槐耳清膏联合化疗栓塞治疗兔VX2肝癌的实验研究

目的 观察槐耳清膏联合经肝动脉化疗栓塞(TACE)对兔VX2肝癌生长及转移的影响.材料与方法将VX2瘤粒直接种植于新西兰大白兔左肝内2周,MRI证实已成功接种VX2的荷瘤兔随机分为3组,每组12只,开腹经肝动脉穿刺分别给予不同处理:A组为生理盐水对照组,经肝动脉注入0.2 ml/kg体重生理盐水;B组为TACE组,经肝动脉注入超液态碘化油0.2 ml/kg+丝裂霉素0.5 mg/ks乳剂;C组为TACE+槐耳清膏灌服组,TA-CE方法同B组,同时术后每天灌服槐耳清膏500 mg/kg.每天观察动物生长情况,术后2周处死动物,测量动物体重、肿瘤体积、坏死区面积,计算肿瘤生长率、坏死率;观察肝、肺及腹腔淋巴结转移情况.结果 术前1天3组动物体重、肿瘤体积差异无统计学意义(P>0.05).术后2周,B组动物体重下降明显,与A组、C组相比差异均有统计学意义(P<0.05);A组与C组相比差异无统计学意义(P>0.05).治疗后2周肿瘤体积、肿瘤生长率和肿瘤坏死率B组、C组与A组相比差异均具有统计学意义(P<0.01),B组与C组相比差异亦具有统计学意义(P<0.05).肝和肺的转移:B组与A组相比差异无统计学意义(P>0.05),C组与B组、A组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);腹腔淋巴结转移3组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 槐耳清膏可以改善动物TACE术后的生存质量;抑制肿瘤生长,促进肿瘤坏死;抑制肿瘤转移.     

肝动脉化疗栓塞联合动脉内灌注促肝细胞生长素对兔VX2肝癌模型的疗效研究

目的 观察肝动脉化疗栓塞(transcatheter arterial chemoembolization,TACE )联合动脉内灌注促肝细胞生长素治疗实验兔肝种植瘤灶的疗效.材料与方法30只VX2肝癌模型兔随机分为3组,A组(n=10):单纯TACE组;;B组(n =10);TACE+局部肝动脉促肝细胞生长素灌注组;C组(n=10):假手术组,经肝动脉造影并灌注生理盐水2ml.分别于术前1天及术后3,7,28天抽血检查血清丙氨酸氨基转移酶(ALT);于术前1天及术后28天测量肿瘤最大直径和最小直径(超声),计算肿瘤体积及肿瘤体积增长率,术后28天处死实验动物,行HE染色与免疫组织化学染色(抗CD34染色),计算肿瘤微血管密度(MVD).结果 介入干预前1天3组ALT水平差异无统计学意义(P>0.05);介入干预后3,7,28天3组动物ALT水平差异有统计学意义(P<0.05).术后28天3组动物肿瘤体积、肿瘤体积增长率分别为:A组(3.42±0.45)cm 3、(316.77±82.44)%;B组(4.92±0.38)cm3,(551.36±121.92)%;C组(8.11±0.52) cm3,(818.70±231.27)%.3组两两相比肿瘤体积及肿瘤增长率差异均有统计学意义(P<0.05).术后第28天A,B,C 3组肿瘤MVD分别为:75.97±11.46,85.34±4.90,63.88±10.04,3组两两相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论 TACE联合动脉内灌注促肝细胞生长素治疗兔VX2肝癌,可明显改善TACE后肝功能的损伤;但同时也促进了TACE后残余肿瘤新生血管生成及体积的增长.     

