主要分布于细胞质内．结论：此3株抗乙型肝炎病毒末端蛋白杂交瘤细胞分泌的mAb具有特异亲合性，其成功制备为研究HlBV感染的早期诊断及乙肝患的生物治疗奠定了基础。     

慢性淋巴细胞性白血病独特型McAb的研究

作者通过细胞融合技术获得10株抗独特型McAb,并对抗独特型McAb与各类免疫球蛋白及细胞反应性进行了检测。 作者以纯化的慢性B淋巴细胞性白血病(B-CLL)患者血清IgM免疫经耐受原刺激的BALB/c小鼠,通过两次细胞融合和克隆化,建立分泌抗独特型McAb的杂交瘤细胞株。该McAb属小鼠IgM和IgG亚类,经ELISA和间接混合ELISA夹心法证明,其特异性针对同源患者血清IgM,而对正常人血清及一系列骨髓瘤     

分泌抗人IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用人ＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾脏与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞在ＰＥＧ作用下融合，经３次克隆化后获得五株抗人ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞，用被动血凝法和ＥＬＩＳＡ检测培养上清滴度为２￣４，用琼脂双扩散法证明此单克隆抗体只与人ＩｇＧ发生反应，产生透明沉淀线。经ＩｇＧ亚类血清鉴定，其单克隆抗体均属ＩｇＧ－Ｇ１亚类抗体。五株杂交瘤细胞在液氮保存数月，经反复复苏培养，不改变其分泌抗体的性能。