Lp-THAE诱导兔VX2肝癌细胞凋亡

目的 研究Lp-THAE诱导兔肝VX2肿瘤细胞凋亡.方法 27只新西兰大白兔种植性VX2肝癌,均分成Lp-THAE组、THAI组和对照组,处理后2～5 d处死动物,在肿瘤中央部位、外周部位和非瘤肝区正常组织取材.采用HE染色光镜观察典型凋亡细胞、计算凋亡指数,FTTC-Annexin V/PI双染色双变量流式细胞术分析凋亡细胞百分率.结果 THAE组肿瘤中央与外周部位的凋亡指数分别为(17.769±2.417)%.(4.129±1.172)%,P＜0.01,凋亡细胞百分率分别为(16.483±1.404)%,(9.478±0.964)%,P＜0.01,坏死细胞百分率分别为(43.559±5.053)%,(33.460±1.840)%,P=0.093.凋亡细胞与坏死细胞百分率总和分别为(60.042±13.979)%,(42.938±8.979)%,P＜0.01.THAE组的肿瘤细胞凋亡指数、凋亡细胞百分率和坏死细胞百分率都显著大于THAI组和对照组(P＜0.01),肿瘤中央部位的细胞凋亡指数、凋亡细胞百分率都显著大于肿瘤外周部位(P＜0.01).结论 Lp-THAE诱导肿瘤细胞凋亡和引起肿瘤细胞坏死是其作用机制的两种形式.     

槐耳清膏体外抑制肝癌细胞生长的实验研究

目的 探讨槐耳清膏体外抑制肝癌细胞生长的机制. 材料与方法取对数生长期的肝癌Hep-G2细胞,分别与DMEM和含槐耳清膏不同浓度(1 mg/ml,2 mg/ml,4 mg/ml,8 mg/ml)的DMEM培养液作用24、48、72 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测肝癌细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测肝癌细胞的凋亡情况. 结果 MTT比色法检测结果 显示槐耳清膏作用Hep-G2细胞后,随着槐耳清膏药物浓度的增加,肝癌细胞生长抑制率增加,呈量效关系.流式细胞仪检测结果 显示槐耳清膏诱导Hep-G2细胞的凋亡率随着槐耳清膏药物浓度的增加,作用时间的延长,其诱导Hep-G2细胞的凋亡率逐步增加. 结论 槐耳清膏体外能抑制Hep-G2细胞增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡.槐耳清膏对肝癌有治疗作用.     

肝癌动脉内化疗栓塞联合免疫治疗兔移植性肝肿瘤实验研究

目的观察经导管肝动脉化疗栓塞术联合超液化碘油+细胞因子对兔移植性肝肿瘤的治疗作用。方法采用新西兰大白兔VX2肿瘤株移植到肝脏的方法制作肝肿瘤模型30只,根据治疗方案的不同随机平均分为生理盐水对照组(G1),常规TACE组(G2),TACE+肝动脉灌注细胞因子组(G3),TACE+脾动脉灌注细胞因子组(G4)及TACE联合超液化碘油+细胞因子组(G5)共5组,每组6只,进行肝动脉插管治疗。观察各组肿瘤生长、坏死情况以及肿瘤组织内增殖细胞核抗原的表达。结果①治疗后第7天,G5肿瘤增长率显著低于G1、G2、G3、G4(P<0.05);G3、G4与G2比较(P<0.05);G5生长抑制率则显著高于G2、G3、G4(P<0.05),G3、G4与G2比较(P<0.05)。②G5肿瘤坏死范围与G1、G2、G3、G4相比较有显著性差异;G3、G4与G2相比较无显著性差异(P(0.05)。③G3组、G4组、G5组的肿瘤组织内增殖细胞核抗原标记指数显著小于对照组G1和G2组(P<0.01);而G2组与G1组相比较,无显著意义(P>0.05);G5组与G3组、G4组比较(P<0.05)。结论TACE联合超液化碘油+细胞因子免疫疗法...     

热碘油栓塞兔肝VX2肿瘤的抑瘤效果

目的评价热碘油栓塞对兔VX2肝癌的抑瘤效果。方法将VX2瘤细胞接种于30只新西兰白兔肝左叶,建立兔肝癌模型,随机分为A、B和C3组,每组10只。利用导管经肝动脉分别给生理盐水(A组)、37°C碘油(B组)和60°C碘油(C组),7d后观察各组肿瘤体积及血清AST水平,观察瘤兔的存活期。结果C组肿瘤的生长率(0.92±0.21)与A组(3.48±1.17)和B组(1.29±0.26)相比有差异(P<0.05)。C组的存活期(41.0±3.0)d与A组(31.5±3.0)d相比有差异(P<0.05)。C组血清AST水平与B组相比无差异(P>0.05),与A组相比有差异(P<0.05)。结论60°C碘油栓塞兔VX2肝癌可明显降低肿瘤生长率并延长存活期。     

60℃碘油栓塞兔VX2肝癌

目的评价60℃碘油栓塞对兔VX2肝癌的抑瘤效果.方法将VX2瘤细胞接种于30只新西兰白兔肝左叶,建立兔肝癌模型,随机分3组,每组10只.经导管向肝动脉分别注入生理盐水、37℃碘油、60℃碘油,1周后观察各组肿瘤体积及血清AST水平,以及瘤兔的存活期.结果60℃碘油组生长率(0.92±0.21)与对照组(3.48±1.17)、37℃碘油组(1.29±0.26)相比有差异(P＜0.05).60℃碘油组存活期(41.0±3.0)与对照组(31.5±3.0)相比有差异(P＜0.05).60℃碘油组血清AST水平与37℃碘油组相比无差异(P＞0.05),与对照组相比有差异(P＜0.05).结论60℃碘油组可降低肿瘤生长率,延长存活期,肝功的损害是可逆的,且抑瘤效果更强.     

As2O3碘油栓塞对兔VX2肝癌凋亡、增殖及肝功能的影响

目的观察肝动脉As2O3碘油栓塞对兔肝移植瘤凋亡、增生细胞核抗原(PCNA)表达及肝功能的影响。方法40只家兔肝内肿瘤种植后2周,随机分为5组,经肝动脉插管分别给予不同处理,实验设生理盐水灌注组(A组)、As2O3灌注组(B组)、单纯碘油栓塞组(C组)、阿霉素碘油栓塞组(D组)及As2O3 碘油栓塞组(E组),As2O3的用量为2 mg/kg。治疗前3 d,治疗后4、7 d,耳缘静脉取血,测定部分肝功能指标。采用原位末端标记法检测肿瘤细胞的凋亡指数,免疫组化方法测定肿瘤细胞增生细胞核抗原的表达。结果治疗后4 d,栓塞治疗组AST、ALT上升,治疗后7 d,肝功能渐趋正常,阿霉素(ADM)碘油栓塞治疗组AST、ALT水平高于其它组。各组的凋亡指数和增殖指数分别为1.53±0.42、1.82±0.41、2.66±0.54、2.91±0.32、3.44±0.65和60.8±15.5、55.9±14.8、42.4±11.2、40.6±8.8、28.5±5.7,两者存在负相关。结论As2O3比ADM对正常肝组织的毒性低。As2O3碘油栓塞治疗后残余肿瘤的凋亡增加,肿瘤细胞的增殖能力下降。     

土贝母皂甙微囊栓塞治疗兔肾VX2移植癌的研究

目的观察土贝母皂甙微囊肾动脉灌注对兔VX2移植性肾癌的治疗作用。方法复制40只兔VX2移植性肾癌模型,随机分为对照组、土贝母组、空白微囊组、土贝母皂甙微囊组。每组10只经肾动脉分别注入生理盐水3 m l、土贝母注射液0.1 mg/kg、空白微囊5.1 mg/kg、土贝母皂甙微囊5.1 mg/kg。比较各组兔的肿瘤生长情况及坏死程度和生存期。结果与其它3组比较,治疗后土贝母皂甙微囊组兔肾癌的生长受到明显抑制(体积2.42 cm3±0.24 cm3对4.93 cm3±0.86 cm3,3.2 cm3±0.28 cm3,3.14 cm3±0.25 cm3,F=48.89,P<0.001),肿瘤坏死率明显增高(88.4%±5.8%对29%±6.01%,50.6%±4.2%,46.7%±9.05%,F=43.75,P<0.001),生存时间亦明显延长(63.8 d±5.63 d对40.9 d±3.25 d,47.2 d±8.23 d,50 d±3.39 d,F=15.38,P<0.01)。结论肾动脉灌注土贝母皂甙微囊治疗兔肾VX2移植癌的效果明显优于土贝母注射液组及空白微囊组。     

TACE联合抗血管生成疗法治疗兔VX2肝移植瘤的实验研究

目的 观察经导管动脉化疗栓塞(TACE)联合应用血管生成抑制剂内皮抑素(endoststin,ES)对兔VX2肝移植瘤疗效的影响.材料与方法30只兔VX2肝移植瘤模型随机分为对照组、TACE组(碘油+阿霉素)和抗血管生成组(碘油+阿霉素+Es),每组10只.种植后3周行TACE术,术后1周获得病理标本,分别利用免疫组织化学法和原位末端标记法检测所有标本的肿瘤微血管密度(microvagculac density,MVD)及残瘤细胞的增殖、凋亡情况,并分析增殖指数(proliferation index,PI)和凋亡指数(apoptosis index,AI);术前、术后行MSCT和超声检查并计算肿瘤增长率(growth rate GR).结果 三组肿瘤GR(%)分别为270.86±148.94、-8.91±21.77和-20.40±36.07,治疗后TACE组和抗血管生成组肿瘤体积均减小,与对照组比较差异性有统计学意义(P<0.01),各组MVD值分别为80.00±17.14、84.22±16.45、57.00±13.26,抗血管生成组最低,与其余两组比较差异均具有统计学意义(P<0.05),对照组和TACE组两组间差异无统计学意义(P>0.05);各组PI值(%)和AI值(%)分别为52.84±7.37、84.53±5.31、79.98±8.38和3.58±0.066、12.28±0.85、14.39±1.32;PI值对照组最低,与其余两组比较差异有统计学意义(P<0.01),抗血管生成组低于TACE组,但无统计学意义(P>0.05);AI值抗血管生成组最高,各组两两比较差异均具有统计学意义(P<0.01).结论 兔VX2肝移植瘤介入治疗中应用ES可直接减少肿瘤微血管的生成,间接影响肿瘤细胞的增殖和凋亡,两种疗法均可抑制肿瘤的生长,联合治疗效果更好.     

兔VX2肝癌阿霉素热碘油栓塞的疗效观察

目的　评价阿霉素 (ADM)热碘油栓塞对兔VX2肝癌的抑瘤效果。材料与方法　将VX2瘤细胞接种于 6 0只新西兰白兔肝左叶 ,建立兔肝癌模型 ,随机分 4组 ,每组 15只。利用导管经肝动脉将生理盐水、超液态碘油、37℃ADM碘油、6 0℃ADM碘油分别给与不同组 ,1周后观察各组肿瘤体积及血清天冬氨酸转氨酶 (AST)水平 ,观察荷瘤兔的存活期。结果　 6 0℃ADM碘油组生长率 (0 .5 3± 0 .11)与对照组 (3.4 8± 1.17)相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ,与超液态碘油组 (0 .99± 0 .2 1)、37℃ADM碘油组 (0 .89± 0 .16 )相比有差异 (P <0 .0 5 )。 6 0℃ADM碘油组存活期[(5 3.0± 3.0 )d]与其他处理组 [(4 6 .0± 2 .5 )d ,(4 7.5± 3.0 )d]相比有差异 (P <0 .0 5 )。 6 0℃ADM碘油组血清AST水平治疗前后变化与其他处理组相比无差异 (P >0 .0 5 ) ,与对照组相比有差异 (P <0 .0 5 )。结论　 6 0℃ADM碘油可大大降低肿瘤生长率 ,延长动物存活期 ,并对肝功能的损害是可逆的 ,其抑瘤效果更强     

兔VX2肝癌模型的MMP-2的表达

目的 探讨在兔VX2肝癌模型上的金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达特征及其意义.方法 建立30只新西兰大白兔VX2肝癌模型.成瘤后第2.5周处死动物,取得癌组织及癌旁组织30例,正常肝组织20例,进行MMP-2的免疫组化SP染色.根据MMP-2 免疫组化染色的阳性结果进行阳性细胞计数,同时根据细胞阳性染色的数目确定阳性、阴性.结果 癌组织内MMP-2表达呈阳性者26例,阳性率为86.7%(26/30),癌旁组织表达阳性16例,阳性率为53.3%(16/30),正常兔肝组织表达为阴性.癌组织内表达部位主要在癌细胞胞浆和间质组织内,癌栓内、胆管上皮、血管内皮均有部分表达.结论 兔VX2肝癌的MMP-2表达特征与人类肝癌(HCC)的表达相似,在此模型上从MMP-2角度进行肝癌临床相关研究具有一定可行性.     

Impact of Chemoembolic Regimen on Immune Cell Recruitment and Immune Checkpoint Marker Expression following Transcatheter Arterial Chemoembolization in a VX2 Rabbit Liver Tumor Model

PurposeTo characterize the effects of commonly used transcatheter arterial chemoembolization (TACE) regimens on the immune response and immune checkpoint marker expression using a VX2 rabbit liver tumor model.Materials and MethodsTwenty-four VX2 liver tumor-bearing New Zealand white rabbits were assigned to 7 groups (n = 3 per group) undergoing locoregional therapy as follows: (a) bicarbonate infusion without embolization, (b) conventional TACE (cTACE) using a water-in-oil emulsion containing doxorubicin mixed 1:2 with Lipiodol, drug-eluting embolic-TACE with either (c) idarubicin-eluting Oncozene microspheres (40 μm) or (d) doxorubicin-eluting Lumi beads (40–90 μm). For each therapy arm (b–d), a tandem set of 3 animals with additional bicarbonate infusion before TACE was added, to evaluate the effect of pH modification on the immune response. Three untreated rabbits served as controls. Tissue was harvested 24 hours after treatment, followed by digital immunohistochemistry quantification (counts/μm² ± SEM) of tumor-infiltrating cluster of differentiation 3⁺ T-lymphocytes, human leukocyte antigen DR type antigen-presenting cells (APCs), cytotoxic T-lymphocyte–associated protein-4 (CTLA-4), and programmed cell death protein-1 (PD-1)/PD-1 ligand (PD-L1) pathway axis expression.ResultsLumi-bead TACE induced significantly more intratumoral T-cell and APC infiltration than cTACE and Oncozene-microsphere TACE. Additionally, tumors treated with Lumi-bead TACE expressed significantly higher intratumoral immune checkpoint markers compared with cTACE and Oncozene-microsphere TACE. Neoadjuvant bicarbonate demonstrated the most pronounced effect on cTACE and resulted in a significant increase in intratumoral cluster of differentiation 3⁺ T-cell infiltration compared with cTACE alone.ConclusionsThis preclinical study revealed significant differences in evoked tumor immunogenicity depending on the choice of chemoembolic regimen for TACE.     

Pharmacokinetics and Early Tumor Response to Conventional Transarterial Chemoembolization with Sorafenib and Doxorubicin in a VX2 Rabbit Tumor Model

PurposeTo investigate the pharmacokinetics (PK) and early effects of conventional transarterial chemoembolization (TACE) using sorafenib and doxorubicin on tumor necrosis, hypoxia markers, and angiogenesis in a rabbit VX2 liver tumor model.Materials and MethodsVX2 tumor-laden New Zealand White rabbits (N = 16) were divided into 2 groups: 1 group was treated with hepatic arterial administration of ethiodized oil and doxorubicin emulsion (DOX-TACE), and the other group was treated with ethiodized oil, sorafenib, and doxorubicin emulsion (SORA-DOX-TACE). Animals were killed within 3 days of the procedure. Levels of sorafenib and doxorubicin were measured in blood, tumor, and adjacent liver using mass spectrometry. Tumor necrosis was determined by histopathological examination. Intratumoral hypoxia-inducible factor (HIF) 1α, vascular endothelial growth factor (VEGF), and microvessel density (MVD) were determined by immunohistochemistry.ResultsThe median intratumoral concentration of sorafenib in the SORA-DOX-TACE group was 17.7 μg/mL (interquartile range [IQR], 7.42–33.5 μg/mL), and its maximal plasma concentration (C_max) was 0.164 μg/mL (IQR, 0.0798–0.528 μg/mL). The intratumoral concentration and C_max of doxorubicin were similar between the groups: 4.08 μg/mL (IQR, 3.18–4.79 μg/mL) and 0.677 μg/mL (IQR, 0.315–1.23 μg/mL), respectively, in the DOX-TACE group and 1.68 μg/mL (IQR, 0.795–4.08 μg/mL) and 0.298 μg/mL (IQR, 0.241–0.64 μg/mL), respectively, in the SORA-DOX-TACE group. HIF-1α expression was increased in the SORA-DOX-TACE group than in the DOX-TACE group. Tumor volume, tumor necrosis, VEGF expression, and MVD were similar between the 2 groups.ConclusionsThe addition of sorafenib to DOX-TACE delivered to VX2 liver tumors resulted in high intratumoral and low systemic concentrations of sorafenib without altering the PK of doxorubicin.     

改良法兔VX2肝移植瘤模型建立及综合治疗的实验研究

目的 探讨DSA设备导引下经皮穿刺瘤组织块接种法制作兔VX2肝移植瘤模型的可行性及对比经导管动脉化疗栓塞(TACE)、经皮微波凝固治疗(PMCT)及TACE+PMCT 3种方法治疗兔VX2肝移植瘤的效果.方法 ①新西兰大白兔50只,DSA设备导引下采用Angiotech SKATER穿刺针经皮穿刺接种瘤组织块于肝脏,14 d后行CT平扫评价肿瘤接种成功率,测量肿瘤体积并随机处死10只实验兔进行病理分析.②取制作成功的肝移植瘤模型30只,随机分为TACE组(A组)、PMCT组(B组)和TACE+PMCT组(C组),每组10只,治疗后第14天对比各组CT测量肿瘤体积、外周血CD3+、CD4+细胞分布、肿瘤组织坏死率.结果 ①DSA设备导引下经皮穿刺瘤组织块接种法制作兔VX2肝移植瘤模型成功率为100%.②治疗后14 d,C组的肿瘤体积为(0.624±0.031)cm3,明显小于A组(0.799±0.057)cm3和B组(0.858±0.112)cm3,P＜0.05;C组外周血CD3+细胞百分数为(66.30±1.36)%,明显高于A组(53.34±2.12)%和B组(60.68±1.06)%,P＜0.05;C组外周血CD4+细胞百分数为(48.19±1.43)%,也明显高于A组 (40.21±1.07)%和B组(44.03±0.08)%,P＜0.05;C组肿瘤组织坏死率明显高于A组和B组(P＜0.05).结论①DSA设备导引下经皮穿刺瘤组织块接种法建立兔VX2肝移植瘤模型具有方法简单、成功率高、动物损伤小等特点.②TACE+PMCT效果优于单纯经导管肝动脉化疗栓塞或微波凝固治疗.     

兔肝VX2瘤模型MR灌注成像与MVD及VEGF的相关性研究

目的 研究肝脏肿瘤MR灌注成像(PWI)表现与微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)的相关性,并优选灌注评价指标.材料与方法建立15只新西兰兔肝VX2瘤模型,随机分为A、B、C 3组,每组5只,分别在肿瘤种植成功后的16、28、45天进行T2*WI的PWI和MVD、VEGF检测,PWI采用信号强度-时间曲线中的几个指标[包括达峰时间(TTP)、最大信号下降百分率(SRRmax)、最大信号下降斜率(SRSmax)、平均通过时间(MTT)]作为参数用于肿瘤灌注的定量研究,并分别与肿瘤的MVD计数、VEGF表达强度作直线相关分析.结果 SRRmax、SRSmax与MVD呈正相关(r=0.584,P=0.022;r=0.731,P=0.002),其中SRSmax与MVD的相关性更高;3组之间SRSmax和MVD的总体差异均有统计学意义(F=6.352,P=0.013;χ2=9.260,P=0.010),A组的SRSmax、MVD明显高于C组(P＜0.05);各项灌注指标与VEGF表达强度不相关.结论 MR-PWI与MVD密切相关,SRSmax可作为优化的灌注评价指标.